一种亚铁血红素多肽组合物及其制备方法

专利名称：一种亚铁血红素多肽组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种亚铁血红素多肽组合物及其制备方法。

背景技术：
世界卫生组织，90年代公布的资料表明全球约有21.5亿人患铁缺乏症，其中11.2亿人产生贫血。贫血患病率一般妇女为47％，妊娠妇女大于60％；6个月至3岁的婴幼儿33.8～45.7％，中小学生大于33％，缺铁性贫血是在全世界范围内严重影响人类健康的主要原因之一。世界卫生组织高度关注，我国卫生部、国家教委将铁缺乏症列为儿童重点防治疾病。缺铁性贫血病发作缓慢，人们一般不太重视，临床表现为倦怠、乏力、气虚、气短、面色萎黄无华，影响正常的工作和生活，如儿童患此病会影响正常的身体生长和智力发育。这就是铁缺乏症的最可怕之处。
维持人体健康需要足够的铁，来源于膳食的铁需要量在成年人大约是0.8～1.4毫克/人·日，成长发育的孩子和孕妇则需要更多。由于膳食中铁的吸收率和生物利用率受多种因素影响，中国营养学会依据全国营养调查和现代科学研究结果提出的铁膳食参考适宜摄入量为成年男性15毫克/人·日，成年女性20毫克/人·日。
膳食中铁的存在有两种形式血红素铁和非血红素铁。前者主要存在于动物性食品中，是动物的血红蛋白和肌红蛋白中与卟啉结合的铁-卟啉铁；后者是存在于植物性食品和乳中的无机铁。人体对于膳食中这两种不同形式的铁有着不同的吸收机制和利用率卟啉铁直接被肠黏膜上皮细胞吸收，吸收率一般可达11％～25％，是世界医学界和卫生学界公认吸收率最好的铁。无机铁是以离子形式存在的高铁(Fe3+)和亚铁(Fe2+)，吸收率只有1％～5％。水溶性高铁盐(Fe3+)在肠道中水解后，几乎不被吸收，只有在被还原成为二价的亚铁离子后才能被吸收；而亚铁盐(Fe2+)以低分子状态存在，各种亚铁盐的生物利用度变化不大，吸收率也几乎相同，为5％。
二价状态的血红素铁是最易被人体吸收的生物态铁剂，其生物利用率一般可达11％～25％，是世界医学界和卫生学界公认的吸收率最好的铁。但二价状态的血红素铁极不稳定，当血红素脱离珠蛋白后，亚铁被自动氧化成高铁，从亚铁原卟啉(亚铁血红素)变成高铁原卟啉(高铁血红素)，致使其生物利用率大大减低，也使得亚铁血红素不利于长期保存，限制了其应用。同时，已有的研究表明血红素易形成聚集体，其处于胃的酸性pH时常发生沉淀，不能被小肠所吸收。
鉴于这种情况，希望发现一些富含亚铁血红素、耐保存、酸性pH下能溶解的制品，以提高其生物利用率和制品的保存时间。


发明内容
本发明的目的是提供一种亚铁血红素多肽组合物及其制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明的亚铁血红素多肽组合物的制备方法，包括如下步骤 (1)将血红蛋白与肝脏混合，匀浆，获得匀浆液，加入抗氧化剂和水； (2)然后在惰性气氛中，加入酶，35～60℃酶解1～4小时； (3)然后在35～60℃下酶解液灭活0.1～2小时； (4)再在灭活酶解液中加入还原剂和稳定剂，进行干燥，获得产品； 血红蛋白的重量为肝脏重量的5～20倍，优选的为6～20倍； 水的用量为匀浆和抗氧化剂的混合物的体积的0.5～5倍； 所述血红蛋白来源于禽畜，包括但不限于如猪、牛、羊、鸡、鸭或鹅，可采用市售产品，如天津恩比蛋白质有限公司的产品； 所述肝脏为来源于禽畜，包括但不限于如猪、牛、羊、鸡、鸭或鹅； 所述抗氧化剂选自原花青素(OPC)、异抗坏血酸钠、银杏黄酮、姜黄素、番茄红素、苹果多酚、烟酰胺或茶多酚中的一种以上，抗氧化剂在匀浆液中的重量含量为0.01％～2.0％； 所述还原剂选自Vc或植物酵素中的一种以上，还原剂在所述灭活酶解液中的重量含量为0.01％～2.0％； 所述稳定剂选自淀粉或环糊精中的一种以上，含亚铁血红素的多肽经稳定剂包合后，能提高亚铁血红素二价铁的稳定性，可大大提高含亚铁血红素的多肽产品的保存期，稳定剂在所述灭活酶解液中的重量含量为0.1％～15％； 所述的酶选自碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶或风味酶中的一种以上，优选中性蛋白酶或风味酶中的一种以上，酶的重量用量为血红蛋白与肝脏总重量的0.1％～4％； 所述碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶或风味酶，均可采用商业化产品，如宁夏和氏璧生物技术有限公司的产品； 优选的，步骤(2)的酶解过程包括如下步骤 以血红蛋白与肝脏总重量为基重加入0.1％～4％所述的中性蛋白酶，35～60℃搅拌酶解1～4小时，然后采用密闭流加法，再加入0.1％～4％风味酶，35～60℃搅拌酶解1～4小时； 风味酶能与血红蛋白水解液中苦味多肽蛋白质发生反应，生成水解动物蛋白(HAP)，然后这些水解物和氨基酸一起与还原糖发生Maillard反应，产生各种不同风味的天然香气和味道。
优选的，在步骤(4)中，还可加入食品添加剂，食品添加剂的加入重量为血红蛋白与肝脏总重量的0.01～20％； 所述食品添加剂是指在食品制造、加工、调整、处理、包装、运输、保管中，为达到技术目的而添加的物质。食品添加剂作为辅助成份可直接或间接成为食品成份，但不能影响食品的特性，是不含污染物并不以改善食品营养为目的的物质，包括但不限于防腐剂如苯甲酸钠、山梨酸钾或苹果多酚、发色剂如维生素C、烟酰胺或亚硝酸、酸味剂如柠檬酸、柠檬酸钠或苹果酸、凝固剂如氯化镁、氯化钙、葡萄糖酸钙、疏松剂如小苏打、纯碱、碳酸氢铵或碳酸铵、甜味剂如阿斯巴甜、三氯蔗糖或甜菊糖甙、着色剂如姜黄素、胭脂红、靛蓝、日落黄或焦糖色素、乳化剂如单甘酯、CMC或酪蛋白朊酸钠、抗结剂如二氧化硅或微晶纤维素、增味剂如谷氨酸钠、5′-鸟苷酸二钠或5′-肌苷酸二钠5′-呈味核苷酸二钠和琥珀酸二钠、被膜剂如石蜡或紫胶、发泡剂、香料如柠檬油、薄荷油或鲜橙油、营养强化剂如乳铁蛋白、低聚果糖或碳酸钙或其他添加剂； 所述干燥方式选自真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥中之一，其中优选喷雾干燥。
本发明还涉及一种营养组合物，包括如下重量百分比的成分 所述的亚铁血红素多肽组合物 10～88.7％ 油脂 4～88.7％ 低聚糖 1～20％ 活性多肽 0.1～10％ 上述成分的百分比之和为100％。
优选的为 所述的亚铁血红素多肽组合物 13～85％ 油脂 5～80％ 低聚糖 5～18％ 活性多肽 1～10％ 上述成分的百分比之和为100％。
所述油脂包括富含α-亚麻酸的油脂、富含DHA的海藻油或富含DHA的鱼油，例如鲨鱼肝油、鲨鱼油、鳕鱼油、鳕鱼肝油、金枪鱼油或金枪鱼肝油等； 所述低聚糖包括低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖或乳果糖等 所述活性多肽包括酪蛋白磷酸肽、乳铁蛋白肽、蛋黄肽或胶原蛋白肽等。
肝脏经过酶解后，生成大量蛋白多肽，这些蛋白多肽常常能和亚铁血红素或含亚铁血红素多肽复合，这使血红素不形成聚集体，促进血红素的溶解，可极大地提高血红素铁的吸收利用率，同时肝脏本身也是优异的铁质来源，还含有丰富的B族维生素(维生素B12、叶酸)，这些是红细胞生长发育所必需的物质； 动物试验证明，本发明的亚铁血红素多肽组合物，具有增强智力、改善记忆力、降血压、促进生长发育的作用，尤其在预防和改善缺铁性贫血方面有显著的作用；适用于各类贫血人群、尤其适用于婴幼儿、孕产妇及更年期女性。可通过口服的方法，根据贫血程度的需要，每天若干次分开服用，或将剂量按比例减少。通常，成人口服剂量的范围为1000-8000mg/日，优选为1500-6000mg/日，婴幼儿口服剂量的范围为100-4000mg/日，优选为500-3000mg/日。
采用上述方法制备的亚铁血红素多肽组合物，总铁含量可达到2000mg/kg以上，亚铁含量较市售的血红素提高了25％，血红素二价铁的稳定性好，大大延长了其保存期，同时本组合物天然健康、无不良气味、溶解性好，这将大大提高其生物利用率。另外，本组合物含有丰富的蛋白和B族维生素，更有利于红细胞的生长发育。

具体实施例方式 以下结合具体实施例，进一步阐明本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。比例和百分比基于重量，除非特别说明。
实施例1.亚铁血红素组合物的制备 (1)猪血红蛋白100Kg，猪肝20Kg，在匀浆机中匀浆，获得匀浆液； (2)匀浆液倒入反应釜中，加入中性蛋白酶、苹果多酚、异抗坏血酸钠，各自终浓度为0.2％、0.01％、0.01％，加入匀浆液和中性蛋白酶、苹果多酚和异抗坏血酸钠混合物的3倍体积的水加入匀浆液和中性蛋白酶、苹果多酚和异抗坏血酸钠混合物的1倍体积的水，真空泵抽真空并填冲氮气，60℃搅拌酶解3小时； 然后采用密闭流加法，向反应釜中添加0.1％的风味酶，60℃搅拌酶解3小时； (3)酶解完成后，酶解液在85℃灭活15分钟，获得灭活酶解液； (4)向步骤(3)的灭活酶解液中加入维生素C、β-环醐精和淀粉，各自终浓度为0.2％、0.01％、0.01％，搅拌30分钟； 喷雾干燥，进风温度225℃，出风温度85℃，获得产品。
其中猪血红蛋白为天津恩比蛋白质有限公司的产品，中性蛋白酶为宁夏和氏璧生物技术有限公司的产品。
实施列2.亚铁血红素组合物的制备 牛血红蛋白为远洋牛肉屠宰厂的产品，胰蛋白酶为北京索莱宝科技有限公司的产品，胃蛋白酶为上海莲冠生物化工有限公司的产品； (1)牛血红蛋白100Kg，猪肝5Kg，在匀浆机中匀浆，获得匀浆液； (2)匀浆液倒入反应釜中，加入胰蛋白酶至终浓度0.01％，加入异抗坏血酸钠至终浓度1％，匀浆液和异抗坏血酸钠混合物总体积匀浆液和异抗坏血酸钠混合物总体积2倍体积的水，真空泵抽真空并填冲氮气，温度为45℃条件下，酶解4.0小时，再加入胃蛋白酶至终浓度0.1％，温度为50℃条件下，酶解3.5小时； (3)酶解完成后，酶解液在85℃灭活15分钟，获得灭活酶解液； (4)向灭活酶解液中加入维生素C、β-环醐精和淀粉，各自终浓度为0.01％、0.5％、0.5％，搅拌30分钟；喷雾干燥，进风温度225℃，出风温度85℃，获得产品。
实施列3.多肽血红素亚铁的制备 (1)猪血红蛋白100Kg，牛肝10Kg，在匀浆机中匀浆，获得匀浆液； (2)匀浆液倒入反应釜中，加入中性蛋白酶，苹果多酚，茶多酚各自终浓度为0.2％、0.01％、0.01％，然后加入匀浆液、中性蛋白酶、苹果多酚和茶多酚总体积的3倍体积的水然后加入匀浆液、中性蛋白酶、苹果多酚和茶多酚总体积的3倍体积的水，真空泵抽真空并填冲氮气，60℃搅拌酶解3小时； 然后采用密闭流加法，然后加入猪血红蛋白和牛肝总重量0.3％风味酶，60℃搅拌酶解3小时； (3)酶解完成后，85℃失活15分钟，获得灭活酶解液； (4)向上述的灭活酶解液中加入植物酵素和环醐精，各自终浓度为0.01％、0.5％、0.5％，调节密度至1.0；搅拌均匀后直接喷雾干燥，进风温度225℃，出风温度85℃，获得产品。
实施例4，营养组合物胶丸 配方1000mg/粒(约5000粒) 将以上成分混合均匀制成油剂。
将800g2400g明胶(40％)、400g1200g甘油(40％)和800g2400g纯水(20％)在80℃搅拌混合2小时，获得溶胶，然后上述的油剂和溶胶混合压丸，胶皮厚度0.80mm±0.05mm，定型4小时，酒精洗丸，干燥一次干燥温度28℃，湿度15％，时间4h；二次干燥温度32℃，湿度15％，4h；胶皮水分13％，然后酒精洗丸，获得胶丸。
实施例5.一种营养组合物胶丸 配方 制备方法同实施例1。
实施例6.营养组合物胶丸 配方 制备方法同实施例1。
实施例7.片剂 利用常规技术，混合以下组分，然后直接压片，制备片剂形式的药物组合物，其配方 实施例8.血红素亚铁含量检测 样品 市售血红素购自天津市生命科学应用技术研究所，标记为C； 多肽血红素亚铁来源于实施例1和2，分别标记为A和B； 实施例3制备的多肽血红素亚铁(室温保藏6月)，标记为D； 血红素和亚铁血色素含量 紫外扫描法，因为制备的血红蛋白很快解聚为单体或二聚体。与肌红蛋白中血红素的测定无差异，采用525、545、565和575nm下的吸光度值计算血红素总量和亚铁血红素含量。
血红蛋白Hemoglobin(mmol/L)含量 ＝(-0.166R1+0.086R2+0.088R3+0.099)×A525 高铁血红蛋白Methemoglobin(mmol/L)含量 ＝-2.514R1+0.777R2+0.800R3+1.098 氧合血红蛋白Oxyhemoglobin(mmol/L)含量 ＝0.882R1-1.267R2+0.809R3-0.361 其中 R1＝A575/A525、R2＝A565/A525、R3＝A545/A525 总铁含量邻二氮菲比色法 1.邻二氮菲铁络合物的吸收光谱精密吸取标准铁溶液(100mg/L)10ml于100ml容量瓶中，加入2mlHCl溶液(6mol/L)，以水稀释到刻度，摇匀(即为10mg/L)。精密量取此溶液5ml于25ml量瓶中，分别加入1ml 10％盐酸羟胺溶液，2ml 0.15％邻二氮菲溶液和5ml NaAC溶液，以水稀释到刻度，摇匀。以试剂溶液为空白置1em比色皿中，于400～600nm波长范围内测定吸收光谱。
2.标准曲线的绘制精密量取标准铁溶液(100mg/L)1.0，3.0，5.0，7.0，9.0ml，分别置于25ml容量瓶中，再分别加入1ml 10％盐酸羟胺溶液，2ml 0.15％邻二氮菲溶液和5ml NaAC溶液，以水稀释到刻度，摇匀。以溶剂溶液为空白，在最大吸收波长处测定吸光度，数据经线形拟合得出回归方程。
结果如表1所述。
表1.血红素亚铁含量检测
样品C中蛋白质含量为56.2％(以氮元素计)，亚铁血红素含量为0；实施例1和实施例2来源的亚铁血红素多肽含有0.06％的亚铁血红素，蛋白质含量高达90％以上，亚铁含量提高了25％。样品D中亚铁血红素含量为0.05％，表明实施例1和实施例2来源的亚铁血红素多肽储存稳定性好。
实施例9.亚铁血红素组合物的溶解性试验 采用重力沉降后的残渣干燥至恒重的方法测定，分别准确称量粉末状产品于蒸馏水和pH＝5的磷酸缓冲液中，磁力搅拌溶解后，离心分离并收集沉淀，干燥至恒重。结果如表2所述 表2.亚铁血红素组合物的溶解性
实施例10，亚铁血红素组合物的动物补血试验 1.材料和方法 1.1样品 实施例1、实施例2、实施例3亚铁血红素多肽组合物及实施例4、实施例5的补血营养组合物。
1.2实验动物 由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供的刚断乳雄性SD大鼠120只，许可证号为SCXK(沪)2008-0016。大鼠单笼饲养，使用不锈钢笼和食罐。自由摄食、饮水，室温保持在20±2℃。
1.3低铁饲料配方如下 6kg鸡蛋白粉，30kg大米粉，2kg玉米油，0.08kg氯化胆碱，2kg明胶，混合维生素240mg盐酸硫胺素、240mg核黄素、280mg盐酸吡哆醇、1200mg尼克酸(尼克酰胺)、640mgD-泛酸钙盐、100mg叶酸、8mgD-生物素、400μg维生素B12、48mgRE维生素A、2000IU dl-α-醋酸生育酚(粉状)、1000μg维生素D3、1750μg维生素K，混合盐700g CaHPO4、103.6gNaCl、308gK3C6H5O7.H2O、72.8gK2SO4、33.6gMgO、4.8gMnCO3、2240mgZnCO3、420mgCuCO3、14mgKIO3、14mgNaSeO2.5H2O、768mgCrK(SO4)2.12H2O。
1.4实验方法 动物以基础饲料喂养在实验环境下适应3天后，饲以低铁饲料及去离子水。第三周时，大鼠采尾血测血红蛋白，多数动物血红蛋白低于正常值，选取Hb水平低于100g/L的雄性大鼠90只。根据贫血大鼠Hb水平和体重将其随机分为9组，各剂量组10只动物。硫酸亚铁高剂量组100mg/kg·bw(铁元素20mg/kg·bw)；氯化血红素组24.21mg/kgbw(铁元素2mg/kg·bw)；实验①组给予1000mg/kg.bw实施例1的营养组合物(铁元素2mg/kg·bw)；实验②组给予1000mg/kg.bw实施例2的营养组合物(铁元素2mg/kg·bw)；实验③组给予1000mg/kg.bw实施例3的营养组合物(铁元素2mg/kg·bw)；实验④组给予5000mg/kg.bw实施例4的营养组合物(铁元素1mg/kg·bw)；实验⑤组、实验⑥组分别给予645.2mg/kg·bw、1290.4mg/kg.bw实施例5的营养组合物(铁元素1mg/kg·bw、2mg/kg·bw)；所有样品均经口灌胃，灌胃量1ml/100g.bw，对照组给予去离子水，连续灌胃28天。各组同时给予低铁饲料和去离子水饲养。
1.5观察指标 体重、血红蛋白、红细胞内游离原卟啉。
1.6实验数据用SPSS14.0软件统计分析。
2.结果 2.1样品对动物体重变化情况 从表3可见，试验前各组动物体重经方差分析，统计学上无显著性差别。实验后低铁对照组动物体重低于服用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5的补血营养组合物的各实验组(P＜0.05)。
表3贫血实验大鼠体重变化情况(g，

)
a与对照组相比P＜0.05 2.2样品对血红蛋白的影响 从表4可见，试验前，各剂量组大鼠的血红蛋白水平经方差分析，无显著性差别(P＞0.05)，灌胃给予动物28天后，各试验组与对低铁照组相比，均有显著性差别(P＜0.05)。与低铁对照组相比较所有试验组结果均呈阳性。
服用实施例1、实施例2、实施例3亚铁血红素多肽组合物的各实验组(铁摄入量为2mg/kg·bw)与氯化血红素组(铁摄入量为2mg/kg·bw)相比，铁元素摄入量相同，大鼠血红蛋白值增加多22.1g/L，实验结果表明亚铁血红素多肽组合物中铁的吸收利用率远高于氯化血红素中铁的吸收率。究其原因，除了亚铁血红素多肽组合物中铁的存在状态有25％为亚铁形式外，肝脏经过酶解后，生成大量蛋白多肽，这些蛋白多肽常常能和亚铁血红素或含亚铁血红素多肽复合，这使血红素不形成聚集体，促进血红素的溶解，可极大地提高血红素铁的吸收利用率，同时肝脏本身也是优异的铁质来源，还含有丰富的B族维生素(维生素B12、叶酸)，这些是红细胞生长发育所必需的物质。
服用实施例4补血营养组合物的试验④组(铁摄入量为1mg/kg·bw)与服用实施例1、实施例2、实施例3亚铁血红素多肽组合物的各实验组(铁摄入量为2mg/kg·bw)相比，铁元素摄入量为1/2，大鼠血红蛋白值增加量接近，实验结果表明，亚麻籽油、低聚果糖、乳铁蛋白肽有协同促进铁吸收的作用。
实验⑥组(铁摄入量为2mg/kg·bw)与硫酸亚铁高剂量组(铁摄入量为20mg/kg·bw)相比铁元素摄入量仅1/10，血红蛋白值的增加接近，表明服用实施例5补血营养组合物的实验组具有更好的预防和改善缺铁性贫血作用。
表4实验前后大鼠的血红蛋白水平(g/L，

)

a与对照组比较，差别有极显著性，P＜0.05 2.3样品对红细胞内游离原卟啉浓度的影响 由表5可见，实验末，服用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5营养组合物的试验①组～实验⑤组的各实验组红细胞内游离原卟啉浓度下降，与低铁对照组动物相比，差异有显著意义(P＜0.05)。
表5各组大鼠实验后红细胞内游离原卟啉水平(μg/dl，

)
a与对照组比较，差别有显著性(P＜0.05)。
3.小结 根据“保健食品功能学评价程序和检验方法”中规定的评判标准，可以认为亚铁血红素多肽组合物以及以亚铁血红素多肽组合物为主要原料制备的补血营养组合物均具有预防和改善缺铁性贫血的作用。
实施例11 1资料与方法 1.1研究对象 1.1.1选择孕妇标准 (1)年龄20一35岁，沈阳城市户口，单胎妊娠。(2)无不良妊娠史及分娩史，本次妊娠无异常，无胎盘功能不全。无孕期接触放射线，化学毒物及有害药物史。(3)无产钳及胎头吸引助娩。随机分为实验①组60例，孕妇分娩后每隔1天给予实施例4营养组合物直至产后3个月；实验②组60例，孕妇分娩后每隔1天给予实施例5营养组合物直至产后3个月；对照组60例，用普通饮食。
1.1.2选择胎儿标准 (1)1分钟Apgar评分≥8分；(2)无产时感染，无先天遗传代谢性疾病。医院符合选择标准的180例正常孕妇及其分娩的足月健康新生儿，孕妇年龄20～35岁，平均26岁，妊娠35～40周，新生儿出生体重2550～3850g，平均3302g，其中男性72例(40％)，女性108例(60％)，剖宫产90例(50％)，阴道分娩90例(50％)，接受0～3岁婴幼儿智能发育量表检查180例。其中男性72例(40％)，女性108例(60％)。
1.2研究方法 1.2.1婴儿智力测试 采用0～3岁婴幼儿智能发育量表(CDCC)，对产后3～4个月的婴儿检测精神发育指数(MDI)和运动发育指数(PDI)。检查环境要求为安静，温暖，光线足。婴儿在清醒状态下进行。评定标准为≥120分为优秀，80～119分为正常，70～79分为可疑智力低下，≤69分为智力低下。
固定检查员由培训合格的高年资儿科医生担任，采用双盲法进行检查。
1.2.2产妇及新生儿血红蛋白值测定 采集产后三个月产妇静脉血、新生儿血，测定血液中血红蛋白浓度。
1.3数据处理与统计方法 核对数据，编码输入计算机，采用SPSS 14.0统计软件进行数据处理。统计方法正态性检验，F检验。
2实验结果 2.1补血营养组合物对婴幼儿智力发育影响(见表6) 2.2补血营养组合物对产妇及新生儿血红蛋白值影响(g/L)(见表7) 表6补血营养组合物对婴幼儿智力发育影响

表7补血营养组合物对产妇及新生儿血红蛋白值影响(

g/L)
实验结论 (1)试验组婴儿精神发育指数和运动指数明显高于对照组，说明补血营养组合物对婴幼儿大脑发育起特殊作用。
(2)贫血诊断按国内确定的贫血标准育龄妇女Hb＜110g/L，1～6个月婴幼儿Hb＜100g/L。试验结果表明普通饮食的对照组贫血产妇与新生儿比例均高达30％，这与当地居民的饮食习惯相关。采用实施例4和实施例5的补血营养组合物干预后，产妇与新生儿均无贫血状况发生，极大的促进了母婴健康，提高了出生人口素质，补血营养组合物作为预防和改善缺铁性贫血的膳食剂是十分有效的。
实施例12 1.材料与方法 1.1试验动物分组 选用初断乳Wistar大鼠50只(沈阳药科大学动物实验中心提供)，体重80～100g之间，随机分为5组，每组10只。
1.2受试物和剂量 实验对照组饲喂基础饲料(沈阳药科大学动物实验中心提供)；实验①组、实验②组在饲喂基础饲料基础上分别灌胃给予0.3g/kg·bw和0.9g/kg·bw的实施例4的营养组合物；实验③组、实验④组在饲喂基础饲料基础上分别灌胃给予0.3g/kg·bw和0.9g/kg·bw的实施例5的营养组合物。
1.3仪器 跳台仪、避暗仪、和水迷宫仪(中国医学科学院药物研究所生产)。
1.4方法 1.4.1跳台实验 选用初断乳Wistar大鼠50只(沈阳药科大学动物实验中心提供)，体重80-100g之间，随机分成空白对照组，分别饲喂实施例4和实施例5营养组合物的低(0.3g/kg·bw)、高(0.9g/kg·bw)剂量实验组。各实验组每天灌胃给予受试物，连续给样30d后进行跳台训练。将动物放入反应箱内适应4min，立即通以36伏交流电，动物的正、常反应是跳回到绝缘平台上。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录5min内每只鼠受到电击的次数(错误次数)，以此作为学习成绩。24h后重测验，记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min内的错误次数。
1.4.2避暗实验 避暗试验动物选择，试验分组，给受试物的剂量、途径、时间均同跳台试验，连续给样30d后开始进行避暗训练。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器停止，取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室内遭电击所需的时间，即潜伏期。24h后同一时间，进行重复测验，记录每鼠进入暗室的潜伏期、5min内的错误次数和进入暗室的动物数。
1.4.3水迷宫试验 水迷宫试验动物选择，试验分组，给受试物的剂量、途径、时间均同跳台试验，连续给样30d后开始进行避暗训练。训练期间继续给受试物，每天1次。迷宫泳道水深15em，水温(25+1)℃。实验时，将小鼠放于泳道的起点处，开始计时，观察其到达终点所需时间，以及出现错误次数。将小鼠训练时间限定为120s，在120s内未到达终点的小鼠均记为120s。共训练5d，末次从起点进行训练。最后以5d的总学习成绩进行评价(即各组两分钟内到达终点的动物数、每组5d平均错误次数和到达终点的时间)。
1.4.4数据处理 所得数据数据采用SPSS 14.0统计软件包进行统计处理，统计方法采用方差分析和X2检验。
表8补血营养组合物对小鼠记忆获得的影响(跳台法

))
表9补血营养组合物对小鼠记忆获得的影响(避暗法

))
表10钙营养组合物对小鼠记忆获得的影响(水迷宫

))(5次总成绩)
1.5结论 实验结果显示，在跳台试验和避暗试验中，食用实施例4、实施例5营养组合物的实验组与对照组比较记忆获得的错误反应潜伏期延长，错误次数降低，差异具显著性；在水迷宫试验中，各实验组动物到达终点的时间缩短，到达终点的动物数增加，错误次数减少，与对照组比较差异亦具显著性，且训练及重复测验结果一致。试验结果表明补血营养组合物具有促进学习和改善记忆的功能。
实施例13，毒理试验 1.材料与方法 选用初断乳Wistar大鼠70只(沈阳药科大学动物实验中心提供)，体重80-100g之间，随机分为7组，每组10只。实验对照组饲喂基础饲料(沈阳药科大学动物实验中心提供)；实验①组、实验②组在饲喂基础饲料基础上分别灌胃给予0.4g/kg·bw、1.2g/kg·bw实施例4的营养组合物；验③组、实验④组在饲喂基础饲料基础上分别灌胃给予0.4g/kg·bw、1.2g/kg·bw实施例5的营养组合物；实验⑤组、实验⑥组在饲喂基础饲料基础上分别灌胃给予0.4g/kg·bw、1.2g/kg·bw实施例6的营养组合物；连续喂养60天。
实验结果 服用实施例4、实施例5、实施例6营养组合物的实验组及对照组大鼠均无死亡；各组大鼠体重情况、血液学和生化检测、脏器重量和组织学检查均正常。结果比较显示各实验组与对照组无明显差异。脏器组织学病理切片检查由沈阳药科大学病理教研组完成。
上述试验结果表明补血营养组合物无毒性，食用安全。
本发明的范围不受所述具体实施方案的限制，所述实施方案只欲作为阐明本发明各个方面的单个例子，本发明范围内还包括功能等同的方法和组分。实际上，除了本文所述的内容外，本领域技术人员参照上文的描述可以容易地掌握对本发明的多种改进。所述改进也落入所附权利要求书的范围之内。
权利要求
1.一种亚铁血红素多肽组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤
(1)将血红蛋白与肝脏混合，匀浆，获得匀浆液，加入抗氧化剂和水；
(2)然后在惰性气氛中，加入酶，酶解；
(3)然后酶解液灭活；
(4)再在灭活酶解液中加入还原剂和稳定剂，进行干燥，获得产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，血红蛋白的重量为肝脏重量的5～20倍。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血红蛋白来源于禽畜，包括但不限于如猪、牛、羊、鸡、鸭或鹅；所述肝脏为来源于禽畜，包括但不限于如猪、牛、羊、鸡、鸭或鹅。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗氧化剂选自原花青素(OPC)、异抗坏血酸钠、银杏黄酮、姜黄素、番茄红素、苹果多酚、烟酰胺或茶多酚中的一种以上，抗氧化剂在匀浆液中的重量含量为0.01％～2.0％，所述还原剂选自Vc或植物酵素中的一种以上，还原剂在所述灭活酶解液中的重量含量为0.01％～2.0％，所述稳定剂选自淀粉或环糊精中的一种以上，稳定剂在所述灭活酶解液中的重量含量为0.1％～15％。
5.根据权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，所述的酶选自碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶或风味酶中的一种以上。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的酶的重量用量为血红蛋白与肝脏总重量的0.1％～4％。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)的酶解过程包括如下步骤以血红蛋白与肝脏总重量为基重加入0.1％～4％所述的中性蛋白酶，35～60℃搅拌酶解1～4小时，然后采用密闭流加法，再加入0.1％～4％风味酶，30℃～60℃搅拌酶解1～4小时。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，加入食品添加剂，食品添加剂的加入重量为血红蛋白与肝脏总重量的0.01％～15％。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，35～60℃搅拌酶解1～8小时；60℃～150℃下酶解液灭活0.1～2小时。
10.根据权利要求1任一项所述方法制备的亚铁血红素多肽组合物。
11.一种营养组合物，包括如下重量百分比的成分
权利要求10所述的亚铁血红素多肽组合物 10～88.7％
油脂 4～88.7％
低聚糖1～20％
活性多肽 0.1～10％
上述成分的百分比之和为100％。
12.根据权利要求11所述的营养组合物，其特征在于，包括如下重量百分比的成分
权利要求10所述的亚铁血红素多肽组合物13～85％
油脂5～80％
低聚糖 5～18％
活性多肽1～10％
上述成分的百分比之和为100％。
13.根据权利要求11或12所述的营养组合物，其特征在于，所述油脂包括富含α-亚麻酸的油脂、富含DHA的海藻油或富含DHA的鱼油；
所述低聚糖包括低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖或乳果糖；
所述活性多肽包括酪蛋白磷酸肽、乳铁蛋白肽、蛋黄肽或胶原蛋白肽。
全文摘要
本发明公开了一种亚铁血红素多肽组合物及其制备方法，制备方法包括如下步骤(1)将血红蛋白与肝脏混合，匀浆，获得匀浆液，加入抗氧化剂和水；(2)然后在惰性气氛中，加入酶，酶解；(3)然后酶解液灭活；(4)再在灭活酶解液中加入还原剂和稳定剂，进行干燥，获得产品。采用上述方法制备的亚铁血红素多肽组合物，总铁含量可达到2000mg/kg以上，亚铁含量较市售的血红素提高了25％，血红素二价铁的稳定性好，本组合物天然健康、无不良气味、溶解性好，这将大大提高其生物利用率。另外，本组合物含有丰富的蛋白质和B族维生素，更有利于红细胞的生长发育。
文档编号A23J3/12GK101828708SQ20091004756
公开日2010年9月15日 申请日期2009年3月13日 优先权日2009年3月13日
发明者顾茂健, 邵玉芬, 蒋江峰 申请人:上海培宝康实业股份有限公司