用于癌症治疗的药品的制作方法

专利名称：：用于癌症治疗的药品的制作方法
技术领域：
：本发明涉及包含乳铁蛋白水解产物混合物、从乳铁蛋白水解产物混合物中分离的乳铁蛋白的部分肽、或通过化学合成制备的乳铁蛋白的部分肽等等的药物，其作为活性成分在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用。更准确地，本发明涉及具有增强癌细胞的抗体药物敏感性作用的药物，所述癌细胞具有抗体药物抗性。
背景技术：
：抗体识别特异性抗原和清除机体的外来物质的机制已经得以研究了很久。已知免疫球蛋白制剂是广泛用于治疗的抗体，然而，它们存在例如滴定度不足和未知传染源污染的问题。Milstein和Kohler的单克隆抗体制备技术的发明在各种抗体技术中获得突破。今天，在所谓的后基因组时代，成功地阐明了肿瘤细胞的特异性基因和致病因子及其表达产物。抗体技术很大程度地归功于以它们为目标的研究方法和利用它们的治疗方法的发展。而且，今后抗体技术的深入改进将得到进一步地期待和关注，耙向恶性肿瘤的抗体药物在分子靶向治疗领域取得显著的进展，迄今为止，在曰本仅仅两种抗体药物产品得到批准。然而，目前已知的抗体药物至少包括针对恶性淋巴瘤(CD20,HLA-DR，CD5)、急性骨號性白血病(CD33，CD66)、慢性淋巴细胞性白血病(CD52，CD20)、急性淋巴细胞性白血病(CD19，CD20，CD22)、多发性骨拔瘤(Id-独特型，HM1.24)、乳腺癌(HER2/neu)、上皮瘤(EGF-R，VEGF)、结肠癌(17-lA，CEA)、卵巢癌(CA125)等等(例如，参见非专利文献l)的药物。作为这些抗体药物针对恶性肿瘤的作用机制，一般来说认为有三种机制.即，第一种机制是当抗体结合恶性肿瘤细胞的表面时，特定信号被传递到肿瘤细胞以引起细胞死亡。第二种机制是存在于机体的效应细胞(嗜中性粒细胞、巨嗜细胞、NK细胞等等)通过抗原-抗体反应识别结合于肿瘤细胞的抗体。它们通过其细胞毒素活性杀死肿瘤细胞。第三种机制是机体中的补体成分通过抗原-抗体反应识别结合于肺瘤细胞的抗体。它们通过补体系统的激活途径中的经典途径诱导细胞毒作用，以杀死肿瘤细胞(例如，参见非专利文献2)。由于抗体药物的发展已使许多癌症病人得以存活。然而，报告显示在实施治疗过程中，一些使用抗体药物治疗的病例，由于获得抗体药物抗性的恶性胂瘤的复发，而变得困难。因此，使用化疗刑的联合治疗得到研究。然而，它们存在例如需要预防副作用而使治疗受到限制的问题(例如，参见非专利文献3),对于肿瘤细胞获得抗体药物抗性的机制，已经报道了一些病例，其中在肿瘤细胞表面，被称为补体调控因子(CD46，CD55，CD59)的分子的表达有所增加。在上述第三种作用机制中，它们钝化了补体的经典途径，导致获得抗性(例如，参见非专利文献4)。这暗示补体系统的细胞毒活性可通过所述机制得到降解，导致靶肿瘤细胞对抗体药物的敏感性降低。这样，期望研制可提高补体系统针对具有抗体药物抗性的恶性肿瘤的细胞毒活性的技术。乳铁蛋白是非血红素铁结合糖蛋白，存在于哺乳动物的乳汁、唾液、泪液、精液、各种粘液等等，是具有铁吸附作用、促细胞生长作用、免疫调节作用和抗菌作用的多功能蛋白质。牛乳铁蛋白可容易地从乳品工厂中常规处理的生脱脂乳或干酪乳清中得到大量制备，并容易地作为商业产品得到利用乳铁蛋白肽(Lactoferricin)(本发明申请人的注册商品名)是本发明的发明人第一次从牛乳铁蛋白的酶促水解产物中分离的新肽(例如，参见专利文献l)。例如，分离自牛乳铁蛋白的乳铁蛋白肽具有例如SEQ1DNO:2的氨基酸序列。乳铁蛋白肽是非常有用的物质，其在低浓度时对广范的微生物，例如引起人或其他动物各种疾病的革兰氏阳性和革兰氏阴性菌和酵母表现杀菌作用。包括抗生素在内的大多数其他临床上使用的抗菌剂对人和动物是外来化学物质。然而，乳铁蛋白肽是不含任何化学物质或化学合成氨基酸衍生物的天然肽，因此它对人和动物是健康安全的。这是因为乳铁蛋白肽在人胃中，通过胃蛋白酶对在通常摄取的牛乳中经常含有的乳铁蛋白分解，而得以自然产生。因此，乳铁蛋白可作为安全有效的抗菌刑而用于各种商业产品中，例如滴眼剂、口腔含化剂、化妆品、润肤液、治疗食品和宠物产品，因此具有极大的价值。考虑到乳铁蛋白的抗肿瘤效果，迄今为止已经公开了抗肿瘤药(专利文献2)、肠胃外抗肿瘤药(专利文献3)、口服施用的癌转移抑制剂(专利文献4)等等。这些技术都利用了乳铁蛋白直接作用于肿瘤细胞的效果，这种效果与由于抗体治疗中的抗体药物的细胞毒活性增强的抗肿瘤效果不同，这在近来的癌症治疗中引起注意。即，现在不清楚乳铁蛋白水解产物混合物或乳铁蛋白的部分肽在癌症的抗体治疗中(具体地，癌耐药的抗体治疗)具有增强抗体药物的细胞毒活性的效果。l专利文献1|特许第2818056号公报l专利文献2j特开昭第63-51337号公报专利文献3I特开平第7-3097"71号公报l专利文献引特开平第10-59864号公报l非专利文献1|OguraM，Saishin1gaku，Vol.58，No,12，pp.l02陽121，2003l非专利文献2|KoyasuS.ed.，KinoshitaT.，CurrentImmunologyIllustrated,pp.41-43，2003l非专利文献31HatakeK.,BloodFrontier,Vol.12，No.ll，pp.65-71，2002l非专利文献4|Oncogene,Vol.22，pp.7359-7368，2003发明概述本发明的一个目的是提供在癌症(特别是耐药癌)的抗体治疗中不引起副作用和具有增强抗体药物细胞毒活性作用的高安全药物、提供含有该药物的食品或饮料、并提供增强抗体药物的细胞毒活性的方法。在注意到更有效地增强抗体药物的细胞毒活性导致提高了治疗结果的技术的同时，本发明的发明人考虑到，如果我们能增强靶胂瘤细胞对抗体药物的敏感性，即使在患有恶性肝瘤的病人中证实了抗体药物的抗性，也可充分发挥补体系统的细胞毒活性，并且对此进行了不懈地研究和开发。结果发现在由抗体和补体引起的细胞毒效应实验系统中，乳铁蛋白水解产物混合物和分离自乳铁蛋白水解产物混合物中的肽可作用把肿瘤细胞，增强细胞对抗体药物的敏感性，从而完成了本发明。即，本发明涉及基于增强抗体药物的细胞毒活性作用的，含有作为活性成分的乳铁蛋白水解产物混合物、或分离自乳铁蛋白水解产物混合物的部分肽、或通过化学合成制备的乳铁蛋白的部分肽等等的新药及其用途，其本质上不同于常规已知的乳铁蛋白的抗肿瘤作用，在抗体治疗中该药被认为对迄今为止几乎没有发现任何有效的疗法或药物的癌症是特别有效的。实现上述目的的本发明第一项发明是在癌症的抗体治疗中用于增强抗体药物的细胞毒活性的药物，其包含作为活性成分的、通过用水解酶水解乳铁蛋白而获得的乳铁蛋白水解产物，该产物在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用。作为优选，上述的第一项发明具有下述1)至6)的特征1)上述水解酶是胃蛋白酶。2)上述乳铁蛋白水解产物的降解率是6至20%。3)上述乳铁蛋白水解产物数平均分子量为500至5000。4)上述癌是乳腺癌、B细胞淋巴癌和结肠癌中任意一种，5)上述癌是具有抗体药物抗性的癌。6)上述增强抗体药物的细胞毒活性的作用是提高靶肿瘤细胞对抗体药物敏感性的作用，上述第一项发明的另外一个实施方案是上述乳铁蛋白水解产物用于生产上迷药物的用途，此外，上述第一项发明的另外一个实施方案是在使用抗体药物的癌症的抗体治疗中，用于增强抗体药物的细胞毒活性的方法，其中对病人施用上述乳铁蛋白水解产物。实现上迷目的的本发明第二项发明是在癌症的抗体治疗中，用于增强抗体药物的细胞毒活性的药物，其包含作为活性成分的下列(a)至(d)的肽中任意一种、或两种或多种的混合物(a)具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的肽；(b)具有在SEQIDNO:l的氨基酸序列中36至60位氨基酸的氨基酸序列、包含一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入或倒位，且在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用的肽；(c)具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的肽；(d)具有在SEQ1DNO:l的氨基酸序列中36至61位氨基酸的氨基酸序列、包括一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入或倒位，肽。作为优选，上述第二项发明具有下述7)至9)的特征7)上述癌是乳腺癌、B细胞淋巴瘤和结肠癌中的任意一种。8)上述癌是具有抗体药物抗性的癌。9)上述增强抗体药物的细胞毒活性的作用是提高靶肿瘤细胞对抗体药物敏感性的作用。上述第二项发明的另外一个实施方案是上述肽在制备上述药物中的用途。此外，上述第二项发明的另外一个实施方案是在癌症的抗体治疗中，使用上迷抗体药物以增强抗体药物的细胞毒活性的方法，其中对病人施用上述乳铁蛋白水解产物。此外，本发明提供包含上述第一项或第二项发明的药物的食品或饮料。实现上迷目的的本发明第三项发明是包含乳铁蛋白水解产物的食品或饮料，其附有食品或饮料用于增强癌症的抗体治疗中所使用的抗体药物的细胞毒活性的标识(indication),其中所述乳铁蛋白水解产物通过用水解酶水解乳铁蛋白而得到制备，并在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用。实现上迷目的的本发明第四项发明是用于癌症的抗体治疗的药物，其包含作为活性成分的、通过用水解酶水解乳铁蛋白而制备的乳铁蛋白水解产物和抗体药物。作为优选，上述第四项发明具有下述10)至14)的特征10)上述水解酶是胃蛋白酶。11)上述乳铁蛋白的降解率是6至20%。12)上述乳铁蛋白水解产物数平均分子量为500至5000。13)上述抗体药物是抗CD20抗体、抗HER2单克隆抗体或抗17-1A(人胂瘤相关上皮细胞粘附因子)抗体。14)上述癌是具有抗体药物抗性的癌。实现上述目的的本发明第五项发明是用于癌症的抗体治疗的药物，其中包含作为活性成分的、下列(a)至(d)的肽中任意一种、或两种或多种的混合物以及抗体药物(a)具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的肽；(b)具有在SEQlDNO:l的氨基酸序列中36至60位氨基酸的氨基酸序列、包含一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入或倒位，且在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用的肽；(c)具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的肽；(d)具有在SEQIDNO:l的氨基酸序列中36至61位氨基酸的氨基酸序列、包括一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入或倒位，并且在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用的肽。作为优选，上述第五项发明具有下述15)至16)的特征15)上述抗体药物是抗CD20抗体、抗HER2单克隆抗体或抗17-1A(人肿瘤相关上皮细胞粘附因子)抗体。16)上述癌是具有抗体药物抗性的癌。本发明涉及在癌症的抗体治疗中用于增强抗体药物的细胞毒活性的药物，其包含作为活性成分的、乳铁蛋白水解产物混合物、分离自乳铁蛋白水解产物混合物的乳铁蛋白部分肽、或通过化学合成制备的乳铁蛋白部分肽等等，并且通过增强补体和抗体药物的细胞毒活性可使得靶肿瘤细胞被有效地杀死或杀伤.此外，本发明的药物也具有恢复补体和抗体药物的细胞毒活性的作用，特别是针对具有抗体药物抗性的肿瘤细胞的细胞毒活性。此外，本发明用于对具有抗性的癌进行治疗的药物活性成分可从相对廉价的原料(例如牛奶)中获得，因此可进行大规模地生产。此外，当其包含于食品或饮料时，上述活性成分也发挥与上述药物相同的作用，并附有食品或饮料用于在癌症的抗体治疗中增强抗体药物的细胞毒活性的标识，。附图简述图1显示本发明的乳铁蛋白水解产物混合物和乳铁蛋白部分肽赋予R"uximab抗Raji细胞的细胞毒活性的作用。符号"*"表示相对于培养基(培养液)t<0.001。实施发明的最佳方式下文中，将详细阐述本发明的优选实施方案。然而，本发明并不限于以下描述的优选实施方案，并可在本发明的范围内进行任意地修改。在本说明书中，除非另外指明，百分比使用质量百分比。本发明的在癌症的抗体治疗中增强抗体药物的细胞毒活性的药物、或用于癌症的抗体治疗的药物(以下也可指简称为"本发明的药物")的活性成分是乳铁蛋白水解产物或下列(a)至(d)的肽中任意一种、或两种或多种的混合物(以下也可指"乳铁蛋白的部分肽")，所述水解产物可通过用水解酶水解乳铁蛋白而得到制备，并在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用(以下也可指"乳铁蛋白水解产物混合物")(a)具有SEQlDNO:2的氨基酸序列的肽；(b)具有在SEQlDNO:l的氨基酸序列中36至60位氨基酸的氨基酸序列、包含一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入或倒位，且在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用的肽；(c)具有SEQ1DNO:3的氨基酸序列的肽；(d)具有在SEQlDNO:l的氨基酸序列中36至61位氨基酸的氨基酸序列、包括一个或多个氨基酸残基的取代、缺失、插入或倒位，并且在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用的肽。SEQlDNO:2对应于SEQ1DNO:l中36至60位氨基酸，此外，SEQ1DNO:3对应于SEQ1DNO:l中36至61位氨基酸。在本发明中，术语"用于癌症的抗体治疗的抗体药物"指含有作为活性成分的、结合于癌细胞表面的抗体的药物，该药物通过上述抗体结合于癌细胞可杀死或杀伤癌细胞。抗体药物的作用包括抑制癌细胞生长信号、通过激活细胞凋亡信号杀死或杀伤癌细胞、通过依赖补体的细胞毒作用或依赖抗体的细胞毒作用杀死或杀伤癌细胞，等等。在本发明中，除了在癌症的抗体治疗中增强抗体药物的细胞毒活性的效果(即增强补体和/或抗体药物杀死或杀伤靶肿瘤细胞的作用)之外，表达术语"增强细胞毒活性"包括，提高具有抗体药物抗性的肿瘤细胞对抗体药物的敏感性(即，恢复补体和/或抗体药物的细胞毒活性)的作用。此外，表达术语"具有抗体药物抗性，，指对可杀死或杀伤肿瘤细胞(细胞毒活性)的抗体药物或补体的作用具有抗性。换句话说，这指上述的作用可得到消弱，或肿瘤细胞不接受这种作用。此外，抗体药物抗性不限于由补体调控因子引起的抗性，并包括由其他因子引起的抗体药物抗性.作为本发明药物的活性成分的乳铁蛋白水解产物混合物和分离自乳铁蛋白水解产物的乳铁蛋白部分肽(乳铁蛋白部分肽)，可通过利用乳铁蛋白作为起始材料得以制备。作为乳铁蛋白，可使用可商购的乳铁蛋白和从哺乳动物，例如，人、牛等等的初乳、过渡乳、天然乳或末期乳，或这些乳的加工产物，例如脱脂乳和乳清作为原料通过常规技术使用例如离子交换色谱，从上述的原料中得以分离制备乳铁蛋白。特别优选使用以工业规模生产的可商购的乳铁蛋白(例如，MorinagaMilkIndustryCo,，Ltd.生产的产品)。此外，也可使用通过利用遗传工程技术通过微生物、动物细胞、转基因动物等等生产的乳铁蛋白。此外，具有类似于分离自乳铁蛋白水解产物混合物(乳铁蛋白部分肽)的肽的氨基酸序列的肽，也可通过化学合成、遣传工程技术等等而得到直接制备。蛋白水解产物混合物的方法实例，包括用水解酶等等以常规方式水解乳铁蛋白的方法。就具体方法而言，用于水解乳铁蛋白的酶可以是任何水解酶，只要它降解乳铁蛋白以生成在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性作用的肽或其混合物即可，水解酶的实例包括来源于米曲霉C4s/7ei^"/ns)或灰色链霉菌(5^e/7fowyc""g〃、e"s)等等的胃蛋白酶、胰酶、狭蛋白酶、狭凝乳蛋白酶、蛋白酶。可使用一种或多种类型的水解酶，当使用两种或多种类型的酶时，可同时或分别实施酶促反应。在本发明中，特别优选使用胃蛋白酶-此外，也能使用内型(endo-type)蛋白酶联合外型(exo-type)水解酶。当监控酶促反应的降解率时，优选确定水解反应时间以使得可获得优选的降解率。为了获得乳铁蛋白水解产物混合物，本发明的药物的活性成分，优选降解率是6至20%，特别优选8至12%'蛋白质的降解率可通过，例如根据Kjeldahl的方法(Ed.byTheJapaneseSocietyforFoodScienceandTechnology,"FoodAnalysisMethods,"p.102,Korin，1984)测定样品的总含氮量、才艮据曱搭滴定法测定样品的甲醛氮含量(Ed,byMitsuda等人，"LaboratoryManualofFoodEngineering,"FirstVolume,p.547，Yoke油Co.,Ltd.,1970)并使用下列方程式中的测定值而得到计算降解率(％)=(甲醛氮含量/总氮含量)xl00当获得优选的降解率时，可终止酶促反应。酶促反应可通过在水解溶液中失活酶而得以终止，其可通过以常规方式热失活处理而进行。考虑到所用的酶的热稳定性，热失活处理的加热温度和持续时间可适宜的选用能有效失活的条件，例如，可在80至130"C温度范围中以30分钟至2秒钟的持续时间进行失活。用酸(例如柠檬酸)，将得到的反应混合物优选调节至5.5至7的pH范围中，当乳铁蛋白水解产物混合物含有不溶性物质，它可通过离心或过滤得到除去。在本发明中，乳铁蛋白水解产物混合物的数平均分子量优选是500至5000，特别优选是1000至4000。例如，如文献(TheSocietyofPolymerScience,Japan,ed.，"FundamentalsofPolymerScience",pp.116-119，TokyoKagakuDozinCo.,Ltd"1978)中描述的，基于以下描述的不同指数，数平均分子量代表大分子化合物的平均分子量。即，大分子化合物(例如蛋白质水解酶)是不均一的物质，并且单个分子的分子量具有分布。因此，蛋白质水解酶的分子量必须用平均分子量表示，用于物理化学上进行表述。数平均分子量(文中也可缩写为Mn)是关于分子个数的平均数。当肽链i的分子量是Mi时，其分子量数是Ni，根据下列方程式定义Mn:方程式1:Mn=2MiNi/2Ni如上所述，获得的乳铁蛋白水解产物混合物本身可用作本发明药物的活性成分，或以常规方式冻干或喷雾干燥并以粉末状保存。此外，其可用于生产乳铁蛋白部分肽，本发明的药物的另外一个活性成分。此外，可通过将乳铁蛋白部分肽加入以上得到的乳铁蛋白产物中制备乳铁蛋白水解产物混合物。上述乳铁蛋白部分肽的具体实例包括具有如序列表中SEQIDNO:l的氨基酸序列中36至60位氨基酸的氨基酸序列的肽，和具有如序列表中SEQIDNO:l的氨基酸序列中36至61位氨基酸的氨基酸序列(SEQIDNO:2)的肽。下文中，具有36至60位氨基酸的氨基酸序列(SEQlDNO:3)的肽也称作乳铁蛋白F3rF6()，上迷具有36至61位氨基酸的氨基酸序列的肽也称作乳铁蛋白F36-A61。当包含乳铁蛋白F36-F6。和乳铁蛋白F36-A61的肽用作活性成分时，乳铁蛋白卩36氺6()和乳铁蛋白F36-A61的混合比率优选是1:20至20:1(乳铁蛋白F36-F^:乳铁蛋白F36-A61)，特别优选是1:10至2:3(乳铁蛋白卩36^60:乳铁蛋白F36-A61)。例如，乳铁蛋白部分肽，特别是乳铁蛋白&6^6()和/或乳铁蛋白F36-A61，可根据特开平第5-238948号公报中描述的生产乳铁蛋白肽的方法，以上述制备的乳铁蛋白水解产物混合物作为起始原料制备，此外，乳铁蛋白F36-F6()和/或乳铁蛋白F36-A61可以是根据生产合成肽的方法通过化学合成而制备的任何肽，或是根据生产肽的方法通过基因重組技术等遗传工程技术合成重组肽而制备的任何肽，只要它是具有在SEQIDNO:l氨基酸序列中36至60位氨基酸和/或36至61位氨基酸的氨基酸序列的肽即可。例如，就使用遗传工程技术的方法而言，通过基于编码包含目的区域的氨基酸序列的核苷酸序列而制备合适引物、使用上述引物和包含作为模板的靶核苷酸序列的cDNA并通过PCR扩增核苷酸序列、使用合适的表达系统表达得到的核苷酸序列，从而制备乳铁蛋白部分肽。此外，由于种、属、个体差异等等，通常的基因含有突变，例如在一个或多个位点的一个或多个核苷酸的替换、缺失、插入、添加或倒位，并且由具有所述突变的基因編码的蛋白质的氨基酸残基也具有突变。用于本发明的并包含所述突变的乳铁蛋白F36-F6()和乳铁蛋白F36-A61也落入本发明的范围内，只要其在具有抗性的癌症的抗体治疗中可增强抗体药物的细胞毒活性的作用没有受到损害。在乳铁蛋白F36-F^或乳铁蛋白F36-A61中包含的替换、缺失、插入、添加或倒位的氨基酸残基数，优选是i至12，更优逸是1至8，最优选是1至5。此外，氨基酸残基的替换优选是具有相似性质的氨基酸替换，即，所谓的保守性替换。如果所述修饰的乳铁蛋白F^-F6o或乳铁蛋白F36-A61长于乳铁蛋白F^-F6o或乳铁蛋白F36-A61，添加的氨基酸优选是对应于乳铁蛋白的从N末端第36位起始的或从C末端第60或61位起始的序列的氨基酸。然而，只要上述修饰的乳铁蛋白1^36氺6()或乳铁蛋白F36-A^具有期望的作用，添加的氨基酸可以是任意的氨基酸。可用于本发明的乳铁蛋白水解产物混合物或乳铁蛋白部分肽在癌症的抗体治疗中具有增强抗体药物的细胞毒活性的作用，并且该作用可才艮据使用珙化丙啶的方法(P1，Dojindo,catalogNo.P378)[Cytometry,Vol.8，No.4,pp.421-426，1987j或使用4丐素-AM的方法(Dojindo,catalogNo.341-07901)Apoptosis，Vol.3，No.3，pp.195-20219981测定。在随后描述的实例中，将详细地阐述测定方法。作为本发明的药物，乳铁蛋白水解产物混合物或乳铁蛋白部分肽可与药学上可接受的栽体相结合制备药物制剂，可经口或肠胃外施用给包括人的哺乳动物。作为本发明用于癌症的抗体治疗的药物，抗体药物还可结合上述成分使用。本发明的药物剂型没有特别地限定，可根据治疗的目的适宜地选择。其具体实例包括片剂、丸剂、粉剂、溶液剂、悬浮剂、乳剂、颗粒剂、胶嚢剂、糖浆剂、栓剂、针剂、骨剂、贴剂、滴眼剂、滴鼻剂等等。在药物制剂的生产中，可使用作为药学栽体的并通常作为普通试剂的添加剂，所述药学栽体例如赋型剂、粘合刑、崩解剂、润滑刑、稳定剂、调味剂、稀释剂、表面活性刑和注射用溶剂。本发明药物中乳铁蛋白水解产物混合物或乳铁蛋白部分肽的含量没有特别地限定，并可适宜地选择。然而，例如，药物制剂中含有乳铁蛋白水解产物混合物的浓度可以是10ng/ml至50mg/ml，优选是50fig/ml至10mg/ml，以及制剂中乳铁蛋白部分肽的浓度可以是0.5至200ng/ml，优选是1至100fig/ml。本发明药物的施用时间没有特别地限定，可在施用抗体药物之前或之后或同时与抗体药物施用。施用时间可根据用于目的癌症类型的14治疗的方法适宜地选择。施用方法可根据剂型、年龄、性别或病人的其他条件、病人症状的严重程度等等适宜地选择。本发明药物制剂中含有的活性成分的刑量可根据施用方法、年龄、性别和病人疾病的严重程度、其他条件等等适宜地选择。作为指导，作为活性成分的乳铁蛋白水解产物混合物或乳铁蛋白部分肽的剂量优选在0.001至60mg/kg/天，优选是0.01至20mg/kg/天，并且作为分开的部分，服药量可以是一天一次或一天两次或多次。本发明的药物可用作使用抗体药物治疗癌症(例如，乳腺癌、B细胞淋巴瘤和结肠癌中任意一种)的治疗中的治疗药物、增强药物或辅助医疗药物。此外，在本发明的药物中，包含带有乳铁蛋白水解产疗^物。二外，即使在;吏用本发明用于癌症一的抗P体治疗的药物时，还可施用用于增强本发明的抗体药物的细胞毒活性的抗体药物或药物，本发明的药物对特别是具有抗体药物抗性的癌症显示极其明显的效果。用于本发明的抗体药物的实例包括抗CD20抗体(rituximab)、抗HER2单克隆抗体(trastuzumab)、抗17-1A(人上皮瘤粘附分子)抗体(edrecolomab)等等。此外，也可使用用于癌症治疗的抗体治疗中所用的抗体药物。此外，不但可使用现在已知的抗体药物，而且也可使用今后研制的抗体药物。本发明的药物在抗体治疗中优选与抗体药物联合使用(并不限制它们是否是同时施用或单独施用)，并且也可与用于上述任意癌症中的已知预防药或治疗药(包括增效药和辅助药)联合使用。联合使用可增强上述癌症疾病的预防和治疗效果，并可降低上述联合使用的预防药或治疗药的剂量。此外，用于上述癌症中联合使用的预防药或治疗药可作为活性成分包含在本发明的药物组合物中，或不包含在本发明的药物组合物中，可以单味药构成商品在施用时联合。本发明的药物或乳铁蛋白水解产物混合物或作为药物活性成分的乳铁蛋白部分肽可包含在食品或饮料中。只要活性成分的效果没有降解，食品或饮料的形式和性质就没有特别地限制，并且食品或饮料可经口摄入，以及除了加入上述活性成分之外，它们通过使用通常用于食品或饮料的原料以常规方式制备。本发明的食品或饮料的用途可以是用于增强癌症的抗体治疗所用到的抗体药物"细胞毒活性的任何用途。实例包括，例如，食品或饮料的用途可用于减少或消除癌症，特別是具有抗体药物抗性的癌症的风险因素。本发明的食品或饮料也可用于预防由具有抗体药物抗性的癌症所引起的疾病等等。此外，本发明的食品或饮料可预防由具有抗体药物抗性的癌症所引起的多种疾病及其并发症等等，并降低这些疾病及其并发症等等的风险。本发明的食品或饮料优选以附有"用于增强癌症的抗体治疗中所使用的抗体药物的细胞毒活性"标识的食品或饮料销售，例如，"含有用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性的药物的食品或饮料，其标注"用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"，或"含有标注"增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"的乳铁蛋白水解产物混合物或乳铁蛋白部分肽的食品或饮料"，或"含有用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性效果的化合物的食品或饮料"，或"含有标注"用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"的乳铁蛋白水解产物的食品或饮料"，或"含有标注"用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"的乳铁蛋白部分肽的食品或饮料"，或"含有标注"用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"的乳铁蛋白水解产物的食品或饮料"，或"含有标注"用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"的乳铁蛋白部分肽的食品或饮料"等等。另外，因为本发明的化合物、組合物等等具有增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性的作用，本发明的食品或饮料可标注"用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"。用于上述描述的标识的用语不必限于"用于增强癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性"的表达方式，任何用于癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性的辅助表达或增强效果的用语当然在本发明范围之内。如所指的用语，也可能是基于多种用途的标识，使消费者认识癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的细胞毒活性的增强效果、或癌症的抗体治疗中使用的抗体药物的辅助或增强效果。实例包括，例如，"用于减少和消除具有抗体药物抗性的癌症的风险因素等等"的标识。另外，在上述的标识中，可省略"用于癌症的抗体治疗"的用语u上述术语"标识"包括用于告知消费者上迷用途的所有行为，并且不管标识的目的、内容、客观条款、介质等等，任何提醒或类比说明上述用途的标识属于本发明的"标识"范围之内。然而，标识优选以允许消费者直接认识上述用途的表达进行阐述。具体实例包括在涉及本发明的食品或饮料的商品或商品包装上指明上述用途的行为，或用于分配或输送或进口所迷标注了上迷用途的商品或商品包装目的的分配、输送、显示行为，或显示或分配涉及商品的广告、价目表或工商业票据的行为，或通过电磁法(互联网等)提供包括满足于标注上述用途的那些信息的行为，等等。标识优选是通过行政部门等等批准的标识(例如，基于批准形式的标识，其由行政部门提供的任何法律系统认可)，具体地优选是在包装、容器、目录、小册和在例如POPs的销售点的广告资料、其他文件等等上的标识。标识的实例还包括，例如，作为保健食品、功能食品、肠营养食品、用于特殊膳食用途的食品、具有营养功能声明(nutrientfunctionclaims)的食品、准药品等等的标识，以及劳动福利卫生部批准的标识，例如，根据用于指定的保健用途的系统和类似系统批准的标识。后者的实例包括用于指定的保健用途的食品标识、用于具有合格健康声明(qualifiedhealthclaims)的保健用途的食品标识、对身体结构和功能有影响的标识、降低疾病风险声明的标识等等，更准确地，典型实例包括健康促进法实施细则(日本劳动福利卫生部，部级条例No.86，2003年4月30日)中提供的用于指定保健用途的食品标识(特别是用于保健用途的标识)和类似标识。实施例下文中，本发明通过下列涉及的实施例进一步具体地阐述。然而，本发明并不限于下列实施例。l制备实施例11乳铁蛋白水解产物混合物的制备将总量2.0kg的分离自脱脂乳(MorinagaMilkIndustryCo，,Ltd.純度约90%)的牛乳铁蛋白以5质量％的浓度溶解于蒸馏水中，加入1IN盐酸调节溶液至pH3.0。将结晶胃蛋白酶(mf'co)以底物的3质量％比例加入，并在37X:水解4小时。然后，将反应混合液在8ox:加热15分钟以失活胃蛋白酶，并加入1N氢氧化钠以调节反应混合液至pH7.0。通过过滤除去不可溶性物质，并将过滤液喷雾干燥以制备约1.9kg的粉末状乳铁蛋白水解产物。生产的乳铁蛋白水解产物混合物的分解率是10%。l制备实施例2|乳铁蛋白水解肽的制备以与制备实施例1中相同方式制备的总量600g的起始原料(乳铁蛋白水解产物混合物)以5质量％的浓度溶解于蒸馏水中。用水充分洗涤，以平衡约3000ml的疏水性栽体(ButylTOYOPERL650M，商标名，TOSOHCORP.)。将起始原料溶液和疏水性栽体在装备有搅拌器的容器中混合，然后分离溶液。将疏水性栽体装填柱(长10cm，直径20cm)，并将上述的分离液上柱。然后，用水以400ml/分钟的流速充分洗柱，直到洗液在280nm的吸光度变成0.06或更低。随后，将10mmol盐酸上柱以洗脱乳铁蛋白水解肽，将洗脱液和等体积的Mcl,vaine緩沖液(按177份体积的0.1M乙酸+按823份体积的0.2M磷酸二氢钠的混合物，pH7.0)混合，肽被吸附在疏水性栽体上。将疏水性栽体装填柱，并用6000ml相同的緩冲液洗涤，以及用9000ml的Mcllvaine緩冲液(按485份体积的0.1M乙酸+按515份体积的0.2M嶙酸二氢钠的混合物，pH5.0)洗脱乳铁蛋白水解肽。将10mM盐酸和水上柱以再生疏水性栽体，并用1N氢氧化钠溶液调节洗脱液的pH至7.0。将上述含有乳铁蛋白水解肽的洗脱液经过该柱，并用30升水洗柱以除去緩冲液的盐。然后，将10mM盐酸上柱以洗脱乳铁蛋白水解肽，其冻千可获得约10.5g粉末状乳铁蛋白水解肽。得到的乳铁蛋白水解肽的纯度通过HPLC测定，结果发现达到99%。此外，确定乳铁蛋白水解肽的氨基酸序列，结果证实生成的乳铁蛋白水解肽含有乳铁蛋白F36-F60和乳铁蛋白F36-A61的肽。这些肽(乳铁蛋白F36-F6o和乳铁蛋白F36-A61)的比率是1:6。下文中，本发明根据下列测试实施例详细地阐述。l测试实施例lj为了检测添加乳铁蛋白水解产物混合物对补体和抗体药物的细胞毒作用的效果而实施该测试。(1)测试样品将在制备实施例1中制备的乳铁蛋白水解产物混合物，用含有7.5。/。胎牛血清(Gibco，目录号10099-141)和1%青霉素-链霉素(Gibco，目录号15070-063)的RPMI1640培养基(Sig陽，目录号R8758)l下文中，该溶液指的是"稀释液"|调节至1000pg/ml制备测试样品1。此外，对照样品1通过用稀释液将乳铁蛋白稀释至1000pg/ml的浓度。作为用于测定补体和抗体药物的细胞毒作用的靶细胞，使用人Burkitt淋巴瘤Raji细胞(ATCCCCL-86,获得于美国典型培养物保藏中心(10801Boulevard大学，马纳萨斯，VA20110-2209,美国))，并使用稀释液将细胞以2x1(^细胞/ml的密度悬浮以制备Raji细胞悬浮液。作为抗体药物溶液，使用可识别CD20抗原的rituximab(ZenyakuKogyo，日本Roche出售)，并且其可使用稀释液配制成200^g/ml的浓度。作为补体溶液，使用人血清AB(Cosmobio，目录号832000027)。这些抗体药物溶液和补体溶液也可用于下列描述的测试实施例2至5。通过使用捵化丙啶(PI，Dojindo，目录号P378)的方法(Cytometry,Vol.8，No.4，pp.421-426，19871或使用钾素画AM(Dojindo，目录号341-07卯l)的方法|Apoptosis，Vol.3，No.3,pp.195-202,1998|确定细胞的生存力。(2)测试方法将Raji细胞悬浮液以每孔100pi的体积(每孔2x10s细胞)加到24孔培养板(NUNC，目录号143982)中。将24孔分为四组，在其中的一组的孔(6孑L)中加入50pl/孔的抗体药物溶液和250pl/孑L的稀释液，作为"添加抗体药物"。此外，在另外一组的孔(6孔)中加入100nl补体溶液和200pl稀释液，作为"添加补体"。此外，在另外一组的孔(6孔)中加入50ji，抗体药物溶液、100pl补体溶液和150…稀释液，作为"添加抗体药物+补体"，在剩下一组的孔(6孔)中，加入300nl稀释液，作为"未添加"。对于上述四组，分别加入上述的100pl/孔的测试样品1(4组x2孔)、对照样品1(4組x2孔)或稀释液(4组x2孔)，作为"测试样品组1"、"对照组1"和"阴性组1"。通过使用上述制备的24孔板，使用培养箱(Napco，目录号5300)将细胞在37'C和5%二氧化碳(<:02)的条件下温育l小时。然后，收集各样品组的细胞，并通过上述使用PI的方法检测各组的死细胞的比率。根据所有靶细胞被杀死的情况计算细胞毒活性，设定其为100%。(3)测试结果该测试结果如表1所示。从表1显示的结果清楚可见，通过"加入抗体药物+补体"，确定各样品组的细胞毒活性("测试样品组r:45.7%,"对照样品组"24.3%,"阴性样品组1":30,7%)，并且发现，特别是乳铁蛋白水解产物混合物(测试样品组l)显著地增强细胞毒活性(与阴性样品组1相比，增加约50%)。另一方面，与阴性样品组相比，对照样品组1中细胞毒活性未增加，因此发现，细胞毒活性的增强是特异于乳铁蛋白水解产物混合物的活性。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>测试实施例21该实施例为了检测在补体和抗体药物的细胞毒活性的培养期间的、添加了乳铁蛋白水解产物混合物培养的靶肺瘤细胞的敏感性的变化。(l)领ij试祥品通过测试实施例1中用到的稀释液，将制备实施例1中制备的乳铁蛋白水解产物混合物稀释至1000^g/ml的浓度，以制备测试样品2。(2)测试方法将人Burkitt淋巴瘤Raji细胞以2xl05细胞/培养瓶(BD，目录号35-3014)的细胞数悬浮在6.3ml的稀释液中。对于以上悬浮液，分别制备加入了上述的0.7ml测试样品2的组(测试样品组2)和加入了0.7ml稀释液的组(阴性样品组2)，并将细胞在37t:和5%二氧化碳(C02)的条件下用培养箱温育三天.将两个样品组的细胞各自重新加入10ml稀释液，并使用离心机(KUBOTA，目录号5910)离心(IIOOrpmx6分钟)以除去上清液'该过程重复3次，然后通过使用如测试实施例1中用到"添加抗体药物+补体"和"未添加"的相同系统检测细胞对细胞毒活性的敏感性，(3)测试结果该测试结果如表2所示。从表2显示的结果清楚可见，与阴性样品组2相比，在添加了乳铁蛋白水解产物混合物(测试样品组2)培养3天的靶肿瘤细胞组中，"补体+抗体药物，，提供的对细胞毒活性的敏感性明显地得到提高，因此发现测试样品1中阐迷的增强作用对把肿瘤细胞起作用。表2细胞毒活性(％)测试样品组2阴性样品组2添加抗体+补体53.934.8未添力口1.91.5aThrLeuThrl.eu125Scr'lie30LysLeuLeuArgHis110AspAlaC'lyLeu15SerGinLys匕euGluCysAspGly80ProVal95TyrTyrGinLeuGlyTrpHeliel,euGluValProl'ysGlyl)he(;1y210ValAlaAlaAspProValAlaValProMetGly!!150Lt'uGin(;lyAlaValAlaCysGlu'l'yrArgAspVal275lie180GlySen'V"lAspAla260Ala(;lu(;lyl.ys(;lnl)ht;l.ysl,eul,eu290Phc(;ln305AspScrAlal.euArgAla(My(;yGlyArgAsnAla(;luTyrl.y.sScr(;lnSet:u()AlaGin卩h。Tht'Cys2()()l.ysThr(;luVal(;luCysAsp280l.ysl,euTyrl,cuThrAla(;lu(;luVtilLys:555Val(;lyl)r'()(;370GlyGinAsnVal385Vall,euVall'hrCysAI，.cuLys(;ly(;l405!)r()AlaTyr185Ala〔:ysValTyrl,cu155l,cul.cuHis265GlyPhe(;lyl.cuThraArgTyr':湖u(;IuGinl.ysl.ysCyThrAIs7nCysl)heAsn丄'uI,InlJhcCys250l.ysGly(;lnl)ro:"()l,euAlaGluLys/\rgr'l.cuThrs(;ln(;lnaSurThr395ScrPheLeuSerAs)AsnAsn(;nAspAsn300Aspl,ysl.ysVal'l'r.p380ThrAlaAspAlal,eu410AsnTyrlieTyrThrAlaGlyl.ysCysGlyLeuValProCys420AsnArgl,ysSerScrl,ysIIi4:!5uGlyTyrl丄'uAlaV;425sSerSer'LeuAspThrGl450l,euThrTrpAsnSer.I,州)AlaValVall.ys■ir)5ul.ysAspl.ysl.ysSt'r柳CysTrpSerCysArg205Glyl丄'uAsnVall'eu285lys匕euValAsnVal:船SerAspl,euValValAla465AspArgThrAh'170'lyT卬八sn175yT卜,rAlaGin190GluAlaPro'SurPro270lieSerLt'uAspl,(、u350'l'r卩GinAspAspLeu430l,euAsnHisThrl)roM(nGl顿)G1uSer160SerCysLeuCysProTyr(;lyAspGhjl,ys240ArgAla255SerHisTrpLysArgSt、rPhc;l.ys320SerAlaArg(;luCysAlaCys11e400GlyGly415AlaGluArgProGlyAlaVal化OAsnGin49528ThrGly(;lyAlaGinGy530TyrThr545PheValAlaAspl,cuAspAlaVal610IlisVa625GlyLysAsnl,euArgProAsn6901)hel,eu705SerAspi、JGlyLysTrpGly595AlaLysAsnleuThr675LeuCys500ProAspAlaAsnAlaThrl)r()(;1nCysAir,Dti,、A/in^1,,r、iaiiicrtayui_U匕ysSerArgteul,ysCysValPro5:i5l)heArgCysl丄)u〖)5()Asp'l'hrVal'l'rp565l,ysAsnl,euAsnPhe505CysAsnAlaGluArg585ThrArgl.ysl)r()Valeu)oAsnHisAlaValVal615Vall'euLeuHisGin630ProAspLysPheCysl)heAsnAsp/\snThrGlu660665Tyr(;luGluTyrl.euGly680l,ysl.ysCysSerThrSet-695IIJCAlaSer(;luAsn570(■;1uG1uSc_、rGin匕eu650CysSerGinSerCys510LeuCysAlaGlyLysGluLysTyr540AspValGlyAsp鹏ThrAsnGly(;luAspPheArgl,eu590Ala〔；lnSer*CysArgSerAspA厂g620AlaLeuPheGlyPheLysSerGlu,cuAlaLysLeu670Thr(;luTyrValThr685ProL,euLeuGluAla700AlsProAspAspTyr(;lyValAla560SerThr575LeuCysHisl丄'uAlaAlaLysAsn640ThrLys655GlyGlyAlalieCysAlaThrArg'<21()〉2<川〉25<213>屮(BosLaur'us<400>2PheLysCysArgArgTrpGinTrpArgMet1-ysl,ysLeuGlyAlaPro151015SerlieThrCysValArgArgAlaPhe2025<211>26<212>m<213>1'-(Bostaurus<formula>formulaseeoriginaldocumentpage30</formula>权利要求1.一种用于在癌症的抗体治疗中增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的药物，其包含作为活性成分的乳铁蛋白水解产物，抗体药物和补体，所述乳铁蛋白水解产物可通过用水解酶水解乳铁蛋白而得到，并具有在癌症的抗体治疗中增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的作用。2.根据权利要求1的药物，其中所述水解酶是胃蛋白酶。3.根据权利要求1的药物，其中所述乳铁蛋白水解产物的降解率是6至20%。4.根据权利要求1的药物，其中所迷乳铁蛋白水解产物的数均分子量为500至5000。5.根据权利要求1的药物，其中所述癌症是乳腺癌、B细胞淋巴瘤或结肠癌中任意一种。6.根据权利要求1的药物，其中所述癌症是具有针对所述抗体药物的抗性的癌症。7.根据权利要求1-6之任一项的药物，其中所述增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的作用是提高靶细胞对所述抗体药物敏感性的作用。8.—种用于在癌症的抗体治疗中增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的药物，其包含下列(a)或(b)的肽中的任意一种类型或两种类型的混合物(a)具有SEQ1DNO:2的氨基酸序列的肽；(b)具有SEQ1DNO:3的氨基酸序列的肽，抗体药物和补体作为活性成分。9.根据权利要求8的药物，其中所述癌症是乳腺癌、B细胞淋巴瘤或结肠癌中任意一种。10.根据权利要求8的药物，其中所述癌症是具有针对所迷抗体药物的抗性的癌症。11.根据权利要求8至10中任一项的药物，其中所述增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的作用是提高靶细胞对所述抗体药物敏感性的作用。12.乳铁蛋白水解产物，抗体药物和补体在制备用于在癌症的抗体治疗中增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的药物中的用途，所述乳铁蛋白水解产物可通过用水解酶水解乳铁蛋白而得到，并具有增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的作用。13.根据权利要求12的用途，其中所述水解酶是胃蛋白酶。14.根据权利要求12的用途，其中所述乳铁蛋白水解产物的降解率是6至20%。15.根据权利要求12的用途，其中所述乳铁蛋白水解产物的数均分子量为500至5000。16.根据权利要求12的用途，其中所述癌症是乳腺癌、B细胞淋巴瘤或结肠癌中任意一种。17.根据权利要求12的用途，其中所述癌症是具有针对所述抗体药物的抗性的癌症。18.根据权利要求12-17之任一项的用途，其中所述增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的作用是提高靶细胞对所述抗体药物敏感性的作用。19.下列(a)和/或(b)的肽中的任意一种，抗体药物和补体在制备用于在癌症的抗体治疗中增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的药物中的用途(a)具有SEQ1DNO:2的氨基酸序列的肽；(b)具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的肽，20.根据权利要求19的用途，其中所述癌症是乳腺癌、B细胞淋巴瘤或结肠癌中任意一种。21.根据权利要求19的用途，其中所述癌症是具有针对所述抗体药物的抗性的癌症。22，根据权利要求19-21中任一项的用途，其中所述增强抗体药物和/或补体的细胞毒活性的作用是提高靶细胞对所迷抗体敏感性的作用.全文摘要癌症的抗体治疗中的、并可通过用水解酶水解乳铁蛋白而制备的乳铁蛋白部分肽或乳铁蛋白水解产物混合物，具有增强抗体药物的细胞毒活性的功效。乳铁蛋白部分肽或乳铁蛋白水解产物混合物可作为药品的活性成分，用于在癌症的抗体治疗中增强抗体药物的细胞毒活性。文档编号A23L1/305GK101444624SQ20081017957公开日2009年6月3日申请日期2005年3月9日优先权日2004年3月19日发明者三岛雄二,伊藤岳人,山田明男,樱井琢磨,照井康仁,畠清彥申请人:森永乳业株式会社