专利名称：：市政环保污水排放粪大肠菌群快检纸片的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种市政环保污水排放粪大肠菌群快检纸片，是一种专门用于市政环保污水的消毒效果，快速检测指示菌-粪大肠菌群的鉴定试剂。其主要成分是蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、靛基质、硫代硫酸钠、1.6%溴甲酚紫溶液、4%TTC溶液、蒸馏水按比例混合后经灭菌浸渍于中速定性滤纸上烘干，包装于印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表(污水样品接种量为5份lml水样，5份0.lml水样和5份0.01ml水样)的外包装袋内，封口后放冰箱保存备用。污水粪大肠菌群快检纸片可用于市政环保、防疫、科研、教学、食品、海洋生物、畜牧、水产、生物工程、检疫、等各个领域的污水消毒效果的鉴定试剂，已有粪大肠菌群试剂很多，性能单一；需要特殊培养条件；成本及价格高；操作方法复杂，检测步骤达不到快速一步法，检测时间长；敏感性差、特异性弱、准确性低；粪大肠菌群的检测结果无法定量分析；不含有中和剂，在检测中易受干扰因素影响等缺点。因此，各行业一直希望能有一种能克服已有产品不足的粪大肠菌群快检纸片。
背景技术：
粪大肠菌群是人类粪便中的主要细菌，具有作为指示菌的一般特性，因而被用来作为反映污水中有否粪便污染的指示菌。粪大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。目前粪大肠菌群作为评价污水卫生质量的主要指标之一，已被国内外广泛应用。本发明的目的在于提供一种能克服已有产品不足的专用于监督市政环保污水的消毒效果，快速检测粪大肠菌群的鉴定试剂。具有可适合于各种场合污水的粪大肠菌群的培养检测；不需要特殊培养条件；成本及价格低；操作方法简便易行，检测步骤达到快速一步法，检测时间短；敏感性好、特异性强、准确性高；包装袋表面印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表，粪大肠菌群的检测结果可直接在包装袋检索，进行定量分析；含有中和剂，在检测中不易受干扰因素影响等特点的粪大肠菌群的鉴定试剂。
发明内容本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经一系列现代生物技术溶解、校正ra、高温灭菌、冷却、加指示剂、浸渍纸片、恒温烘干、无菌包装等工艺而成一种专业的粪大肠菌群快检纸片。本发明选择的配方如下(组分及其重量百分比％):蛋白胨(0.8-1.5);氯化钠(0.4-0.6);靛基质(0.05-015);磷酸氢二钾(0.3-0.5);乳糖(1.2-1.7);琼脂糖(0.08-0.12);硫代硫酸钠(0.3-0.5);1.6%溴甲酚紫溶液(0.4-0.8);4XTTC溶液(2.3-2.8);蒸馏水加至100。蛋白胨作为主要的组分，该组分为细菌的氮源，为培养粪大肠菌群提供其生长所需要的营养和能量；氯化钠作为主要的组分，该组分为无机盐，为培养粪大肠菌群提供其生长所需要的渗透压；靛基质作为主要的组分，该组分为鉴别剂，用于区别培养粪大肠菌群和大肠杆菌；磷酸氢二钾作为主要的组分，该组分为缓冲剂，为培养粪大肠菌群提供其生长所需要一定的氢离子浓度，以保持较稳定的PH环境；乳糖作为主要的组分，该组分为细菌的碳源，为培养粪大肠菌群提供其生长所需要的新陈代谢的能源，同时粪大肠菌群能分解乳糖产酸产气；琼脂糖作为主要的组分，该组分为培养基的赋形剂，溶解冷却后可将培养基中的有效成分凝固并挂载于纸片上；硫代硫酸钠作为主要的组分，该组分为中和剂，其作用是中和祛除污水采样液残留的干扰因素；1.6%溴甲酚紫溶液、4%TTC溶液为指示剂，利用粪大肠菌群能分解乳糖产酸使指示剂颜色变化来鉴别粪大肠菌群是否生存，从而推导污水的消毒效果。本发明产品的制备方法1)切纸将新华中速定性滤纸，切成10X12厘米，叠成5X6厘米大小的双层纸片十五份，经干烤或高压灭菌(高压后于37t:温箱烘干)后备用；2)灭菌将耐高温的聚丙塑料薄膜袋，可按实验要求压合成一定规格的袋，IO(TC15分灭菌后备用；3)制备培养基将蛋白胨、氯化钠、靛基质、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、硫代硫酸钠、蒸馏水按比例混合加热溶解，冷后调pH7.0-7.2，再按量加入1.6%溴甲酚紫溶液，混匀IO(TC15分灭菌，冷至6(TC左右按量加入4%TTC溶液，混匀；4)浸渍纸片用无菌镊子将纸片排放于消毒的大搪瓷盘内，放4(TC左右恒温室或37"温箱烘干；5)包装将温箱烘干的浸渍纸片，无菌操作装入消毒的塑料袋内，再装入包装袋表面印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表(污水样品接种量为5份lml水样，5份0.lml水样和5份0.Olml水样)的外包装袋内，封口后放冰箱保存备用。本发明具有以下优点1).粪大肠菌群快检纸片适合于市政环保污水粪大肠菌群的培养检测。2).不需特殊培养条件。3).成本及价格低廉。4).操作方法简便易行，检测步骤达到快速一步法，检测时间比生物生化鉴定法縮短了四天，使高深的生物培养技术简化到一般人员都能掌握操作。5).产品的敏感性好、特异性强、准确性高。6).纸片有一定的规格，包装袋表面印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表，粪大肠菌群的检测结果可直接在包装袋检索，使粪大肠菌群的检测达到快速准确定量分析。7).粪大肠菌群快检纸片含有中和剂，在检测中不受干扰因素影响。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明按照下表所列数据(重量百分比％)及其所述步骤进行配置配方一优质蛋白胨(0.8-1.5)氯化钠(0.4-0.6)靛基质(0.05-015)磷酸氢二钾(0,3-0.5)乳糖(L2-1.7)琼脂糖(0.08-0.12)硫代硫酸钠(0.3-0.5)1.6%溴甲酚紫溶液(0.4-0.8)4%TTC溶液(2.3-2.8)蒸馏水加至100配方二:优质蛋白胨(0.9-1.4)氯化钠(0.5-0.6)靛基质(0.10-013)磷酸氢二钾(0.4-0.5)乳糖(1.4-1.7)琼脂糖(0.08-0.1)硫代硫酸钠(0.3卜0.5)1.6%溴甲酚紫溶液(0.4-0.7)4%TTC溶液(2.3-2.8)蒸馏水加至100配方三优质蛋白胨(1.1-1.4)氯化钠(0.5-0.6)靛基质(0.11-013)磷酸氢二钾(0.35-0.5)乳糖(1.3-1.7)琼脂糖(0.07-0.1)硫代硫酸钠(0.35-0.5)1.6%溴甲酚紫溶液(0.5-0.7)4%TTC^#液(2.3-2.7)蒸馏水加至100配方四优质蛋白胨(0.9-1.3)氯化钠(0.5-0.6)靛基质(0.07-013)磷酸氢二钾(0.4-0,5)乳糖(1.2-1.6)琼脂糖(0.08-0.1)硫代硫酸钠(0.4-0.5)1.6%溴甲酚紫溶液(0.4-0.7)4%TTC溶液(2.2-2.8)蒸馏水加至100包装袋表面印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表，粪大肠菌群的检测结果可直接在包装袋检索，使粪大肠菌群的检测达到快速准确定量分析污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表(污水样品接种量为5份lml水样，5份0.lml水样和5份0.01ml水样)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>10260302130502430103803031605035801041003042005047601051203052305059501104031011051033011160311140511460112803121705126301131003132005138401141201423051411001151403152705151300120603201405204901218032117052170012210032220052294012312032324052312001241502427052415001251703253105251800130803301705307901311003312105311100132120332240532140013315033328053318001341703343205342100135190335360535250014011034021054013001411303412405411700142150342280542220014317034332054328001441903443605443500145220-3454005454300150130350250550240015115035129055135001521703523205525400153190353370553920015422035441055416000155240355450555>16000权利要求本发明涉及一种市政环保污水排放粪大肠菌群快检纸片，是以乳糖靛基质培养基为基础液，硫代硫酸钠为中和剂，溴甲酚紫、TTC为指示剂，新华中速定性滤纸为载体，经一系列现代生物技术溶解、校正PH、高温灭菌、冷却、加指示剂、浸渍纸片、恒温烘干、无菌包装等工艺而成；其特征在于具有如下配方(组分及其重量百分比％)蛋白胨(0.8-1.5)；氯化钠(0.4-0.6)；靛基质(0.05-015)；磷酸氢二钾(0.3-0.5)；乳糖(1.2-1.7)；琼脂糖(0.08-0.12)；硫代硫酸钠(0.3-0.5)；1.6％溴甲酚紫溶液(0.4-0.8)；4％TTC溶液(2.3-2.8)；蒸馏水加至100。2.—种权利要求1所述市政环保污水排放粪大肠菌群快检纸片的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1)切纸将新华中速定性滤纸，切成10X12厘米，叠成5X6厘米大小的双层纸片十五份，经干烤或高压灭菌(高压后于37t:温箱烘干)后备用；2)灭菌将耐高温的聚丙塑料薄膜袋，可按实验要求压合成一定规格的袋，10(TC15分灭菌后备用；3)制备培养基将蛋白胨、氯化钠、靛基质、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、硫代硫酸钠、蒸馏水按比例混合加热溶解，冷后调pH7.0-7.2，再按量加入1.6%溴甲酚紫溶液，混匀IO(TC15分灭菌，冷至6(TC左右按量加入4%TTC溶液，混匀；4)浸渍纸片用无菌镊子将纸片排放于消毒的大搪瓷盘内，放4(TC左右恒温室或37t:温箱烘干；5)包装将温箱烘干的浸渍纸片，无菌操作装入消毒的塑料袋内，再装入包装袋表面印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表(污水样品接种量为5份lml水样，5份0.lml水样和5份0.Olml水样)的外包装袋内，封口后放冰箱保存备用。3.—种权利要求1所述市政环保污水排放粪大肠菌群快检纸片的包装，其特征在于外包装的表面印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表(污水样品接种量为5份lml水样，5份0.lml水样和5份0.Olml水样)，使检测结果可直接在包装袋上进行检索，使粪大肠菌群的检测达到快速准确定量分析。全文摘要本发明涉及一种市政环保污水排放粪大肠菌群快检纸片，是一种专门用于市政环保污水的消毒效果，快速检测指示菌-粪大肠菌群的鉴定试剂。其主要成分是蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、靛基质、硫代硫酸钠、1.6％溴甲酚紫溶液、4％TTC溶液、蒸馏水按比例混合后经灭菌浸渍于中速定性滤纸上烘干，包装于印有污水中粪大肠菌群最大可能数(MPN)检索表(污水样品接种量为5份1ml水样，5份0.1ml水样和5份0.01ml水样)的外包装袋内，封口后放冰箱保存备用。污水粪大肠菌群快检纸片可用于市政环保、防疫、科研、教学、食品、海洋生物、畜牧、水产、生物工程、检疫、等各个领域的污水消毒效果的鉴定试剂。文档编号C12Q1/06GK101698873SQ20081009344公开日2010年4月28日申请日期2008年4月21日优先权日2008年4月21日发明者曲奕申请人:曲奕