基于分子印记聚合物的小分子和蛋白质分析装置的制作方法

专利名称：基于分子印记聚合物的小分子和蛋白质分析装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及诊断领域，而且更特别地涉及基于使用分子印记聚合物测量液体样品 中分析物水平的流通(flow through)装置或横向流动(lateral flow)装置，以及其使用 的方法和试剂盒。
背景技术：
用于对液体样品中的分析物例如蛋白质相关的分析物的水平进行有效和精确的 检测和定量的方法和装置，对于在各式各样的应用中的使用是特别令人感兴趣的。目前，蛋白质分子和含有蛋白质的生物体例如细菌和病毒的检测和测量包括利用 靶特异性抗体的免疫测定。如今使用复杂的仪器和基于抗体的装置来进行液体样品中感兴 趣的各种分析物和蛋白质相关分子的快速、实时和简单分析。抗体被用于若干领域例如治疗、免疫亲和纯化中，以及特别地免疫测定中。通过将 动物用相应的抗原进行免疫导致多克隆抗体，或者通过使用融合细胞以允许获得的细胞系 产生单克隆抗体来生产抗体。对于开发生产抗体或抗体样化合物的可选的方法的尝试包括应用于细菌或植物 的重组技术。可针对大多数化合物产生抗体，而且所述抗体已被用于从基础研究到临床分 析范围内的各种应用(Kohler 和 Milstein，1975，Nature 256,495497 ；Oellerich, · 1984， J.Clin.Chem. Clin. Biochem. 22,895904 Gosling,1990. Clin. Chem. 36, 1408 1427 ； Kurstak，1986，在 Enzyme Immunodiagnosis (酶免疫诊断)中，Kurstak，编辑，第 5-11 页， Academic Press,伦敦)。使用标记的报道子的免疫学技术已被广泛用于生物学和医学研究以及临床诊断 中。尽管已知的报道子和步骤有很多(Oellerich, 1984, Clin. Chem. Clin. Biochem. 22, 895-904 ；Gosling, 1990，Clin. Chem. 36，1408-1427)，但是所有目前已知的免疫诊断技术都 利用抗体的显著的亲和力和特异性。然而，抗体是不稳定的生物分子，其需要小心的操作和储存。它们的生产是费时的 过程(Kurstak，1986，在Enzyme Immunodiagnosis (酶免疫诊断)中，Kurstak，编辑，第 5-11 页，Academic Press，伦敦)，包括费力的步骤例如半抗原对载体蛋白的偶合、动物的免疫接 种、动物的放血以及免疫球蛋白的分离和纯化。非生物抗体模拟物(人工抗体)是天然抗体的有用的替代物。这种系统的使用可 减少对动物来源的需要。此外，可针对通常被认为难以或不可能针对其产生抗体的分子例 如免疫抑制剂、短肽或其他小分子获得抗体模拟物。通过化学方法制备的这种非生物系统 也将比天然抗体更稳定，其允许重复使用、高温下运行、容易灭菌和增加的逐批可重复性。在其中使用稳定的和容易制备的高度选择性试剂例如合成的聚合物而非抗体的 类似于免疫测定的技术是已知的。该方法利用分子印记聚合物(molecular imprinted polymer, MIP) 0分子印记聚合物是通过将功能单体围绕模板或“印记(print) ”分子聚合 而制备的聚合物，然后通过提取或其他方法从聚合物除去该模板或“印记”分子，以使聚合 物在重新暴露于印记分子时选择性地吸收模板或印记分子。Mosbach等人的美国专利第5，821，311,5, 872，198和5，959，050号描述某些MIP聚合物、聚合步骤以及由功能单体的悬
浮聚合而产生的用作色谱介质的对称的珠子。分子印记的方法在近些年已经吸引了许多注意(Alexander等人2006，J. Mol. Recognit. ；19 :106-180)。分子印记源自于通过模板聚合作用在聚合物中产生定做的识 别位点的概念(Mosbach K.等人，Bio/Technology，1996，14，163-170 ;Ansell R. J.等 人，Curr. Opin. Biotechnol. ，1996,7,89-94 ；Wulff G. Angew. Chem. Int. Ed. Engl, 1995, 34,1812-32 ；Vidyasankar S.等人，Curr. Opin. Biotechnol.，1995，6，218-224 ；和 Shea K. J, Trends In Polymer Science，1994，2，166-173)。分子印记聚合物已经显示了惊 人的识别特性，其已被用于各种领域例如药物分离(Fischer L.等人，J.Am. Chem. Soc, 1991,113,9358-9360 ；Kempe M 等人，J. Chromatogr. , 1994,664,276-279 ；Nilsson K.等 人，J. Chromatogr.，1994，680，57-61)、受体模拟物(Ramstrom 0.等人，Tetrahedron Asymmetry,1994,5, 649-656 ；Ramstrom 0.等 A, J.Mol. Recogn. ,1996,9,691-696 ； Andersson L. I.等人,Proc. Natl. Acad. Sci. ,1995,92,4788-4792 ；Andersson L. I. ,Anal. Chem.，1996，68，111-117)、仿生感应器(Kriz D.等人，Anal. Chem.，1995，67，2142-2144)、 抗体模拟物(Vlatakis G.等人，Nature，1993，361，645-647)、模板辅助合成(Bystrom S. E.等人，J. Am. Chem. Soc.，1993，115，2081-2083)和催化(Muller R.等人，Makromol. Chem.，1993，14,637-641 ；BeachJ. V.等人，J. Am. Chem. Soc.，1994，卷 116,379-380)。已经描述了用于对蛋白质和其他大分子进行印记的各种方法。例如，已经通过 将基质物质与分子图像要结合的完整的多肽链混合而产生了多肽的离子型分子图像(美 国专利第5，756，717号)。已经分别通过在每种完整蛋白的存在下将丙烯酰胺聚合来制 备细胞色素c、血红蛋白和肌红蛋白的分子印记(美国专利第5，814，223号)。马肌红蛋 白的印记在含有鲸鱼肌红蛋白的蛋白质混合物中选择性地结合马肌红蛋白(美国专利第 5，814，223 号)。美国专利第6582971号中描述了在有机溶剂和水溶液之间的界面处存在印记分 子和宿主聚合物的情况下通过单体的界面聚合作用对大生物分子进行印记的方法。美国专 利第6979573号中描述了包括定义模板分子的印记的基质物质的印记组合物，其中所述模 板分子通常对应于感兴趣的大分子的一部分。已经显示，MIP可被制备并靶向烟草花叶病毒(Linden等人，2006，Biomaterials 27,4165-4168)。分子印记方法可包括“表位印记”(Rachkov和 Minoura，2000，J. Chromatogr Α.； 889，111-118)，其中在蛋白质表面上鉴定关键的表位并用代表该表位的线性肽作为靶来制 备 ΜΙΡ。用于检测各种分析物的基于分子印记的众多分析装置和方法已被Ye和Haupt进 行综述(Anal. Bioanal. Chem. 2004，378，1887-1897)。主要的挑战是从聚合物-分析物结合 事件中获得明显的信号。已经提出了各种手段，然而其中大多数手段包括复杂的方法和工 具。基于MIP的感应器的一些实例如下Yan等人(美国专利第5，587，273号)描述这样的感应器，其利用分子印记膜 并在曝光步骤之后测量该膜的电容或光特性或对膜进行光谱分析。HUang(美国专利第 6，680，210号)公开了用于对大分子进行检测、分析和定量的基于MIP的装置。通过在结合后将分析物分子从聚合物解离然后对其分析而进行检测。Williams等人(美国专利6，807，842)公开了用于检测分析物的存在和浓度的分 子识别感应器系统，其包括具有半导电聚合物膜的电阻式感应器，所述半导电聚合物膜在 暴露于分析物时膨胀。Kroeger等人(英国专利第2，337，332号)公开了具有用印记的合成聚合物修饰 的表面的电极，其中所述印记的合成聚合物特异性地识别、结合并浓缩在紧贴近电极表面 处的分析物。在电极表面直接地通过电化学(例如通过差示脉冲或方波伏安法)对结合的 分析物自身或与电极预孵化的或被加入样品(竞争/替换测定)中的电化学活性衍生物进
行定量。Penelle (美国专利第6，890，486号)公开了将MIP技术与石英晶体微量天平 (QCM)联合的基于六氯苯MIP的感应器。Green等人(美国专利第6，638，498号)公开了利用具有对特定胆汁酸和/或盐 例如DCA和⑶CA有特异性结合能力的MIP的装置。通过用样品中的⑶CA替换放射性标记 的CDCA来进行检测。在对上述的修饰中，胆酸的荧光衍生物被用作测定物质。Lawrence等人(美国专利第6，833，274号)公开皮质醇纤维光学感应器，其使用 皮质醇印记的聚合物和皮质醇_荧光发色团偶合物的替换。Schwartz等人(美国专利第6，967，103号)公开了爆炸检测器(explosive detector)，其利用一系列涂布了 MIP的分叉的纤维光缆。各自带有校正的气流的单个感应 器纤维束被用来将纤维暴露于靶分子。检测器激发每条纤维专用的激发光源，并通过含有 过滤器和光电二极管的检测器同时读取和处理所得荧光的强度，所述强度对于靶分子的浓 度是指示性的。在若干实验室中已经显示，与分析物-标志物偶合物的替换联合的MIP的使 用是可行的(Vlatakis G.等人，Nature，1993，361，645-647，Levi 等人，1997，Anal. Chem. 69. 2017-2021 ；Nathaniel Τ.等人，J. Am. Chem. Soc. 2005，127，5695-5700 ；Nicholls C.等人，Biosens. Bioelec.，2006，21，1171-1177)。分析物与分析物-标志物偶合物的 竞争也与 MIP—起用作感应方法(Piletsky S. A.等人，Analytical Letters，1997，30， 445-455 ；Surugiu I.等人，Analyst，2000，125，13-16)。PCT申请WO 07/002237描述了分析液体样品的方法，其包括将样品与MIP接触。美国专利第6，890，486号描述石英晶体微量天平感应器和MIP技术一起的使用。发明简述背景技术未公开MIP在流通装置或横向流动装置中的使用。此外，背景技术方法 包括繁重的样品制备，并要求由经培训的人员使用复杂的辅助分析装置。因此，存在对于使用MIP诊断小分子、大分子、细胞和整个生物体的快速和简单装 置和试剂盒的广泛承认的需要，并且对它们的拥有将是高度有利的，其缺少现有技术的至 少一些限制。本发明在其各种实施方案中提供用于液体样品中的靶分子包括小分子、多肽、蛋 白质、细胞和传染病媒介物的快速和简单确定的装置、方法和试剂盒，所述装置、方法和试 剂盒能够实时测量液体样品中的这些实体，而且是高度选择性的、高度敏感的、操作简单 的、低花费的和便携的。所述装置、方法和试剂盒在至少一些实施方案中还提供MIP在流通或横向流动装置中的使用。所述装置、方法和试剂盒适合由未受训练的人员使用，而不需要不常见的和操作 复杂的仪器。当本发明的试剂盒任选地需要辅助仪器时，它优选地为便携的和手持的、相对 便宜的和使用简单的。本发明提供用于确定液体样品中的靶多肽、蛋白质、细胞和传染病媒介物的快速 和使用简单的测定装置、方法和试剂盒，其被设计以用于家庭、诊所、医师办公室、医院床 旁、工厂或野外。该测定装置比传统的快速测试测定获得较大的敏感性而不使特异性打折 扣，导致比传统装置所产生的更强和/或更稳定的视觉信号、更容易的结果解释和不确定 结果发生的减少。在少量时间内，该装置可被用于检测各种生物、环境和工业样品中的靶分 析物而不需要复杂的样品制备步骤，并且因此适合由甚至野外条件中的未受训练的人员使 用。本发明用全新的双替换/竞争手段将横向流动装置和流通装置的优点(快速、相 对便宜和使用简单)与用于诊断的MIP的优点(有特异性、受控产生和非常稳定)相结合。预期的是本发明的装置在至少一些实施方案中将提供“实时”测量，即相对快速的 检测时间，优选地为约15分钟，更优选地为少于15分钟。可选地，取决于所用的可检测的 报道子，可使用商业上可得的和使用简单的辅助装置例如读数器、扫描仪等来解释结果。基于MIP对分析物的结合，使用靶特异性的分子印记聚合物(MIP)来检测样品中 靶分析物的存在。根据本发明的一些实施方案，提供了检测液体样品中至少一种分析物的方法。所 述方法包括提供包括固定于固体支持物的具有分析物特异性结合位点的分子印记聚合 物，以及将液体样品应用于所述装置的样品应用区域的诊断装置，其中所述液体样品可沿 着沿着或穿过固体支持物的流动途径移动；将液体样品应用于样品应用区域并允许该样品 沿着或穿过固体支持物流动，并与分子印记聚合物接触；以及检测所述分析物与所述分子 印记聚合物的结合。根据本发明的一些实施方案，提供了检测液体样品中至少一种分析物的诊断装 置，所述装置包括固定于固体支持物的具有分析物特异性结合位点的分子印记聚合物，其 中所述液体样品可沿着沿着固体支持物的流动途径移动；用于将液体样品应用于所述装置 并将其与分子印记聚合物接触的样品应用区域；以及用于检测所述分析物与所述分子印记 聚合物的结合的检测区域。根据本发明的方法或装置的一些实施方案，所述装置包括横向流动装置、流通装 置或组合了横向流动和流通元件的装置，其中液体样品从样品应用区域沿着或穿过装置的 固体支持物组件沿着装置的流动途径流动。根据一些实施方案，分析物替换可释放地结合至分子印记聚合物的分析物类似 物报道子偶合物，其中分析物类似物报道子偶合物的替换表明样品中分析物的存在。根据一些实施方案，可释放的分析物类似物报道子偶合物被结合至分子印记聚 合物，其中所述分析物对分子印记聚合物的结合位点的亲和力至少等于分析物类似物报 道子偶合物对分子印记聚合物的分析物特异性结合位点的亲和力。当将分子印记聚合物与 液体样品中的分析物接触时，分析物被结合而分析物类似物报道子偶合物被替换。该装 置任选地还包括结果区域，该结果区域包括在样品流动途径中固定于固体支持物的分析物类似物报道子偶合物结合元件，而且报道子-偶合物结合元件能够结合替换的分析物类 似物报道子偶合物。分析物类似物报道子偶合物的替换与液体样品中分析物的浓度是 任选地成比例的，使得分析物与分子印记聚合物的结合的检测包括替换的分析物报道子 偶合物与分析物类似物报道子偶合物结合元件的结合的检测。根据一些实施方案，分析物替换可释放地结合至所述分子印记聚合物的第一结合 剂分析物偶合物，其中替换的第一结合剂分析物偶合物替换可释放地结合至固体支持 物的第二结合剂报道子偶合物，其中第二结合剂报道子偶合物的替换表明样品中分析 物的存在。根据一些实施方案，可释放的第一结合剂分析物偶合物被结合至分子印记聚合 物，其中所述分析物对分子印记聚合物的结合位点的亲和力至少等于第一结合剂分析物 偶合物对分子印记聚合物的分析物特异性结合位点的亲和力。当将分子印记聚合物与液体 样品中的分析物接触时，分析物被结合而第一结合剂分析物偶合物被替换。该装置任选 地还包括报道子_偶合物结合区域，所述报道子_偶合物结合区域包括在液体样品流动途 径中固定于固体支持物的报道子_偶合物结合元件，所述报道子_偶合物结合元件具有对 于结合于其上的可检测的、可释放的第二结合剂报道子偶合物的结合位点。任选地和优 选地，第一结合剂分析物偶合物对于报道子偶合物结合元件的分析物特异性结合位点的 亲和力至少等于第二结合剂报道子偶合物对报道子偶合物结合元件的结合位点的亲和 力。第一结合剂分析物偶合物的结合替换第二结合剂报道子偶合物，而且第二结合剂 报道子偶合物的替换与液体样品中分析物的浓度是任选地和优选地成比例的。该装置任选 地还包括在样品流动途径中固定于固体支持物的第二结合剂报道子偶合物结合元件，所 述报道子偶合物结合元件能够结合替换的第二结合剂报道子偶合物。对于分析物与分子 印记聚合物的结合的检测任选地包括对于第二结合剂报道子偶合物与分析物类似物报 道子偶合物结合元件的结合的检测。根据一些实施方案，本发明的方法或装置包括分析物类似物报道子偶合物，其 中所述分析物与分析物类似物报道子偶合物竞争分子印记聚合物的分析物特异性结合 位点，其中未结合的分析物类似物报道子偶合物的存在被检测并表明样品中分析物的存在。根据一些实施方案，本发明的方法或装置包括分析物类似物报道子偶合物，其 中所述分析物对分子印记聚合物的分析物特异性结合位点的亲和力至少等于分析物类似 物报道子偶合物对分子印记聚合物的分析物特异性结合位点的亲和力。当将分子印记聚 合物与液体样品中的分析物接触时，分析物和分析物类似物报道子偶合物竞争分子印记 聚合物的结合位点。该装置优选地还包括结果区域，该结果区域包括结合于固体支持物的 分析物类似物报道子偶合物结合元件，报道子偶合物结合元件能够结合未结合的分析物 类似物报道子偶合物并提供可检测的信号，所述可检测的信号表明液体样品中分析物的 浓度。根据一些实施方案，本发明的方法或装置包括第一结合剂分析物偶合物、第二 结合剂报道子偶合物和第二结合剂受体偶合物结合元件。分析物与第一结合剂分析 物偶合物竞争分子印记聚合物的分析物特异性结合位点，使得在分析物存在下至少一部分 所述第一结合剂分析物偶合物是未结合的。然后未结合的第一结合剂分析物偶合物与第二结合剂报道子偶合物竞争对于第二结合剂受体偶合物结合元件的结合。根据一些实施方案，本发明的方法或装置包括第一结合剂分析物偶合物，其中 所述分析物对分子印记聚合物的分析物特异性结合位点的亲和力至少等于第一结合剂 分析物偶合物对分子印记聚合物的分析物特异性结合位点的亲和力，其中当将所述分子印 记聚合物与液体样品中的分析物接触时，分析物和第一结合剂分析物偶合物分析物竞争 分子印记聚合物的分析物特异性结合位点。未结合的第一结合剂分析物偶合物在液体样 品的流动途径中流动。该装置任选地还包括第二结合剂报道子应用区域，其包括干燥状 态的第二结合剂报道子偶合物；下游的报道子偶合物结合区域，其包括在液体样品流动 途径中固定于固体支持物的报道子-偶合物结合元件。第一结合剂分析物偶合物对报道 子-偶合物结合元件的亲和力至少等于第二结合剂报道子偶合物对结合位点的亲和力。 当将干燥的第二结合剂报道子偶合物与未结合的第一结合剂分析物偶合物接触时，第 二结合剂报道子偶合物和未结合的第一结合剂分析物偶合物竞争与报道子_偶合物 结合元件的结合，而且未结合的第二结合剂报道子偶合物在液体样品流动途径中向下游 流动。该装置任选地还包括包括与固体支持物结合的第二结合剂报道子偶合物结合元 件的结果区域，能够结合未结合的第二结合剂报道子偶合物并提供可检测的信号的报道 子_偶合物结合元件，其中所述可检测的信号表明液体样品中分析物的浓度。根据一些实施方案，本发明的方法或装置还包括第一结合剂分析物类似物，其 中未结合的第一结合剂分析物类似物由与分析物对分子印记聚合物的结合位点的竞争 以及被所述分析物从分子印记聚合物的替换中的至少一种所产生。该装置任选地还包括第 二结合剂报道子偶合物结合元件，其中未结合的第二结合剂报道子偶合物由与第一结 合剂分析物偶合物的竞争以及被第一结合剂分析物偶合物的替换中的至少一种所产 生，其中未结合的第二结合剂报道子偶合物的存在表明样品中分析物的存在。根据一些实施方案，第一结合剂分析物类似物在样品应用区域被提供，或者被 结合至分子印记聚合物。报道子偶合物结合元件被任选地在液体样品的流动途径中固定于 固体支持物上。第二结合剂报道子偶合物在报道子偶合物应用区域被提供，或者被可释 放地结合至报道子偶合物结合元件。该装置优选地还包括结果区域，其包括结合至固体支 持物的第二结合剂报道子偶合物结合元件，所述报道子-偶合物结合元件能够结合未结 合的第二结合剂报道子偶合物并提供可检测的信号，所述可检测的信号表明液体样品中 分析物的浓度。根据一些实施方案，至少一种报道子偶合物或结合剂偶合物包括生物素，而结合 元件选自由抗生物素蛋白、NeutrAvidin和Extravidin所组成的组。根据一些实施方案，报道子_偶合物_结合元件被水平地固定于固体支持物上的 样品液体流动途径上，而且未结合的报道子偶合物使报道子_偶合物结合元件的结合位点 饱和。结果被任选地显像为前进中的柱，其具有与样品中分析物的量成比例的长度。根据一些实施方案，该装置还包括下列中的至少一个阳性对照区域；参考区域； 液体样品流动途径上结果区域下游的吸收区域，所述吸收区域包括能够吸收液体样品的吸 收性材料；以及包括与结果区域、参考区域和对照区域中至少一个对齐以允许观察装置上 的测试结果的至少一个窗的外壳(housing)。根据一些实施方案，将结果区域中的信号强度与参考区域中的信号强度进行比较，所述装置被布置并构造为在分析物以等于或高于阈值水平存在时提供阳性结果，以表 明样品中分析物的浓度。根据一些实施方案，该装置还包括参考区域，其包括结合元件的至少一个离散条 带，所述结合元件包括已知量的分析物类似物报道子偶合物，其中样品中靶分析物的存 在或不存在是通过比较参考区域中的信号强度和结果区域中的信号强度来确定的。根据一些实施方案，该装置缺少参考区域，而且结果区域还包括与固定的报道 子_偶合物结合元件平行的标尺，所述标尺被校准以对应被分析的液体样品中的分析物浓 度，以便通过被沿着和穿过结果区域中报道子_偶合物结合元件的报道子_偶合物所覆盖 的面积来确定液体中分析物的存在和浓度。根据一些实施方案，样品选自由生物液体、环境样品、食品、毒素、工业样品和工业 生产步骤的副产品所组成的组。根据一些实施方案，分析物选自由细胞、生物体、小分子、蛋白质、激素、酶、生物标 志物、生物标志物的代谢产物、药物的代谢产物、药物、药物代谢产物药物-蛋白偶合物、药 物代谢产物-蛋白偶合物、维生素、滥用药物、天然或合成的毒素、化学或生物战剂、药物的 抗体、传染原的抗体、环境污染物、免疫球蛋白、淋巴因子、细胞因子、可溶性癌症抗原、生长 因子、神经递质、表明食品安全性或质量的分子、操作化学品(process chemical)、生产过 程的副产品、杀虫剂、杀昆虫剂、除草剂、肥料、表面活性剂、粘着剂和用于制造食物、工业剂 或化学产品的剂所组成的组。根据一些实施方案，分析物选自由MMA、高半胱氨酸、肌钙蛋白亚基I或T、CKMB、 LDH和G0T/SG0T、citrozine、醋氨酚、卡马西平、氯霉素、毛地黄毒苷、地高辛、庆大霉素、卡 那霉素、利多卡因、锂、氨甲蝶呤、苯巴比妥、普萘洛尔、奎尼丁、茶碱、BNP、FSH、Cumadine、维 生素K、黄曲霉毒素、蓖麻毒素、2，4_ 二氯苯氧乙酸(2-4，D)、莠去津、甲草胺、草净津、甲氧 毒草安、西玛津、肾上腺素、安非他明、TSH、游离的T3 T4、PSA、类固醇、雌二醇、孕酮、睾酮、 雌激素、砷、氰化物、士的宁、禽流感病毒、HIV病毒、肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒、巨细胞病 毒、登革病毒、埃博拉病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、EBV、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒、轮状病 毒、SARS病毒、西尼罗河病毒、黄热病病毒、弯曲杆菌属、衣原体属、霍乱、梭状芽胞杆菌属、 白喉、大肠杆菌、奈瑟氏菌属、螺杆菌属、嗜血杆菌属、分枝杆菌属、葡萄球菌属、百日咳、沙 门氏菌属、志贺氏菌属、链球菌属、密螺旋体属、破伤风、耶尔森氏菌属(Yershinia)、葡萄球 菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素B、蓖麻毒素、肉毒杆菌毒素、霉菌毒素、破伤风毒素、霍乱毒素、 单端孢霉烯霉菌毒素、对传染病媒介物有特异性的抗体和与自体免疫疾病相关的自身抗 体、癌细胞、病毒感染的细胞、病毒、细菌细胞和真菌细胞所组成的组。根据一些实施方案，可释放的第一结合剂选自由生物素、生物素类似物、生物素衍 生物、抗原、蛋白A和蛋白G、纤维素结合蛋白、激素、毒素、脂质、脂肪酸、核酸、糖偶合物、凝 集素、底物和配体所组成的组。根据一些实施方案，可释放的第二结合剂选自由生物素、生物素类似物、生物素衍 生物、HABA、DTB、抗原、蛋白A和蛋白G、纤维素结合蛋白、脂质体、激素、毒素、脂质、脂肪酸、 核酸、糖偶合物、凝集素、底物和配体或它们的类似物所组成的组。根据一些实施方案，报道子选自由HABA、染料、荧光剂、荧光染料、放射性标记、磁 性颗粒、金属颗粒、半导体颗粒、量子点、有色颗粒、荧光颗粒、金属盐、酶底物、酶、化学发光剂、感光剂和可悬浮颗粒(suspendable particle)所组成的组。根据一些实施方案，第一结合剂和第二结合剂是相同的或不同的，而且各自选自 由具有对生物素的高特异性亲和力的抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、NeutrAvidin、 ExtrAvidin化合物，膜，受体，免疫球蛋白，纤维素，酶，凝集素，糖偶合物，互补核酸和具有 对它们相应的结合配偶体的高亲和力的疏水位点所组成的组。根据一些实施方案，固体支持物选自由多孔材料、多孔膜、颗粒状材料和吸收性材 料所组成的组。根据一些实施方案，分子印记聚合物包括选自由如下所组成的组的聚合物在靶 分析物或靶分析物-偶合物和成孔剂(porogen)的存在下用交联剂将一种或多种单体交联 而聚合得到的聚合物，其中所述聚合物具有选择性结合靶分析物和它的偶合物的能力；在 MMA的存在下聚合得到的聚合物，其中所述聚合物具有选择性结合MMA的能力；在含有氨基 酸LSCKCGKCNTDY的合成肽或者代表TSH的0亚基的表位的肽的存在下在成孔剂中聚合得 到的聚合物，所述聚合物具有选择性结合TSH的能力。根据一些实施方案，提供了检测液体样品中存在的TSH的方法，所述方法包括如 下步骤将样品与本发明的装置相接触，在结果区域中检测结合至报道子-偶合物结合元 件的报道子偶合物的量，其中所述报道子_偶合物的量对于样品中TSH的存在或量是有指 示性的；以及诊断甲状腺功能减退或甲状腺功能亢进病症。根据一些实施方案，提供了试剂盒，其包括本发明的装置；任选地，用于提取或加 工样品以洗脱分析物的一种或多种试剂或组合物；任选地，一种或多种稀释剂；以及任选 地，用于实践检测和确定液体样品中靶分析物的存在、不存在或浓度的方法的说明书。根据一些实施方案，分析物的检测包括使用辅助检测器装置，其中所述检测器装 置选自由荧光感应器、磁性感应器、化学发光感应器、密度计、图像分析器和放射性感应器 所组成的组。根据一些实施方案，样品被预处理以修饰样品的特性。根据一些实施方案，预处理选自由稀释、过滤、蒸馏、浓缩、干扰组分的灭活和试剂 的添加或其组合所组成的组。根据一些实施方案，该装置包括置于样品应用区域、结果区域、参考区域、对照区 域或所述吸收区域中的一个或多个中的至少一个多孔垫。任选地，该垫被预处理以促进或 控制样品穿过装置的流速。本发明前述和其他特征和优势从下面的描述中将变得明显，所述描述的进行参考 随附的图和权利要求。附图简述本文参考随附的图和下面的详述仅举例性地描述了本发明，应理解，所显示的详 细资料仅仅用于举例和说明性的讨论，并且将其呈现以提供被认为是本发明的实施方案的 最有用的和容易理解的描述。没有尝试比本发明基本的理解所需的更详细地来显示本发明 的结构细节，附图的描述使本领域技术人员明白本发明的若干形式可如何在实践中实现。 在附图中

图1A是具有竞争或单替换以及如实施例1中所述的垂直成像的横向流动装置的 第一个实施方案的侧视图。
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图1B是具有竞争或单替换以及如实施例2中所述的水平成像的横向流动装置的 侧视图。图2A是具有竞争/双替换以及如实施例3中所述的垂直成像的横向流动装置的 侧视图。图2B是具有竞争/双替换以及如实施例4中所述的水平成像的横向流动装置的 侧视图。图3A是具有竞争或单替换以及如实施例5中所述的垂直成像的流通装置的侧视 图。图3B是具有竞争或单替换以及如实施例6中所述的水平成像的流通装置的侧视 图。图4A是具有竞争/双替换以及如实施例7中所述的垂直成像的流通装置的侧视 图。图4B是具有竞争/双替换以及如实施例8中所述的水平成像的流通装置的侧视 图。以及图5是实施例9中所述的横向流动的侧视图。优选的实施方案的描述本发明提供用于确定液体样品中至少一种分析物的存在或不存在或浓度的诊断 方法、装置和试剂盒。参考随附的图、实施例和描述，本发明的诊断方法、装置和试剂盒可被更好地理 解。预期本发明不局限于它在下面的描述或附图中所列的或由实施例所例证的细节中的应 用。可以以各种其他方式实践本发明，而且其能够以其他实施方案来实践。而且，预期本文 所用的措辞和术语是为了描述的目的而不应该被视为限制。在描述本发明特定方法和装置之前，将描述至少一些实施方案中的本发明的一般 特征。根据一些实施方案，提供了检测液体样品中至少一种分析物的诊断装置，所述装 置包括结合具有分析物特异性结合位点的分子印记聚合物(MIP)的至少一个固体支持物； 样品应用区域；以及检测区域。MIP通过物理方法或通过物体与支持物的化学键接(固定化作用)来结合至固体 支持物。液体样品可沿着沿着或穿过固体支持物的流动途径移动，例如通过毛细管作用或 通过任何类型的流动。将液体样品应用于样品应用区域，并将其与液体样品流动途径上样品应用区域下 游的分子印记聚合物接触。在检测区域中确定分析物与分子印记聚合物的结合，所述检测区域优选地位于分 子印记聚合物位置的下游。优选地，检测区域提供可检测的信号，其表明液体样品中分析 物的存在。然而，应该注意的是，这种检测任选地包括样品中分析物的直接检测，而可选地 (或另外地)，这种检测任选地包括样品中分析物的间接检测，例如根据竞争和/或替换或
者其组合。根据一些实施方案，提供了检测液体样品中至少一种分析物的方法，所述方法包括提供用于检测液体样品中至少一种分析物的诊断装置，所述装置包括结合了具有分析 物特异性结合位点的分子印记聚合物的至少一个固体支持物、样品应用区域和检测区域; 将液体样品应用于样品应用区域；并且检测分析物与分子印记聚合物的结合。如本文所用，术语“分析物”是指所要检测或测量的分子、分子组或具有天然或合 成来源的化合物，或者其类似物或衍生物，其能够特异性地结合至少一个结合配偶体(例 如MIP)。可使用类似物或衍生物，当类似物或衍生物参与测定时，可以与分析物自身基本上 相同的方式将它们用作结合对的一个成员。可使用几乎任何分析物的测定来实践本发明的方法。分析物尺寸相异，并且范围 可从小分子、具有少于30个氨基酸的多肽分析物至整个生物体如细菌。靶分析物可以是感兴趣的任何分子、多肽、蛋白质或传染病媒介物。可使用公开的 方法和装置对可针对其制备适合的分析物特异性MIP的任何已知分析物容易地进行检测 和/或定量。可在基础科学研究、包括兽医和牙医在内的医疗实践、法医分析、环境保护监 测和研究、工业或化学制造以及药物、食品和化妆产品的开发和测试的背景下使用本文所 述的方法和装置。被检测的分析物可包括但不限于选自由生物标志物、杀虫剂、滥用药物、蛋白、激 素、酶、生物标志物、天然或合成的毒素、化学战剂、生物战剂、药物的抗体、传染原的抗体、 免疫球蛋白、淋巴因子、细胞因子、可溶性癌症抗原、生长因子和传染病媒介物所组成的组 的分析物。作为例子但不以任何方式进行限制，分析物可包括选自由甲基丙二酸(MMA)、高半 胱氨酸、肌酸酐、TSH、BNP、FSH、肌钙蛋白、CK、CKMB、AST、GOT、LDH、肌红蛋白、PSA、AST、ALT、 ALKP、GGT和胆红素所组成的组的生物标志物(人类和动物二者的)。分析物可包括选自由 禽流感病毒、HIV病毒、肝炎病毒、脊髓灰质炎病毒、巨细胞病毒、登革病毒、埃博拉病毒、疱 疹病毒、麻疹、EBV、狂犬病病毒、呼吸道合胞病毒、轮状病毒、SARS病毒、西尼罗河病毒、黄热 病病毒、弯曲杆菌属、衣原体属、霍乱、梭状芽胞杆菌属、白喉、大肠杆菌、奈瑟氏菌属、螺杆 菌属、嗜血杆菌属、分枝杆菌属、葡萄球菌属、百日咳、沙门氏菌属、志贺氏菌属、链球菌属、 密螺旋体属、破伤风和耶尔森氏菌属所组成的组的传染病媒介物。分析物可包括选自由葡 萄球菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素B、蓖麻毒素、肉毒杆菌毒素、霉菌毒素、破伤风毒素、霍乱毒 素和单端孢霉烯霉菌毒素所组成的组的毒素。分析物可选自由对传染病媒介物有特异性的 抗体或与自体免疫疾病相关的自身抗体所组成的组。根据一些实施方案，本发明的液体样品任选地包括可含有特定的靶分析物的任何 液体。这种液体包括生物液体、环境样品、食品、药物、毒素、工业样品和工业生产步骤的副 产品。生物液体任选地和优选地选自由体液、呼吸所得的液体、组织勻浆和工艺液体所组成 的组。液体样品可任选地包括选自由液体例如水、油、废液或从固体提取的液体如从固 体废物、土壤和植物提取的液体所组成的组的环境样品。可如从来源直接获得的那样或在预处理以修饰它的特性之后任选地使用样品。预 处理可包括例如从血液分离血浆，稀释粘液，稀释样品或诸如此类。处理方法可包括过滤、 蒸馏、浓缩、干扰组分的灭活和试剂的加入。例如，可将样品离心或过滤以除去颗粒物质，或 可将其溶于或补充缓冲液或表面活性剂以提供适合的介质以便允许分析物的更有效检测。适合的缓冲液包括技术人员已知的那些中的任一种，例如1-1，OOOmM的Tris溶液(TRIZMA， Sigma Chemical Co.，St. Louis，Mo.)或 1-1，OOOmM TRIS(2_ 氨基 _2_(羟基-甲基)_1， 3-丙二醇)或0. 05-0. 5%的表面活性剂聚山梨醇酯20 (商业上也被称作吐温 20)。其他 的缓冲液包括磷酸盐缓冲盐水(PBS)、柠檬酸盐缓冲液或碳酸氢盐缓冲液。本发明还可被任选地用来检测最初包含在固相样品中的分析物。在分析前使用用 来提取或加工样品以洗脱分析物的适当的试剂或组合物来将这些分析物简单地提取并悬 浮或溶解于液体中。提取过程可以与在稀释剂或缓冲液如上面所列的那些中摇动固体样品 一样简单，其然后可被应用于固体支持物。任选地，仪器例如手压机、研钵和研杵、均质器、 榨汁机、混合器或食品加工机可被用来预处理或提取样品以将靶分析物变成适合在装置中 测试的液体形式。固体样品可包括生物组织(例如在进行活组织检查中获得的)、土壤或叶 子。根据一些实施方案，可根据本领域技术人员已知的任何技术来制备分析物特异性 的分子印记聚合物(MIP)。这些方法包括共价印记(ffullf G，1982，Pure & Appl. Chem.， 54,2093-2102)，借此将单体共价地连接至分析物并使用交联剂将其聚合。接下来，将分析 物从聚合物切割下来，留下分析物特异性的结合腔。可选地，可使用例如由Mosbach (美 国专利第5，110，833号)公开的非共价印记方法，借此单体通过非共价力与靶分子相 互作用并然后通过交联剂将其连接以在除去靶分子之后形成靶特异性结合位点。可使 用这些方法的变种来构建薄的分子印记薄膜和膜(Hong等人1998Chem. Mater. ,10, 1029-1033)；固体支持物表面上的印记(Bianco-Lopez 等人，2004，Anal. Bioanal. Chem.， 378,1922-1928 ；Sulitzky C.等人，2002Macromolecules，35，79-91)；微球体(Ye 等人， 2000，Macromolecules，33，8239-8245)以及甚至是蛋白质和完整的生物体(Hayden等人 2006 Adv. Funct. Mater.，16，1269-1278)。优选地，分子印记聚合物包括在靶分析物和成孔剂的存在下用交联剂将单体交联 而聚合的聚合物，所述聚合物具有选择性结合靶分析物的能力。蛋白质印记的相关方法是 所谓的“表位印记”(Rachkov and Minoura, 2000, J. Chromatogr A. ；889，111-118)，其中关 键的表位在蛋白质表面上被鉴定而MIP是用将代表该表位的线状肽作为靶来制备的。可针对分析物或者分析物与其他分子的任何偶合物来制备MIP，只要MIP特异性 地结合分析物和它的偶合物二者。根据本发明的装置的一些实施方案，在MIP-偶合物区域中提供MIP，所述区域是 直接或间接地固定在固体支持物上的包括具有对被测分析物的特异性结合亲和力的分析 物特异性分子印记聚合物(“MIP”)的装置上的区域，其中所述对被测分析物的特异性结合 亲和力是指对整个分析物、对分析物的离散部分或对代表分析物上特定表位的肽的特异性 结合亲和力。根据一些实施方案，用可释放的分析物类似物报道子偶合物或可释放的第一结 合剂分析物偶合物的分子使MIP的分析物特异性结合位点饱和。如本文所用，术语“分析物特异性的”是指在异质的分子群体的存在下确定分析物 存在的结合反应。如本文所用，术语“分析物类似物”是指修饰的分析物或任何其他分子或其组合， 其与样品中潜在发现的分析物的形式具有结构相似性，而且其可结合至少一种分析物结合配偶体。在本发明某些实施方案中，分析物类似物是可检测的分析物类似物_报道子偶合 物。例如，分析物类似物_偶合物可包括偶合至生物素或任何其他报道子对结合元件而形 成报道子对的一半的分析物，其中生物素是这种元件的实例。分析物类似物可以是MMA、靶 蛋白或代表被测分析物上离散表位的肽。如本文所用，术语“报道子”是指可被光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光 学、放射性检测或化学手段检测的能够被连接至分析物、分析物类似物或结合配偶体的任 何分子、颗粒或组合物。根据分析装置的期望属性，报道子选自大量可得的分子和颗粒。不 被认为以任何方式进行限制的这种报道子的一些实例包括HABA、染料、荧光染料、放射性 标记、磁性颗粒、金属颗粒、有色颗粒(例如金和乳胶溶胶)、荧光颗粒、金属溶胶、酶底物和 酶、化学发光分子、感光剂、半导体颗粒、量子点和可悬浮颗粒。化合物(例如分析物)与报 道子的偶合可通过共价键、离子键、氢键、螯合物形成、吸附过程、疏水相互作用、亲水相互 作用、静电相互作用以及诸如此类或这些键和相互作用的任何组合，并且/或者可包括连 接基团。可检测的报道子任选地选自由HABA、染料、荧光剂、荧光染料、放射性标记、磁性颗 粒、金属颗粒、有色颗粒、金属溶胶、酶底物、酶、化学发光剂、感光剂、可悬浮颗粒、聚合物颗 粒、半导体颗粒、量子点所组成的组。前述列表中显然的是，可检测的报道子可以是可见的物质，例如着色的乳胶珠子， 或者它可以参加产生着色产物的反应。当用肉眼观察时，反应产物可能是可见的，或者例如 当暴露于专门的光源例如紫外光时，其可能是明显的。虽然期望对结果区域的观察(直接 地或间接地)将是获得测试结果的主要途径，但是在本发明的范围内还考虑其他方法，例 如当分析物与通过随后暴露于扫描仪而被检测的荧光物质缔合时。样品中分析物的浓度，不管是定性的还是定量的，被可检测的报道子的量所指示， 所述报道子随后与结果区域缔合。表明分析物浓度的可检测的信号是在结果区域中产生 的。如本文所用，术语“分析物类似物报道子偶合物”是指用于检测小分子的偶合 物，并且当“表位印记”方法时被用来产生分析物特异性的MIP。合成肽或者可代表单个分 子或这种分子的组的其他合成的或天然获得的分子代表分析物特异性表位或它的类似物， 并且被偶合至报道分子，其可以例如选自下面讨论的分子的组，例如金溶胶。分析物类似 物报道子偶合物具有对分析物特异性MIP的高结合亲和力，但是其低于未修饰的分析物 的亲和力。偶合的分子甚至在潮湿状态下保持与分析物特异性MIP的结合腔的缔合，除非 它们任选地和优选地以剂量依赖性的方式被测试液体样品中的靶分析物替换。当从聚合物 中被替换时，分析物类似物报道子偶合物在潮湿的固体支持物中自由移动。如本文所用，术语“分析物类似物报道子结合配偶体偶合物”是指当对整个多 肽/蛋白质或其他分子或分子的组进行印记时使用的偶合物。靶分析物或它的类似物偶合 至来自下面讨论的分子的组和颗粒的组的报道子例如金溶胶，以及偶合至来自下面讨论的 组的结合配偶体例如生物素。分析物类似物报道子L结合配偶体偶合物具有对分析物特 异性MIP的高结合亲和力，但是其低于未修饰的分析物的亲和力。偶合的分子甚至在潮湿 状态下保持与分析物特异性MIP的结合腔的缔合，除非它们以剂量依赖性的方式被测试液 体样品中的靶分析物替换。当从聚合物中被替换时，分析物类似物报道子结合配偶体
19偶合物在潮湿的固体支持物中自由移动。在多肽和蛋白质的情况下，分析物类似物报道 子结合配偶体偶合物被同时偶合至报道子例如金溶胶以及结合剂例如生物素，其可被用 来捕捉替换的分析物类似物报道子结合配偶体偶合物。如本文所用，术语“结合亲和力”是指一个分子与另一个结合的强度。如果特定 的分子结合至或特异性地缔合另一个特定的分子，那么说这两个分子展示互相的结合亲和 力。结合亲和力与一对分子的缔合常数和解离常数相关，但是这些常数的测量或确定对于 本发明不是关键性的。相反地，本文中用来描述所述方法和装置的分子间相互作用的亲和 力通常是在实证研究中观察到的表观亲和力(除非另外指明)，其可被用来比较一个分子 (例如MIP或其他特异性结合配偶体)结合另外两个分子(例如分析物和分析物-报道子 偶合物)的相对强度。结合亲和力、缔合常数和解离常数的概念是熟知的。根据一些实施方案，MIP的分析物特异性结合位点是未被占据的，并且可以被分析 物或结合竞争剂结合。根据一些实施方案，MIP是TSH特异性的。任选地，这种MIP包括在对应于TSH3 亚基上的表位例如在TSH0亚基95-112位置的氨基酸残基(LSCKCGKCNTDY)的合成肽的存 在下，由作为单体的甲基丙烯酸(MAA)、作为交联剂的二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)、作 为启动因子的2，2P-偶氮双(2，4-异庚腈)仏80力和作为成孔剂的乙腈中3%的水所聚合 生成的聚合物。可使用标准步骤在常规的肽合成器上任选地制备合成肽。根据本发明装置的一些实施方案，固体支持物可包括用于流动装置工业，并且具 有促进液体通过毛细力沿着装置前进的多孔结构的任何多孔材料。优选地，固体支持物选 自由多孔材料、多孔膜、颗粒状材料物质和吸收性材料所组成的组。这些材料通常还具有好 的结合蛋白的能力。这种材料的不以任何方式限制的实例包括硝酸纤维素(高的蛋白结 合)醋酸纤维素(低的蛋白结合)玻璃纤维膜(非蛋白结合)，尼龙、聚偏二氟乙烯(PVDF)、 聚醚砜(PES)制成的膜或可由或将由专门制造诊断性膜的公司例如Millipore公司、Pall 公司和Whatman所开发的该性质的其他膜，以及全新的微流体系统例如美国专利申请第 20050042766号中所公开的系统。该装置可任选地包括超过一种固体支持物，借此可在样品中检测超过一种分析 物。根据本发明装置的一些实施方案，样品应用区域包括吸水的、多孔的或含纤维的 材料制成的能够快速吸收液体的吸收垫。它的多孔性可能是单向的(即孔或纤维完全地或 主要地平行于流动的轴线延伸)或多向的(即全向的、类似于海绵的结构)。可以使用多孔 的塑料材料，例如聚丙烯、聚乙烯(优选地具有非常高的分子量)、聚偏二氟乙烯、乙烯基醋 酸乙烯酯、丙烯腈和聚四氟乙烯。在制造中用表面活性剂的预处理可被任选地用来减少任 何固有的疏水性并改进快速和有效地吸收和运输潮湿样品的能力。该材料还可由纸或其他 纤维质的材料制成。该材料连接装置的罩(casing)中的开口和装置的固体支持物。将血清从全血分离的垫，例如美国专利第5，660，798号中所述的，可与测试血清 中分析物的装置一起使用。被应用于样品应用区域的样品由吸收垫所吸收，通过毛细力自 由流动并与固体支持物相接触。取决于装置类型，进入装置的样品体积可以是随机的或受 到智能应用垫控制的，所述智能应用垫允许精确的预先确定的样品体积进入装置(参见例 如美国专利第6，008，056号)。
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根据一些实施方案，本发明的装置还包括罩。罩将固体支持物保持在适合的构型 以便保证整个装置的正确功能。罩任选地包括窗口，优选地1个和4个之间的窗口。更优选地，该罩包括结果窗， 其作用是允许观察结果。进一步优选地，该罩包括对照窗，其允许观察对照反应例如确认测 试的充分进行。也任选地，该罩包括在该罩中的第三个窗或者开口，所述窗或者开口允许在 样品窗通过直接将装置置于样品中(允许样品在开口窗的接触)或通过用滴管或相似的装 置将样品应用于样品窗来将液体样品应用于样品应用区域。另外，该罩可任选地包括参考 窗以允许比较结果区域中的结果强度和参考区域中的指示条带强度。任选地，固体支持物还包括参考区域。如本文所用，参考区域是其中几行的分析物 类似物-报道子结合元件被固定在固体支持物上的区域，其具有结合至他们的已知量的分 析物类似物_报道子偶合物，并且以与结合的报道子的量成比例的强度产生特殊信号。该装置可任选地还包括含有产生阳性对照的工具的阳性对照区域，其确认分析物 类似物报道子偶合物的适当流动以及其与结果区域的结合从而确定测试是工作的。任选地，本发明的装置可包括一个或多个吸收垫，其被放置以促进分析物流过结 果区域、参考区域和/或对照区域。另外，支持物可任选地包括含有吸收性材料的垫的吸收区域，所述垫在垫和固体 支持物是湿的时与固体支持物通过液体连接，所述垫具有足够的多孔性和能力来吸收过量 的液体。根据一些实施方案，本发明的装置可包括期望包括具有浸渍片(dipstick)形式 的装置的横向流动装置，或者流通装置，或者其组合。根据一些实施方案，检测系统可以是通过单替换或竞争和偶合的报道子的直接监 测，或者通过双替换或竞争手段，如下将进一步详细解释。然而，对于任何下述实施方案，可 任选地进行流通或横向流动。单替换根据本发明一些实施方案，提供了用于确定存在于液体样品中的靶分析物的存 在、不存在或浓度的单替换诊断装置。该装置包括可释放地结合至固体支持物上的分子印 记聚合物的分析物类似物报道子偶合物；用于将样品应用于装置并将它与固体支持物相 接触的样品应用区域；和检测区域。分析物具有等于或大于分析物类似物报道子偶合物 的对MIP结合位点的亲和力，以使分析物和MIP之间的接触导致分析物类似物报道子被 替换。在进一步的一个方面，本发明涉及通过一种测定来检测和确定存在于液体样品中 的靶分析物的存在、不存在或浓度的方法，所述测定包括如下步骤将怀疑含有分析物的样 品应用于本发明的单替换诊断装置的样品应用区域，并允许样品沿着或穿过固体支持物流 动并且接触MIP-偶合物区域，以便如果分析物存在于样品中则分析物结合至MIP的结合位 点，替换分析物类似物报道子偶合物，所述分析物类似物报道子偶合物流至结果区域并 在此被分析物类似物报道子偶合物结合元件所捕捉，产生可检测的信号，所述可检测的 信号表明样品中分析物的存在或量。检测区域优选地包括含有固定于固体支持物的分析物类似物报道子偶合物结 合元件的结果区域，其中所述报道子偶合物结合元件能够结合替换的分析物类似物报道子偶合物。如本文所用，术语“分析物类似物报道子偶合物结合元件”是指装置上含有 对分析物类似物报道子偶合物分子具有高亲和力的元件的区域。这些元件可任选地 包括但不限于生物素结合元件(例如抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、NeutrAvidin和 ExtrAvidin)、报道子特异性抗体、酶、底物和特别针对分析物类似物报道子偶合物制备 的 MIP。单替换方法包括将怀疑含有待测分析物的液体样品引入样品应用区域，并允许样 品沿着支持物移动。如果分析物存在于样品中，它结合至MIP的分析物特异性结合位点，并 替换分析物类似物报道子偶合物。被替换的报道子偶合物沿着或穿过固体支持物移动到 结果区域，在此它结合至报道子偶合物结合元件，提供可检测的信号。可检测的信号的存在 和/或强度优选地至少与样品中分析物的量定量地或定性地相关，虽然可任选地获得二元 的“是/否”答案；任选地这对于下述其他实施方案也是可能的。双替换在另一方面，本发明涉及用来直接检测和确定液体样品中靶分析物的存在、不存 在或浓度的双替换诊断装置。该装置包括结合MIP的固体支持物，和结合至MIP的可释放 的第一结合剂分析物偶合物；样品应用区域；以及在样品应用区域下游的报道子偶合 物结合区域。设计双替换方法来促进信号形成和解释，而且其可被应用于具有相似性质的其他 仪器。该方法找到完善的生物素-抗生物素蛋白系统的特殊应用，其与可被使用的众多类 似物和衍生物一起提供非常强的结合亲和力。当处理“表位印记”方法时，当结合剂分析 物偶合物是针对其制备特异性MIP并偶合至结合剂例如生物素的代表靶分析物上的表位 的合成肽时，双替换方法是高度适用的。双替换方法与报道子直接结合至靶分子的普通的单替换方法相比具有若干优点。 生物素是相对小的分子，将它加入靶分子应该不太多地干扰它与分析物特异性MIP的相互 作用。生物素的化学特征是非常确立的，而且许多商业试剂能够修饰靶分析物。生物素与 各种生物素结合元件的结合是非常快和强的，其为装置的总体性能做贡献。因为报道子不 直接结合至分析物，所以在报道子选择和将它偶合至生物素衍生物的能力方面存在大的灵 活性。将报道分子结合至某些分析物的无能或困难可能是在这些情况下使用替换方法的限 制因素。另外，它允许增加装置的灵敏度，因为由于感应元件和结果区域之间的分离而可使 用本领域技术人员已知的信号放大的各种方法。另一个优点是对于各种分析物的装置，本发明使用相同的信号形成方法，产生大 多是相似的，而且只需要针对每种单独产物开发特异性的MIP和偶合至生物素的分析物。 这使新产品的上市缩短时间并减少开发和生产的成本。如果对完整的蛋白进行印记，那么结合剂分析物偶合物可任选地由偶合了结合 剂和报道分子二者的靶蛋白所组成。在该情况下，偶合物可载有足够的报道分子以便可能 不需要放大。如本文所用，术语“结合剂分析物偶合物”是指直接地或通过间隔子偶合至结合 剂(优选地为生物素或生物素衍生物)的靶分析物。可选地，结合剂分析物偶合物可任 选地是偶合至结合剂的对应于分析物上的表位的肽。结合剂具有对它相应的结合配偶体的特定亲和力。当结合剂是生物素和它的衍生物时，相应的结合配偶体或剂是抗生物素蛋白、 链霉抗生物素蛋白、NeutrAvidin和相似的生物素结合剂。第一结合剂分析物偶合物对分析物特异性MIP具有高的结合亲和力，但是其低 于未修饰的分析物的亲和力。甚至在潮湿状态下，第一结合剂分析物偶合物分子保持与 分析物特异性MIP结合位点的连接，除非它们以剂量依赖的方式被测试液体样品中的靶分 析物所替换。当从聚合物中被替换时，第一结合剂分析物偶合物在潮湿的固体支持物中 是自由移动的。双替换装置还包括结果区域，其包括在样品流动途径上结合至固体支持物的第二 结合剂报道子偶合物结合元件。报道子-偶合物结合元件具有连接了可检测的、可释放 的第二结合剂报道子偶合物的结合位点。如本文所用，术语“结合元件”是指能够以足够的亲和力特异性地结合它的相应结 合配偶体的分子结构。这种元件的特定序列和特定界限都不是关键的，只要其展现结合活 性。结合特性必要地包括一系列亲和力、亲和性(avidity)和特异性及其组合，只要其展现 结合活性。结合剂报道子偶合物包括如上对于分析物类似物报道子偶合物所述的任何报 道子实体，其被偶合至能够与结合剂分析物偶合物特异性地结合至相同的结合元件的结 合剂。第二结合剂具有对该结合元件的高度亲和力，但是其低于用于本装置中的第一结 合剂分析物偶合物的亲和力。因此第一结合剂分析物偶合物和结合元件之间的接触导 致第二结合剂报道子偶合物的替换。第二结合剂报道子偶合物的替换与液体样品中分 析物的浓度成比例，以使可检测的信号的存在和/或强度与样品中分析物的量相关。当例如生物素在装置中被用作结合剂分析物偶合物中的结合剂时，具有比生 物素低的对生物素结合元件(例如抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、NeutrAvidin和 ExtrAvidin)的亲和力的生物素或其他分子(例如HABA和DTB)的衍生物被用来构建结合 剂报道子偶合物。如本文所用，术语“结合配偶体”或“结合剂”是指能够识别和结合至另一个分子 或组合物的特定结构方面的任何分子或组合物。这种结合配偶体和相应的分子或组合物的 实例包括生物素/抗生物素蛋白、抗原/抗体、半抗原/抗体、激素/受体、核酸链/互补核 酸链、底物/酶、抑制剂/酶、蛋白A(或G)/免疫球蛋白、碳水化合物/凝集素、病毒/细胞 受体和脱辅基蛋白/脂质。可释放的第一结合剂选自由生物素、生物素类似物、生物素衍生物、抗原、蛋白A 和蛋白G、纤维素结合蛋白、激素、毒素、脂质、脂肪酸、互补核酸序列、糖偶合物、凝集素、底 物和配体所组成的组。可释放的第二结合剂可选自由生物素类似物、HABA、DTB、抗原、蛋白A和蛋白G、 纤维素结合蛋白、脂质体、激素、毒素、脂质、脂肪酸、互补核酸、糖偶合物、凝集素、底物和配 体或它们的类似物所组成的组，条件是所述第二结合剂具有比所述第一结合剂低的对报道 子-偶合物结合元件的亲和力。生物素类似物在Advances in Protein Chemistry (蛋白 质化学进展)，Anfinsen，Edsall 和 Richards 编辑，Academic Press (1975)，第 104-111 页 中被鉴定。
单竞争本发明还提供一种诊断装置，其中样品应用区域包括分析物类似物偶合物，而 且MIP的结合位点是未被占据的。还可在例如垫中提供偶合物，以使偶合物一旦被样品水 合就变得自由流动。在该情况下，分析物类似物报道子偶合物与样品中的分析物竞争MIP 的分析物特异性结合位点。然后，未结合的偶合物移动并且如上对于替换的偶合物所述被 检测。在再进一步的方面，本发明涉及通过一种测定来检测和确定存在于液体样品中的 靶分析物的存在、不存在或浓度的方法，所述方法包括如下步骤将怀疑含有分析物的样品 应用于本发明的竞争型诊断装置的样品应用区域，并允许样品沿着或穿过固体支持物流动 并且接触MIP-偶合物区域，以便如果分析物存在于样品中，则分析物与分析物类似物报 道子偶合物竞争MIP的结合位点。未结合的分析物类似物报道子偶合物流至结果区域， 在其中它被分析物类似物报道子偶合物结合元件所捕捉，产生可检测的信号，所述可检 测的信号表明样品中分析物的存在或量。双竞争本发明进一步提供一种诊断装置，其包括第一结合剂分析物偶合物、第二结合 剂报道子偶合物以及第二结合剂报道子偶合物结合元件。任选地在样品应用区域中提 供第一结合剂分析物偶合物，而且其与分析物竞争MIP的分析物特异性结合位点。未结 合的第一结合剂分析物偶合物向下游流动，并且与第二结合剂报道子偶合物竞争与第 二结合剂报道子偶合物结合元件的结合。在再另一个方面，本发明涉及通过一种测定来检测和确定存在于液体样品中的靶 分析物的存在、不存在或浓度的方法，所述方法包括如下步骤(a)将怀疑含有分析物的样品应用于本发明的双替换诊断装置的样品应用区域； 并且(b)允许样品沿着或穿过固体支持物流动并且接触MIP-偶合物区域，以便如果分 析物存在于样品中，则分析物与MIP的结合位点结合，替换第一结合剂分析物偶合物，所 述第一结合剂分析物偶合物流至报道子-偶合物结合区域，报道子-偶合物结合元件的 第一结合区域结合替换的第一结合剂分析物偶合物并从而替换第二结合剂报道子偶合 物，所述第二结合剂报道子偶合物沿着液体流动的途径继续，至结果区域并被报道子-偶 合物结合元件的第二结合区域所捕捉，产生可检测的信号，所述可检测的信号表明样品中 分析物的存在和/或量，其中被捕捉的第二结合剂报道子偶合物的量与样品中所述靶分 析物的浓度成比例。在另一个方面，本发明涉及包括固体支持物的装置，包括第一组件，其包括浸渍 了分析物类似物_偶合物的样品应用垫，所述分析物类似物_偶合物包括任选地通过间隔 子偶合至生物素的分析物(任选地，分析物类似物偶合物可被浸渍在样品垫和MIP之间 的专用试剂垫中)；第二组件，其包括分析物特异性MIP ；第三组件，其含有用报道子_偶合 物饱和的第一生物素结合元件，所述报道子_偶合物包括偶合至报道子的具有比生物素低 的对生物素结合元件的亲和力的生物素类似物(例如脱硫生物素-DTB)；以及第四组件，其 包括第二生物素结合元件。在再另一个方面，本发明涉及包括固体支持物的装置，包括第一组件，其包括用分析物类似物_偶合物所饱和的分析物特异性MIP，所述分析物类似物_偶合物包括任选地 通过间隔子偶合至生物素的分析物；第二组件，其包括用报道子-偶合物饱和的第一生物 素结合元件，所述报道子-偶合物包括偶合至报道子的具有比生物素低的对生物素结合元 件的亲和力的生物素类似物；以及第三组件，其包括第二生物素结合元件。竞争加替换本发明还可任选地提供以任何顺序和组合包括竞争和替换方法的诊断装置和方 法。例如，该方法可包括第一步骤，其中结合至MIP的第一结合剂分析物偶合物被 分析物替换；以及第二步骤，其中被替换的偶合物与第二结合剂报道子偶合物竞争报道 子偶合物结合元件的结合位点。可选地，第一步骤可包括第一结合剂分析物偶合物与分析物之间对MIP结合位 点的竞争；并且第二步骤可包括来自报道子偶合物结合元件的第二结合剂报道子偶合物 被未结合的分析物偶合物的替换。在再进一步的方面，该方法包括比较结果区域中信号强度和参考区域中信号强度 来确定样品中分析物的浓度的步骤。在仍进一步的方面，结果区域包括平行于固定的报道子-偶合物结合元件的相对 于待分析液体样品中分析物浓度校准的标尺，并且其中所述液体中分析物的存在和浓度是 通过由沿着和穿过结果区域中报道子-偶合物结合元件的报道子-偶合物所覆盖的面积来 确定的。在再另一个方面，本发明涉及检测存在于液体样品中的TSH的方法，所述方法包 括如下步骤a)将样品与根据本发明的竞争、单或双替换装置相接触，并且b)在结果区域中检测结合至报道子_偶合物结合元件的报道子偶合物的量，其中 所述报道子_偶合物的量对于样品中TSH的存在或量是指示性的；c)诊断甲状腺的活动。 检测TSH的方法可被用于鉴定活化不足的甲状腺(甲状腺功能减退)，其可导致症 状例如体重增加、疲劳、皮肤干燥、便秘、感觉太冷或月经期频繁；或者用于鉴定过度活化的 甲状腺(甲状腺功能亢进)，其可导致症状例如体重减少、心率加快、精神过敏、腹泻、感觉 太热或不规律的月经期。在另一方面，本发明的装置可与用于提取或加工样品以洗脱分析物并检测给定分 析物的任何或所有稀释剂或者试剂一起被包装进诊断试剂盒。在又其他的方面，诊断试剂盒还包括包装材料以及有关在至少一种类型的液体样 品上进行定量分析的说明书。特定的测定的灵敏度是相对亲和力和各种试剂浓度、在其中特定试剂和分析物互 相接触的时间以及通过报道系统产生的信号的强度的函数。本领域技术人员熟悉用于优化 和表征用于横向流动装置和流通装置的传统测定的灵敏度和剂量应答特征的方法。本发明另一个重要的实施方案是目视监测和解释结果窗中信号的方法。在监测系 统的称作“垂直显像方法”的一个变体中，报道子_偶合物结合元件(生物素结合或其他报 道子对结合元件或者分析物_报道子结合元件中任一个)被垂直于样品流动途径放置以便以随机的顺序捕捉和浓缩尽可能多的自由流动的报道子偶合物分子。结合至结合元件的报 道子偶合物的量(其为被测样品中分析物的量的直接代表)越大，获得的视觉信号越强。结 果窗旁边是参考窗，其由各自浸渍了增加的精确量的报道子偶合物的结合元件的若干指示 线所组成。这些线将展现一系列颜色强度，其与结合至它们的报道子偶合物的已知量成比 例。结果窗中信号强度与相邻的参考窗中线强度的比较使得被测样品中分析物的量的良好 估计成为可能。在监测系统的称作“水平显像方法”的另一个变体中，界限清晰的报道子-偶合物 结合元件的带被精确地水平地置于样品流通途径。应该以允许液体只流过被报道子_偶合 物结合元件覆盖的区域并且采取措施避免样品绕着结合元件所覆盖的区域或从其下方流 过的方式来操作该位置的装置。这可例如通过以只有结合元件覆盖的区域留在流动途径 中的方式来物理地切割多孔材料，或者通过使用例如通过光刻法(photolithography)对 流动通道成型等方法(Martinez等人，2007 Angwe. Chem. Int. 119，1340-1342)来实现。这 保证响应于样品中分析物的存在而被替换的所有偶合的报道分子到达固定的结合元件。到 达结合元件的被替换的报道子偶合物分子通过毛细作用迁移，而且任何报道子_偶合物分 子被结合元件捕捉。然而，由于结合元件的吸收能力是有限的，并且由于结合元件的结合位 点充满了报道子_偶合物分子，因此带前部的结合元件分子变得饱和而且报道子_偶合物 分子必须沿着带进一步向下迁移以找到游离的结合位点。样品中分析物的浓度越高，报道 子_偶合物将覆盖的结合元件的面积越大。被已知量的报道子_偶合物所覆盖的面积的预 校准将使得根据沿着结合元件带的报道子_偶合物所覆盖的距离对分析物浓度的精确测 定成为可能，其通过在装置中固定的结合元件旁边引入允许使用者确定样品中分析物的量 的校准的标尺。该装置可包括超过一种固体支持物，借此可在样品中检测超过一种分析物。报道子-偶合物结合元件的第一结合区域和报道子_偶合物结合元件的第二结合 区域可以是相同的或不同的，而且各自选自由具有对生物素的高特异性亲和力的抗生物素 蛋白、链霉抗生物素蛋白、NeutrAvidiruExtrAvidin化合物，膜，受体，免疫球蛋白，纤维素， 酶，凝集素，糖偶合物，互补核酸和具有对它们相应的结合配偶体的高亲和力的疏水位点组 成的组。附图和实施例的详述下面的实施例对于本发明是说明性的，而非旨在以任何方式加以限制。本领域技 术人员将发现可被改变的各种非关键参数。为了清楚，横向流动装置中各种组件被水平地 呈现，但可根据需要使一个在另一个上面或叠加。图1-2显示本发明的横向流动装置的四 种不同实施方案，图3-4显示本发明的流通装置的四种不同实施方案，而图5显示将横向流 动和流通元件合并的装置的实施方案，每一种实施方案将被分别描述于实施例1-9中。实施例1 图1A的实施方案下面描述了带有竞争或单替换和垂直显像的横向流动装置的结构和操作。图1A是用于检测和确定液体样品中存在的靶分析物的存在、不存在或浓度的横 向流动装置的侧视图。分析性测试装置包括含有用作能够从其中传递液体样品的载体的多 孔测试带形式的固体支持物12的中空固体罩10，可通过毛细作用沿着液体流动途径中的 固体支持物移动样品。固体支持物12具有包括样品应用区域的确定区域，其中所述样品应
26用区域包括用于将样品应用于装置并将它与固体支持物12接触的样品应用垫14。样品应 用垫14位于罩10中的开口或窗16附近以用于应用液体样品。当使用竞争类型时，将样品 应用垫14浸渍干燥状态的可释放的分析物类似物报道子偶合物，可选地可添加专用的垫。靶分析物如果存在于液体样品中，则将被从样品应用区域搬运到样品应用区域下 游的MIP-偶合物区域，其包括在样品流通途径上固定于固体支持物12的分析物特异性MIP 18。MIP具有用干燥状态的可释放的分析物类似物报道子偶合物饱和的分析物特异性结 合位点，其包括偶合至结合配偶体和报道分子的靶分析物。分析物对分析物特异性MIP的 结合位点的亲和力大于分析物类似物报道子偶合物对分析物特异性MIP的结合位点的亲 和力。当含有分析物的液体样品接触分析物特异性MIP时，样品中的分析物结合至MIP的 分析物特异性腔并从而以与特定分析物的浓度直接成比例的量来替换占据这些腔的分析 物类似物-报道子偶合物，导致替换的分析物类似物报道子偶合物在液体流动途径中向 下游流动。在竞争的情况下，液体样品溶解浸渍的分析物类似物报道子偶合物并且它与 样品中的分析物混合。当液体到达分析物特异性MIP时，两种分子竞争分析物特异性结合 位点。与特定分析物的浓度成比例的量的分析物类似物报道子偶合物未被结合并在液体 流动途径中向下游流动。固体支持物12上进一步向下游是分析物类似物报道子偶合物结合元件，其为结 合至在分析物特异性MIP 18样品下游的流动途径上固定于固体支持物12的分析物类似 物报道子偶合物20的结合元件的结合配偶体。罩10中的开口位于分析物类似物报道 子偶合物结合配偶体20上方，其包括装置的结果窗22。当含有分析物的液体样品流进流动 途径区域时，报道子偶合物结合配偶体20结合至未结合的分析物类似物报道子偶合物或 替换自分析物特异性MIP 18的替换的分析物类似物报道子偶合物，并在结果窗22中提 供可检测的信号，其表明样品中分析物的存在或浓度。在固体支持物12上进一步向下游是分析物类似物报道子偶合物结合配偶体的 三个离散的和不重叠的指示条带，其每个都沿着条带的长度延伸，其中24a表示低浓度参 考条带，24b表示中浓度参考条带而24c表示高浓度参考条带。这三个指示条带构成在确定 被测样品中分析物的存在或半定量中用来确立参考点的参考区域。对应的参考窗26出现 在参考条带24a、24b和24c上方的罩10中。在要确定样品中靶分析物的存在或不存的情 况下，参考区域可包括用已知量的分析物类似物报道子偶合物浸渍的结合元件的至少一 个离散条带。在要确定样品中靶分析物的量的情况下，参考区域可包括各自用增加量的分 析物类似物报道子偶合物浸渍的结合元件的至少两个间隔的指示条带，并展现一系列与 结合于它的分析物类似物报道子偶合物的量成比例的颜色强度。用户通过视觉比较结果 窗22中的信号强度和参考窗26中一个或多个条带的强度来解释结果并确定样品中分析物 的存在、不存在或浓度的半定量。参考条带24a、24b和24c的下游是用分析物类似物报道子偶合物浸渍的对照垫 32，该偶合物在干燥状态下静止但是当固体支持物12被样品的液体弄湿时变得自由流动。 进一步向下游是锚固在固体支持物12上的另一种分析物类似物报道子偶合物结合配偶 体34。在类似物报道子偶合物结合配偶体34上方的罩中存在用于观察结果的相应的对 照窗30。被样品的液体从对照垫32释放的分析物类似物报道子偶合物到达结合配偶体34并变得固定于固体支持物12，在对照窗30中产生可视的信号。对照垫和分析物类似物 报道子偶合物结合元件34共同构成用于产生阳性对照的对照区域，所述阳性对照确认分 析物类似物报道子偶合物的适当流动和对结果区域的结合，从而确定测试适当地工作。在装置的远端是吸收性材料的吸收垫36，当垫36和固体支持物12是湿的时，所述 吸收垫36与固体支持物12通过液体相通。所述垫具有足够的多孔性和能力来吸收过剩液 体，并且保证贯穿装置的连续流动。实施例2 图1B的实施方案下面描述了带有竞争或单替换和测试结果水平显像的横向流动装置的结构和操 作。所述横向流动装置与上面实施例1中所述的相同，用相似数字指示相似部分，用 参考数字和附加的字母“a”表示的修饰除外。修饰如下在图1B的装置中不存在参考区 域，因此，罩38具有较少的窗或开口，并具有扩大的结果窗42。只根据分析物类似物报道 子偶合物所覆盖的距离从结果窗42中读取结果。由固定的分析物类似物报道子偶合物 结合元件44所覆盖的区域被扩大并具有平行于它放置的标尺46。标尺46和由固定的分析 物类似物报道子偶合物结合元件44所覆盖的区域被共同校准以对应于被分析的液体样 品中的分析物浓度。通过由沿着和穿过分析物类似物报道子-偶合物结合元件44的分 析物类似物报道子-偶合物所覆盖的面积在结果窗42确定液体中分析物的存在和浓度。 在对照窗30a中观察对照信号的结果。实施例3 图2A的实施方案下面描述了带有竞争/双替换和测试结果垂直显像的横向流动装置的结构和操 作。图2A是用于检测和确定液体样品中存在的靶分析物的存在、不存在或浓度的横 向流动装置的侧视图。装置包括含有能够从其中传递液体样品的测试带形式的固体多孔支 持物12b的中空固体罩10b，可通过毛细作用沿着液体流动途径中的固体支持物移动的样 品。固体支持物12b具有包括样品应用区域的确定区域，其中所述样品应用区域包括用于 将样品应用于装置并将它与固体支持物12b接触的样品应用垫14b。样品应用垫14b位于 罩10b中的开口或窗16b附近以用于应用液体样品。当使用竞争类型时，将样品应用垫14b 浸渍干燥状态的可释放的分析物类似物报道子偶合物，可选地可添加专用的垫。靶分析物如果存在于液体样品中，则将被从样品应用垫14b沿着和穿过样品应用 区域14b下游的MIP-偶合物区域搬运，所述MIP-偶合物区域包括在样品流通途径上固定 于固体支持物12b的分析物特异性MIP 50。MIP 50具有用干燥状态的、偶合至结合元件的 作为靶的可释放的第一结合剂分析物偶合物所饱和的分析物特异性结合位点。分析物对 分析物特异性MIP 50的结合位点的亲和力显著地大于第一结合剂分析物偶合物对分析 物特异性MIP 50的结合位点的亲和力，以便在分析物的存在下导致第一结合剂分析物偶 合物从MIP 50的分析物特异性结合位点的替换。当含有分析物的液体样品接触分析物特 异性MIP 50时，样品中的分析物结合至MIP的分析物特异性腔并从而以与特定分析物的浓 度直接成比例的量来替换占据这些腔的第一结合剂分析物偶合物，导致替换的第一结合 剂分析物偶合物在液体流动途径中向下游流动。在竞争的情况下，液体样品溶解浸渍的 分析物类似物报道子偶合物并且它与样品中的分析物混合。当液体到达分析物特异性MIP时，两种分子竞争分析物特异性结合位点。与特定分析物的浓度成比例的量的分析物类 似物报道子偶合物未被结合并在液体流动途径中向下游流动。在固体支持物12b上进一步向下游是报道子-偶合物结合区域，其包括在分析物 特异性MIP 50下游的样品流动途径上固定于固体支持物12b的报道子-偶合物结合元件 52的第一结合区域，该结合区域包括结合位点用干燥状态的可检测的、可释放的第二结合 剂报道子偶合物饱和的报道子-偶合物结合元件52。第一结合剂分析物偶合物对报道 子-偶合物结合元件52的结合位点的亲和力大于第二结合剂报道子偶合物对报道子-偶 合物结合元件52的结合位点的亲和力。报道子-偶合物结合元件52的第一结合区域以与 样品中特定分析物的浓度直接成比例的量结合第一结合剂分析物偶合物并替换第二结 合剂报道子偶合物，导致替换的第二结合剂报道子偶合物在液体流动途径中继续向下 游迁移。可选地，可使用竞争并且可在垫上将第二结合剂报道子偶合物干燥，通过样品 液体重新水合并与第一结合剂分析物偶合物竞争第一结合区域中的结合位点，在该情况 下，不需要第一结合剂分析物对报道子-偶合物结合元件52的结合位点的更大亲和力。 过量的未结合的第二结合剂报道子偶合物将在液体流动途径中继续向下游迁移。在固体支持物12b上进一步向下游是在报道子_偶合物结合元件52的第一结合 区域下游的样品流动途径上固定于固体支持物12b的报道子-偶合物结合元件54的第二 结合区域。罩10b中的开口位于报道子-偶合物结合元件54的第二结合区域上方，包括装 置的结果窗22b。当含有分析物的液体样品在流动途径区域中流动时，报道子-偶合物结合 元件54的第二结合区域结合至从报道子_偶合物结合元件52的第一结合区域替换的第二 结合剂报道子偶合物，并提供可检测的表明样品中分析物的存在或浓度的信号。如关于实施例1A中的装置所述，进一步位于固体支持物12b下游的是第二结合 剂报道子偶合物结合元件的三个离散的和不重叠的指示条带，其中56a表示低浓度参考 条带，56b表示中浓度参考条带而56c表示高浓度参考条带。这三个指示条带构成在确定被 测样品中分析物的存在或半定量中用来确立参考点的参考区域，在其上方是罩10b中对应 的参考窗26b。用户通过视觉比较结果窗22b中的信号强度和参考窗26b中一个或多个条 带的强度来解释结果并确定样品中分析物的存在、不存在或浓度的半定量。如上面关于实施例1A和1B所述，参考窗26b下游是用第二结合剂报道子偶合 物浸渍的对照垫32b，该偶合物在干燥状态下静止但是当固体支持物12b被样品的液体弄 湿时变得自由流动。进一步向下游是锚固在固体支持物12b上的另一种报道子-偶合物结 合元件56。在报道子-偶合物结合元件56上方的罩10b中存在用于观察结果的相应的对 照窗30a。被来自样品的液体从对照垫32b释放的第二结合剂报道子偶合物到达结合元 件56并变得固定于固体支持物12b，产生在对照窗30b中观察到的可视的信号。对照垫32b 和报道子_偶合物结合元件56共同构成用于产生阳性对照的对照区域。在装置的远端是吸收性材料制成的吸收垫36b，当垫36b和固体支持物12b是湿的 时，所述吸收垫36b与固体支持物12b通过液体相通。所述垫具有足够的多孔性和能力来 吸收过剩液体，并且保证贯穿装置的连续流动。实施例4 图2B的实施方案下面描述了带有竞争/双替换和测试结果水平显像的横向流动装置的结构和操 作。所述横向流动装置与上面实施例3中所述的相同，用相似数字指示相似部分，用参考数
29字和附加的字母“a”表示的修饰除外。修饰如下在图2B的装置中不存在参考区域。只根 据第二结合剂报道子偶合物所覆盖的距离从结果窗60中读取结果。罩38a中结果窗60下 面的报道子_偶合物结合元件66的第二结合区域被延长并包括平行于固定的报道子_偶 合物结合元件66的第二结合区域的标尺68，所述标尺68被校准以对应于被分析的液体样 品中的分析物浓度。通过在结果窗60中所观察到的由沿着报道子-偶合物结合元件66的 第二结合区域的第二结合剂报道子-偶合物所覆盖的面积来确定液体中分析物的存在和 浓度。实施例5 图3A的实施方案下面描述了带有竞争或单替换和垂直显像的流通装置的结构和操作。图3A是用于检测和确定液体样品中存在的靶分析物的存在、不存在或浓度的流 通装置的侧视图。装置包括含有确定的层或区域的中空固体罩80，所述层或区域是由含有 试剂的多孔材料制成，并被排列以使应用于装置顶端的液体从一层到另一层垂直地流过装 置的各层，直至液体接触装置底部的吸收材料。包括用于将样品应用于装置的样品应用垫82的样品应用区域位于装置顶端的罩 80中的开口或窗84附近，并导向包括具有用干燥状态的可释放的分析物类似物报道子偶 合物饱和的分析物特异性结合位点的分析物特异性MIP 86的MIP-偶合物区域。分析物类 似物报道子偶合物还可包括对应于靶分析物的，偶合至结合配偶体和报道分子二者的多 肽或蛋白。分析物对分析物特异性MIP 86的结合位点的亲和力大于分析物类似物报道 子偶合物对分析物特异性MIP 86的结合位点的亲和力。在竞争类型装置的情况下，应用垫 或它下方的专用试剂垫被分析物类似物报道子偶合物浸渍，而MIP 86的结合位点是游离 的。在该情况下，对MIP的亲和力的差别不是强制性的。靶分析物如果存在于液体样品中， 从样品应用垫82穿过分析物特异性MIP 86迁移。当含有分析物的液体样品接触分析物特 异性MIP 86时，样品中的分析物结合至MIP的分析物特异性腔，并且从而以与样品中特定 分析物的浓度直接成比例的量替换占据这些腔的分析物类似物_报道子偶合物，导致替换 的分析物类似物报道子偶合物进一步向下穿过装置迁移。对于竞争类型装置，样品的液 体溶解来自样品垫或专用试剂垫的分析物类似物报道子偶合物，并且分析物类似物报 道子偶合物与样品中的分析物混合在一起并一起流动直至MIP区域86，在此它们竞争分析 物特异性结合位点。与样品中特定分析物的浓度直接成比例的量的分析物类似物报道子 偶合物未被结合并向装置下游进一步迁移。接下来是在分析物特异性MIP 86下游的样品的流动途径上固定于多孔载体或支 持物88的分析物类似物报道子偶合物结合元件90，其特异性地结合偶合至分析物类似 物报道子偶合物的其结合配偶体。固体罩80中的透明的窗位于分析物类似物报道子 偶合物结合元件90的前面，包括装置的结果窗92。未结合的分析物类似物报道子偶合 物或从分析物特异性MIP 86中被分析物替换的分析物类似物报道子偶合物迁移至分析 物类似物报道子偶合物结合元件90，在此它们被捕捉，并提供可检测的信号，在结果窗92 中表明样品中分析物的存在或浓度。下一个区域是包括分析物类似物报道子偶合物结合元件的被多孔载体区域88 所分开的三个离散的和不重叠的指示条带的参考区域，其中94a表示低浓度参考条带，94b 表示中浓度参考条带而94c表示高浓度参考条带。透明的参考窗96位于三条指示条带94a、94b和94c的前面。用户通过视觉比较结果窗92中的信号强度和参考窗96中的条带的强 度来解释结果。参考区域下方是多孔载体区域88，接着是包括浸渍了未结合的分析物类似物报 道子偶合物的多孔载体的对照区域100。偶合物100在干燥状态下是静止的，但是当多孔载 体被样品的液体弄湿时变得自由流动。再向下，被另一个多孔载体区域88分开的是另一个 分析物类似物报道子偶合物结合元件102。对照窗104位于报道子偶合物结合元件102 的前面。被来自样品的液体从对照区域100释放的分析物类似物报道子偶合物到达分析 物类似物报道子偶合物结合元件102并被结合至载体，产生在对照窗104中可观察到的 可视信号。在装置的远端是吸收性材料106，其吸收过剩液体并且保证贯穿装置的连续流 动。实施例6 图3B的实施方案下面描述了带有竞争或单替换和测试结果水平显像的流通装置的结构和操作。所述流通装置与上面实施例5中所述的相同，用相似数字指示相似部分，具有较 少如下修饰在图3B的装置的罩108中不存在参考区域。只根据分析物类似物报道子 偶合物所覆盖的距离从结果窗114中读取结果。分析物类似物报道子_偶合物结合元件 110以及结果窗114被延长。标尺112平行于固定的分析物类似物报道子_偶合物结合 元件110放置，二者被共同校准以对应于被分析的液体样品中的分析物浓度。通过在结果 窗114中所看到的由穿过分析物类似物报道子-偶合物结合元件的分析物类似物报道 子_偶合物所覆盖的面积来确定液体中分析物的存在和浓度。在对照窗104a中观察到对 照结果。实施例7 图4A的实施方案下面描述了带有竞争/双替换和测试结果垂直显像的流通装置的结构和操作。图4A是使用竞争/双替换来检测和确定液体样品中存在的靶分析物的存在、不存 在或浓度的流通装置的侧面剖视图。所述装置包括含有确定的层或区域的中空固体罩80b， 所述层或区域是由含有试剂的多孔材料制成，并被排列以使应用于装置顶端的液体从一层 到另一层垂直地流过装置的各层，直至液体接触装置底部的吸收材料。用于将样品应用于装置的样品应用垫82b位于装置顶端的罩80b中的开口或窗 84b附近，并导向包括具有用干燥状态的可释放的第一结合剂分析物偶合物饱和的分析 物特异性结合位点的分析物特异性MIP 122的MIP-偶合物区域。第一结合剂分析物偶合 物可包括对应于被印记的靶的表位的，偶合至结合配偶体的合成肽。分析物对分析物特异 性MIP 122的结合位点的亲和力大于第一结合剂分析物偶合物对分析物特异性MIP 122 的结合位点的亲和力。在液体样品中发现的靶分析物从样品应用垫82穿过MIP-偶合物区 域迁移，在MIP-偶合物区域中，靶分析物结合至MIP 122的分析物特异性腔，并且从而以与 特定分析物的浓度直接成比例的量替换占据这些腔的第一结合剂分析物偶合物，导致替 换的第一结合剂分析物偶合物进一步向下穿过装置迁移。可选地，如果使用竞争类型装 置，则将应用垫82b或专用的试剂垫浸渍可释放的第一结合剂分析物偶合物。对于竞争类 型装置，样品的液体溶解来自样品垫或专用试剂垫的分析物类似物报道子偶合物，并且 分析物类似物报道子偶合物与样品中的分析物混合在一起并一起流动直至MIP区域122， 在此它们竞争分析物特异性结合位点。与样品中特定分析物的浓度直接成比例的量的分析物类似物报道子偶合物未被结合并向装置下游进一步迁移。接下来一层是多孔载体或支持物88b，接着是报道子_偶合物结合区域的层，该结 合区域包括具有用干燥状态的、可检测的、可释放的第二结合剂报道子偶合物饱和的结 合位点的报道子_偶合物结合元件124的第一结合区域。该结合元件对偶合至第一结合 剂分析物以及第二结合剂报道子偶合物二者的它的结合配偶体具有特异性亲和力。第 一结合剂分析物偶合物对报道子-偶合物结合元件124的结合位点的亲和力大于对报道 子-偶合物结合元件124的结合位点的亲和力。报道子偶合物结合区域中报道子-偶合物 结合元件124的第一结合区域结合第一结合剂分析物偶合物，并以与样品中特定分析物 的浓度直接成比例的量替换第二结合剂报道子偶合物，导致替换的(替换)或未结合的 (竞争)第二结合剂报道子偶合物进一步向装置下方继续迁移。可选地，可使用竞争，并 且可在报道子_偶合物结合元件124的结合区域之前将第二结合剂报道子偶合物干燥， 通过样品液体重新水合并与第一结合剂分析物偶合物竞争第一结合区域中的结合位点。 在该情况下，不需要第一结合剂分析物对报道子_偶合物结合元件124的结合位点的更 大亲和力。过量的未结合的第二结合剂报道子偶合物将继续在液体流动途径中向下游迁 移。接下来是固定在多孔载体上的报道子-偶合物结合元件126的第二结合区域。罩 80b中的开口位于报道子-偶合物结合元件126的前面，包括装置的结果窗92b。当含有分 析物的液体样品迁移至报道子_偶合物结合元件126时，报道子-偶合物结合元件126的 第二结合区域结合来自分析物特异性MIP 122的未结合的或替换的第二结合剂；报道子偶 合物，并在结果窗92b中提供表明样品中分析物的存在或浓度的可检测的信号。下一个区域是包括第二结合剂报道子偶合物结合元件的三个离散的和不重叠 的指示条带的参考区域，其中128a表示低浓度参考条带，128b表示中浓度参考条带而128c 表示高浓度参考条带。透明的参考窗96b位于参考条带的前面。用户通过视觉比较结果窗 92b中的信号强度和参考窗96b中的条带强度来解释结果。参考区域下方是对照区域，其包括浸渍了未结合的第二结合剂报道子偶合物的 多孔载体132。偶合物在干燥状态下是静止的，但是当多孔载体被样品的液体弄湿时变得自 由流动。再向下是在对照窗104b中可见的另一个报道子-偶合物结合元件134。被来自样 品的液体从对照垫132释放的第二结合剂报道子偶合物到达报道子偶合物结合元件134 并被结合至载体，在对照窗104b中产生可视信号。在装置的远端是吸收性材料106b，其吸 收过剩液体并且保证贯穿装置的连续流动。实施例8 图4B的实施方案下面描述了带有竞争/双替换和测试结果水平显像的流通装置的结构和操作。所述流通装置与上面实施例7中所述的相同，用相似数字指示相似部分，用参考 数字和附加的字母“b”表示的修饰除外。修饰如下在图4B的装置的罩108b中不存在参 考区域。只根据第二结合剂报道子偶合物所覆盖的距离从结果窗中读取结果。固定的第 二结合剂报道子偶合物结合元件136以及结果窗114b被延长。标尺112b平行于固定的 第二结合剂报道子偶合物结合元件136放置，二者被共同校准以对应于被分析的液体样 品中的分析物浓度。通过在结果窗114中所看到的由穿过第二结合剂报道子偶合物结合 元件136的第二结合剂报道子偶合物所覆盖的面积来确定液体中分析物的存在和浓度。
实施例9 图5的实施方案下面描述了带有竞争和测试结果垂直显像的组合横向流动/流通装置的结构和 操作。图5是用于检测和确定液体样品中存在的靶分析物的存在、不存在或浓度的横向 流动装置的侧视图。所述装置包括含有指定的多孔垫的中空固体罩40 ；样品垫14c、用可 释放的第一结合剂分析物偶合物浸渍的偶合物垫70、含有分析物特异性MIP的MIP垫72 和用第二结合剂报道子偶合物浸渍的试剂报道子垫74，所有垫被紧密接触地堆叠，一个 在另一个上方，垫74与固体多孔支持物12c紧密接触。堆叠的垫和下面的测试带能够从其 中传递液体样品，所述样品可通过重力和毛细作用穿过垫和沿着液体流动途径上的固体支 持物移动。样品应用垫14c位于罩40中的开口或窗16c附近以用于应用液体样品。靶分 析物如果存在于液体样品中，被从样品应用垫14c搬运穿过偶合物垫70，在其中液体样品 溶解被浸渍的可释放的第一结合剂分析物偶合物，而且它与样品中的分析物混合。当液 体向下流动至位于MIP区域70的分析物特异性MIP时，该二分子竞争分析物特异性结合位 点。与样品中特定分析物的浓度成比例的量的第一结合剂分析物偶合物未被结合并在液 体流动途径中向下游流动。未结合的第一结合剂分析物偶合物与样品液体一起继续流动 至报道子试剂垫74，在其中液体溶解第二结合剂报道子偶合物。含有未结合的第一结合 剂分析物偶合物和第二结合剂报道子偶合物的液体流过垫74并接触固体多孔支持物 12c，其将液体流进一步向下游输送至包括固定在固体支持物12c上的报道子-偶合物结合 元件的第一报道子-偶合物结合区域54c。第一结合剂分析物偶合物和第二结合剂报 道子偶合物竞争第一报道子_偶合物结合区域的结合位点，留下(living)未结合的第二结 合剂报道子偶合物。未结合的第二结合剂报道子偶合物继续向液体流动途径下游迁移。在固体支持物12c上进一步向下游是在样品流动途径上固定于固体支持物12c上 的报道子_偶合物结合元件60c的第二结合区域。罩40中结果窗60下面的报道子_偶合 物结合元件66c的第二结合区域被延长并包括平行于固定的报道子_偶合物结合元件66c 的第二结合区域的标尺68c，所述标尺68c被校准以对应于被分析的液体样品中的分析物 浓度。通过在结果窗60中所观察到的由沿着报道子-偶合物结合元件66的第二结合区域 的第二结合剂报道子-偶合物所覆盖的面积来确定液体中分析物的存在和浓度。在报道子-偶合物结合元件64c上方的罩40中存在用于观察结果的相应的对照 窗30c。样品液体从对照垫58c释放的第二结合剂报道子偶合物到达结合元件64c并变 得固定于固体支持物12c，产生在对照窗30c中观察到的可视的信号。对照垫58c和报道 子_偶合物结合元件64c共同构成用于产生阳性对照的对照区域。在装置的远端是吸收性材料制成的吸收垫36c，其与固体支持物12c通过液体相 通。所述垫具有足够的多孔性和能力来吸收过剩液体，并且保证贯穿装置的连续流动。实施例10 材料和方法 下面的材料和方法被用于下述实施例中。A.多孔的固体支持物用于本发明的快速诊断装置的多孔的固体支持物是包含 具有大的表面积的强烈吸附性物质的膜滤器，例如PuraBind (Whatman，USA)，其为不具制 造后处理的100%的硝酸纤维素。B.代表TSH的0亚基上的表位的合成肽的制备从描述TSH的0亚基上的抗体的结合位点的文献(Fairlie等人，1995, Biochem. J. 308，203-210)获得了靶表位的氨基酸 序列(LSCKCGKCNTDY)。使用自动化的433A肽合成器(Applied Biosystems，美国)制备了肽。C. TSH 特异性 MIP 的制备如下按照 Yan 和 Row (Int. J. Mol. Sci. 2006，7，155-178) 的综述中所列的方法来制备将功能单体甲基丙烯酸(MAA)(目录号155721，Aldrich)与在 该情况下是上述合成肽的靶印记分子，并且与乙腈(目录号360457，Sigma-AldriCh)中3% 的水中的交联单体二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)(目录号33568-1，Aldrich) 一起，与启 动因子2，2'-偶氮双(2，4-异庚腈)(目录号002094，ChemOS GmBH，德国)一起混合。将 混合物脱气并用氮气吹扫5min，并在之后在40°C下发生聚合16小时，得到坚硬的不可溶聚 合物，而TSH特异性的结合腔存在于聚合物网络之中。在机械研钵中研磨本体聚合物(bulk polymer)并在水中通过25 y m筛子进行湿筛。通过用甲醇-醋酸(9/1，体积比)充分冲洗 颗粒而提取印记分子，在真空中将聚合物颗粒干燥并干燥储藏。D. TSH肽-生物素偶合物的制备使用P印tiTag-生物素试剂盒(BioSight，以色 列)将合成肽偶合至生物素。E. MIP-偶合物区域的制备首先通过将过筛的TSH特异性MIP颗粒与TSH肽-生 物素偶合物的溶液在37°C下孵化24小时，用TSH肽-偶合物(即肽-生物素偶合物)将 TSH特异性MIP的结合腔饱和，接着冲洗以除去过量的偶合物。然后在60°C下烘箱中将冲 洗的MIP颗粒干燥并包装进滤纸包，所述滤纸包由印度的Filtech Fabrics Ltd制造并与 用作茶包的那些相似。通过涂布了压敏粘着剂的薄膜(目录号ARcare 8570，Adhesives Research，美国)，将含有装入的MIP颗粒的包连接到MIP-偶合物区域中的硝酸纤维素膜 上。F.报道子-偶合物的制备作为报道子_偶合物分子，使用用胶体金颗粒涂布 的偶合至BSA(目录号A3902，Sigma)的4-羟基偶氮苯-2-羧酸(HABA)(目录号54791， Fluka)。根据 Hofstetter 等人(Analytical Biochemistry (2000) 284, 354-366)所述 的方法将HABA缔合至BSA。HABA偶氮染料以Kd= 10_6M的亲和常数结合至抗生物素 蛋白的生物素结合位点。用生物素将HABA从该结合位点替换，所述生物素具有Kd = 1(T15M的亲和常数。金溶胶可从美国的BioAssay Works MD获得。使用Horrisberger和 Clerc (Histochemistry, 1985，82，219-223A)所述的偶合方法进行金溶胶向 HABA-BSA 偶合 物的加载。G.对于两个含有生物素-结合元件的区域，均优选地使用NeutrAvidin 生物 素-结合蛋白(Pierce，美国)。当非特异性结合必须被最小化时，该蛋白是其他生物素-结 合蛋白例如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白的优秀替代物。通过将NeutrAvidin直接印 迹到硝酸纤维素膜上来进行它的固定。在室温下将含有0. 5M NaCl的pH 7. 2的0. 5M磷酸 盐缓冲液中20 u g/ml的NeutrAvidin过夜孵化，用PBS冲洗一次并风干。在室温下将制备 的膜干燥储存直至装置的最终构建。H.通过使用EZ-Link磺基-NHS-生物素标记试剂盒(Pierce，美国)将生物素连 接至TSH的0亚基来完成TSH-报道子结合配偶体偶合物(生物素-TSH-金)的制备。 然后用金溶胶涂布TSH-生物素偶合物。如较早用金溶胶涂布BSA所述完成该涂布。当以 自由移动形式存在时，该偶合物被固定的NeutrAvidin捕捉，并且由于覆盖该分子的金颗
34粒而获得可视信号。I. TSH-报道子偶合物结合区域的制备TSH-报道子偶合物结合区域包括具有固 定在它上面的NeutrAvidin (如上面有关生物素-结合元件区域所述)的硝酸纤维素固体 支持物上的区域。J.参考区域的制备参考区域优选地包括TSH-报道子偶合物结合区域的五个相 同的平行条带。将生物素-TSH-金偶合物的溶液精确地应用于每个条带。最后，五个条带 分别具有结合至它们的0. 2,1. 0,3. 0,5. 0和7. 5mIU/L的偶合物。通过将结果窗中的条带 颜色强度与参考条带比较，用户可确定被测样品中TSH的量的范围。实施例11 使用横向流动装置(双替换)对TSH的测定下面描述了本发明的特定替换测定的结构和操作。结构图2A中显示的装置被用来对从人获得的液体样品中的TSH进行定量。该装置包括 一个罩，所述罩含有将固体支持物的区域暴露用于观察的窗。该装置包括含有一个垫(LF1， Whatman，美国)的样品应用区域，向所述垫引入全血的液体样品，将所述样品液体与多孔 膜(PuraBind ，Whatman，美国)的固体支持物(测试带)相接触。该垫被设计为使血浆与 血细胞分离。固体支持物包括确定的MIP-偶合物区域，其包括用TSH-肽-生物素偶合物饱 和的TSH特异性MIP。MIP-偶合物区域的下游是报道子-偶合物结合区域，其包括用涂布了 金溶胶的偶合至BSA的HABA浸渍的NeutrAvidin。再往下游是带有将被用作对样品中MMA 的浓度进行定量的辅助的标尺的包括固定的NeutrAvidin的结果区域，接下来是包括干燥 的HABA-BSA-金(报道子-偶合物)的对照垫和包括固定在固体支持物上的NeutrAvidin 的对照区域。操作为了开始测定，将一滴全血应用于样品应用区域。离开样品应用区域的血浆接触 硝酸纤维素膜并通过毛细作用沿着装置流动以接触被TSH-肽-生物素偶合物浸渍的TSH 特异性MIP区域。随着液体的前面移动穿过MIP-偶合物区域，存在于样品中的TSH以与它 的浓度成比例的量替换来自MIP的TSH-肽-生物素偶合物分子。替换的TSH-肽_生物素偶合物分子在液体中向下游流动，到达报道子_偶合物结 合区域，其包括固定于NeutrAvidin的HABA-BSA-金报道子偶合物。由于生物素较高的亲 和力，TSH-肽-生物素偶合物的生物素以与替换的TSH-肽-生物素偶合物的浓度成比例 的量替换来自NeutrAvidin的报道子-偶合物。替换的报道子-偶合物进一步向下游迁移直到它与结果区域中的NeutrAvidin结 合元件接触。平行于NeutrAvidin结合元件的是参考标尺，其被滴定以允许通过确定报道 子-偶合物沿着结果窗的结合元件前进的距离来解释样品中TSH的量。可视信号在结果区 域中是明显的，允许用户确定血液样品中TSH的量。在应用样品后约15分钟确定结果，这 是保证装置的所有组件适当工作所必需的时间。在过了结果区域之后，液体样品继续横向地跨越对照垫移动，将浸渍在对照垫中 的报道子_偶合物即HABA-BSA-金带进沿着装置自由流动的状态，直至位于对照区域中的 NeutrAvidin条带，在此它被捕捉。跨越整个对照区域形成可见的线，表明测定已经适当地 工作。过量液体和试剂将继续横向地跨越装置移动并收集在吸收垫中。
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实施例12 使用诊断性流通装置(双替换)对TSH的测定下面描述了本发明的特定替换测定的结构和操作(柱式组合)。结构图4B中显示的装置被用来对从人获得的液体样品中的TSH进行定量。该装置包 括一个罩，所述罩含有将固体支持物的区域暴露用于观察的窗。该装置包括含有被设计为 使血浆与血细胞分离的垫(LF1，Whatman，美国)的样品应用区域，向所述垫引入全血的液 体样品，将所述液体样品与含有未修饰的珠子的多孔固体支持物(Sigmacell⑧纤维素，50 型，目录号S5504 Sigma)的区域相接触。进一步向下游是MIP-偶合物区域，其包括位于物理接触的下方的固体支持物 区域的用TSH-肽-生物素偶合物饱和的包装的TSH特异性MIP颗粒。进一步向下游与 MIP-偶合物区域物理接触的是报道子-偶合物结合区域，其包括用HABA-BSA-金饱和的 NeutrAvidin涂布的包装的纤维素生物素固定的琼脂糖珠子(目录号VIT-H-4S，Affiland S.A.比利时)。再往下游与纤维素珠子物理接触的是结果区域，其包括用未修饰的珠子的 区域分隔的包装的NeutrAvidin涂布的生物素固定的琼脂糖珠子。穿过珠子的分子的色谱 流动在液体中帮助形成分析物的清楚的和浓缩的区域。在观察窗中可见的标尺平行于结果 区域以便被用作对样品中TSH的浓度进行定量的辅助，接下来是包括干燥的HABA-BSA-金 (报道子_偶合物)的对照垫和包括NeutrAvidin涂布的生物素固定的琼脂糖珠子的对照 区域。在样品应用区域引入样品并在装置中分析样品之后，可视信号在结果区域和对照区 域中是明显的，允许用户确定血液样品中TSH的量，并且确认装置的适当性能。操作为了开始测定，将一滴全血应用于装置顶端的样品应用区域。离开样品应用区域 的血浆通过毛细作用沿着装置流动以接触被TSH-肽-生物素偶合物浸渍的TSH特异性MIP 区域。随着液体的前部移动穿过MIP-偶合物区域，存在于样品中的TSH以与它的浓度成比 例的量替换来自MIP的TSH-肽-生物素偶合物分子。替换的TSH-肽_生物素偶合物分子在液体中向装置的下方流动，到达报道子_偶 合物结合区域。由于生物素较高的亲和力，TSH-肽-生物素偶合物的生物素以与替换的 TSH-肽-生物素偶合物的量成比例的量替换来自NeutrAvidin的报道子偶合物。替换的报道子偶合物向装置下方迁移直到它与结果区域中的NeutrAvidin涂布 的纤维素珠子接触。平行于含有NeutrAvidin的结合元件的是参考标尺，其被滴定以允许 通过确定报道子_偶合物沿着结果窗的结合元件前进的距离来解释样品中TSH的量。在应 用样品后约15分钟确定结果，这是保证装置的所有组件适当工作所必需的时间。在过了结果区域之后，液体样品继续向下移动至对照垫，将浸渍在对照垫中的未 结合的报道子_偶合物即HABA-BSA-金带进向装置下方自由流动的状态，直至位于对照区 域中的NeutrAvidin涂布的珠子。跨越整个对照区域形成可见的线，表明测定已经适当地 工作。过量液体和试剂将继续向装置下方移动并收集在吸收垫中。实施例13 用于确定B型钠尿(naturietic)肽(BNP)的荧光替换测定试剂盒结构该装置包括便携的检测单元。为了方便，该描述将涉及实施例1-4中所述的横向 流动装置的一般结构，应理解，经少量修饰，该装置可采用具如实施例5-8中所述的流通装置的形式。该装置包括含有被设计为使血浆与血细胞分离的垫(LF1，Whatman，美国)的样品 应用区域，向所述垫引入全血的液体样品，将所述液体样品与硝酸纤维素膜接触。MIP-偶 合物区域(检测区域)包括用BNP-肽-生物素偶合物饱和的BNP-肽-特异性MIP。报道 子_偶合物是涂布了荧光染料分子的HABA-BSA (HABA-BSA-FLUR0F0R)。报道子-偶合物的 报道分子是荧光染料Alexa Fluor 488(lnvitr0gen，美国)，并且借助于手持便携式荧光测 定读数器(ESE;St0CkaCh，德国)完成结果的确定。该装置装有一个被设计为适合荧光读 数器的罩，以此方式将对应于可视装置中结果区域的区域与读数器的荧光检测单元对齐。操作用于检测BNP的装置被用来监测血清中BNP的存在和浓度。在应用血清样品之 前，将装置装入读数器，其将仪器激活并将它带入待机位置(只有适当的装入才激活仪器， 否则出现出错信息)。样品应用触发仪器进行倒计时，其导致在样品应用之后约15分钟的 荧光强度的测量，这是保证测定的所有组件适当工作所必需的时间。样品中的BNP从BNP-肽-特异性MIP中替换BNP-肽-生物素，并且替换的阿特 拉津_生物素又从报道子_偶合物结合区域中的NeutrAvidin中替换HABA_BSA-fIuor染 料。报道子-偶合物向下游迁移直至结果区域，在其中它被NeutrAvidin捕捉。通过由荧 光读数器比较从样品中获得的信号和内部校准曲线的信号来确定样品中BNP的量。结果以 pg/ml (检测极限为10pg/ml)被显示在仪器的IXD上。实施例14 使用横向流动装置(竞争/替换)对MMA的测定下面描述了本发明的特定替换测定的结构和操作。结构图2B中显示的装置被用来对从人获得的液体样品中的MMA进行定量。该装置包 括一个罩，所述罩含有将固体支持物的区域暴露用于观察的窗。该装置包括含有用MMA-生 物素偶合物浸渍的垫(LF1，Whatman，美国)的样品应用区域，向所述垫引入全血的液体样 品，将所述样品液体与多孔膜(PuraBind ，Whatman，美国)的固体支持物(测试带)相接 触。该垫被设计为使血浆与血细胞分离。固体支持物包括含有MMA特异性MIP的确定的 MIP区域。MIP区域的下游是报道子_偶合物结合区域，其包括用连接至染色的聚苯乙烯珠 子(Kl-030bleu (39457)，Merck-Estapor，法国)的脱硫生物素(DTB)浸渍的 NeutrAvidin。 再往下游是带有将被用作对样品中MMA的浓度进行定量的辅助的标尺的包括固定的 NeutrAvidin的结果区域，接下来是包括干燥的DTB-珠子(报道子-偶合物)的对照垫和 包括固定在固体支持物上的NeutrAvidin的对照区域。操作为了开始测定，将一滴全血应用于样品应用区域并溶解浸渍的MMA-生物素偶合 物。离开样品应用区域的含有偶合物的血浆接触硝酸纤维素膜，并通过毛细作用沿着装置 流动以接触MMA特异性MIP区域。随着液体的前部移动穿过MIP-偶合物区域，存在于样品 中的MMA与MMA-生物素偶合物分子竞争MIP的MMA特异性结合位点，而且由于MMA对这些 位点的优良的亲和力，与样品中MMA的浓度成比例的量的偶合物未被结合。未结合的MMA-生物素偶合物分子在液体中向下游流动，到达报道子_偶合物结合 区域，其包括固定于NeutrAvidin的DTB-珠子报道子-偶合物。由于生物素较高的亲和
37力，MMA-生物素偶合物的生物素以与替换的MMA-生物素偶合物的量成比例的量替换来自 NeutrAvidin的报道子-偶合物。替换的报道子_偶合物进一步向下游迁移直到它与结果 区域中的NeutrAvidin结合元件接触。平行于NeutrAvidin结合元件的是参考标尺，其被 滴定以允许通过确定报道子_偶合物沿着结果窗的结合元件前进的距离来解释样品中MMA 的量。可视信号在结果区域中是明显的，允许用户确定血液样品中MMA的量。在应用样品 后约15分钟确定结果，这是保证装置的所有组件适当工作所必需的时间。在过了结果区域之后，液体样品继续横向地跨越对照垫移动，将浸渍在对照垫中 的报道子-偶合物即DTB-珠子带进沿着装置自由流动的状态，直至位于对照区域中的 NeutrAvidin条带，在此它被捕捉。跨越整个对照区域形成可见的线，表明测定已经适当地 工作。过量液体和试剂将继续横向地跨越装置移动并收集在吸收垫中。大家都了解，为了清楚目的在分开的实施方案的上下文中所述的本发明的某些特 征还可在单独的实施方案中组合在一起提供。相反地，为了简洁目的在单独的实施方案的 上下文中所述的本发明的各种特征还可分别地或以任何适合的亚组合提供。在检验了下面不期望加以限制的实施例之后，本发明另外的目的、优势和新特征 对于本领域普通技术人员将变得明显。另外，本文上述描绘的和下面权利要求部分中所要 求保护的本发明的各种实施方案和方面中的每个实施方案和方面都在下面的实施例中找 到实验支持，其期望说明但不限制本发明。虽然已结合其特定的实施方案描述了本发明，明显的是许多替代方案、修饰和变 化对于本领域技术人员将是明显的，例如加入试剂来控制测定的条件，例如PH。因此，期望 涵盖落入所附权利要求的精神和宽范围之内的所有这种替代方案、修饰和变化。
权利要求
一种检测液体样品中至少一种分析物的方法，所述方法包括a)提供诊断装置，所述诊断装置包括固定于固体支持物的具有分析物特异性结合位点的分子印记聚合物，其中所述液体样品可沿着沿着或穿过所述固体支持物的流动途径移动；以及将所述液体样品应用于所述装置的样品应用区域；b)将所述液体样品应用于所述样品应用区域并允许该样品沿着或穿过所述固体支持物流动，并与所述分子印记聚合物接触；以及c)检测所述分析物与所述分子印记聚合物的结合。
a)提供诊断装置，所述诊断装置包括固定于固体支持物的具有分析物特异性结合位 点的分子印记聚合物，其中所述液体样品可沿着沿着或穿过所述固体支持物的流动途径移 动；以及将所述液体样品应用于所述装置的样品应用区域；b)将所述液体样品应用于所述样品应用区域并允许该样品沿着或穿过所述固体支持 物流动，并与所述分子印记聚合物接触；以及c)检测所述分析物与所述分子印记聚合物的结合。
2.一种用于检测液体样品中至少一种分析物的诊断装置，所述装置包括a)固定于固体支持物的具有分析物特异性结合位点的分子印记聚合物，其中所述液体 样品可沿着沿着所述固体支持物的流动途径移动；b)用于将所述液体样品应用于所述装置并使所述液体样品与所述分子印记聚合物接 触的样品应用区域；以及c)用于检测所述分析物与所述分子印记聚合物的结合的检测区域。
3.根据权利要求1或2任一项所述的方法或装置，其中所述装置包括横向流动装置、流 通装置或组合了横向流动元件和流通元件的装置，其中所述液体样品从所述样品应用区域 沿着装置的流动途径沿着或穿过装置的所述固体支持物组件流动。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法或装置，其中所述分析物替换可释放地结 合至所述分子印记聚合物的分析物类似物报道子偶合物，其中所述分析物类似物报道 子偶合物的替换表明样品中所述分析物的存在。
5.根据权利要求4所述的方法或装置，其中可释放的分析物类似物报道子偶合物被 结合至所述分子印记聚合物，其中所述分析物对所述分子印记聚合物的所述结合位点的亲和力至少等于所述分析 物类似物报道子偶合物对所述分子印记聚合物的所述分析物特异性结合位点的亲和力，其中当将所述分子印记聚合物与所述液体样品中的所述分析物接触时，所述分析物被 结合而所述分析物类似物报道子偶合物被替换，所述装置还包括结果区域，所述结果区域包括在样品的所述流动途径上固定于所述固 体支持物的分析物类似物报道子偶合物结合元件，所述报道子偶合物结合元件能够结合 所述替换的分析物类似物报道子偶合物，其中所述分析物类似物报道子偶合物的替换与所述液体样品中所述分析物的浓度 是成比例的，使得所述分析物与所述分子印记聚合物的结合的检测包括所述替换的分析 物报道子偶合物与所述分析物类似物报道子偶合物结合元件的所述结合的检测。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法或装置，其中所述分析物替换可释放地结 合至所述分子印记聚合物的第一结合剂分析物偶合物，其中所述替换的第一结合剂分析物偶合物替换可释放地结合至所述固体支持物的 第二结合剂报道子偶合物，其中所述第二结合剂报道子偶合物的替换表明样品中所述分析物的存在。
7.根据权利要求6所述的方法或装置，其中可释放的第一结合剂分析物偶合物被结 合至所述分子印记聚合物，其中所述分析物对所述分子印记聚合物的所述结合位点的亲和力至少等于所述第一结合剂分析物偶合物对所述分子印记聚合物的所述分析物特异性结合位点的亲和力，其中当将所述分子印记聚合物与所述液体样品中的所述分析物接触时，所述分析物被 结合而所述第一结合剂分析物偶合物被替换，所述装置还包括i)报道子_偶合物结合区域，其包括在液体样品的所述流动途径上固定于所述固体支 持物的报道子_偶合物结合元件，所述报道子_偶合物结合元件具有对结合于其上的可检 测的、可释放的第二结合剂报道子偶合物的结合位点，其中所述第一结合剂分析物偶合物对于所述报道子偶合物结合元件的所述分析物 特异性结合位点的亲和力至少等于所述第二结合剂报道子偶合物对所述报道子偶合物 结合元件的所述结合位点的亲和力，其中所述第一结合剂分析物偶合物的结合替换第二 结合剂报道子偶合物，而且其中所述第二结合剂报道子偶合物的替换与所述液体样品 中所述分析物的浓度是成比例的；和 )结果区域，其包括在样品的所述流动途径上固定于所述固体支持物的第二结合 剂报道子偶合物结合元件，所述报道子偶合物结合元件能够结合所述替换的第二结合 剂报道子偶合物，其中所述分析物与所述分子印记聚合物的结合的检测包括所述第二结合剂报道子 偶合物与所述分析物类似物报道子偶合物结合元件的所述结合的检测。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的方法或装置，包括分析物类似物报道子偶合 物，其中所述分析物与所述分析物类似物报道子偶合物竞争所述分子印记聚合物的所述 分析物特异性结合位点，其中未结合的分析物类似物报道子偶合物的存在被检测并表明样品中分析物的存在。
9.根据权利要求8所述的方法或装置，包括分析物类似物报道子偶合物，其中所述分 析物对所述分子印记聚合物的所述分析物特异性结合位点的亲和力至少等于所述分析物 类似物报道子偶合物对所述分子印记聚合物的所述分析物特异性结合位点的亲和力，其中当将所述分子印记聚合物与所述液体样品中的所述分析物接触时，所述分析物和 所述分析物类似物报道子偶合物竞争所述分子印记聚合物的所述结合位点，所述装置还包括结果区域，所述结果区域包括结合于所述固体支持物的分析物类似 物报道子偶合物结合元件，所述报道子偶合物结合元件能够结合所述未结合的分析物类 似物报道子偶合物并提供可检测的信号，所述可检测的信号表明所述液体样品中所述分 析物的浓度。
10.根据权利要求1至3中任一项所述的方法或装置，包括第一结合剂分析物偶合 物、第二结合剂报道子偶合物和第二结合剂受体偶合物结合元件，其中所述分析物与所述第一结合剂分析物偶合物竞争所述分子印记聚合物的所述 分析物特异性结合位点，使得在所述分析物存在下至少一部分所述第一结合剂分析物偶 合物是未结合的，其中所述未结合的第一结合剂分析物偶合物与所述第二结合剂报道子偶合物竞争 对于所述第二结合剂受体偶合物结合元件的结合。
11.根据权利要求10所述的方法或装置，包括第一结合剂分析物偶合物，其中所述分析物对所述分子印记聚合物的所述分析物特异性结合位点的亲和力至少等于所述第一结 合剂分析物偶合物对所述分子印记聚合物的所述分析物特异性结合位点的亲和力，其中当将所述分子印记聚合物与所述液体样品中的所述分析物接触时，所述分析物和 所述第一结合剂分析物偶合物分析物竞争所述分子印记聚合物的所述分析物特异性结 合位点，并且其中所述未结合的第一结合剂分析物偶合物在所述液体样品的流动途径中流动，所述装置还包括i)第二结合剂报道子应用区域，其包括干燥状态的第二结合剂报道子偶合物；ii)下游的报道子偶合物结合区域，其包括在液体样品的所述流动途径上固定于所述 固体支持物的报道子_偶合物结合元件，其中所述第一结合剂分析物偶合物对所述报道子-偶合物结合元件的亲和力至少等 于所述第二结合剂报道子偶合物对所述结合位点的亲和力，其中当将所述干燥的第二结合剂报道子偶合物与所述未结合的第一结合剂分析物 偶合物接触时，所述第二结合剂报道子偶合物和所述未结合的第一结合剂分析物偶合 物竞争与所述报道子_偶合物结合元件的结合，其中所述未结合的第二结合剂报道子偶合物在液体样品的所述流动途径中向下游 流动；以及iii)结果区域，其包括与所述固体支持物结合的第二结合剂报道子偶合物结合元 件，所述报道子-偶合物结合元件能够结合所述未结合的第二结合剂报道子偶合物并提 供可检测的信号，所述可检测的信号表明所述液体样品中所述分析物的浓度。
12.根据权利要求1至3中任一项所述的方法或装置，包括第一结合剂分析物类似 物，其中未结合的第一结合剂分析物类似物由与分析物对分子印记聚合物的结合位点的 竞争以及被所述分析物自所述分子印记聚合物的替换中的至少一种所产生；所述装置还包括第二结合剂报道子偶合物结合元件，其中未结合的第二结合剂报道子偶合物由与 所述第一结合剂分析物偶合物的竞争以及被所述第一结合剂分析物偶合物的替换中的 至少一种所产生，其中未结合的第二结合剂报道子偶合物的存在表明样品中分析物的存 在。
13.根据权利要求12所述的方法或装置，其中所述第一结合剂分析物类似物在所述 样品应用区域被提供，或者被结合至所述分子印记聚合物；其中所述报道子偶合物结合元件在液体样品的所述流动途径上被固定于所述固体支 持物，并且所述第二结合剂报道子偶合物在报道子偶合物应用区域被提供，或者被可释 放地结合至所述报道子偶合物结合元件，所述装置还包括结果区域，所述结果区域包括结合至所述固体支持物的第二结合剂 报道子偶合物结合元件，所述报道子-偶合物结合元件能够结合所述未结合的第二结合 剂报道子偶合物并提供可检测的信号，所述可检测的信号表明所述液体样品中所述分析 物的浓度。
14.根据权利要求4至13中任一项所述的方法或装置，其中所述报道子偶合物或所 述结合剂偶合物中的至少一种包括生物素，而且其中所述结合元件选自由抗生物素蛋白、NeutrAvidin 和 Extravidin 所组成的组。
15.根据权利要求5、7、9或10中任一项所述的方法或装置，其中所述报道子_偶合 物_结合元件被水平地固定于所述固体支持物上的样品液体流动途径，其中所述未结合的报道子偶合物使所述报道子_偶合物结合元件的所述结合位点饱和，其中所述结果被显像为前进中的柱，该柱具有与样品中分析物的量成比例的长度。
16.根据权利要求5、7、9、11或13中任一项所述的方法或装置，还包括下列中的至少一 个阳性对照区域；参考区域；液体样品的所述流动途径上的所述结果区域下游的吸收区 域，所述吸收区域包括能够吸收液体样品的吸收性材料；以及包括与结果区域、参考区域和 对照区域中的至少一个对齐以允许观察装置上的测试结果的至少一个窗的外壳。
17.根据权利要求17任一项所述的方法或装置，其中将所述结果区域中的信号强度与 所述参考区域中的信号强度进行比较，所述装置被布置并构造为在分析物以等于或高于阈 值水平存在时提供阳性结果以表明样品中分析物的浓度。
18.根据权利要求5、7、9、11或13中任一项所述的方法或装置，还包括参考区域，其中 所述参考区域包括结合元件的至少一个离散条带，所述离散条带包括已知量的所述分析物 类似物报道子偶合物，其中样品中靶分析物的存在或不存在是通过比较所述参考区域中 的信号强度和所述结果区域中的所述信号强度来确定的。
19.根据权利要求5、7、9、11或13所述的方法或装置，其中所述装置缺少参考区域， 其中所述结果区域还包括与固定的报道子-偶合物结合元件平行的标尺，所述标尺被校准 以对应被分析的液体样品中的分析物浓度，而且其中通过被沿着和穿过结果区域中报道 子_偶合物结合元件的报道子_偶合物所覆盖的面积来确定液体中分析物的存在和浓度。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法或装置，其中所述样品选自由生物液体、 环境样品、食品、毒素、工业样品和工业生产步骤的副产品所组成的组。
21.根据权利要求20所述的方法或装置，其中所述分析物选自由细胞、生物体、小分 子、蛋白质、激素、酶、生物标志物、生物标志物的代谢产物、药物的代谢产物、药物、药物代 谢产物药物-蛋白偶合物、药物代谢产物-蛋白偶合物、维生素、滥用药物、天然或合成的毒 素、化学或生物战剂、药物的抗体、传染原的抗体、环境污染物、免疫球蛋白、淋巴因子、细胞 因子、可溶性癌症抗原、生长因子、神经递质、表明食品安全性或质量的分子、操作化学品、 生产过程的副产品、杀虫剂、杀昆虫剂、除草剂、肥料、表面活性剂、粘着剂和用于制造食物、 工业剂或化学产品的剂所组成的组。
22.根据权利要求21任一项所述的方法或装置，其中所述分析物选自由MMA、高半胱氨 酸、肌钙蛋白亚基I或T、CKMB, LDH和G0T/SG0T、citrozine、醋氨酚、卡马西平、氯霉素、毛 地黄毒苷、地高辛、庆大霉素、卡那霉素、利多卡因、锂、氨甲蝶呤、苯巴比妥、普萘洛尔、奎尼 丁、茶碱、BNP, FSH、cumadine、维生素K、黄曲霉毒素、蓖麻毒素、2，4_ 二氯苯氧乙酸(2_4， D)、莠去津、甲草胺、草净津、甲氧毒草安、西玛津、肾上腺素、安非他明、TSH、游离的T3 T4、 PSA、类固醇、雌二醇、孕酮、睾酮、雌激素、砷、氰化物、士的宁、禽流感病毒、HIV病毒、肝炎病 毒、脊髓灰质炎病毒、巨细胞病毒、登革病毒、埃博拉病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、EBV、狂犬病 病毒、呼吸道合胞病毒、轮状病毒、SARS病毒、西尼罗河病毒、黄热病病毒、弯曲杆菌属、衣原 体属、霍乱、梭状芽胞杆菌属、白喉、大肠杆菌、奈瑟氏菌属、螺杆菌属、嗜血杆菌属、分枝杆菌属、葡萄球菌属、百日咳、沙门氏菌属、志贺氏菌属、链球菌属、密螺旋体属、破伤风、耶尔 森氏菌属、葡萄球菌肠毒素、葡萄球菌肠毒素B、蓖麻毒素、肉毒杆菌毒素、霉菌毒素、破伤风 毒素、霍乱毒素、单端孢霉烯霉菌毒素、对传染病媒介物有特异性的抗体和与自体免疫疾病 相关的自身抗体、癌细胞、病毒感染的细胞、病毒、细菌细胞和真菌细胞所组成的组。
23.根据权利要求5所述的方法或装置，其中所述可释放的第一结合剂选自由生物素、 生物素类似物、生物素衍生物、抗原、蛋白A和蛋白G、纤维素结合蛋白、激素、毒素、脂质、脂 肪酸、核酸、糖偶合物、凝集素、底物和配体所组成的组。
24.根据权利要求5所述的方法或装置，其中所述可释放的第二结合剂选自由生物素、 生物素类似物、生物素衍生物、HABA、DTB、抗原、蛋白A和蛋白G、纤维素结合蛋白、脂质体、 激素、毒素、脂质、脂肪酸、核酸、糖偶合物、凝集素、底物和配体或它们的类似物所组成的 组。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法或装置，其中所述报道子选自由HABA、 染料、荧光剂、荧光染料、放射性标记、磁性颗粒、金属颗粒、半导体颗粒、量子点、有色颗粒、 荧光颗粒、金属盐、酶底物、酶、化学发光剂、感光剂和可悬浮颗粒所组成的组。
26.根据权利要求5所述的方法或装置，其中所述第一结合剂和所述第二结合剂是相 同的或不同的，而且各自选自由具有对生物素的高特异性亲和力的抗生物素蛋白、链霉抗 生物素蛋白、NeutrAvidin, ExtrAvidin化合物，膜，受体，免疫球蛋白，纤维素，酶，凝集素， 糖偶合物，互补核酸和具有对它们相应的结合配偶体的高亲和力的疏水位点所组成的组。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法或装置，其中所述固体支持物选自由多 孔材料、多孔膜、颗粒状材料和吸收性材料所组成的组。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法或装置，其中所述分子印记聚合物包括 选自由如下所组成的组的聚合物在靶分析物或靶分析物_偶合物和成孔剂的存在下用交 联剂将一种或多种单体交联而聚合得到的聚合物，所述聚合物具有选择性结合靶分析物和 它的偶合物的能力；在MMA的存在下聚合得到的聚合物，所述聚合物具有选择性结合MMA的 能力；在含有氨基酸LSCKCGKCNTDY的合成肽或者代表TSH的β亚基的表位的肽的存在下 在成孔剂中聚合得到的聚合物，所述聚合物具有选择性结合TSH的能力。
29.一种检测液体样品中存在的TSH的方法，所述方法包括如下步骤a)将样品与权利要求5、7、9、11、13中任一项所述的装置中的任一个相接触，并且b)在结果区域中检测结合至报道子_偶合物结合元件的报道子偶合物的量，其中所述 报道子_偶合物的量对于样品中TSH的存在或量是有指示性的；c)诊断甲状腺功能减退或甲状腺功能亢进病症。
30.一种试剂盒，包括a.根据权利要求1-3所述的装置中的任一个；b.任选地，用于提取或加工样品以洗脱分析物的一种或多种试剂或组合物；c.任选地，一种或多种稀释剂；以及d.任选地，用于实践检测和确定液体样品中靶分析物的存在、不存在或浓度的方法的 说明书。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的方法或装置，其中所述分析物的所述检测包 括使用辅助检测器装置，其中所述检测器装置选自由荧光感应器、磁性感应器、化学发光感应器、密度计、图像分析器和放射性感应器所组成的组。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法或装置，其中所述样品被预处理以修饰 样品的特性。
33.根据权利要求32所述的方法或装置，其中所述预处理选自由稀释、过滤、蒸馏、浓 缩、干扰组分的灭活和试剂的添加或其组合所组成的组。
34.根据权利要求16所述的方法或装置，其中所述装置包括置于所述样品应用区域、 所述结果区域、所述参考区域、对照区域或所述吸收区域中的一个或多个区域中的至少一 个多孔垫。
35.根据权利要求34所述的方法或装置，其中所述垫被预处理以促进或控制样品穿过 装置的流速。
全文摘要
用于液体样品中的靶分子包括小分子、多肽、蛋白质、细胞和传染病媒介物的快速和简单确定的装置、方法和试剂盒，其能够实时测量液体样品中的这些实体，而且是高度选择性的、高度敏感的、操作简单的、低花费的和便携的。所述装置、方法和试剂盒在至少一些实施方案中还提供流通装置或横向流动装置中MIP的用途。
文档编号C12M1/00GK101945990SQ200880126888
公开日2011年1月12日 申请日期2008年12月28日 优先权日2007年12月27日
发明者伊多·马葛利特, 拉斐尔·李维, 雅登·德鲁米 申请人:尹菲戈诊断有限公司