专利名称：球虫卵囊简易监测法的制作方法
技术领域：
本发明涉及家 禽寄生虫病的诊断技术领域，更具体地说是涉及一种专用于检测鸡 粪或垫料中的球虫卵囊的方法。
背景技术：
鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一，特别是在气温高、湿度大的地区，有 利于球虫卵囊的生长发育，鸡球虫病常常是暴发性流行。自上世纪40年代磺胺类药物用于 养鸡生产以来，已先后有40多种药物投入临床应用，给现代养鸡业带来空前的发展，可以 说，没有抗球虫药物的开发应用，就没有现代集约化养鸡业。然而，随着药物的广范应用，球 虫抗药性问题日趋普遍和严重。多药抗性或交叉抗药性的产生大大缩短了药物的商业使用 年限。再者，药物残留问题日趋引起了人们的关注，尤其是随着人们对无药残安全食品需求 的不断提高，更是迫使业界在不久的将来，会彻底抛弃通过长期连续于饲料中添加药物防 治球虫病这种高成本高药残的方法。经过长时间的研究开发，目前，在鸡球虫病免疫防制技 术上取得多项突破，成功研发出药物敏感的鸡球虫病四价活疫苗，经鸡球虫病活疫苗免疫 后的鸡群，疫苗虫株在体内经5 7天发育繁殖，形成子代卵囊并随鸡粪排出体外，子代卵 囊在外界环境中发育成具有感染力的孢子化卵囊，再被鸡只食入，开始第二次循环。根据球 虫的生活史，通过监测免疫鸡群球虫卵囊的排泄情况，可以了解和预测球虫病活疫苗的免 疫保护效果，而常见的测定粪便或垫料中鸡球虫卵囊的数量的方法是饱和盐水浮卵法，但 它存在只能定性、不能定量的缺点。因此，寻找一种能提供准确数据，且操作简便，成本低， 提高效率的监测方法，作为球虫病活疫苗推广使用的服务技术之一，使免疫监测实现数字 化和标准化已成为人们值得探讨的课题。
发明内容
本发明的目的就是为了解决现有技术之不足而提供的一种不仅其操作和对设备 的要求大为简化，而且可测定每克粪便或垫料中鸡球虫卵囊的数量的球虫卵囊简易监测法。本发明是采用如下技术解决方案来实现上述目的一种球虫卵囊简易监测法，其 特征在于，它包括如下步骤a、粪样采集，从鸡舍地面的多个位置采集新鲜粪便样品，装入收集鸡粪用塑料袋 或容器中；b、将所采集到的1个粪样充分搅拌均勻，用球虫卵囊简易监测工具盒中的小汤匙 取半匙(3 5克)，装入烧杯中，加入纩12mL饱和食盐水，搅拌至粪样彻底分散均勻后，再 加入44 52mL饱和食盐水，搅拌均勻后静置8 12分钟；c、将b过程搅拌后的粪样用取液环轻轻蘸取最上层液面，抖落到双凹载玻片上的 圆形凹槽中，并将双凹玻片置于显微镜下观察(倍数IOX 10)，观察液滴中间位置的上层液 面，计算卵囊最密集位置1个视野中的卵囊和种类数量；
d、对比卵囊排泄标准曲线，进行免疫监测结果判别；e、重复步骤a、b、C、d，分别进行球苗子代卵囊监测与球苗孙代卵囊监测。作为上述方案的进一步说明，在所述粪样采集过程中，同一栋鸡舍或同一群鸡的粪样为1个样品，每个样品中包含从鸡舍地面的多个位置采集到的小肠粪18 22堆，盲肠 粪3 6堆。在所述步骤c的蘸取液滴的过程中，在液面不同位置取样3 5次抖落到同一个 圆形凹槽，形成一个与圆形凹槽面积大小相同的液滴。在所述步骤d过程中，进行球苗子代卵囊监测的时间为首免接种1周后连续监测 1 3天，进行球苗孙代卵囊监测的时间为首免接种2周后连续监测1 3天。发明采用上述技术解决方案所能达到的有益效果是本发明只需采用1台可放大100倍的显微镜、适量的饱和食盐水，以及球虫卵囊简 易监测工具盒，就可测定每克粪便或垫料中鸡球虫卵囊的数量，在十多分钟内完成对一群 鸡的球虫病或疫苗免疫效果的快速监测，操作简单快捷，对设备的要求大为简化，成本低； 并且，通过对免疫鸡群球虫卵囊排泄情况的监测，对比卵囊排泄标准曲线，可以科学地预见 免疫力建立程度，使免疫监测实现数字化和标准化。
具体实施例方式本发明一种球虫卵囊简易监测法，它包括如下步骤1、准备工作a、材料可放大100倍的显微镜1台、饱和食盐水适量、正典球虫卵囊简易监测工具盒(双 凹载玻片ι块、IOOmL量杯1个、标准取液环1个和小汤匙1把)、收集鸡粪便用的塑料袋或
容器适量。b、饱和盐水配制方法取IOOOmL的沸水，边搅拌边往沸水中加入纯食盐，直至有少量食盐不再溶解为 止，待冷却后使用。C、粪样采集从鸡舍地面的多个位置采集新鲜粪便样品，小肠粪约20堆，盲肠粪约5堆，装入收 集鸡粪用塑料袋或容器中，同一栋鸡舍或同一群鸡的粪样为1个样品。2、具体检测步骤将所采集到的1个粪样充分搅拌均勻。用球虫卵囊简易监测工具盒中的小汤匙取半匙(约3 5克)，装入IOOmL烧杯 中，加入IOmL饱和食盐水，用小汤匙不断搅拌至粪样彻底分散均勻后，再加入50mL饱和食 盐水，搅拌均勻后静置10分钟。用取液环轻轻蘸取最上层液面，抖落到双凹载玻片上的圆形凹槽中，在液面不同 位置取样3次抖落到同一个圆形凹槽，形成一个与圆形凹槽面积大小相同的液滴。将双凹玻片置于显微镜下观察(倍数10 X 10)，观察液滴中间位置的上层液面，计 算卵囊最密集位置1个视野中的卵囊和种类数量。3、免疫监测结果判别
对比卵囊排泄标准曲线，科学预见免疫力建立程度，使免疫监测实现数字化和标 准化。球苗子代卵囊监测
首免接种1周前后连续监测3天(或其中1天)平均每个视野10 20个混合 球虫卵囊。球苗孙代卵囊监测首免接种2周前后连续监测3天(或其中1天)平均每个视野100 200个混 合球虫卵囊。本发明的球虫免疫监测基本原理鸡接种球虫活疫苗后，疫苗虫株在体内经5 7天发育繁殖，刺激鸡体产生免疫应答，但其建立的初步免疫力不足以抵御野外大量球虫强 毒的攻击。疫苗虫株在鸡体内发育形成子代卵囊并随鸡粪排出体外，于适宜的温度、湿度和 有氧条件下，在外界环境中经1 2天发育成为具有感染能力的孢子化卵囊，再被鸡只食入 而重复感染，实现“二免、三免”，有了如此的循环感染，鸡体抗球虫免疫力进一步加强，从而 能完全抵御野外球虫强毒的攻击。本发明通过对免疫鸡群球虫卵囊排泄情况的监测，对比卵囊排泄标准曲线，科学 地预见免疫力建立程度，使免疫监测实现数字化和标准化，克服了饱和盐水浮卵法只能定 性、不能定量的缺点，准确性虽较麦氏克粪便虫卵计数法稍差，但其操作和对设备的要求大 为简化，仅需1台可放大100倍的显微镜，少量饱和食盐水和1套球虫卵囊简易监测工具 盒，即可在十多分钟内完成对一群鸡的球虫病或疫苗免疫效果的快速监测。以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对 本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解。依然可以对发明的具体实 施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其 均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。
权利要求
一种球虫卵囊简易监测法，其特征在于，它包括如下步骤a、粪样采集，从鸡舍地面的多个位置采集新鲜粪便样品，装入收集鸡粪用塑料袋或容器中；b、将所采集到的1个粪样充分搅拌均匀，用球虫卵囊简易监测工具盒中的汤匙取3～5克，装入烧杯中，加入8~12mL饱和食盐水，搅拌至粪样彻底分散均匀后，再加入44~52mL饱和食盐水，搅拌均匀后静置8~12分钟；c、将b过程搅拌后的粪样用取液环蘸取最上层液面，抖落到双凹载玻片上的圆形凹槽中，并将双凹玻片置于显微镜下观察，观察液滴中间位置的上层液面，计算卵囊最密集位置1个视野中的卵囊和种类数量；d、对比卵囊排泄标准曲线，进行免疫监测结果判别；e、重复步骤a、b、c、d，分别进行球苗子代卵囊监测与球苗孙代卵囊监测。
2.根据权利要求1所述的球虫卵囊简易监测法，其特征在于在所述粪样采集过程中， 同一栋鸡舍或同一群鸡的粪样为1个样品，每个样品中包含从鸡舍地面的多个位置采集到 的小肠粪18 22堆，盲肠粪3 6堆。
3.根据权利要求1所述的球虫卵囊简易监测法，其特征在于在所述步骤c的蘸取液 滴的过程中，在液面不同位置取样3 5次抖落到同一个圆形凹槽，形成一个与圆形凹槽面 积大小相同的液滴。
4.根据权利要求1所述的球虫卵囊简易监测法，其特征在于在所述步骤d过程中，进 行球苗子代卵囊监测的时间为首免接种1周后连续监测1 3天，进行球苗孙代卵囊监测 的时间为首免接种2周后连续监测1 3天。
全文摘要
本发明公开了一种球虫卵囊简易监测法，其特征在于，它包括如下步骤a、粪样采集，从鸡舍地面的多个位置采集新鲜粪便样品，装入收集鸡粪用塑料袋或容器中；b、将所采集到的1个粪样充分搅拌均匀，用球虫卵囊简易监测工具盒中的汤匙取3～5克，装入100mL烧杯中，加入10mL饱和食盐水，搅拌至粪样彻底分散均匀后，再加入50mL饱和食盐水，搅拌均匀后静置10分钟；c、将b过程搅拌后的粪样用取液环蘸取最上层液面，抖落到双凹载玻片上的圆形凹槽中，并将双凹玻片置于显微镜下观察，观察液滴中间位置的上层液面，计算卵囊最密集位置1个视野中的卵囊和种类数量；对比卵囊排泄标准曲线，进行免疫监测结果判别。本发明操作简单快捷，对设备要求低，成本低。
文档编号C12R1/90GK101845477SQ20091004234
公开日2010年9月29日 申请日期2009年9月1日 优先权日2009年9月1日
发明者翁亚彪, 谭志坚 申请人:佛山市正典生物技术有限公司