专利名称：一种节杆菌产β-呋喃果糖苷酶的发酵培养基及发酵方法
技术领域：
本发明属生物技术工程领域，特别涉及微生物发酵培养基及其发酵方法。 背景资料
"-呋喃果糖苷酶广泛地存在于生物界，不同微生物来源的々-呋喃果糖苷酶的性质 不同，其中节杆菌"-呋喃果糖苷酶主要用于转移果糖至单糖或寡糖上，在以蔗糖和乳
糖为原料下，将蔗糖分解产生的果糖基转移至乳糖还原性末端的C7位羟基上，生成 半乳糖基蔗糖即低聚乳果糖0^"owm^,LS)。低聚乳果糖几乎不被人体消化吸收，摄 入后不会引起体内血糖水平和血液胰岛素水平的波动，可供糖尿病人食用；该糖也是 双歧杆菌增殖因子，与其它双歧杆菌增殖因子如低聚果糖、低聚异麦芽糖等相比，低 聚乳果糖的双歧杆菌增殖活性更高，甜味特性也更接近于蔗糖。
节杆菌(^^ra^""平10138)是从土壤中分离出来的一种革兰氏阳性菌，严格需 氧，属化能异养型。使用不同的发酵培养基，节杆菌所产的/ -吹喃果糖苷酶的酶活不 一样。据"节杆菌10137产/ -吹喃果糖苷酶条件及酶学性质"报道(无锡轻工大学学 报，2004 ( 23 )), / -呋喃果糖苷酶的酶活力为177. 78w/w/。生产出的^-吹喃果糖苷 酶活性比较低。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于生产夫喃果糖苷酶的发酵培养基，使培养基的菌 株生物量高、产酶量高、酶活性高、生产成本低。
本发明所述的发酵培养基为蔗糖3~7g/i，牛肉膏25 40g/L,酵母膏2~3g/L, (NH4)2HP04 8~12g/L， KH2P04 0.5~lg/L, MgS04'7H20 0.1~0.5g/L,余为水。
本发明所述的发酵方法如下
用现有技术，将菌种活化、培养，然后加入上述发酵培养基，初始pH值为6.0-8.0, 发酵温度为25~45°C，接种量为1~4%。
本发明所述的发酵温度最佳为30~37°C。 本发明所述的现有技术的菌种活化、培养，可以是以下步骤
1、 活化将保藏的节杆菌接入平板培养基中，于培养箱内30 37'C恒温培养 36 48h，得到活化的菌种。
2、 一级种子培养挑一环生长良好的活化菌种接入250w/摇瓶的一级种子培养基 中，于摇床中培养2"36h。温度设定为27 37°C,摇速为100~15(Wm/"。
3、 二级种子培养将培养好的一级种子按5 10%的接种量接入250m/摇瓶的二 级种子培养基中，于摇床内培养。温度设定为27 37°C，摇速为100~150r/m/"。培养 时间由节杆菌的生长曲线确定。
本发明培养基用于微生物发酵产酶大大优于现有技术的培养基配方。本发明培养 基培养的菌株生物量高、产酶量高、酶活性高。
具体实施例方式
本发明将通过以下实施例作进一步说明。
本发明所述的实施例， 一个酶活力单位定义为每分钟在上述条件下产生10—9mo/ 低聚乳果糖的量来表示。 实施例1。
1、 活化将保藏的节杆菌接入平板培养基中，于培养箱内32t:恒温培养40h，得 到活化的菌种；
2、 一级种子培养挑一环生长良好的活化菌种接入250m/摇瓶的一级种子培养基 中，于摇床中培养28h,温度设定为34°C,摇速为12(Wmfw;
3、 二级种子培养将培养好的一级种子按6y。的接种量接入250m/摇瓶的二级种 子培养基中，于摇床内培养30h，温度设定为34'C,摇速为120r/m/";
4、 发酵蔗糖5g/丄，牛肉膏30g/丄，酵母膏2g/丄，(NH4)2HP0410g/L, KH2P04 0. 5g/L， MgS04'7H20 0. 2g/L，在培养温度为3(TC，初始/ //为7.0,接种量为2%， 250w/三角 瓶的装液量为100m/及转速为125r/w/"的条件下培养48h,所产/ -吹喃果糖苷酶酶活 力酶活为365. 85U/w/。
实施例2。
活化、培养条件与实施例l相同，发酵为
蔗糖10g/Z，牛肉膏18g/￡,酵母膏6g/丄，(NH4)2HP049g/I， KH2P04 2g/L, MgS04 7H20 0. 6g/丄，在培养温度为30°C,初始; H为7.0，接种量为2%, 250m/三角瓶的装液量为 100m/及转速为125r/w/"的条件下培养48h，所产々-吹喃果糖苷酶酶活力酶活为 281. 55U/m/。
权利要求
1、一种节杆菌产β-呋喃果糖苷酶的发酵培养基，其特征是其组成成份为蔗糖3～7g/L，牛肉膏25～40g/L，酵母膏2～3g/L，(NH4)2HPO48～12g/L，KH2PO40.5～1g/L，MgSO4·7H2O 0.1～0.5g/L，余为水。
2、 根据权利要求l所述的发酵培养基的发酵方法，其特征是将菌种活化、培养, 然后加入上述发酵培养基，初始pH值为6.0 8.0,发酵温度为25 45。C,接种量为1~4%。
3、 根据权利要求2所述的发酵方法，其特征是发酵温度为30~37°C。
全文摘要
一种节杆菌产β-呋喃果糖苷酶的发酵培养基和发酵方法，属生物技术工程领域，发酵培养基组成成份为蔗糖3～7g/L，牛肉膏25～40g/L，酵母膏2～3g/L，(NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>8～12g/L，KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 0.5～1g/L，MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 0.1～0.5g/L，余为水；先将菌种活化、培养，然后加入上述发酵培养基，初始pH值为6.0～8.0，发酵温度为25～45℃，接种量为1～4％；本发明大大优于现有技术的培养基配方，菌株生物量高、产酶量高、酶活性高。
文档编号C12N9/24GK101624582SQ20091011579
公开日2010年1月13日 申请日期2009年7月30日 优先权日2009年7月30日
发明者代志凯, 印遇龙, 廖春龙, 邓泽元, 征 阮 申请人:南昌大学