专利名称：一种燃油毒性的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种毒性检测方法，尤其涉及一种燃油毒性的检测方法。
背景技术：
各国汽车代用燃料的技术虽有不同，但目标都是预防石油燃料的枯竭和减少汽车 排放对环境的污染。目前，在众多汽车代用燃料中倍受关注的是甲醇汽油和乙醇汽油。这 类燃料都是在汽油中通过添加甲醇或乙醇以部分取代价格正在不断上升、资源已近枯竭的 汽油。在实际的应用中，甲醇汽油和乙醇汽油都被证明能很好地用于汽车的燃油，但他们在 使用过程中是否安全呢？对汽油燃料和甲醇燃料毒性研究已有许多报道。发光细菌的毒性 测定方法是一个快速、经济、有效的环境毒性物质评价手段，已成功地应用于重金属污染土 壤的毒性评价以及水体污染毒性评价等方面。但是，应用发光细菌直接检测汽油、甲醇汽油 和乙醇汽油三者毒性研究还末见报道。
发明内容
本发明提供了 一种燃油毒性的检测方法，可以方便地对燃油的毒性进行检测。本发明的技术方案为首先，进行样品处理稀释液一 0. 85% NaCl溶液；稀释液二 在稀释液一中加入 吐温-80 至 0. 1 % (ν/ν)。用稀释液一分别配制甲醇汽油添加剂(ν/ν)，甲醇10% (ν/ν)，乙醇10% (ν/ ν)，苯酚1000mg/L。用稀释液二分别配制样品93#汽油0. (ν/ν)，ElO乙醇汽油0. 1% (ν/ν)，Μ50 甲醇汽油 0. 16% (ν/ν)。然后，进行细菌培养基菌液制备青海弧菌Vibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌 株)培养基成分为混合盐12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至IOOOmI ；pH 9. 0。 混合盐成分=MgSO4 19. 8% ；MgCO3 6. 3% ；MgBr2 0. 74% ；MgCl2 0. 74% ；CaCO3 0. 22% ；KCl 1. 76% ；NaCI 66. 36% ；Mg(HCO3)2 4. 04% 以上配方中再加琼脂2%即为固体培养基。将培养12-16小时的新鲜发光菌离心分离，加生理盐水稀释至适当浓度的菌悬 液。测试样品配制成系列浓度梯度(93#汽油与ElO乙醇汽油的系列浓度为(v/v，%) 0. 02，0. 04，0. 06，0. 08，0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列浓度为(ν/ν, % ) 0. 032，0. 064，0. 096， 0. 128,0. 160)，再向测试管中依次分别加入1.9mL系列浓度的样品溶液。接着在装有样品 液的测试管中各加入上述菌液0. ImL, 15min后用毒性测试仪检测其发光度，并同时测定参 比毒物苯酚溶液系列浓度对发光菌发光的抑制曲线。每个浓度设三个平行样，取平均值。每 种样品液均配一对照(CK)管(汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的对照管中为上述稀释液二；甲 醇、乙醇、M50甲醇汽油添加剂和苯酚的对照管中为上述稀释液一)，并重复实验3次。用直线内插法求出EC5(i。EC5(i是指在一定条件下发光强度降低50%时样品的浓度。 根据EC5tl值的大小，判断样品的毒性及其大小。最有对检测数据进行处理，处理公式为
相对发光度(％)=样品管发光值(脉冲数)xl00 1 ； CX管发光值(脉冲数)
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明做进一步说明。本实施例中用到的材料为下表中的。 所用的试剂及仪器为吐温-80，化学纯。苯酚，分析纯。乙醇，分析纯，乙醇含量彡99. 7%，密度P (20°C) g/ml :0. 79。甲醇，分析纯，甲醇含量彡99. 5%，密度P (20°C ) g/ml 0. 79。测试方法为首先，进行样品处理稀释液一 0. 85% NaCl溶液；稀释液二 在稀释液一中加入 吐温-80 至 0. 1 % (ν/ν)。用稀释液一分别配制甲醇汽油添加剂1% (ν/ν)，甲醇10% (ν/ν)，乙醇10% (ν/ ν)，苯酚1000mg/L。用稀释液二分别配制样品93#汽油0. (ν/ν)，ElO乙醇汽油0. 1% (ν/ν)，Μ50 甲醇汽油 0. 16% (ν/ν)。然后，进行细菌培养基菌液制备青海弧菌Vibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌 株)培养基成分为混合盐12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至IOOOmI ；pH 9. 0。 混合盐成分=MgSO4 19. 8% ；MgCO3 6. 3% ；MgBr2 0. 74% ；MgCl2 0. 74% ；CaCO3 0. 22% ；KCl 1. 76% ；NaCI 66. 36% ；Mg(HCO3)2 4. 04% 以上配方中再加琼脂2%即为固体培养基。将培养12-16小时的新鲜发光菌离心分离，加生理盐水稀释至适当浓度的菌悬 液。测试样品配制成系列浓度梯度(93#汽油与ElO乙醇汽油的系列浓度为(v/v，%) 0. 02，0. 04，0. 06，0. 08，0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列浓度为(ν/ν, % ) 0. 032，0. 064，0. 096， 0. 128,0. 160)，再向测试管中依次分别加入1.9mL系列浓度的样品溶液。接着在装有样品 液的测试管中各加入上述菌液0. ImL, 15min后用毒性测试仪检测其发光度，并同时测定参 比毒物苯酚溶液系列浓度对发光菌发光的抑制曲线。每个浓度设三个平行样，取平均值。每 种样品液均配一对照(CK)管(汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的对照管中为上述稀释液二；甲醇、乙醇、M50甲醇汽油添加剂和苯酚的对照管中为上述稀释液一)，并重复实验3次。用直线内插法求出EC5(i。EC5(i是指在一定条件下发光强度降低50%时样品的浓度。 根据EC5tl值的大小，判断样品的毒性及其大小。最有对检测数据进行处理，处理公式为
样品管发光值(脉冲数、1() 赚峋/。) - crt发光值(脉冲数)通过对上述测试结果进行分析，四批93#汽油样品的EC5tl平均值为528. 82mg/L ； 四批ElO乙醇汽油样品的EC5tl平均值为583. 30mg/L ；六批M50甲醇汽油样品的EC5tl平均值 为904. 99mg/L。甲醇汽油添加剂的EC50为4924. 39mg/L，甲醇的EC50为4. 74X 104mg/L。乙 醇的EC5tl为3. 79X 104mg/L。由EC5tl的大小可知各样品的毒性由大到小顺序为93#汽油> ElO乙醇汽油>1150甲醇汽油> 甲醇汽油添加剂> 乙醇> 甲醇。因此我们认为，M50甲醇汽 油和ElO乙醇汽油的毒性主要是由汽油毒性引起的；M50甲醇汽油的毒性比93#汽油和ElO 乙醇汽油小，生物安全性比较好。
权利要求
一种燃油毒性的检测方法，其特征在于首先，进行样品处理稀释液一；0.85％NaCl溶液；稀释液二在稀释液一中加入吐温 80至0.1％(v/v)。
2.根据权利要求1所述的一种燃油毒性的检测方法，其特征在于用稀释液一分别配 制甲醇汽油添加剂(v/v)，甲醇10% (v/v)，乙醇10% (v/v)，苯酚1000mg/L。用稀释 液二分别配制样品93#汽油0. (v/v),E10乙醇汽油0. 1% (v/v)，M50甲醇汽油0. 16% (v/v)。
3.根据权利要求1所述的一种燃油毒性的检测方法，其特征在于然后，进行细菌培养 基菌液制备青海弧菌Vibrio qinghaiensis sp. Nov. (Q67菌株)培养基成分为混合盐 12. 49g ；酵母膏5g ；胰胨5g ；甘油3g ；加水至1000ml ；pH 9. 0。混合盐成分:MgS04 19. 8%； MgC036 . 3 % ；MgBr2 0. 74 % ；MgCl2 0. 74 % ；CaC03 0. 22 % ；KC1 1. 76 % ；NaCI 66. 36 % ； Mg(HC03)24. 04%。以上配方中再加琼脂2%即为固体培养基。
4.根据权利要求1所述的一种燃油毒性的检测方法，其特征在于将培养12-16小时 的新鲜发光菌离心分离，加生理盐水稀释至适当浓度的菌悬液。测试样品配制成系列浓度 梯度(93#汽油与E10乙醇汽油的系列浓度为(v/v, % ) 0. 02,0. 04,0. 06,0. 08,0. 10 ；M50 甲醇汽油的系列浓度为(v/v, % ) :0.032，0.064，0.096，0. 128，0. 160)，再向测试管中依 次分别加入1.9mL系列浓度的样品溶液。接着在装有样品液的测试管中各加入上述菌液 0. lmL，15min后用毒性测试仪检测其发光度，并同时测定参比毒物苯酚溶液系列浓度对发 光菌发光的抑制曲线。每个浓度设三个平行样，取平均值。每种样品液均配一对照(CK)管 (汽油、乙醇汽油和甲醇汽油的对照管中为上述稀释液二；甲醇、乙醇、M50甲醇汽油添加剂 和苯酚的对照管中为上述稀释液一)，并重复实验3次。
5.根据权利要求1所述的一种燃油毒性的检测方法，其特征在于用直线内插法求出 EC5Q。EC5(i是指在一定条件下发光强度降低50%时样品的浓度。根据EC5(I值的大小，判断样 品的毒性及其大小。
6.根据权利要求1所述的一种燃油毒性的检测方法，其特征在于最有对检测数据进 行处理，处理公式为相对发光度(％ ) J羊纖想(脉冲数)xl0 反 ()CA管发光值(脉冲数)
全文摘要
本发明涉及一种毒性检测方法，尤其涉及一种燃油毒性的检测方法。各国汽车代用燃料的技术虽有不同，但目标都是预防石油燃料的枯竭和减少汽车排放对环境的污染。目前，在众多汽车代用燃料中倍受关注的是甲醇汽油和乙醇汽油。在实际的应用中，甲醇汽油和乙醇汽油都被证明能很好地用于汽车的燃油，但他们在使用过程中是否安全呢？对汽油燃料和甲醇燃料毒性研究已有许多报道。但是，应用发光细菌直接检测汽油、甲醇汽油和乙醇汽油三者毒性研究还来见报道。本发明提供了一种燃油毒性的检测方法，可以方便地对燃油的毒性进行检测。
文档编号C12Q1/02GK101892284SQ20091005729
公开日2010年11月24日 申请日期2009年5月22日 优先权日2009年5月22日
发明者张亚旦 申请人:张亚旦