专利名称：H1n1病毒核酸高效提取试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种从生物样品中分离核酸的试剂盒，尤其是从无细胞生物样品 中快速纯化Hmi病毒核酸的试剂盒。
背景技术：
流行性感冒是一种常见的呼吸道传染病，引起该病的流感病毒抗原性复杂，根据 其核心蛋白抗原性不同分为甲、乙、丙三型，根据其表面抗原血凝素(H)和神经氨酸酶(N) 的不同，同型病毒又分为若干亚型，各型之间无交叉免疫。甲型Hmi流感病毒已在世界范 围内传播，且感染人数急剧增多，给人类带来巨大灾害。从生物材料中高效、简便地分离纯化得到完整、高纯度的流感病毒核酸是研究流 感疾病的基础。传统的核酸纯化方法步骤繁琐，耗时长，提取效率低，已经很难满足高通量 的实验需求。同时传统方法使用酚/氯仿等试剂对人体产生巨大毒害作用且污染环境。磁 珠在外加磁场的作用下可快速地分离核酸，简单、快捷、成本低廉且安全。目前已有很多公司生产出专门为核酸磁性分离纯化而设计的配套自动化系统，这 些仪器使得磁珠法纯化核酸实现了自动化，极大地提高了样品处理的通量，易于高通量的 筛选，同时也提高了提取操作的可重复性。本实用新型具有灵敏度高、成本低廉、操作简便快捷、省时省力等特点，可用于自 动化核酸提取仪器。
发明内容针对上述情况，本实用新型的目的在于提供一种能够从无细胞生物样本中快速高 效分离Hmi病毒核酸的试剂盒，并且适用于自动化核酸提取仪器。该试剂盒操作简便，成 本低廉，灵敏度高，所提取的病毒核酸可直接用于后续实验。本实用新型提供了一种通过磁性颗粒来纯化Hmi病毒核酸的试剂盒，该试剂盒 有一个盒体，盒体内包括磁力架以及多个小瓶，所述多个小瓶中分别装有裂解缓冲液、结合 缓冲液、洗涤缓冲液I、洗涤缓冲液II、洗涤缓冲液III、洗脱缓冲液、蛋白酶K、磁珠溶液、助 沉剂。在含病毒的样品中加入蛋白酶K、助沉剂及裂解缓冲液，使病毒裂解释放核酸；加 入结合缓冲液和磁珠，样品中的核酸与磁珠结合，然后在外加磁场条件下进行分离，收集磁 珠-核酸复合物；加入洗涤缓冲液，去除未结合物质；加入洗脱缓冲液，将结合在磁珠上的 核酸洗脱下来，回收洗脱液即为病毒核酸。其中助沉剂有助于提取病毒含量低的样本，提 高了试剂盒灵敏度。本实用新型的有益效果是提供了一种高效的病毒核酸的试剂盒，该试剂盒成本 低廉、操作简便，灵敏度高，可配合自动化仪器，快速高通量提取病毒核酸。所提取的核酸可 直接用于后续实验研究。
图1为本实用新型的立体结构图。图2为病毒含量与Ct值的相关性曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本实用新型进行详细的说明。本实用新型提供了一种通过磁性颗粒来纯化病毒核酸的试剂盒，该试剂盒有一个 盒体11，盒体11内包括裂解缓冲液1、结合缓冲液2、洗涤缓冲液I 3、洗涤缓冲液II 4、洗 涤缓冲液III 5、洗脱缓冲液6、蛋白酶K 7、磁珠溶液8、助沉剂9及磁力架10，上述液体试剂 均分装于小瓶内。使用时，按照以下具体步骤操作取Hmi甲型流感病毒阳性标本的培养病毒(4X 106COpieS/ml)，进行10倍梯度稀 释，然后用本试剂盒提取病毒RNA，同时用Roche High Pure Viral RNA Kit作为对照。(1)向1.5ml去RNA酶离心管中加入5μ1蛋白酶Κ，2μ1助沉剂和ΙΟΟμΙ裂解缓 冲液，加入100 μ 1病毒稀释液，充分混勻，55°C水浴10分钟。(2)向离心管内先加入300μ1结合缓冲液，再加入20μ1磁珠(使用前充分混 勻)，室温下柔和充分混勻10分钟。(3)将离心管置于磁力架上1分钟，使管内磁珠吸附到一边，用加样枪移走管内液 体，取下离心管。(4)向离心管内加入250 μ 1洗涤缓冲液I，使磁珠重新悬浮，利用磁力架吸附磁 珠，1分钟后移走管内液体，取下离心管。(5)向离心管内加入250 μ 1洗涤缓冲液II，使磁珠重新悬浮，利用磁力架吸附磁 珠，1分钟后移走管内液体，保持离心管置于磁力架上，使磁珠继续被吸附。(6)从离心管的另一侧缓慢加入275 μ 1洗涤缓冲液III，尽量不要冲起磁珠，1分钟 后移走管内液体，取下离心管。(7)向离心管内加入50 μ 1洗脱缓冲液，使磁珠重新悬浮，55°C水浴5分钟，其间轻 轻晃动使RNA洗脱出来。(8)将离心管置于磁力架1分钟，使磁珠被吸附，将洗脱液转移至干净的离心管， 即为纯化的RNA。取上述RNA提取液2μ 1作为模板，进行荧光定量PCR检测。检测结果见下表和图 2。 表中为不同稀释度时RNA的荧光定量PCR Ct值。Ct值越低，核酸量及纯度越高。 本试剂盒提取结果在低拷贝时略优于对比试剂盒，产品检测下限达到40COpieS/ml。本试剂盒效果优于对比试剂盒，且成本低廉，操作简便、快速，亦可配合自动化仪 器使用。
权利要求一种H1N1病毒核酸高效提取试剂盒，其特征在于该试剂盒有一个盒体(11)，盒体(11)内包括磁力架(10)以及多个小瓶，所述多个小瓶中分别装有裂解缓冲液(1)、结合缓冲液(2)、洗涤缓冲液Ⅰ(3)、洗涤缓冲液Ⅱ(4)、洗涤缓冲液Ⅲ(5)、洗脱缓冲液(6)、蛋白酶K(7)、磁珠溶液(8)、助沉剂(9)。
专利摘要本实用新型涉及一种H1N1病毒核酸高效提取试剂盒，从无细胞生物样品中快速分离病毒核酸。本试剂盒有一个盒体，盒体内包括小瓶分装的裂解缓冲液、结合缓冲液、洗涤缓冲液I、洗涤缓冲液II、洗涤缓冲液III、洗脱缓冲液、蛋白酶K、磁珠溶液、助沉剂及磁力架。用本试剂盒中裂解缓冲液裂解病毒释放核酸，使磁珠吸附核酸形成复合物，在外加磁场作用下进行分离，经洗涤缓冲液洗涤去除杂质，然后洗脱回收核酸。本试剂盒操作简便、安全，成本低廉，可配合自动化核酸提取仪器进行高效的病毒核酸提取，所提取的核酸完整、纯度高，可直接用于后续实验。
文档编号C12R1/93GK201648402SQ20092027175
公开日2010年11月24日 申请日期2009年11月19日 优先权日2009年11月19日
发明者赵海峰 申请人:北京金麦格生物技术有限公司