专利名称：一种dna释放剂的制作方法
技术领域：
本项发明属医学生物化学领域，具体涉及一种提取DNA的释放剂。
背景技术：
DNA在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。DNA的分离主要是指将DNA与蛋 白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离DNA时应遵循以下原则保证DNA分子一 级结构的完整性；排除其他分子污染。 目前常用的HBV DNA提取方法有(1)煮沸发将50 100 的病毒裂解液与 50 ill 100 ill待测血清振荡混匀，IO(TC煮沸10min， 4 放置30min 60min，高速离心， 吸取上清液进行PCR扩增。(2)浓集煮沸法将1001 200 ill的病毒促沉液与50 ill 100 ill待测血清振荡混匀，高速离心IOmin，使病毒颗粒沉淀，弃去上清液，收集沉淀病毒， 然后加入病毒裂解液，IO(TC煮沸10min，高速离心5min 10min，吸取上清液进行PCR扩 增。(3)Trizo1裂解提取法将300iil 500iil Trizol裂解液与1001 50 待测血 清充分混匀，加入氯仿混匀后离心使分层，取上层液体与异丙醇混匀使DNA沉淀，用75%的 乙醇洗涤1次，65t:烤干10min，加洗脱液溶解，吸取上清液进行PCR扩增。
以上3种方法需经2 5次的离心、3 7次的开盖等开放操作，提取30个标本的 DNA约需1 3个小时，需严格的实验要求，不但费时费力，易导致操作过程中的污染、并且 导致核酸丢失的因素较多、检测结果重复性较差。
发明内容
本发明的目的就在于克服现有技术存在的上述不足，而提供一种无污染然、操作 简单、检测率高的DNA释放剂。 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案，将liU lOiU的DNA释放剂和 10iil待测血清直接加到PCR扩增管中，轻轻混匀，加lOiU 40iU无菌石蜡油， 置PCR扩增仪60。C 100。C处理5min 15min，然后在3°C l(TC条件置lmin 5min，直 接加入PCR扩增液，进入PCR扩增程序。
本发明的有益效果 本发明使HBV DNA完全释放到液相，而且将待测血清中的蛋白等物质封闭沉淀，消 除其对PCR扩增的干扰，使血清直接从采血管中进入PCR扩增管，不需离心、不需振荡、只需 一个吸头即可完成DNA的提取过程。整个处理过程只需15min左右，不但操作快速、简便， 更重要的避免了操作过程中的污染问题，并且检测结果具有良好的重复性，准确反映血清 中病毒的含量。
具体实施方式
实施例1将5iU的DNA释放剂和5iil待测血清直接加到PCR扩增管中，轻轻混匀，加40ii1无菌石蜡油，置PCR扩增仪85t:处理10min，然后在6t:条件置2min，直接加入PCR扩增液，进入PCR扩增程序。
权利要求
一种DNA释放剂，其特征在于将1μl～10μl的DNA释放剂和1μl～10μl待测血清直接加到PCR扩增管中，轻轻混匀，加10μl～40μl无菌石蜡油，置PCR扩增仪60℃～100℃处理5min～15min，然后在3℃～10℃条件置1min～5min，直接加入PCR扩增液，进入PCR扩增程序。
2. 根据权利要求1所述的一种DNA释放剂，其特征在于将5 ill的DNA释放剂和5 y 1 待测血清直接加到PCR扩增管中，轻轻混匀，加40iU无菌石蜡油，置PCR扩增仪85t:处理 10min，然后在6t:条件置2min，直接加入PCR扩增液，进入PCR扩增程序。
全文摘要
一种DNA释放剂属于属医学生物化学领域，具体涉及一种提取DNA的释放剂。本发明提供一种无污染然、操作简单、检测率高的DNA释放剂。本发明采用如下技术方案，将1μl～10μl的DNA释放剂和1μl～10μl待测血清直接加到PCR扩增管中，轻轻混匀，加10μl～40μl无菌石蜡油，置PCR扩增仪60℃～100℃处理5min～15min，然后在3℃～10℃条件置1min～5min，直接加入PCR扩增液，进入PCR扩增程序。
文档编号C12Q1/68GK101736077SQ200810179149
公开日2010年6月16日 申请日期2008年11月27日 优先权日2008年11月27日
发明者赵雪娇 申请人:赵雪娇