脂连蛋白受体片段和使用方法

专利名称：脂连蛋白受体片段和使用方法
技术领域：
本发明概括地涉及脂连蛋白受体片段。更具体地，本发明涉及使用脂连蛋白受体 片段的方法和包含脂连蛋白受体片段的组合物、剂型和试剂盒。
背景技术：
脂连蛋白受体l(ADIPORl)是一种7个跨膜G蛋白偶联的受体(GPCR)。参见，例 如，WO 01/012662和WO 01/090304。许多医学上重要的生物过程由包含G-蛋白的信号转 导途径来介导[Lefkowitz,Nature 351，353-354 (1991)]。某些细胞外信使(ECM)(它们是 来自ADIP0R1的C-末端的肽片段)在人血中具有诊断价值。使用多克隆抗体和测量质量 的SELDI-T0F免疫亲和方法证实了它们的有用性。这些发明是相关申请WO 2007/120,311 的主题，它们通过援引并入本文。在该工作中，鉴别出了在测试的所有糖尿病患者中完全缺 失的32个氨基酸的特定的长的肽序列(ECM32)。更短的肽序列也见于血液中，但是同时见 于健康和糖尿病患者。更短的肽序列的水平通常随着疾病状态而增加。意外地发现，ECM32 (SEQ ID NO :1)，通过2个分开的单克隆抗体证实为3473Da片 段，当施用给患者时，起胰岛素敏化剂的作用。这样，ADIP0R1的该C-末端片段可以是可用 于增加需要它的患者的胰岛素分泌的治疗剂，包括，但不限于，遭受糖尿病、异常脂细胞活 性和胰岛素抗性的患者。本发明的方法、组合物、剂型和试剂盒指向这些以及其它的重要目 标。

发明内容
已经意外地发现，ADIP0R1的某些C-末端片段会抑制ADAM-17和胰岛素降解酶 (IDE)的酶活性，并从而影响胰岛素水平和受这些酶影响的信号肽，例如TNF-α。因此，这 些C-末端片段可以用于治疗糖尿病、异常脂细胞活性和胰岛素抗性的方法，造成健康和糖 尿病患者中的胰岛素分泌的方法，和增加健康患者的胰岛素水平的方法。还已经发现了有 用的组合物、剂型和试剂盒。本发明部分地涉及治疗需要它的患者的糖尿病的方法，其包含下述步骤
给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及治疗需要它的患者的异常脂细胞活性的方法，其 包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在另一个实施方案中，本发明涉及治疗需要它的患者的胰岛素抗性的方法，其包 含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及治疗需要它的患者的代谢综合征的方法，其包含 下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及造成患者中胰岛素分泌的方法，其包含下述步 骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及增加患者中胰岛素水平的方法，其中所述患者不 遭受糖尿病，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及抑制患者中胰岛素降解酶(IDE)的方法，其包含 下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO :1，SEQ ID NO :5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，禾口 SEQ ID NO :8。在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者的阿尔茨海默氏病的方法，其包含下述 步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO :1，SEQ ID NO :5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，禾口 SEQ ID NO :8。在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者中与脂连蛋白水平有关的心血管病的方 法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及抑制患者中ADAM-17酶的方法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者中与TNF-α有关的状况的方法，其包含 下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者中与HER2neU有关的状况的方法，其包 含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在另一个实施方案中，本发明涉及组合物，其包含肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同 一性SEQ ID N0:1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7 禾口 SEQ ID NO: 8 ；禾口至少一种药学上可接受的载体。在其它实施方案中，本发明涉及组合物，其包含纯化的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少 75% 同一性SEQ ID NO =USEQ ID N0:2、SEQ IDNO :5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO 8 ；任选地，至少一种药学上可接受的载体。在其它实施方案中，本发明涉及注射剂型，其包含本文所述的组合物；和所述肽的至少一种溶剂。在其它实施方案中，本发明涉及吸入剂型，其包含本文所述的组合物；和用于通过吸入来施用所述肽的至少一种药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，本发明涉及试剂盒，其包含关于给患者施用注射剂型的说明书；包含本文所述组合物的容器；包含所述组合物的药学上可接受的溶剂的容器。在其它实施方案中，本发明涉及试剂盒，其包含关于给患者施用吸入剂型的说明书；包含本文所述组合物的容器；包含所述组合物的药学上可接受的溶剂的容器。附图简述伴随的附图用于提供对于本发明的进一步理解，并入本说明书且构成本说明书的 一部分，解释本发明的实施方案，与说明书一起，用于解释本发明的原理。在附图中

图1是正常患者的对照、2mg/kg ECM30于盐水中和2mg/kgECM32于盐水中的血液 胰岛素水平(ng/ml)与时间的关系图；图2是正常患者的对照、2mg/kg ECM30和2mg/kg ECM32的血糖水平(mg/dl)与时 间的关系图3是糖尿病患者的对照(牛血清白蛋白于盐水中)、2mg/kgECM30和10mg/kg ECM30的血液胰岛素水平(ng/ml)与时间的关系图；图4是糖尿病患者的对照(牛血清白蛋白于盐水中)、2mg/kgECM30和10mg/kg ECM30的给药前葡萄糖的百分比与时间的关系图；图 5 是 Omg/L、12. 5mg/L、25mg/L 和 50mg/L 水平的 ECM32 的 ％ TACE 对照活性与时 间的关系图；图 6 是 Omg/L、12. 5mg/L、25mg/L 和 50mg/L 水平的 ECM30 的 ％ TACE 对照活性与时 间的关系图；图7是对照(没有ECM32)和通过注射施用的ECM32 (SEQ IDN0 1)对糖尿病大鼠 中葡萄糖的胰岛素抗性的体内稳态模型评估抗性(H0M0-IR)与时间(分钟)的关系图。图8是ECM32(SEQ ID NO 1)和ECM30(SEQ ID NO 2)对正常和糖尿病大鼠中的血 浆葡萄糖水平的对照的百分比与时间的关系图。图 9 是在 4 个水平(0,12. 5，25jP50iig/ml)施用的 ECM32(SEQ IDN0 ；1)抑制 IDE 活性的对照的百分比与时间的关系图。图 10 是在 4 个水平(0，25，50，和 100 u g/ml)施用的 ECM30 (SEQID NO 2)抑制 IDE 活性的对照的百分比与时间的关系图。发明详述如上面和在公开内容中所采用的，除非另有说明，下面的术语应当理解为具有下 述含义。本文使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数的对象，除非上下文另有
清楚指明。本文使用的术语“约”当涉及可测量值例如数量、短暂持续时间等时，意在包括从 指定值士20%、优选士 10%、更优选士5%、更优选士 和更优选士0. 的变动，只要这 样的变动适合执行所公开的方法和组合物。本文使用的“有效量”是指可以有效地预防、减少或消除所述症状或状况的本文所 述活性成分的量，就本发明而言，包括治疗糖尿病、治疗异常脂细胞活性、治疗代谢综合征、 造成胰岛素分泌、增加胰岛素水平、抑制胰岛素降解酶、治疗阿尔茨海默氏病、治疗与脂连 蛋白水平有关的心血管病、抑制ADAM-17酶、治疗与TNF-a有关的状况、和治疗与HER2 neu 有关的状况。一般而言，本发明的ADIP0 R1片段的有效量，从约0.25mg/kg患者体重至约 200mg/kg患者体重，优选约25mg/kg患者体重至约175mg/kg患者体重，更优选约30mg/kg 患者体重至约150mg/kg患者体重(和其中的所有组合和子组合)。本文使用的“治疗”是指状况的预防性的、治愈性的、和治标性的治疗，最低要求治 标效应。本文使用的“药学上可接受的”是指，在合理医学判断范围内、适合接触人类和动 物的组织、没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它问题并发症且具有相当的合理利益/风 险比的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。本文使用的“药学上可接受的盐”是指公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通 过制备其酸或碱盐来修饰，包括酸加成盐和碱加成盐。药学上可接受的盐的实例包括、但不 限于，碱性残基例如胺的无机或有机酸盐；酸性残基例如羧酸的碱或有机盐；等。术语“酸加成盐”是指已经通过加成酸来制备的母体化合物的对应盐衍生物。药学上可接受的盐包 括从例如无机或有机酸形成的母体化合物的常规盐或季铵盐。例如，这样的常规盐包括、但 不限于，源自无机酸的那些，所述无机酸例如盐酸，氢溴酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸，硝酸等； 和从有机酸制备的盐，所述有机酸例如醋酸，丙酸，琥珀酸，羟乙酸，硬脂酸，乳酸，苹果酸， 酒石酸，柠檬酸，抗坏血酸，双羟萘酸，马来酸，已二酸，褐藻酸，门冬氨酸，羟基马来酸，苯基 乙酸，谷氨酸，苯甲酸，水杨酸，对氨基苯磺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，延胡索酸，苯磺酸，甲苯 磺酸，甲磺酸，2-萘磺酸，乙烷二磺酸，草酸，羟乙磺酸，葡庚酸(glucoh印tanoic acid)，甘 油磷酸，半硫酸，庚酸，己酸，盐酸，氢溴酸，氢碘酸，2-羟基乙磺酸，2-萘磺酸，果胶酯酸，磷 酸，硫酸，3-苯基丙酸，苦味酸，新戊酸，硫氰酸，对甲苯磺酸，丁酸，樟脑酸，樟脑磺酸，二葡 糖酸，环戊烷丙酸，二硫酸，十二烷基硫酸，乙磺酸，和十一烷酸等。因而，术语“碱加成盐” 是指已经通过加成碱来制备的母体化合物的对应盐衍生物。含有碱性氮的基团也可以用如 下述的试剂季化低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物、和碘化物； 二烷基硫酸酯，如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯，长链卤化物例如癸基、月桂基、 肉豆蔻基和硬脂酰基氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基商化物如苄基和苯乙基溴化物，和其 它。药学上可接受的盐包括从例如无机或有机碱形成的母体化合物的常规盐或季铵盐。例 如，这样的常规盐包括、但不限于，从无机碱衍生的那些，所述无机碱例如氢氧化锂、氢氧化 钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、和氢氧化铵，和从有机胺制备的盐，所述有机胺例如甲 基胺，乙基胺，异丙基胺，哌啶，哌嗪，吡咯烷，乙醇胺，吗啉，diazapine,乙二胺，吡啶，喹啉， 喹核碱，等。本文使用的“药学上可接受的载体”意在包括与药物施用相容的任意的和所有的 溶剂、分散介质、包衣剂、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这样的介质和试剂 用于药学活性物质的应用，是本领域众所周知的。除了任意常规介质或试剂与活性化合物 不相容以外，预见到其在组合物中的应用。补充性的活性化合物也可以掺入组合物中。本文使用的“剂量单位”是指适合作为待治疗的特定患者的单元剂量的物理上分 离的单元。每个单元可以含有经计算会产生希望的治疗效应的预定量的活性化合物和需要 的药用载体。本发明的剂量单位形式的规格，可以取决于(a)活性化合物的独特特征和要 实现的特定治疗效应，和(b)调配这样的活性化合物的领域固有的限制。 本文使用的“患者”是指动物，包括哺乳动物，优选人。本文使用的“健康”是指目前没有遭受状况或疾病的患者，包括易于遭受状况的患 者。例如，前驱糖尿病患者被视作本发明目的的健康患者。本文使用的“多肽”、“肽”和“蛋白片段”在本文中互换地用于指氨基酸残基的聚 合物。该术语包括其中一个或更多个氨基酸残基是对应天然存在的氨基酸的人工化学模仿 物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。本文使用的“多核苷酸”是指长度为至少约10个碱基或碱基对的核苷酸的聚合形 式，是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或其修饰形式。本文使用的“同一性百分比”是指与参照多肽序列匹配的多肽序列的百分比，可以 通过在对比窗上对比2个最佳比对的序列来测定，其中与用于2个序列的最佳比对的参照 序列(它不包含添加或缺失)相比，对比窗中的多肽序列可以包含添加、缺失(即间隙)、 衍生化、和/或保守氨基酸置换。如下计算百分比通过测定在2个序列中出现相同氨基酸残基的位置的数目，产生匹配位置的数目，用匹配位置的数目除以对比窗中位置的总数，和 将结果乘以100，产生序列同一性百分比。使用本领域已知的众多序列对比算法和程序中 的任一种，评估同一性。这样的算法和程序包括，但是决不限于，TBLASTN, BLASTP, FASTA， TFASTA, CLUSTALW，FASTDB，它们的整个公开内容通过援引并入本文。也参见，Pearson, 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. ,85 =2444-2448,1988 ；Atlschul,等人，J. Mol. Biol.， 215 403410,1990 ；Thompson,等人，Nucleic Acids Res.，22 :4673_4680，1994 ；Higgins, 等人，Meth. Enzymol.，266 =383402,1996 ；Altschul，等人，Nature Genetics, 3 :266_272， 1993 ；Brutlag，等人，Comp. App. Biosci.，6 :237_44，1990。本文使用的“衍生化”是指通过例如遍在蛋白化、加标记、PEG化(即用聚乙二醇衍 生化)和在人蛋白中不常见的氨基酸(例如鸟氨酸)的化学插入或置换等技术来化学修饰 的过程。本文使用的“保守氨基酸置换”是指用另一个具有类似结构和/或化学性质的氨 基酸来替换一个氨基酸，例如用异亮氨酸或缬氨酸替换亮氨酸，用谷氨酸替换天冬氨酸，或 用丝氨酸替换苏氨酸。本文使用的“TACE”是指肿瘤坏死因子a-转化酶，可以与“ADAM-17”互换使用， 后者是指解聚素和金属蛋白酶结构域17，它是一种切割TNF和HERn的酶。本文使用的“糖尿病(diabetes)”是指糖尿病(diabetes mellitus)，归因于有缺 陷的胰岛素分泌和/或作用的慢性高血糖症。世界卫生组织识别出3种主要的糖尿病形式 I型，II型，和妊娠糖尿病。尽管所有形式都是由于胰腺3细胞不能生成足够的胰岛素来 预防高血糖症，原因各不相同。I型糖尿病通常是由于胰腺0细胞的自身免疫破坏。II型 糖尿病的特征在于靶组织中的胰岛素抗性，这造成对异常大量的胰岛素的需求，当0细胞 不能满足该需求时，形成糖尿病。妊娠糖尿病类似于II型糖尿病，因为它包含胰岛素抗性； 妊娠激素可以造成遗传上易于发展该状况的妇女的胰岛素抗性。妊娠糖尿病通常随着小孩 的分娩而消退，但是I和II型糖尿病是慢性状况。所有类型都可以用胰岛素治疗。其中胰 腺不分泌胰岛素的I型糖尿病只能通过注射或吸入胰岛素来直接治疗，尽管饮食和其它生 活方式调节是治疗的一部分。II型可以用饮食治疗、片剂和注射剂的组合来治疗，且经常补 充胰岛素。当胰岛素造成脂肪细胞生成脂连蛋白时，产生正常胰岛素敏感性。脂连蛋白与肝 中的脂连蛋白受体2和肌肉中的脂连蛋白受体1相互作用，停止葡萄糖生成，并造成糖酵解 和脂肪酸氧化。脂连蛋白受体1与称作球形脂连蛋白的切割形式的脂连蛋白起作用，而脂 连蛋白受体2与全长脂连蛋白起作用。当脂细胞变得肥大且响应于胰岛素产生更少的脂连蛋白时，产生胰岛素抗性。在 该状态，细胞变得更易凋亡，且细胞分裂变慢。结果，血浆脂连蛋白水平降低。胰岛素水平 升高，试图造成细胞释放更多的脂连蛋白。但是，随着胰岛素抗性恶化，生成更多的胰岛素 和更少的脂连蛋白。更低水平的脂连蛋白导致肌肉中更低的糖酵解和脂肪酸氧化，并阻止 肝葡萄糖生产的停止。本文使用的“胰岛素抗性”是指个体体内胰岛素生物作用的降低，这 可以通过从血流处置葡萄糖的速率来判断(例如，进入胰岛素敏感组织，例如肌肉，脂肪， 和肝)。本文使用的“代谢综合征”或“综合征X”是指在超重和肥胖患者和II型糖尿病患者中导致过度的心血管病发病率的一群危险因素。世界卫生组织和国家胆固醇教育计 划-成年人治疗专利(NCEP-ATP III)已经阐明代谢综合征的诊断标准(Darwin Deen, American FamilyPhysician,69(12) :2875_2882(2004)表 1根据WHO和ATP III的代谢综合征诊断标准 WHO =世界卫生组织；ATP =成年人治疗组；BMI =体重指数；HDL =高密度脂蛋 白.*-通过2型糖尿病或受损的禁食葡萄糖鉴别出的胰岛素抗性本文使用的“心血管病”是指影响心脏和血管的任意疾病，包括可能造成心脏病发 作和某些类型中风的与动脉粥样硬化(动脉疾病)有关的疾病。本文使用的“与TNF-a有关的状况”是指哺乳动物中由TNF_ a转化酶(TACE) 介导的任意病理状况或疾病。这样的状况和疾病的实例包括，但不限于HIV ；肝炎；成人 呼吸窘迫综合征；骨再吸收疾病；慢性阻塞性肺病；慢性肺炎性疾病；皮炎；囊性纤维化 病；感染性休克；脓毒病；内毒素性休克；血液动力休克；脓毒病综合征；缺血后再灌注损 伤；脑膜炎；银屑病；纤维变性病；恶病质；移植物抗宿主病(GVHD)；移植物排斥；自身免 疫病；类风湿性脊椎炎；关节炎状况，例如类风湿性关节炎，类风湿性脊椎炎和骨关节炎； 骨质疏松症；炎性肠病；克罗恩病；溃疡性结肠炎；多发性硬化；全身性红斑狼疮；麻风病中的ENL ；辐射损伤；哮喘；I型糖尿病，和高含氧肺泡损伤，和其组合。Tracey，等人， 1987, Nature 330:662 664 和 Hinshaw，等人，1990，Circ. Shock 30:279 292 (内毒素性 休克)；Dezube，等人，1990，Lancet，335 :662(恶病质)；Millar，等人，1989，Lancet 2 712 714 和 Ferrai-Baliviera，等人，1989，Arch. Surg. 124 1400 1405 (成人呼吸窘迫综 合征)；Bertolini，等人，1986，Nature 319:516518，Johnson,等人，1989，Endocrinology 124 1424 1427，Holler,等人，1990，Blood75 1011 1016，和 Grau,等人，1989，N. Engl. J. Med. 320 1586 1591 (骨再吸收疾病)；Pignet，等人，1990，Nature，344 :245 247， Bissonnette,等人，1989，Inflammation 13 329 339 禾口 Baughman，等人，1990，J. Lab. Clin. Med. 115 36 42(慢性肺炎性疾病)；Elliot，等人，1995，Int. J. Pharmac. 17 141 145 (类风湿性关节炎)；von Dullemen，等人，1995，Gastroenterology，109 129135 (克 罗恩病)；Duh,等人，1989，Proc. Nat. Acad. Sci. 86 5974 5978，Poll,等人，1990，Proc. Nat. Acad. Sci. 87 =782785, Monto,等人，1990，Blood 79 :2670，Clouse，等人，1989， J. Immunol. 142,431 438，Poll，等人，1992，AIDS Res. Hum. Retrovirus, 191 197，Poli，等 人 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. 87 782 784，Folks，等人，1989，PNAS 86:2365 2368 (HIV 和源自HIV的机会性感染)。本文使用的“与HER2-neU有关的状况”是指哺乳动物中由人表皮生长因子受体 2 (HER2-neu)介导的任意病理状况或疾病，包括肿瘤生长，尤其在乳腺癌中。ADIP0R1的核苷酸序列可以通过登录号NM_015999在公开数据库得到，且在SEQ ID NO 3中给出。ADIP0R1的氨基酸序列如SEQ IDN0 4所述。脂连蛋白受体ADIP0R1和 ADIP0R2用作球状和全长脂连蛋白的受体，且通过脂连蛋白介导增加的AMPK和PPAR- a 配体活性以及脂肪酸氧化和葡萄糖吸收[Yamauchi，等人，Nature 423 :762_769 (2003)]。 Yamauchi,等人[Yamauchi，等人，Nature 423 :762_769 (2003)]通过表达克隆，分离了 编码 ADIP0R1 和 ADIP0R2 的 cDNA。受体 ADIP0R1 公开在[Yamauchi，等人，Nature 423 762-769(2003)]o因此，本发明部分地涉及治疗需要它的患者的糖尿病的方法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及治疗需要它的患者的异常脂细胞活性的方法，其 包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在另一个实施方案中，本发明涉及治疗需要它的患者的胰岛素抗性的方法，其包 含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及治疗需要它的患者的代谢综合征的方法，其包含 下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
在其它实施方案中，本发明涉及造成患者中胰岛素分泌的方法，其包含下述步 骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及增加患者中胰岛素水平的方法，其中所述患者不 遭受糖尿病，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2具有至少75%同一性。在本发明的某些实施方案中，患者遭受I型或II型糖尿病。在本发明的其它实施 方案中，患者遭受妊娠糖尿病。在其它实施方案中，本发明涉及抑制患者中胰岛素降解酶(IDE)的方法，其包含 下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO :1，SEQ ID NO 5, SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，禾口 SEQ ID NO :8。在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者的阿尔茨海默氏病的方法，其包含下述 步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO :1，SEQ ID NO 5, SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，禾口 SEQ ID NO :8。在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者中与脂连蛋白水平有关的心血管病的方 法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO :1。在其它实施方案中，本发明涉及抑制患者中ADAM-17酶的方法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性.因而，SEQ ID NO :1可以用作抗-TNF a疗法和抗-HER2neu疗法。抗_TNF a 疗法在治疗炎症和自身免疫病(例如狼疮，类风湿性关节炎，和I型糖尿病)中是重要的。 抗-HER2neU疗法在影响肿瘤生长(尤其是乳腺癌)中是重要的。在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者中与TNF-a有关的状况的方法，其包含 下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在其它实施方案中，本发明涉及治疗患者中与HER2neU有关的状况的方法，其包 含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。在某些情况下，用于本发明的方法、组合物、剂型和试剂盒中的ADIP0R1的C-末端片段不具有本文所述的精确序列，但是作为变体形式存在。例如，本发明的ADIP0R1的C-末 端片段可以置换它们的氨基酸的至少5%、至少10%或甚至至少25%，而不丧失功能。因 此，SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ IDNO :7 和 SEQ ID NO 8
的肽中的至少一些氨基酸可以置换为其它氨基酸。在本发明的某些实施方案中，所述肽与SEQ ID NO :USEQ IDN0:2、SEQ ID NO :5、 SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7或SEQ ID NO :8具有至少80%同一性，优选地，所述肽与SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7 或 SEQ ID NO :8 具有至 少 90% 同一性，更优选地，所述肽与 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQID N0:5、SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO :7或SEQ ID NO :8具有至少95%同一性，甚至更优选地，所述肽与SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO :2、SEQID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 或 SEQ ID NO 8 具有至少 97% 同一性，甚至更优选地，所述肽与 SEQ ID NO SEQ ID NO :2、SEQID NO :5、SEQ ID NO :6、 SEQ ID NO :7 或 SEQ ID NO :8 具有至少 98% 同一性。在某些实施方案中，该方法涉及治疗遭受糖尿病的患者。在某些实施方案中，该方 法涉及治疗遭受异常脂细胞活性的患者。在某些实施方案中，该方法涉及治疗遭受胰岛素 抗性的患者。在某些实施方案中，该方法涉及治疗遭受代谢综合征的患者。在本发明的某些实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐通过肠胃外途径来施 用。在某些优选实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐通过注射来施用。在其它优选 的实施方案中，所述肽或其药学上可接受的盐通过输注来施用。在其它优选的实施方案中， 所述肽或其药学上可接受的盐通过吸入来施用。在另一个实施方案中，本发明涉及组合物，其包含肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75% 同一性SEQ ID N0:1、SEQ ID NO :2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7 禾口 SEQ ID NO 8 ；和至少一种药学上可接受的载体。在其它实施方案中，本发明涉及组合物，其包含纯化的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少 75% 同一性SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ IDNO :5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7 禾口 SEQ ID NO 8 ；任选地，至少一种药学上可接受的载体。在其它实施方案中，本发明涉及注射剂型，其包含本文所述的组合物；和所述肽的至少一种溶剂。在其它实施方案中，本发明涉及吸入剂型，其包含本文所述的组合物；和用于通过吸入来施用所述肽的至少一种药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，本发明涉及试剂盒，其包含关于给患者施用注射剂型的说明书；包含本文所述组合物的容器；包含所述组合物的药学上可接受的溶剂的容器。
在其它实施方案中，本发明涉及试剂盒，其包含关于给患者施用吸入剂型的说明书；包含本文所述组合物的容器；包含所述组合物的药学上可接受的溶剂的容器。在本发明的某些实施方案中，低压冻干所述组合物。本发明的药物组合物配制成与它的预期给药途径相容，后者优选肠胃外途径，尤 其静脉内(通过注射或通过输注)或通过吸入。用于肠胃外的、真皮内的或皮下的应用的 溶液或悬浮液可以包括下述组分无菌稀释剂例如注射用水，盐水溶液，不挥发性油，聚乙 二醇，甘油，丙二醇，或其它合成溶剂；抗细菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化 剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如醋酸盐，柠檬酸 盐，或磷酸盐，和调节张力的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。可以用酸或碱来调节PH，例如盐酸 或氢氧化钠。肠胃外制剂可以封装在安瓿瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量 管形瓶中。适合注射用的药物组合物包括用于临时制备无菌注射液或分散系的无菌水溶液 (当水可溶时)或分散剂和无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水，抑制细 菌的水，克列莫佛EM (BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，所 述组合物必须是无菌的，且其流动性达到容易实现注射的程度。它必须在生产和储存条件 下是稳定的，且必须防止微生物(例如细菌和真菌)的污染作用。所述载体可以是包括例 如水、乙醇、药学上可接受的多元醇如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇和其合适混合物的溶剂 或分散介质。可以如下维持适当的流动性例如，通过使用包衣例如卵磷脂，通过维持需要 的颗粒大小(在分散系的情况下)和通过使用表面活性剂。可以通过各种抗细菌和抗真菌 剂，例如，对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，抗坏血酸，硫柳萊，等，预防微生物作用。在许多 情况下，优选地在组合物中包含等渗剂，例如，糖，多元醇，例如甘露醇，山梨醇，和氯化钠。 通过在组合物中包含延长吸收的试剂，例如，单硬脂酸铝和明胶，可以实现注射用组合物的 延长吸收。可以如下制备无菌注射用溶液将需要量的活性成分(即，多肽)掺入含有一种 或一组上述成分的适当溶剂，根据需要，随后过滤灭菌。通常，如下制备分散系将活性化合 物掺入无菌载体，后者含有基础分散介质和来自上述那些的其它需要的成分。在用于制备 无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这从以前无 菌过滤过的其溶液生成活性成分和希望的成分的粉末。对于通过吸入给药，所述肽以喷雾剂的形式从含有合适推进剂(例如气体，例如 二氧化碳)的加压容器或分配器递送，或从雾化器递送。为了给药方便和剂量均一，特别有利地以剂量单位形式配制组合物。本文使用的 “剂量单位形式”是指适合用作待治疗的患者的单元剂量的物理上分离的单元；每个单元含 有经计算会产生希望的治疗效应的预定量的肽和需要的药用载体。本发明的剂量单位形式 的规格，取决于且直接依赖于活性化合物的独特特征和要实现的特定治疗效应，和调配这 样的用于治疗患者的活性化合物的领域固有的限制。药物组合物可以与给药说明书一起包含在容器、包装或分配器中。在本发明的某些实施方案中，所述组合物还包含至少一种药学上可接受的载体。 在某些优选实施方案中，所述药学上可接受的载体是乳酸钠。其它可用在用于实现本发明的溶液和组合物中的药用载体包括、但不限于，蛋白，肽，氨基酸，脂类，聚合物，和碳水化合 物(例如，糖类，包括单糖，二糖，三糖，四糖，和寡糖；衍生的糖类例如糖醇，糖醛酸，酯化 的糖；和多糖或糖聚合物)，它们可以单独或组合存在。示例性的蛋白载体包括血清白蛋 白例如人血清白蛋白(HSA)，重组人白蛋白(rHA)，明胶和酪蛋白。也可以在缓冲容量中 起作用的代表性的氨基酸/多肽组分包括丙氨酸，甘氨酸，精氨酸，甜菜碱，组氨酸，谷氨 酸，天冬氨酸，半胱氨酸，赖氨酸，亮氨酸，脯氨酸，异亮氨酸，缬氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸和 aspartame.代表性氨基酸的聚氨基酸例如二亮氨酸和三亮氨酸，也适用于本发明。适用 于本发明的碳水化合物载体包括，例如，单糖例如果糖，麦芽糖，半乳糖，葡萄糖，D-甘露糖， 和山梨糖；二糖，例如乳糖，蔗糖，海藻糖，纤维二糖；多糖，例如棉子糖，松三糖，麦芽糊精， 葡聚糖，和淀粉；和糖醇，例如甘露醇，木糖醇，麦芽糖醇，拉克替醇，木糖醇山梨醇(葡萄糖 醇)，和肌醇。另外，可用于本发明的溶液和组合物可以包括聚合载体例如聚乙烯吡咯烷 酮，羟丙基甲基纤维素，甲基纤维素，乙基纤维素，菲柯尔(一种聚合糖)，葡聚糖，葡萄糖结 合剂(例如，环糊精，例如2-羟丙基-P-环糊精，羟乙基淀粉)，聚乙二醇，果胶，盐(例如， 氯化钠)，抗氧化剂，抗静电剂，表面活性剂(例如，聚山梨酯例如'TWEEN20”和'TWEEN 80”，卵磷脂，油酸，苯扎氯铵，和脱水山梨糖醇酯)，脂类(例如，磷脂，脂肪酸)，类固醇 (例如，胆固醇)，和螯合剂(例如，EDTA)。适用于本发明的溶液和组合物的药用载体和 / 或添加剂的其它实例列在Remington :The Science&Practice of Pharmacy, 20thed., ffi11iams&ffilliams, (2000),禾口 the Physician' s Desk Reference,52nd ed. , Medical Economics, Montvale，N. J。(1998)，它们的公开内容通过援引并入本文。
在本发明的某些实施方案中，SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7或SEQ ID NO 8的肽或其药学上可接受的盐的药学上可接受的溶剂是 水，氯化钠水溶液，氯化钾水溶液，氯化镁六水合物水溶液，醋酸钠三水合物水溶液，葡萄糖 酸钠水溶液，氢氧化钠水溶液，葡萄糖水溶液，乳酸盐化的林格溶液，或其组合。在本发明的 某些实施方案中，SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 或SEQ ID NO :8的肽或其药学上可接受的盐的药学上可接受的溶剂是含水醇，例如，20%乙在本发明的某些实施方案中，包含SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7或SEQ ID NO 8的肽或其药学上可接受的盐的溶液具有约3. 5至 约5. 5的pH。该溶液也可以包含缓冲剂或pH调节剂；通常，缓冲剂是从有机酸或碱制备的 盐。代表性的缓冲剂包括有机酸盐例如柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、醋 酸或酞酸的盐；Tris，氨基丁三醇盐酸盐，或磷酸盐缓冲剂。在本发明的某些实施方案中，低压冻干SEQ ID N0:1、SEQ IDN0:2、SEQ ID NO :5、 SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7或SEQ ID NO :8的肽和其药学上可接受的盐或包含这些肽的组 合物。根据可接受的制药规程来制备各种剂型，前者例如记载在Remington :The Science and Practice of Pharmacy,20th ed. ；Gennaro, A. R. , Ed. ；Lippincott ffilliams&ffilkins Philadelphia, PA, (2000)。另外，本发明的组合物还可以包含除了 SEQ ID N0:1、SEQ IDN0:2、SEQ ID NO :5、 SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7或SEQ ID NO 8的肽或它的药学上可接受的盐之外的第二种活性成分，它可以用于糖尿病、异常脂细胞活性和胰岛素抗性的并发或协同治疗。这些化合 物和其组合物可以包括已知可用于治疗糖尿病、异常脂细胞活性和胰岛素抗性的其它化合 物。合适的其它化合物包括磺酰脲，氯茴苯酸，双胍，噻唑烷二酮，DPP-4抑制剂，a-葡萄糖 苷酶抑制剂，胰高血糖素样-肽(GLP-l)/eXendin-4，和其组合。本发明的SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :6、SEQ ID NO 7 或SEQ ID NO :8的肽或它的药学上可接受的盐可以以本领域技术人员众所周知的许多方式 来制备。可以合成 SEQ IDN0 :1、SEQ ID NO ；2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 或SEQ ID NO :8的肽和它们的药学上可接受的盐，例如，通过下述的方法，或技术人员基于 它们会理解的变化。预见到与本发明有关的公开的所有方法可以在任意规模来实现，包括 毫克，克，数克，千克，数千克或商业工业规模。使用手工或自动化技术，通过液相或固相常规方法，可以重组地或合成地制备可 用于本发明的肽。合适的方法一般地描述在，例如Atherton,E. and Sheppard,R. C. ,Solid Phase peptide synthesis :apractical approach. Oxford, England :IRL Press(1989)；Stewart, J. M. and Young, J.D. , Solid phase peptide synthesis,2ndedition, Rockford :Pierce Chemical Company,91(1984)；R. B.Merrifield, "Solid Phase Peptide Synthesis. I. The Synthesis ofa Tetrap 印 tide，” J.Am. Chem. Soc. 85(14) :2149_2154 (1963)；和L. A. Carpino “l-Hydroxy-7-azabenzotriazole. An efficient peptidecoupling additive, "J.Am. Chem. Soc. 115(10) :4397_4398 (1993)；它们通过援引并入本文。另外，在直接合成过程中可以改变肽的氨基酸序列的任 意部分，和/或使用化学方法与其它蛋白的序列组合，以生成变体肽。优选地，通过常规固相肽合成方法来制备肽。可以使用基于Fmoc化学的标准合成 方法。合成后，从固体支持物切割粗肽，去除侧链保护基。可以纯化粗肽，例如，通过制备级 高效液相色谱，例如C18反相HPLC。通过HPLC，可以进一步将纯化的肽脱盐，并低压冻干成 干燥形式。优选地，将肽储藏在充氮密闭容器中。预见到SEQ ID N0:1、SEQ ID NO :2、SEQ ID N0:5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :7 或
SEQ ID NO :8的肽的所有形式，包括游离酸，游离碱，两性离子形式，同型晶体形式，所有手 性的、对映异构的、外消旋的形式，水合物，溶剂化物，盐和酸盐水合物，都在本发明的范围 内。游离酸和钠、钾和钙盐是优选形式。本发明的SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :6、SEQ ID NO 7 或SEQ ID NO :8的肽可以含有一个或更多个不对称置换的碳原子，且可以以旋光或外消旋 形式分离。因此，预见到结构的所有手性的、非对映的、外消旋的形式和所有几何异构体形 式，除非特别指出特定立体化学或异构体形式。本领域众所周知如何制备和分离这样的旋 光形式。例如，立体异构体的混合物可以通过标准技术来分离，包括，但不限于，外消旋形式 的拆分，正常的、反相和手性色谱法，优先盐形成、重结晶等，或通过手性合成从手性原料制 备或通过目标手性中心的审慎合成。容易理解，在合成过程中存在的官能团可以含有保护基。已知保护基本身是可以 选择性地在官能团上添加和去除的化学官能团，例如羟基和羧基。这些基团存在于化合物中，以赋予对化合物暴露的化学反应条件的这样的官能度惰性。本发明可以采用众多 保护基中的任一种。优选的保护基包括苄氧羰基和叔丁氧羰基。可以根据本发明采用的 其它优选的保护基描述在 Greene，T. ff.和 Wuts，P. G. M.，ProtectiveGroups in Organic Synthesis 2d. Ed. , ffiley&Sons,1991。可用于例如治疗糖尿病、异常脂细胞活性和胰岛素抗性的药物试剂盒，其在一个 或更多个无菌容器中包含有效量的SEQ ID NO :USEQID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、 SEQ ID NO :7或SEQ ID NO :8的肽或其药学上可接受的盐，也在本发明的范围内。使用本领 域技术人员熟知的常规灭菌方法，可以实现容器的灭菌。材料的无菌容器可以包含分开的 容器，或一个或更多个多部件容器，如UNIVIAL 两部件容器(购自Abbott Labs,Chicago, Illinois)所例证的，这取决于需要。本领域技术人员会容易地明白，这样的试剂盒还可以 包含，如果需要，众多常规药物试剂盒组分中的一个或更多个，例如，用于混合组分的其它 管形瓶等。在试剂盒中也可以包含说明书，其作为插入物或作为标签，指示要施用的组分的 数量，关于给药的指南和/或关于混合组分的指南。在下面的实施例中进一步定义了本发明，其中所有部分和百分比都是按体重计 算，除非另有说明。应当理解，这些实施例在指示本发明的优选实施方案的同时，仅仅作为 解释来给出。从上面的讨论和这些实施例中，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征， 且不脱离其精神和范围，可以作出本发明的多种变化和修改，以使它适应不同用途和条件。
实施例实施例1 :SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ IDNO :6、SEQ ID NO 7 和SEQ ID NO 8的合成使用常规固相肽合成方法，合成SEQID N0:1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO 8 的月太SEQIDNO1(ECM32) :VVAAAFVHFYGVSNLQEFRYGLEGGCTDDTLL
SEQIDNO2 (ECM30) :HVLVVAAAFVHFYGVSNLQEFRYGLEGGCT
SEQIDNO5 (ECM25) :HFYGVSNLQEFRYGLEGGCTDDTLL
SEQIDNO6(ECM 10) :VVAAAFVHFY
SEQIDNO7(ECM 12) :HFYGVSNLQEFR
SEQIDNO8(ECM 9) :SGCTDDTLL
使用基于Fmoc化学的标准合成方法。合成后，从固体支持物切割粗肽，去除侧链保护基。使用Varian SD-2仪器，通过C18反相HPLC纯化粗肽。用缓冲液B梯度洗脱肽30
分钟(缓冲液A 含有0. 1 % TFA的水相，pH 2. 5，缓冲液B 乙腈；流速600ml/min,在230mm 检测)。通过HPLC进一步将纯化的肽脱盐，低压冻干至干燥形式。通过分析级HPLC分析和 质谱分析，表征肽，然后包装在充氮的密闭管形瓶中。实施例2 正常大鼠中的血浆葡萄糖和胰岛素测试通过在盐水中的2mg/mL静脉内地治疗6_8只动物的正常大鼠组测试SEQ ID NO 1 (ECM32)和SEQ ID N0:2(ECM30)的肽，并与未治疗的对照组(仅0.9%盐水溶液)相对 比。所有3组在第0天禁食。在第1天，在葡萄糖给药(5mL/kg)后0、30、60、90和120分 钟，测量禁食血浆葡萄糖和胰岛素。也测量ECM30和ECM32的血浆水平。各自随时间而变化的按照ng/mL计算的胰岛素水平和按照mg/dL计算的葡萄糖水平的数据的图如图1和图 2所示。在几个时间点，与对照组相比，SEQ ID NO :1(ECM32)和SEQ IDNO :2(ECM30)两种 肽表现出对血浆胰岛素的显著升高。对于ECM30，在30分钟时间点胰岛素峰值是对照观测 值的2倍。由于所有大鼠都是正常的(即，非糖尿病的)，在所有情况下葡萄糖在30分钟达 到峰值175-210mg/dl。认为在正常情况下产生足够的胰岛素来饱和信号传递。这支持了 SEQ ID NO :1(ECM32)和SEQ ID N0:2(ECM30)的肽的肽序列或其部分可以起胰岛素-敏化 剂的作用。实施例3 糖尿病大鼠中的血浆葡萄糖和胰岛素测试通过在盐水中的2mg/mL和10mg/mL静脉内地治疗8只动物的糖尿病大鼠组测试 SEQ ID NO 2的肽(ECM30)，并与对照组(于盐水中的牛血清白蛋白)相对比。所有3组在 第0天禁食。在第1天，在葡萄糖给药后0、30、60、90和120分钟，测量禁食血浆葡萄糖和 胰岛素。各自随时间而变化的按照ng/mL计算的胰岛素水平和给药前葡萄糖的％的数据的 图如图3和图4所示。ECM30没有增加胰岛素。实施例4:切割酶ECM32的切割酶也是潜在的治疗靶物。将在切割位点的ECM32序列与作为能切割 或结合ECM32的潜在酶(蛋白酶)的弹性蛋白酶(X-VV)和ADAM17(X-VVAA)相匹配。在Omg/ L、12. 5mg/L、25mg/L 和 50mg/L 的水平，测试 SEQ ID NO 1 (ECM32)和 SEQ ID NO :2(ECM30) 的肽对切割酶的作用。发现ECM32对ADAM-17具有强抑制作用，如图5所示。未切割的ECM30没有显著 抑制ADAM-17活性，如图6所示。ECM30和ECM32都没有表现出弹性蛋白酶抑制。ECM30和 /或ECM32也潜在地结合IDE胰岛素降解酶IDE(L-V)，因为用ECM32观察到IDE的抑制。 ADAM-17和IDE都影响胰岛素浓度。该数据显示，ECM32对影响胰岛素浓度的几种蛋白酶具 有抑制作用。该数据还显示，ECM32可以由几种蛋白酶形成。ECM30不缺少天然的ECM32，但是它们具有比正常大鼠更低的水平。这些大鼠中 的ADAM-17和IDE功能可以改变，导致疾病状态。不希望受理论的约束，相信由于改变的 ADAM-17活性，ECM30不会抑制糖尿病大鼠中的IDE。实施例5 :ECM32注射对胰岛素抗性的影响评价了 ECM32(SEQ ID NO :1)注射对糖尿病大鼠中葡萄糖的胰岛素抗性的影响。 ECM32 (SEQ ID NO 1)和对照(没有ECM32)的体内稳态模型评估抗性(H0M0-IR)结果如图 7所示。实施例6 ；对血浆葡萄糖水平的影响评价了 ECM32(SEQ ID NO 1)和ECM30 (SEQ ID NO :2)对正常和糖尿病大鼠中血 浆葡萄糖水平的影响。随同对照组一起，在2mg/kg注射肽。正如通过增加的胰岛素所预见 的，ECM32会降低葡萄糖水平。ECM30也会降低葡萄糖水平，但是在更长的时间点。这可能 是由于ADAM-17在体内将ECM30切割成IDE抑制形式。结果如图8所示。实施例7 对血浆脂连蛋白和ECM32水平的影响评价了 ECM32(SEQ ID NO 1)对正常和糖尿病大鼠中血浆脂连蛋白和ECM32水平 的影响。随同对照组一起，在2mg/kg注射肽。结果如下面的表2所示。
表2
平均值±标准偏差血浆中的脂连蛋白 (pg/ml)血浆中的ECM32 (AdipoRl) (ng/ml)对照组ECM32 (2mg/kg 120 min)对照组ECM32 (2mg/kg 120min)正常大鼠 (SD)24.09 士 3.7220.00 ± 8.0798.80 士 22.95112.94 士 18.49糖尿病大鼠 (ZDF)20.85 土 3.9420.46 ±3.4163.66 ±7.9895.08 ±36.13实施例8 IDE活性的抑制在4 个不同的剂量水平(0,12. 5，25dP50iig/ml 的 ECM32 和 0，25，50，和 100 u g/ ml 的 ECM30)，评价了 ECM32 (SEQ ID NO 1)和 ECM30 (SEQ ID NO 2)对 IDE 活性随着时间的 影响。ECM32 (SEQ IDN0 1)的结果如图9所示，ECM30 (SEQ ID NO 2)的结果如图10所示。 从这些图可以看出，ECM32会随着时间抑制IDE活性，但是ECM30随着时间对IDE没有显著影响。实施例9 :ADAM-17活性的抑制评价了 ECM32(SEQ ID NO 1)，ECM30(SEQ ID NO 2), ECM25(SEQ IDN0 5), ECM10 (SEQ ID NO 6), ECM12(SEQ ID NO :7)，和 ECM9 (SEQ ID NO 8)对 ADAM-17 活性的影 响。结果如下面的表3所示。从该表可以看出，ECM32(SEQ ID NO 1), ECM25 (SEQ ID NO: 5)，ECM10(SEQ ID NO :6)，ECM12 (SEQ ID NO :7)，和 ECM9 (SEQ ID NO :8)会抑制 IDE 活性，但 是ECM30对IDE没有显著影响。从该表还可以看出，ECM32(SEQ ID NO 1)会抑制ADAM-17 活性，但是 ECM30(SEQ ID NO 2), ECM25 (SEQ ID NO :5)，ECM10 (SEQ ID NO :6)，ECM12(SEQ ID N0:7)JPECM9(SEQ ID NO 8)对 ADAM-17 活性没有显著影响。表3
23 当本文中将范围应用于物理性质(例如分子量)或化学性质(例如化学配方)时， 意在包括其中实施方案的特定范围的所有组合和子组合。在本文件中引用或描述的每篇专利、专利申请和出版物的公开内容，都在此通过 援引整体并入本文。本领域技术人员会理解，可以对本发明的优选实施方案作出许多变化和改变，且 可以不脱离本发明精神地作出这些变化和改变。因此，当落入本发明的真实精神和范围内 时，所附的权利要求书意在涵盖所有这样的等同变化。
权利要求
治疗需要它的患者的糖尿病的方法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO1具有至少75％同一性。
2.权利要求1的方法，其中所述患者遭受I型或II型糖尿病。
3.权利要求1的方法，其中所述患者遭受妊娠糖尿病。
4.权利要求1的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少80%同一性。
5.权利要求1的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
6.权利要求1的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
7.权利要求1的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
8.权利要求1的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
9.治疗需要它的患者的异常脂细胞活性的方法，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
10.权利要求9的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少80%同一性。
11.权利要求9的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
12.权利要求9的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
13.权利要求9的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
14.权利要求9的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
15.治疗需要它的患者的胰岛素抗性的方法，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐； 其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
16.权利要求15的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
17.权利要求15的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
18.权利要求15的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
19.权利要求15的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
20.治疗需要它的患者的代谢综合征的方法，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐； 其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
21.权利要求20的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
22.权利要求20的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
23.权利要求20的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
24.权利要求20的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
25.造成患者中胰岛素分泌的方法，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐； 其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
26.权利要求25的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
27.权利要求25的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
28.权利要求25的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
29.权利要求25的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
30.权利要求25的方法， 其中所述患者遭受糖尿病。
31.权利要求25的方法，其中所述患者遭受异常脂细胞活性。
32.权利要求25的方法，其中所述患者遭受胰岛素抗性。
33.权利要求25的方法，其中所述患者遭受代谢综合征。
34.增加患者中胰岛素水平的方法，其中所述患者不遭受糖尿病，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO :1或SEQ ID NO 2具有至少75%同一性。
35.权利要求34的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
36.权利要求34的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
37.权利要求34的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
38.权利要求34的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
39.抑制患者中胰岛素降解酶(IDE)的方法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
40.权利要求39的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少90%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
41.权利要求39的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少95%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
42.权利要求39的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少97%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
43.权利要求39的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少98%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
44.权利要求39的方法，其中所述患者遭受阿尔茨海默氏病。
45.权利要求39的方法，其中所述患者遭受心血管病。
46.治疗患者的阿尔茨海默氏病的方法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
47.权利要求46的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少90%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
48.权利要求46的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少95%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
49.权利要求46的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少97%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO 5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
50.权利要求46的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少98%同一性SEQID NO 1, SEQ ID NO ，5，SEQ ID NO :6，SEQ ID NO :7，和 SEQ ID NO :8。
51.治疗患者中与脂连蛋白水平有关的心血管病的方法，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一性SEQID NO :1。
52.权利要求51的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少90%同一性SEQID NO :1。
53.权利要求51的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少95%同一性SEQID NO :1。
54.权利要求51的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少97%同一性SEQID NO :1。
55.权利要求51的方法，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少98%同一性SEQID NO :1。
56.抑制患者中ADAM-17酶的方法，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐； 其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
57.权利要求56的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
58.权利要求56的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
59.权利要求56的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
60.权利要求56的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
61.治疗患者中与TNF-α有关的状况的方法，其包含下述步骤 给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
62.权利要求61的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
63.权利要求61的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
64.权利要求61的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
65.权利要求61的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
66.权利要求61的方法，其中所述状况选自=HIV ；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨再吸收疾病；慢性阻塞性肺 病；慢性肺炎性疾病；皮炎；囊性纤维化病；感染性休克；脓毒病；内毒素性休克；血液动力 休克；脓毒病综合征；缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维变性病；恶病质；移植物抗 宿主病(GVHD)；移植物排斥；自身免疫病；类风湿性脊椎炎；关节炎状况，例如类风湿性关节炎，类风湿性脊椎炎和骨关节炎；骨质疏松症；炎性肠病；克罗恩病；溃疡性结肠炎；多发 性硬化；全身性红斑狼疮；麻风病中的ENL ；辐射损伤；哮喘；高含氧肺泡损伤，I型糖尿病， 和其组合。
67.治疗患者中与HER2neU有关的状况的方法，其包含下述步骤给所述患者施用有效量的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少75%同一性。
68.权利要求67的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少90%同一性。
69.权利要求67的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少95%同一性。
70.权利要求67的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少97%同一性。
71.权利要求67的方法，其中所述肽与SEQ ID NO 1具有至少98%同一性。
72.权利要求67的方法，其中所述状况是肿瘤生长。
73.权利要求67的方法，其中所述状况是乳腺癌。
74.组合物，其包含肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75%同一 性SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 和 SEQ ID NO 8 ；禾口至少一种药学上可接受的载体。
75.权利要求74的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少90%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
76.权利要求74的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少95%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
77.权利要求74的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少97%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
78.权利要求74的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少98%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
79.权利要求74的组合物，其中所述组合物被低压冻干。
80.组合物，其包含，纯化的肽或其药学上可接受的盐；其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少75% 同一性SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ IDNO :5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7 禾口 SEQ ID NO 8 ；和任选地，至少一种药学上可接受的载体。
81.权利要求80的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少90%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
82.权利要求80的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少95%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
83.权利要求80的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少97%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
84.权利要求80的组合物，其中所述肽与选自下述的至少一种肽具有至少98%同一性SEQID NO :1、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO 7 禾口 SEQ ID NO :8。
85.权利要求80的组合物， 其中所述组合物被低压冻干。
86.注射剂型，其包含权利要求74或权利要求80所述组合物；和 所述肽的至少一种溶剂。
87.权利要求86的注射剂型， 其中所述溶剂是等渗盐水溶液。
88.吸入剂型，其包含权利要求74或权利要求80所述组合物；和用于通过吸入来施用所述肽的至少一种药学上可接受的载体。
89.试剂盒，其包含关于给患者施用注射剂型的说明书；包含权利要求74或权利要求80所述组合物的容器；和包含权利要求74或权利要求80所述组合物的药学上可接受的溶剂的容器。
90.试剂盒，其包含关于给患者施用吸入剂型的说明书；包含权利要求74或权利要求80所述组合物的容器；包含权利要求74或权利要求80所述组合物的药学上可接受的溶剂的容器。
全文摘要
公开了使用脂连蛋白受体R1的C-末端片段治疗糖尿病、异常脂细胞活性和胰岛素抗性的方法。也公开了使用脂连蛋白受体R1的C-末端片段造成健康和糖尿病患者分泌胰岛素的方法。另外，公开了使用脂连蛋白受体R1的C-末端片段增加健康患者的胰岛素水平的方法。另外，公开了治疗异常脂细胞活性、治疗代谢综合征、造成胰岛素分泌、增加胰岛素水平、抑制胰岛素降解酶、治疗阿尔茨海默氏病、治疗与脂连蛋白水平有关的心血管病、抑制ADAM-17酶、治疗与TNF-α有关的状况和治疗与HER2-neu有关的状况的方法。也公开了组合物、剂型和试剂盒。
文档编号C12Q1/68GK101932728SQ200880125821
公开日2010年12月29日 申请日期2008年7月9日 优先权日2007年11月30日
发明者M·普日亚, R·马 申请人:西门子医疗保健诊断公司