用于治疗、诊断和测试的涉及ms4a12之方法以及靶向ms4a12之试剂的制作方法

专利名称：：用于治疗、诊断和测试的涉及ms4a12之方法以及靶向ms4a12之试剂的制作方法用于治疗、诊断和测试的涉及MS4A12之方法以及靶向MS4A12之试剂本发明涉及可用于治疗、诊断和测试疾病状态(特别是癌症疾病)的方法和试剂。特别地，本发明涉及抑制和测定例如癌症患者的赘生性细胞(neoplasticcell)中(特别是结肠癌细胞中)的MS4A12活性。尽管存在跨学科的方法并已充分应用了经典的治疗方法，但癌症仍是首要的死亡原因之一。基于抗体的癌症疗法已被成功应用于临床，并在过去的几十年里成为肿瘤学中最具前景的治疗手段(Glennie等，DrugDiscov.Today8=503-10,2003)恶性血液病为基于单克隆抗体(mAb)的治疗概念提供了成功的试验场。在这些疾病中，仅在特定造血细胞谱系中表达的抗原(例如CD20、CD22、CD25、CD33和CD52(Countouriotis等，StemCells20215-29,2002；DiIlman等，CancerPract.9:71_80，2001；Leget等，Curr.Opin.Oncol.10:548-51,1998))已被证实为有用的治疗靶标。其中最为突出的是抗CD20单克隆抗体，这是因为它们彻底改变了淋巴瘤患者的治疗。嵌合的抗CD20单克隆抗体利妥昔单抗(rituximab)在患有多次复发的惰性B细胞淋巴瘤患者中的应答率达到约40%60%，并成为由美国食品与药品管理局批准的第一种治疗癌症的单克隆抗体(Leget等，Curr.Opin.Oncol.10=548-51,1998)。适用于CD20靶向治疗的淋巴增殖性疾病谱仍在不断扩大(Leonard等，Hematology,Am.Soc.Hemato1.Educ.Program335-9,2005)。两个关键特性有助于CD20作为抗体靶标的临床成功。第一，该靶标提供了最佳的治疗窗口，因为它是B细胞谱系的高度选择性分化标志物。CD20的表达在任何其它正常细胞类型上或B细胞谱系之干细胞前体中均检测不到(Cartron等，Blood104=2635-42,2004)。因此，不存在严重的剂量限制性毒性，并且正常的B淋巴细胞水平最终由靶标阴性的干细胞所恢复。B细胞恶性病变(其通常表达这种分化抗原)可被成功治疗。第二个特性是，与针对造血分化抗原的其它单克隆抗体相比，抗CD20抗体具有特别高的杀死细胞的能力(Cragg等，Blood101=1045-52,2003)0至少在体外，它们既介导补体依赖的细胞毒性(CDC)也介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(ADCC)。对细胞免疫效应物和可溶性免疫效应物的有效募集似乎与CD20分子特有的膜拓扑特征密切相关，这解释了抗体/抗原复合物的高侧向运动性以及靶表位与脂质双层之间的短距离(Cragg等，Blood101=1045-52,2003；Cragg等，Blood103:2738_43，2004Johnson等，Semin.Oncol.30:3_8，2003)。除了募集免疫效应物以外，抗CD20单克隆抗体还可以在某些细胞系中介导生长阻滞和凋亡(Deans等，Immunology107:176_82，2002；Shan等，Blood91:1644_52，1998；Shan等，CancerImmunol.Immunother.48:673_83,2000；Unruh等，Immunologyl16:223_32，2005)。直到最近确定⑶20是由B细胞受体活化之SOC内流途径(SOCentrypathway)的组分之前，尚不清楚抗CD20单克隆抗体干扰增殖和存活的机制。胞内Ca2+是细胞功能的重要调节剂。通过生长受体进行的信号传导导致Ca2+从细胞内钙池迅速释放到细胞质中。钙池的消耗激活穿过质膜的Ca2+内流，再次补充空的钙池并提供细胞质中游离Ca2+浓度([Ca2+]c)的持续提高。这种Ca2+内流被称为“库容性(capacitative)Ca2+内流”或“钙池操纵性Ca2+(store-operatedCa2+，S0C)内流”，它对于调节针对受体介导之刺激的多种细胞应答(包括存活和增殖)是必要的(Berridge，J.Physiol.499291-306,1997；Berridge等，Nature395645-8,1998；Berridge等，Nat.Rev.Mol.CellBiol.1:11_21，2000)。根据CD20在调节Ca2+信号传导中的作用，已显示Ca2+内流对于利妥昔单抗诱导的抗增殖和凋亡作用是至关重要的(Shan等，CancerImmunol.Immunother.48673-83,2000；Ghetie等，Blood971392—98，2001；Hofmeister等，BloodCellsMol.Dis.26133-43，2000)。从抗CD20抗体学到的知识和血液疾病中发现的基本原理使得能够设计出实体癌中的合理的单克隆抗体疗法，这在医疗方面仍具有很高的需求。但是，尚无可用的针对实体瘤的具有类似效力的靶标。本发明的目的是鉴定这样的靶标结构并将其应用于癌症的治疗、诊断和测试中。本发明的目的通过权利要求书中的主题来实现。用于发现可在结肠癌中用作对治疗性抗体之靶标的结肠上皮细胞分化基因的数据挖掘策略得到了MS4A12——⑶20的“近亲”。本发明人显示，MS4A12是参与SOC内流的结肠细胞特异性分化基因，其在EGFR信号传导中作为新的调节剂发挥功能。本发明人提供的数据为结肠上皮细胞的生理学特性和某些癌症疾病(特别是结肠癌)的生物学特性提供了意想不到的启示，并为此类癌症疾病的治疗提供了新靶标。一方面，本发明提供了降低或者抑制细胞中MS4A12之表达或活性的试剂。优选地，所述试剂特异性针对MS4A12。术语“特异性针对MS4A12的试剂”是指，相比于其降低或抑制另一基因产物的表达或活性来说，该试剂以更高的程度降低或者抑制MS4A12的表达或活性。优选地，与任何其它基因产物的表达或活性相比，本发明中降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂以至少1.2倍、至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或者至少1000倍的更高程度降低或者抑制MS4A12的表达或活性。“降低或者抑制细胞中MS4A12之表达或活性的试剂”可以降低或者抑制MS4A12基因的转录，降低或者抑制MS4A12mRNA前体的加工(如剪接、聚腺苷化、加帽等)，降低MS4A12mRNA的半衰期，和/或降低或者抑制MS4A12mRNA翻译成MS4A12蛋白质。特别地，细胞中由MS4A12基因合成的MS4A12蛋白质的量在所述降低或者抑制细胞中MS4A12之表达或活性的试剂存在下被降低。“降低或者抑制细胞中MS4A12之活性的试剂”可以降低或者抑制MS4A12的一种或多种活性。术语“MS4A12的活性”涉及细胞中MS4A12的任何活性。优选地，MS4A12的活性与癌症疾病(例如结肠癌和结肠癌转移)有关。特别地，它参与肿瘤或肿瘤转移(如结肠肿瘤或结肠肿瘤转移)的形成、发展和/或维持。优选地，MS4A12的活性选自提高或者产生细胞的生长、增殖、生存力、细胞周期进程、迁移、趋化性和侵袭。在一些具体实施方案中，MS4A12的活性包括提高或者产生细胞中的钙池操纵性Ca2+内流(Ca2+entry)。应该理解，降低或者抑制细胞中MS4A12表达也会导致如上所述的细胞中MS4A12活性的降低或者抑制。在一个具体实施方案中，MS4A12的活性提高或者产生了细胞对EGF的应答性。根据本发明，“细胞对EGF的应答性”是指细胞在接触EGF后表现出一种或多种应答的能力。所述应答可以是任何应答，例如生化应答，如分子(例如钙离子)浓度的改变，特别是细胞内Ca2+池的消耗或者钙池操纵性Ca2+内流，或者分子修饰(例如蛋白质的磷酸化、去磷酸化、糖基化或去糖基化或者核酸的甲基化或去甲基化)。此外，所述应答可以是信号传导活动，例如信号传导途径的活化或抑制(尤其是导致细胞内Ca2+池消耗或者导致钙池操纵性Ca2+内流的活化)或者信号传导分子(例如激素)的分泌。所述应答的另一实例是在基因水平的应答，例如基因表达的活化或抑制，例如致癌基因的活化或者肿瘤抑制基因的失活。此外，所述应答可以是一种或多种细胞特征的改变，例如细胞形态的改变或者细胞生长、增殖、细胞周期进程、迁移、趋化性或侵袭的提高。优选的EGF诱导的应答有细胞中EGF诱导的生长、EGF诱导的增殖、EGF诱导的细胞周期进程、EGF诱导的迁移、EGF诱导的趋化性和EGF诱导的侵袭、及其组合。同样，“应答于EGF的细胞”是与EGF接触时表现出上述任意应答的细胞。在一个优选的实施方案中，所述细胞表达MS4A12。在一个更优选的实施方案中，所述细胞还表达EGF受体。在一个实施方案中，本发明中降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂降低或者抑制人MS4A12(优选具有SEQIDNO2之氨基酸序列的人MS4A12)的表达或活性。在一个实施方案中，所述试剂包含特异性靶向MS4A12基因之mRNA并导致其发生RNAi诱导之降解的siRNA，并优选由所述siRNA组成，从而使得不产生MS4A12基因的蛋白质产物或者产生量减少。优选地，本发明的siRNA包含有义RNA链和反义RNA链，其中有义和反义RNA链形成RNA双链体。优选地，所述有义RNA链包含与编码MS4A12的核酸(优选编码MS4A12的mRNA)中约19至约25个连续核苷酸的靶序列基本一致的核苷酸序列。优选地，本发明的siRNA是分离的。在一个实施方案中，本发明的siRNA由两个核酸片段组装而成，其中一个片段包含所述siRNA分子的有义链，第二片段包含所述siRNA分子的反义链。在本发明siRNA的另一个实施方案中，形成RNA双链体的有义和反义RNA链是共价连接的，例如通过单链发夹来实现。本发明的siRNA优选进一步包含非核苷酸材料。在本发明siRNA的另一个实施方案中，所述有义和反义RNA链针对核酸酶降解进行了稳定化处理。优选地，本发明的siRNA进一步包含3’突出端，所述3’突出端优选包含1至约6个核苷酸，更优选约2个核苷酸。在本发明siRNA的一个实施方案中，有义RNA链包含第一3’突出端，反义RNA链包含第二3’突出端，其中优选地所述第一和第二3’突出端独立地包含1至约6个核苷酸。更优选地，所述第一3’突出端包含二核苷酸，所述第二3’突出端包含二核苷酸，优选为二脱氧胸苷酸或二尿苷酸。在本发明siRNA的一个实施方案中，3’突出端针对核酸酶降解进行了稳定化处理。在本发明siRNA的一些具体实施方案中，所述靶序列具有SEQIDNO1中344-363位核苷酸的核苷酸序列或者SEQIDNO:1中247-266位核苷酸的核苷酸序列。因此，所述靶序列可以具有SEQIDNO3或者SEQIDNO6的核苷酸序列。在本发明siRNA的另一些具体实施方案中，有义RNA链具有SEQIDNO:4的序列并且反义RNA链具有SEQIDNO5的序列，或者有义RNA链具有SEQIDNO7的序列并且反义RNA链具有SEQIDNO8的序列。在另一实施方案中，所述试剂包括与编码MS4A12的核酸选择性杂交的反义核酸，并优选由其组成。特别地，所述反义核酸与MS4A12基因和/或MS4A12mRNA特异性杂交并因此阻止或者降低MS4A12基因的转录和/或MS4A12mRNA的翻译。优选地，所述反义核酸与编码MS4A12的核酸(优选编码MS4A12的基因或mRNA)中约20至约30个连续核苷酸的靶序列基本上互补。优选地，本发明的反义核酸是分离的。所述靶序列可以定位于MS4A12基因或MS4A12mRNA的任何部分，只要能够实现期望的效果即可。例如，本发明的反义核酸可以与MS4A12基因的启动子或转录起始位点、MS4A12mRNA前体的剪接供体或接纳体(acceptor)位点、MS4A12mRNA的核糖体结合位点或转录起始位点或者MS4A12编码区进行杂交。本发明的反义核酸优选进一步包含非核苷酸材料。在另一个实施方案中，本发明的反义核酸针对核酸酶降解进行了稳定化处理。在另一个实施方案中，所述试剂包括特异性结合MS4A12的抗体，并优选由其组成。通过与MS4A12结合，该抗体降低或者抑制MS4A12的活性。优选地，所述抗体与MS4A12的胞外区(S卩，当MS4A12由细胞表达时在细胞外可接触的MS4A12区域)结合。此处的“细胞外可接触的”是指试剂(例如抗体)在添加到细胞的胞外环境时可以与细胞外靶标结合，优选无需进入或者穿越所述细胞的细胞膜。优选地，所述抗体与人MS4A12的SEQIDNO2中113-126位氨基酸或182-201位氨基酸内的区域或者与人MS4A12的衍生物、同工型、变体或同源物的相应区域结合。本发明的抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，优选单克隆抗体。此外，本发明的抗体可以是嵌合抗体或人源化抗体或者抗体片段(例如抗体的F(ab')2、Fab、Fv或Fd片段)。在另一个实施方案中，本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂是能够表达本发明的siRNA、反义核酸或者抗体的核酸分子(优选重组核酸分子)。优选地，所述核酸分子包含与用于表达本发明之siRNA、反义核酸或者抗体的核酸序列功能性连接的启动子，优选诱导型或调节型启动子。优选地，所述核酸分子是载体，例如表达质粒或病毒载体。病毒载体可选自腺病毒载体、腺相关病毒载体、慢病毒载体、逆转录病毒载体和疱疹病毒载体。能够表达siRNA的核酸分子可以是包含表达siRNA之有义RNA链和反义RNA链的核酸序列的单个载体，或者是两个载体的组合(一个载体包含表达siRNA之有义RNA链的核酸序列，一个载体包含表达siRNA之反义RNA链的核酸序列)。在一个实施方案中，所述核酸分子存在于宿主细胞中。优选地，存在于宿主细胞中的核酸分子能够表达本发明的抗体。在一个优选实施方案中，所述核酸分子表达的抗体由宿主细胞分泌。在另一个实施方案中，本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂包含选自以下的化合物并优选由其组成能够降低或者抑制MS4A12之表达或活性的肽、蛋白质、核酸和小分子化合物。例如，能够降低或者抑制MS4A12之表达或活性的肽、蛋白质、核酸和小分子化合物可以由本领域中已知的任何合适的筛选测定来鉴定。可以在筛选测定中使用不同的肽、蛋白质、核酸和/或小分子化合物的文库。所述文库可由化学合成的化合物、天然化合物或由天然化合物衍生得到的化合物组成。合适的文库是本领域已知的。例如，肽或蛋白质文库可以是包含将肽或蛋白质展示于其表面之噬菌体的噬菌体展示文库。所述筛选测定可包括一轮或多轮包含一个或多个选择步骤的选择。可针对与MS4A12结合、降低或抑制MS4A12的表达和/或降低或抑制MS4A12的活性来筛选文库中的成员。在另一个实施方案中，本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂是不同试剂的混合物。特别地，所述试剂可以是两种或更多种上述siRNA的混合物、两种或更多种上述反义核酸的混合物或者两种或更多种上述抗体的混合物。此外，所述试剂可以是一种或多种上述siRNA和/或一种或多种上述反义核酸和/或一种或多种上述抗体的混合物。在一些具体的实施方案中，MS4A12mRNA或MS4A12基因包含选自以下的核酸序列(a)SEQIDNO1的核酸序列、其部分或衍生物，(b)严格条件下与(a)的核酸序列杂交的核酸序列，(c)与(a)或(b)的核酸具有简并性的核酸序列，(d)与(a)、(b)或(c)的核酸序列互补的核酸序列，和(e)编码SEQIDNO:2之氨基酸序列、其部分、变体、同工型或同源物的核酸序列。此外，在一些具体实施方案中，MS4A12蛋白包含选自以下的氨基酸序列SEQIDNO:2、其部分、变体、同工型或同源物的氨基酸序列。本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂可用于治疗疾病，其中降低或者抑制MS4A12的表达或活性对治疗是有益的，尤其是癌症和癌症转移(优选结肠癌和结肠癌转移)。特别地，本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂能够降低或者抑制肿瘤生长、肿瘤侵袭和/或肿瘤转移。在一个实施方案中，本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂能够降低或抑制细胞中的钙池操纵性Ca2+内流。此外，本发明涉及包含本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂的组合物。优选地，该组合物以有效降低或者抑制细胞中MS4A12之表达或活性的量和/或浓度包含本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂。该组合物可以仅包含一种本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂，或者包含本发明降低或抑制MS4A12之表达或活性的不同试剂的组合。在一个实施方案中，本发明的组合物进一步包含降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂。“降低或者抑制细胞中EGF受体之表达的试剂”可以降低或者抑制EGF受体基因的转录，降低或者抑制EGF受体mRNA前体的加工(如剪接、聚腺苷化、加帽等)，降低EGF受体mRNA的半衰期，和/或降低或抑制EGF受体从mRNA翻译成蛋白质。特别地，细胞中由EGF受体基因合成的EGF受体蛋白的量在所述降低或抑制细胞中EGF受体之表达的试剂存在下被降低。“降低或者抑制细胞中EGF受体之活性的试剂”可以降低或者抑制EGF受体的一种或多种活性。术语“EGF受体的活性”是指具有EGF受体的细胞在EGF受体活化(特别是通过EGF结合EGF受体来实现)后表现出的任何应答。但是，如下文进一步解释地，本发明细胞中EGF受体的活性不仅可以通过干扰EGF受体得以降低或者抑制，还可以通过干扰参与EGF信号传导的任何组分得以降低或者抑制。优选地，EGF受体的活性涉及肿瘤或肿瘤转移(如结肠肿瘤或结肠肿瘤转移)的形成、发展和/或维持。优选地，EGF受体的活性选自提高或者促进细胞生长、增殖、生存力、细胞周期进程、迁移、趋化性和侵袭。降低或者抑制细胞中EGF受体之活性的试剂可以通过直接与EGF受体相互作用来降低或者抑制所述活性。例如，所述试剂可以封闭EGF受体的配体结合位点从而阻止EGF与受体结合。特异性针对EGF受体的抗体、拮抗性EGF模拟物或者能够与配体结合位点结合的小分子化合物都可适用于这个方面。此外，所述试剂可以阻断EGF受体的二聚化。这样的试剂的实例是EGF受体单体的无活性变体(特别是其显性负调控变体)以及与EGF受体单体之二聚化作用表面结合的抗体或小分子化合物。此外，所述试剂可以封闭EGF受体的蛋白酪氨酸激酶结构域，即，所述试剂可以是酪氨酸激酶抑制剂，优选小分子酪氨酸激酶抑制剂。此外，所述试剂可以阻断EGF受体与其下游相互作用配偶体(如PLCy)的相互作用，例如通过结合EGF受体与所述相互作用配偶体结合的结合位点来实现。在另一个实施方案中，降低或者抑制细胞中EGF受体活性的试剂不直接与EGF受体相互作用。特别地，所述试剂可以结合EGF从而阻止EGF与受体结合、阻止EGF的产生或分泌、或者降解EGF。特异性针对EGF的抗体是这种试剂的一个实例。此外，所述试剂可以降低或者抑制一种或多种(优选所有)由EGF受体诱导的信号转导途径，特别是导致细胞内Ca2+池消耗和/或钙池操纵性Ca2+内流的信号转导途径。例如，所述试剂可以降低或者抑制参与所述信号转导途径之一种或多种蛋白质(例如PLCγ)的表达或活性。这些试剂的实例是降低或者抑制所述蛋白质表达的siRNA和反义核酸、降低或者抑制所述蛋白质之一种或多种活性(例如，酶活性或者与相互作用配偶体结合的能力)的抗体或小分子化合物。应该理解，降低或者抑制细胞中EGF受体的表达还会导致如上所述地所述细胞中EGF受体活性的降低或者抑制。在一个优选实施方案中，降低或者抑制EGF受体之表达或活性的试剂降低或者抑制多于一种不同的EGF受体(优选细胞中存在的所有不同的EGF受体)的表达或活性。EGF受体优选人EGF受体，例如人EGFR、人ErbB-I或人HER1。但是，EGF受体也可以是这些人EGF受体的种间同源物。优选地，降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂选自⑴特异性靶向EGF受体mRNA的siRNA；(ii)能够与编码EGF受体之核酸特异性杂交的反义核酸；(iii)能够与EGF受体选择性结合的抗体；(iv)能够表达⑴的siRNA、(ii)的反义核酸或者(iii)的抗体的核酸分子；和(ν)特异性针对EGF受体的酪氨酸激酶抑制剂。降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂的具体实例包括以下抗体西妥昔单抗(cetuximab)、帕木单抗(panitumumab)、扎鲁单抗(zalutumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)和马妥珠单抗(matuzumab)以及酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)和拉帕替尼(Iapatinib)(例如Sridhar等，LancetOncol.4397-406，2003)。在一个实施方案中，本发明的组合物是药物组合物。本发明的药物组合物优选可用于治疗疾病，其中所述疾病中降低或者抑制MS4A12的表达或活性和/或降低或者抑制EGF受体的表达或活性对治疗特别是癌症和癌症转移(优选结肠癌和结肠癌转移)有益。本发明的药物组合物可以包含药物相容性载体。此外，本发明涉及用于降低或者抑制细胞对EGF之应答性的方法，其包括将所述细胞与本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂接触。优选地，所述细胞与有效降低或者抑制所述细胞中MS4A12之表达或活性的量和/或浓度的本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂接触。在一个实施方案中，与细胞的接触是通过将试剂添加到细胞的胞外环境中来实现的。在这个实施方案中，所述试剂优选为上述抗体。在另一个实施方案中，试剂与细胞的接触包括将试剂引入细胞中。在这个实施方案中，所述试剂优选上述siRNA、反义核酸或能够表达siRNA或反义核酸的核酸分子。向细胞内引入试剂可以通过本领域已知的任何方法实现。例如，可使用直接注射、使用脂质载体(如脂质体)引入、电穿孔或者速度驱动的转染(例如基因枪)向细胞中引入本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂。此外，可使用载体(如质粒载体或病毒载体)、磷酸钙沉淀、或结合至阳离子聚合物如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺转染而向细胞中引入本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂，该试剂由例如siRNA、抗原核酸的核酸和能够表达siRNA、抗原核酸或抗体的核酸分子组成。优选地，应答于EGF的细胞表达MS4A12，更优选地还表达EGF受体。优选地，所述细胞是赘生性细胞如肿瘤细胞。在一个实施方案中，用于降低或者抑制细胞对EGF之应答性的方法还包括将所述细胞与降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂接触。降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂优选为上述试剂。特别地，所述试剂优选地选自(i)特异性靶向EGF受体mRNA的siRNA；(ii)能够与编码EGF受体之核酸选择性杂交的反义核酸；(iii)能够与EGF受体选择性结合的抗体；(iv)能够表达(i)的siRNA、(ii)的反义核酸或(iii)的抗体的核酸分子；和(ν)特异性针对EGF受体的酪氨酸激酶抑制剂。可采用与上述针对本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂的类似方式来实现所述细胞与降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂的接触。所述细胞可以与降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂以及本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂同时或者连续接触。如果细胞与两种试剂同时接触，所述试剂可以存在于同一组合物中或者存在于分别的组合物中。在一个实施方案中，用于降低或者抑制细胞对EGF之应答性的方法在体外进行。在这个实施方案中，细胞可以是分离的细胞，优选在体外培养的细胞。此外，所述细胞可以包含在组织样品(其优选分离自生物体)中。在另一个实施方案中，用于降低或者抑制细胞对EGF之应答性的方法在体内进行。在这个实施方案中，所述细胞存在于生物体(例如动物，优选哺乳动物例如啮齿类(如小鼠或大鼠)、灵长类或人)中。此外，在这个实施方案中，将所述细胞与本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂以及任选的降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂接触优选地包括将所述试剂施用给生物体。施用所述试剂可如下进行和/或可包括上述将试剂引入细胞的任何方法。优选地，就施用而言，所述试剂存在于本文上述的药物组合物中。优选地，如果用于降低或者抑制细胞对EGF之应答性的方法在体内进行，则其用于治疗癌症和/或癌症转移。因此，另一方面，本发明涉及治疗癌症和/或癌症转移(特别是结肠癌和/或结肠癌转移)的方法。所述治疗包括将本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂施用给患者。特别地，所述方法包括向有此需要的患者(优选患有结肠癌或结肠癌转移的患者)施用有效量的本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂。优选地，该方法降低或者抑制肿瘤生长、肿瘤侵袭和/或肿瘤转移。在一个实施方案中，治疗癌症和/或癌症转移的方法还包括向患者施用降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂。降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂优选为上述试剂。特别地，所述试剂优选地选自(i)特异性靶向EGF受体mRNA的siRNA；(ii)能够与编码EGF受体之核酸特异性杂交的反义核酸；(iii)能够与EGF受体选择性结合的抗体；(iv)能够表达(i)的siRNA、(ii)的反义核酸或(iii)的抗体的核酸分子；和(ν)特异性针对EGF受体的酪氨酸激酶抑制剂。优选地，降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂以有效量施用。优选地，本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂以及任选的降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂在本文所述的药物组合物中进行施用。降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂以及本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂可以同时或者连续施用。如果两种试剂同时施用，则它们可以存在于同一药物组合物中或者存在于分别的药物组合物中。根据本发明，术语“癌症”和“癌症转移”优选分别指特征在于表达MS4A12和/或表达EGF受体的癌症或癌症转移，即，所述癌症或癌症转移的至少一部分癌细胞表达MS4A12和/或至少一部分癌细胞表达EGF受体。在一个优选实施方案中，至少一部分的癌细胞表达和/或分泌EGF。优选地，所述癌症或癌症转移的至少一部分癌细胞应答于EGF。优选地，在所述应答于EGF的细胞中，在EGF存在下细胞生长、增殖、生存力、细胞周期进程、迁移、趋化性和/或侵袭得以提高。在一个实施方案中，所述癌症或者癌症转移中的肿瘤生长、肿瘤侵袭和/或肿瘤转移在EGF存在下得以提高。此外，本发明还涉及用于测定细胞对EGF之响应性的方法，其包括测定细胞中MS4A12的表达或活性水平。该方法优选地使得能够得出细胞是否应答于EGF添加以及以何种程度应答的定性和/或定量结论。在一个实施方案中，测定细胞中MS4A12的表达水平包括测定所述细胞中MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白质的量。优选地，测定MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白质的量包括将细胞与特异性结合MS4A12mRNA或MS4A12蛋白质的试剂相接触，并测定试剂与MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白质之复合体的量。根据本发明，MS4A12mRNA的量可以使用与MS4A12mRNA特异性杂交的寡核苷酸或多核苷酸探针进行测定，或者可以通过选择性扩增所述MS4A12mRNA进行测定(例如，利用PCR扩增来实现)。在一个实施方案中，所述寡核苷酸或多核苷酸探针包含与所述MS4A12mRNA之6_50个(特别是10-30个、15-30个以及20-30个)连续核苷酸互补的序列。根据本发明，MS4A12蛋白质的量可以使用与所述MS4A12蛋白质特异性结合的抗体进行测定。在测定细胞对EGF之应答性的方法中，用于测定MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白质之量的试剂优选地以可检测的方式进行标记，特别是通过检测标记(例如放射性标记、荧光标记或酶标记)来实现。优选地，细胞中存在MS4A12mRNA或MS4A12蛋白质指示细胞应答于EGF。优选地，细胞中MS4A12mRNA或MS4A12蛋白质的量与所述细胞对EGF之应答性的预期水平相关联。因此，细胞中MS4A12mRNA或MS4A12蛋白质的量越高，所述细胞对EGF之应答性的预期水平就越高。测定细胞中MS4A12的活性水平可以包括测定细胞中MS4A12的一种或多种活性。在一些优选实施方案中，用于测定细胞对EGF之应答性的方法包括在降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂(特别是本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂)存在和/或不存在下测定细胞内MS4A12的活性水平。优选地，可检测水平的MS4A12活性指示细胞对EGF的应答性。优选地，MS4A12的活性水平与细胞对EGF之应答性的预期水平相关联。如果在降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂存在和/或不存在下测定MS4A12的活性水平，则在所述试剂存在下MS4A12活性水平的降低指示细胞对EGF的应答性。在所述试剂存在下MS4A12活性水平的降低程度优选地与细胞对EGF之应答性的的预期水平相关联。在一个实施方案中，测定细胞中MS4A12的活性水平包括测定所述细胞中钙库操纵性Ca2+内流。优选地，所述钙库操纵性Ca2+内流在降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂(特别是本发明降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂)存在和不存在下进行测定。优选地，所述试剂选自(i)特异性靶向MS4A12mRNA的siRNA；(ii)能够与编码MS4A12之核酸选择性杂交的反义核酸；(iii)能够与MS4A12选择性结合的抗体；(iv)能够表达(i)的siRNA或者(ii)的反义核酸的核酸分子。在一个实施方案中，测定细胞中钙库操纵性Ca2+内流包括测定Ca2+和/或Sr2+进入细胞中的量和/或时程(timecourse)。测定Ca2+和/或Sr2+进入细胞中的量优选地包括在测量开始测定细胞内Ca2+和/或Sr2+的浓度并在测量结束时测定细胞内Ca2+和/或Sr2+的浓度，并计算测量结束时与测量开始时细胞内Ca2+和/或Sr2+的浓度差异，其中所述差异对应于Ca2+和/或Sr2+进入细胞中的量。测定Ca2+和/或Sr2+进入细胞的时程优选地包括监测一段时间内细胞中Ca2+和/或Sr2+的浓度，其中Ca2+和/或Sr2+浓度的升高指示Ca2+和/或Sr2+的内流，而Ca2+和/或Sr2+浓度的降低则指示Ca2+和/或Sr2+的流出。从Ca2+和/或Sr2+进入细胞的时程可以计算出在给定时间段内Ca2+和/或Sr2+进入细胞的量以及Ca2+和/或Sr2+内流的速度。在一个实施方案中，Ca2+和/或Sr2+进入细胞的量和/或时程在给定的细胞外Ca2+和/或Sr2+浓度下进行测定。细胞外Ca2+和/或Sr2+可以通过向细胞外环境添加CaCl2和/或SrCl2来提供。给定的细胞外Ca2+和/或Sr2+浓度优选为约0.OlmM至约100mM、更优选约0.ImM至约10mM，更优选约0.5mM至约2mM，最优选约ImM。Ca2+和/或Sr2+的内流可以通过对Ca2+和/或Sr2+的存在敏感的化合物进行测定。优选地，所述化合物提供在Ca2+和/或Sr2+缺失和存在下发生改变的可检测信号。优选地，这种可检测信号随Ca2+和/或Sr2+的浓度而变化，更优选地其可与Ca2+和/或Sr2+的浓度相关联。在一个实施方案中，对Ca2+和/或Sr2+的存在敏感的化合物是Ca2+敏感型染料。在另一个实施方案中，所述化合物用检测标记进行标记，其中所述标记提供可检测的信号。所述检测标记优选为荧光标记或酶标记。在一个优选实施方案中，所述对Ca2+和/或Sr2+的存在敏感的化合物存在于待测定的细胞中，更优选地仅存在于细胞的细胞质中。例如，可以根据生产商的说明使用FLIPRCalcium3测定试剂盒(MolecularDevices)。钙池操纵性Ca2+内流可以使用显微镜测量。在一个实施方案中，Ca2+和/或Sr2+进入细胞的量和/或时程在细胞内Ca2+池消耗之后进行测定。所述消耗可以通过本领域已知的任何手段来实现，例如通过施用内质网Ca2+-ATP酶(SERCA)的抑制剂(如thapsigargin)或者Ca2+池消耗的天然的激活剂(如EGF)来实现。因此，在一个实施方案中，该方法还包括将细胞与EGF和/或thapsigargin接触。优选地，细胞内Ca2+池在不存在细胞外Ca2+和/或Sr2+的情况下被消耗，并且在所述消耗之后将Ca2+和/或Sr2+添加到细胞外环境中。在测定钙池操纵性Ca2+内流时，Sr2+可以被用作Ca2+的替代物，并且Sr2+内流的量和/或时程可被认为是Ca2+内流的量和/或时程的测量值。优选地，可检测到的钙池操纵性Ca2+内流指示细胞对EGF的响应性。优选地，钙池操纵性Ca2+内流的程度对应于细胞对EGF之应答性的预期水平。如果钙池操纵性Ca2+内流是在存在和不存在降低或者抑制MS4A12之表达或活性的试剂的情况下测定的，则在所述试剂存在下钙池操纵性Ca2+内流的降低指示细胞对EGF的响应性。在所述试剂存在下所述钙池操纵性Ca2+内流的降低程度优选地与细胞对EGF之应答性的预期水平相关联。在测定细胞对EGF之应答性的方法的一个实施方案中，将细胞中MS4A12之表达或活性水平的测定结果与参考细胞中MS4A12之表达或活性水平的测定结果进行比较。优选地，参考细胞对EGF的应答性是已知的。在一个实施方案中，所述参考细胞是肿瘤细胞。优选地，待分析的细胞和参考细胞属于同一物种和/或同一类型。在一些实施方案中，用于测定细胞对EGF之应答性的方法还包括测定细胞中EGF受体的表达或活性水平。优选地，EGF受体的表达或活性水平通过测定细胞中EGF受体mRNA和/或EGF受体蛋白质的量来测定，其使用例如与EGF受体mRNA特异性结合的试剂(如与EGF受体mRNA特异性杂交的核酸分子)和/或与EGF受体蛋白质特异性结合的试剂(如特异性针对EGF受体蛋白的抗体)。EGF受体的活性水平可以通过测定EGF受体的酶活性(特别是使靶蛋白磷酸化的活性)来测定。在测定细胞对EGF之应答性的方法的一个实施方案中，所述细胞是真核细胞，优选哺乳动物细胞，更优选人细胞。优选地，所述细胞是肿瘤细胞。在一个实施方案中，同时测定多于一种细胞对EGF的应答性。优选地，用于测定细胞对EGF之应答性的方法在体外进行。在一个实施方案中，所述细胞是源自或者存在于肿瘤样品中的肿瘤细胞。在这个实施方案中，所述方法可用于测定肿瘤细胞所来源之肿瘤对EGF的应答性。所述肿瘤样品可以是包含肿瘤细胞的任何样品，包括播散的肿瘤细胞或转移的肿瘤细胞。优选地，肿瘤样品是结肠肿瘤或者结肠肿瘤转移的样品和/或肿瘤细胞是结肠肿瘤或者结肠肿瘤来源之转移的细胞。肿瘤样品可以是来自肿瘤或者包含转移肿瘤细胞之组织的活检样品。此外，肿瘤样品可以是生物样品例如粪便。优选地，肿瘤样品获取自诊断为患有癌症(优选结肠癌)的患者。肿瘤对EGF的应答性意味着肿瘤可以通过本发明的治疗方法和/或其它抗EGF的肿瘤疗法(特别是包括施用本文所述的降低或者抑制EGF受体之表达或活性的试剂的肿瘤疗法)进行治疗。因此，如果通过本发明的方法测定肿瘤应答于EGF，则可以预期患有所述肿瘤的患者可以通过本发明的治疗方法和/或其它抗EGF的肿瘤疗法成功治疗。本发明还涉及用于提高细胞对EGF之应答性的方法。该方法包括提高所述细胞中MS4A12的表达和/或活性。在一个实施方案中，所述方法包括向细胞中引入MS4A12蛋白或者能够表达MS4A12蛋白的核酸分子。优选地，该核酸分子是载体，例如表达质粒或病毒载体。向细胞中弓I入MS4A12蛋白或者能够表达MS4A12蛋白的核酸分子可以通过本领域已知的任何方法来实现。例如，可以使用直接注射、利用脂质载体(如脂质体)引入、电穿孔、或者速度驱动的转染方法(例如基因枪)。还可通过使用例如病毒转染、磷酸钙沉淀或与阳离子聚合物(如DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺)的转染法向细胞中弓丨入能够表达MS4A12蛋白的核酸分子。优选地，所述细胞表达EGF受体。在一个实施方案中，用于提高细胞对EGF之应答性的方法还包括提高所述细胞中EGF受体的表达和/或活性。在这个实施方案中，该方法优选地包括向细胞中引入EGF受体或能够表达EGF受体的核酸分子。其引入可以通过上述针对引入MS4A12蛋白或能够表达MS4A12蛋白之核酸分子的方法来实现。用于提高细胞对EGF之应答性的方法可以在体外以及体内进行。发明详述应该理解，本文中涉及数值范围时具体指明和提及所述范围所包括的每个数值。术语“MS4A12”涉及“跨膜4结构域，亚家族A，成员12(membrane-spanning4-domains,subfamilyA,member12)，，，并包括由细胞天然表达或者由转染有MS4A12基因的细胞表达的任何MS4A12变体(特别是剪接变体、构象变体、同工型和种间同源物)。优选地，“MS4A12的核酸”、“编码MS4A12的核酸”或“MS4A12基因”是指选自以下的核酸(a)SEQIDNO1的核酸序列、其部分或衍生物，(b)在严格条件下与(a)中核酸杂交的核酸序列，(c)与(a)或(b)中核酸具有简并性的核酸序列，和(d)与(a)、(b)或(c)中核酸序列互补的核酸序列。该术语还可包括编码MS4A12的mRNA。优选地，“MS4A12蛋白”或简写为“MS4A12”包含由上述核酸编码的氨基酸序列，优选选自SEQIDNO:2的氨基酸序列、其部分或衍生物。当表达于细胞中时，MS4A12蛋白优选定位于质膜，更优选地嵌入质膜中。在一些优选实施方案中，MS4A12以如下方式嵌入细胞的质膜中，即，其氨基端和羧基端定位于细胞质并且存在一个另外的细胞质结构域、两个细胞外结构域和四个跨膜结构域。优选地，MS4A12的细胞外结构域对应于SEQIDNO:2的113-126位和182-201位氨基酸或者人MS4A12的衍生物、同工型和种间同源物的对应位置的氨基酸。应该理解，MS4A12细胞外结构域的边界也可以在MS4A12的氨基酸序列中移动1、2、3、4或5个氨基酸位置。MS4A12优选具有图2A所示的质膜拓扑特征。术语“MS4A12”还包括由细胞天然表达或者由转染有MS4A12基因的细胞表达的人MS4A12的翻译后修饰变体、同工型和种间同源物。根据本发明，核酸优选是脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)。本发明的核酸包括基因组DNA、cDNA、mRNA、重组产生的分子和化学合成的分子。根据本发明，核酸可以作为单链或双链的线性或共价环状闭合分子存在。本文使用的术语“RNA”指包含至少一个核糖核苷酸残基的分子。“核糖核苷酸”是指在β-D-核糖-呋喃糖部分的2’位带有羟基的核苷酸。该术语包括双链RNA、单链RNA、分离的RNA(例如部分纯化的RNA、基本纯化的RNA、合成RNA、重组产生的RNA)以及通过添加、缺失、替换和/或改变一个或多个核苷酸而不同于天然RNA的经改变的RNA。这样的改变可包括添加非核苷酸材料，例如向RNA的末端或内部(例如在RNA的一个或多个核苷酸处)添加。RNA分子中的核苷酸还可包括非标准核苷酸，例如非天然核苷酸或者化学合成的核苷酸或脱氧核苷酸。这些经改变的RNA可称为天然RNA的类似物。如果本文中涉及检测或测定核酸的量，则实际检测的核酸或实际测定的量优选为mRNA。但是，应该理解，这也可以包括mRNA间接检测或mRNA的量间接测定的实施方案。例如，mRNA可以转变为cDNA，并检测cDNA或测定的量。本文中mRNA与cDNA是等价的。本领域技术人员应理解，cDNA序列与mRNA序列是等价的并可在本文中用作相同的目的，例如，产生与待检测之核酸杂交的探针。因此，如果本文中涉及序列表中所示的序列，则其也包括所述序列的RNA等价物。本发明所述核酸优选是分离的。本发明的术语“分离的核酸”是指所述核酸是(i)体外扩增的，例如通过聚合酶链式反应(PCR)扩增，(ii)通过克隆重组产生的，(iii)经纯化的，例如通过切割和凝胶电泳分级分离来实现，或者(iv)合成的，例如通过化学合成来实现。分离的核酸是可用于重组DNA技术操作的核酸。本发明的简并性核酸是由于遗传密码的简并性而在密码子序列中不同于参照核酸的核酸。根据本发明，核酸的“衍生物”是指在所述核酸中存在一个或多个(例如至少2个、至少4个或至少6个，并优选多至3个、多至4个、多至5个、多至6个、多至10个、多至15个或多至20个)核苷酸替换、缺失和/或添加。此外，术语“衍生物”还包括在核苷酸碱基、糖或磷酸上对核酸进行化学衍生。术语“衍生物”还包括含有非天然核苷酸及核苷酸类似物的核酸。此外，涉及RNA时的术语“衍生物”还包括通过稳定序列、加帽和/或聚腺苷化修饰的RNA。优选地，本文所述的特定核酸序列与该特定核酸序列之衍生物的核酸序列(其与该特定核酸序列杂交和/或与该特定核酸序列具有简并性)之间的同一性程度将为至少70%，优选至少75%，优选至少80%，更优选至少85%，更优选至少90%或最优选至少95%、96%、97%、98%或99%。同一性程度优选在至少约30个、至少约50个、至少约70个、至少约90个、至少约100个、至少约150个、至少约200个、至少约250个、至少约300个或至少约400个核苷酸的区域中给出。在一些优选的实施方案中，同一性程度在参照核酸序列(例如序列表中给出的核酸序列)的全长中给出。如果两个序列能彼此杂交(杂交优选在允许多核苷酸之间发生特异性杂交的条件(严格条件)下进行)并形成稳定的双链体，则核酸与另一核酸“互补”。严格条件描述于例如MolecularCloning:ALaboratoryManual,J.Sambrook等编辑,第二版，ColdSpringHarborLaboratorypress,ColdSpringHarbor,NewYork,1989或者CurrentProtocolsinMolecularBiology,F.M.Ausubel等编辑，Johnffiley&Sons,Inc.，NewYork，其是指例如在65°C在杂交缓冲液(3.5XSSC、0.02%Ficoll、0.02%聚乙烯吡咯烷酮、0.02%牛血清白蛋白、2.5mMNaH2PO4(pH7)、0·5%SDS、2mMEDTA)中杂交。SSC为0.15M氯化钠/0.15M柠檬酸钠(PH7)。杂交后，清洗已转移有DNA的膜，例如在室温下用2XSSC清洗，接着在高至68°C的温度下用0.10.5XSSC/0.IXSDS清洗。互补性百分比表示核酸分子中可与第二核酸序列形成氢键(例如Watson-Crick碱基配对)的连续残基的百分比(例如10个残基中有5、6、7、8、9、10个为50%、60%、70%、80%、90%和100%互补)。“完全互补”是指核酸序列的所有连续残基与第二核酸序列中相同数目的连续残基形成氢键。优选地，本发明的互补性程度为至少70%，优选至少75%，优选至少80%，更优选至少85%，更优选至少90%，最优选至少95%、96%、97%、98%或99%。最优选地，本发明的互补程度为100%。“序列相似性”表示相同氨基酸或代表保守性氨基酸替换的氨基酸的百分比。两多肽或核酸序列间的“序列同一性”表示在所述序列之间相同的氨基酸或核苷酸的百分比。术语“同一性百分比”旨在表示待比较的两序列之间在最佳比对后获得的相同核苷酸或氨基酸残基的百分比，该百分比纯粹是统计学意义上的，并且两序列间的差异随机分布并分布在其全长上。两核苷酸或氨基酸序列之间的序列比较常规地通过在将其最优比对后比较其序列来进行，所述比较在区段或在“比较窗”中进行，以鉴定和比较局部区域的序列相似性。除了手动进行比较以外，还可通过以下方法来为比较进行最优序列比对Smith和Waterman，1981，AdsApp.Math.2，482的局部同源性算法、Neddleman和Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48，443的局部同源性算法、Pearson和Lipman，1988，Proc.NatlAcad.Sci.USA85，2444的相似性检索法或者使用这些算法的计算机程序(WisconsinGeneticsSoftwarePackage中的GAP、BESTFIT、FASTA,BLASTP、BLASTN禾口TFASTA，GeneticsComputerGroup,575ScienceDrive,Madison,Wis)。同一性百分比如下计算测定两个所比较序列之间相同位置数，用该数除以所比较的位置数并将所得结果乘以100，以获得这两个序列之间的同一性百分比。根据本发明，编码肽或蛋白质的核酸或者能够表达SiRNA或反义核酸的核酸可单独存在或与其它核酸(特别是异源核酸)一起存在。在一些优选的实施方案中，核酸与表达控制序列或调控序列功能性连接，所述表达控制序列或调控序列对于所述核酸而言可以是同源或异源的。如果编码/表达序列与调控序列以所述编码/表达序列的表达或转录处于所述调控序列的调控或影响之下的方式彼此共价连接，则它们是“功能性”连接的。如果要将编码序列翻译成功能性蛋白质，则将调控序列与所述编码序列功能性连接，所述调控序列的诱导引起所述编码序列的转录，而不会导致该编码序列的移码或者所述编码序列不能翻译成期望的蛋白质或肽。根据本发明，术语“表达调控序列”或“调控序列”包括启动子、增强子以及调节基因表达的其它调控元件。在本发明的一些具体实施方案中，所述表达调控序列可受到调节。调控序列的确切结构可作为物种或细胞类型的函数而变化，但一般包含分别参与转录起始及翻译起始的5’非转录序列以及5’非翻译序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。更具体地，5’非转录调控序列包括启动子区，其包含与基因功能性连接的用于转录调控的启动子序列。调控序列还可包含增强子序列或上游激活子序列。此外，根据本发明，核酸可以与另一核酸存在于一起，所述另一核酸编码控制由所述核酸编码的蛋白质或肽从宿主细胞分泌的肽。根据本发明，核酸还可以与另一核酸存在于一起，所述另一核酸编码导致所编码的蛋白质或肽锚定于宿主细胞之细胞膜上或者分隔于所述细胞的特定细胞器中的肽。类似地，也可以与代表报告基因或者任何“标签”的核酸组合。在一个优选的实施方案中，根据本发明的重组核酸分子是载体，其中适当时带有调控核酸表达的启动子。本文使用的术语“载体”以其最广泛的含义使用，包括用于核酸的任何中间载体，其使得所述核酸可以例如引入原核和/或真核细胞中并在适当时整合进基因组中。这种载体优选地在细胞中进行复制和/或表达。中间载体可以进行调整，例如针对在电穿孔、微粒轰击、脂质体、利用农杆菌进行转移或者通过DNA或RNA病毒进行插入中的应用。载体包括质粒、噬菌粒、噬菌体或病毒基因组。本文中使用的术语“细胞”优选是指真核细胞，更优选指哺乳动物细胞，最优选是指人细胞。根据本发明，术语“宿主细胞”是指可用外源核酸转化或转染的任何细胞。本发明的术语“宿主细胞”包括原核细胞(如大肠杆菌(E.coli))或真核细胞(例如树突细胞、B细胞、CHO细胞、COS细胞、K562细胞、酵母细胞和昆虫细胞)。特别优选哺乳动物细胞，例如来自人、小鼠、仓鼠、猪、山羊、灵长类的细胞。所述细胞可来自多种组织类型，并包括灵长类细胞和细胞系。具体实例包括角质形成细胞、外周血白细胞、骨髓干细胞及胚胎干细胞。核酸可以以单拷贝或者两个或更多拷贝的形式存在于宿主细胞中，在一个实施方案中，其在宿主细胞中表达。优选地，宿主细胞不是人体的一部分。根据本发明，术语“表达”以其最广泛的含义使用，包括RNA的产生或者RNA和蛋白质的产生。它还可以包括核酸的部分表达。此外，表达可以是瞬时的也可以是稳定的。在哺乳动物细胞中优选的表达系统包括pcDNA3.1和pRc/CMV(Invitrogen，Carlsbad，CA)，它们包含选择标记如对抗G418的基因(并因此使稳定转染的细胞系可被选择)及巨细胞病毒(CMV)的增强子-启动子序列。“反义核酸”可以用来调节(特别是降低)核酸的表达。本发明的术语“反义核酸”是指在生理条件下与包含特定基因的DNA或与所述基因的mRNA杂交从而抑制所述基因转录和/或所述mRNA翻译的寡核苷酸，其是寡核糖核苷酸、寡脱氧核糖核苷酸、修饰的寡核糖核苷酸或修饰的寡脱氧核糖核苷酸。反义核酸可与天然mRNA形成双链体，从而阻止mRNA累积或翻译。另一种可能是使用使核酸失活的核酶。本发明优选的反义寡核苷酸具有靶核酸中6-50个、特别是10-30个、15-30个和20-30个连续核苷酸的序列，并优选与靶核酸或与其部分完全互补。在一些优选的实施方案中，反义寡核苷酸与N端或5’上游位点(如翻译起始位点、转录起始位点或启动子位点)杂交。在另一些实施方案中，反义寡核苷酸与3’非翻译区或mRNA剪接位点杂交。在一个实施方案中，寡核苷酸(如本发明的SiRNA或者本发明的反义核酸)由核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其组合组成，其中一个核苷酸的5’末端与另一核苷酸的3’末端通过磷酸二酯键彼此连接。这些寡核苷酸可以常规方式合成，或者可以重组产生。在一些优选的实施方案中，该寡核苷酸为“修饰的”寡核苷酸。这时，可以不同的方式来修饰寡核苷酸而不破坏其结合其靶标的能力，从而提高例如其稳定性或治疗有效性。根据本发明，术语“修饰的寡核苷酸”指这样的寡核苷酸，其中(i)其至少两个核苷酸通过合成的核苷间键(即并非磷酸二酯键的核苷间键)彼此连接，和/或(ii)通常不存在于核酸中的化学基团与该寡核苷酸连接。优选的合成的核苷间键为硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸酯、烷基硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、氨基乙酸酯(acetamidate)、羧甲基酯和肽。术语“修饰的寡核苷酸”还包括具有共价修饰的碱基和/或糖的寡核苷酸。例如，“修饰的寡核苷酸”包括带有这样的糖残基的寡核苷酸，所述糖残基与低分子量有机基团共价连接，而非在3’位与羟基共价连接并在5’位与磷酸基共价连接。例如，修饰的寡核苷酸可包括’-ο-烷基化核糖残基或者代替核糖的另一种糖(如阿拉伯糖)。应该理解，在上述所有实施方案中关于寡核苷酸的部分也可适用于多核苷酸。本文使用的“小干扰RNA”或“siRNA”指分子或者复合物，其包含通过标准的Watson-Crick碱基配对(base-paring)相互作用(下文称为“碱基配对(base-paired)”)退火在一起的有义RNA链和互补的反义RNA链。siRNA的有义链和反义链优选长度大于10个核苷酸，更优选长度大于15个核苷酸，最优选长度为18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28,29或30个核苷酸。19-25个核苷酸对于siRNA来说是最优选的。根据本发明，siRNA特异性靶向并导致来自靶基因之mRNA(S卩，靶mRNA)的RNAi诱导之降解，从而不产生靶基因的蛋白产物或产生量减少。本发明的siRNA可包括部分纯化的RNA、基本纯化的RNA、合成RNA或重组产生的RNA以及由于一个或多个核苷酸的添加、缺失、替换和/或改变而区别于天然RNA的经改变的RNA。这样的改变可包括添加非核苷酸材料，例如向siRNA的末端或者向siRNA的一个或多个内部核苷酸添加；修饰以使siRNA抵抗核酸酶消化(例如，使用2’-取代的核糖核苷酸或修饰糖_磷酸骨架)；或者用脱氧核糖核苷酸替换该siRNA中的一个或多个核苷酸。此外，可以如上文修饰寡核苷酸所述地来修饰siRNA以提高其稳定性，特别是引入一个或多个硫代磷酸酯键。siRNA的一条或两条链还可包含3’突出端。本文使用的“3’突出端”是指RNA链3’末端伸出的至少一个未配对核苷酸。因此在一个实施方案中，siRNA包含至少一个3’突出端，其长度为1至约6个核苷酸(包括核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸)，优选长度为1至约5个核苷酸，更优选长度为1至约4个核苷酸，尤其优选长度为约2至约4个核苷酸。在siRNA分子的两条链均包含3’突出端的实施方案中，每条链的突出端长度可以相同或不同。在一个最优选的实施方案中，siRNA的两条链上均存在3’突出端，并且长度为2个核苷酸。例如，本发明siRNA的每条链可包含二脱氧胸苷酸(“TT”)或二尿苷酸(“im”)的3’突出端。为了增强siRNA的稳定性，还可以对3’突出端进行稳定以避免降解。在一个实施方案中，通过包含嘌呤核苷酸(如腺苷或鸟苷核苷酸)来稳定突出端。或者，用经修饰的类似物替换嘧啶核苷酸(例如用2’-脱氧胸苷替换3’突出端中的尿苷核苷酸)是可以耐受的，并且不影响RNAi降解的效率。特别地，2’-脱氧胸苷中缺少2’-羟基显著增强了该3’突出端在组织培养基中的核酸酶抗性。siRNA的有义链和反义链可包含两个互补的单链RNA分子，或者可包含单个分子(其中两个互补部分碱基配对并通过单链“发夹”区共价连接。也就是说，有义区和反义区可通过连接分子共价连接。该连接分子可以是多核苷酸或非核苷酸连接分子。不希望受任何理论的限制，相信后一类型siRNA分子的发夹区在细胞内被“Dicer”蛋白(或其等价物)切割形成两条单独碱基配对RNA分子的siRNA。本文使用的“靶mRNA”是指作为下调靶标的RNA分子。本领域技术人员会理解，cDNA序列等价于mRNA序列，并且可用于本文的相同目的，例如产生siRNA。可以从聚合酶III(polIII)表达载体来表达siRNA而不改变靶位点，因为认为从聚合酶III启动子表达的RNA仅在第一个转录的核苷酸是嘌呤时才有效。本发明的siRNA可靶向任何靶mRNA序列中任何约19_25个连续核苷酸的节段(“靶序列”)。选择siRNA靶序列的技术在例如TuschlT.等，“ThesiRNAUserGuide(siRNA用户指南)”，2002年10月11日修订版中给出，其全部公开内容均通过引用并入本文。“siRNA用户指南”在互联网上由ThomasTuschl博士，RNA分子生物学实验室，RockefellerUniversity,NewYork,USA维护的站点上提供，并可通过进入RockefellerUniversity网站并搜索关键词“siRNA”而找到。因此，本发明siRNA的有义链包含与靶mRNA中任何约19至约25个核苷酸的连续节段基本一致的核苷酸序列。一般而言，靶mRNA上的靶序列可从对应于该靶mRNA的给定cDNA序列中选择，优选从起始密码子下游(即3’方向)50至IOOnt开始。然而，靶序列可以位于5’或3’非翻译区中，或者在起始密码子附近的区域中。例如，MS4A12cDNA中合适的靶序列选自以下的靶序列(i)GATCATGGTTGGATTGATGCA(SEQIDNO3)(ii)GTCAACCGGGTCAAGGAAATA(SEQIDNO6)靶向序列(i)并在每条链上具有3’突出端(突出端以粗体显示)的优选siRNA为5'ucaugguuggauugaugcaTT3'(SEQIDNO4)3‘CTaguaccaaccuaacuacgu5‘(SEQIDNO5)靶向序列(ii)并在每条链上具有3’突出端(突出端以粗体显示)的优选siRNA为5'caaccgggucaaggaaauaTA3‘(SEQIDNO7)3'CAguuggcccaguuccuuuau5'(SEQIDNO8)在以上列表中，核酸序列中的所有脱氧核糖核苷酸均以大写字母表示(例如脱氧胸苷为“T”)，核酸序列中的核糖核苷酸以小写字母表示(例如尿苷为“U”)。应该理解，本文给出的靶序列是参考人MS4A12cDNA给出的，因此这些序列含有以“T”表示的脱氧胸苷。本领域技术人员会理解，在MS4A12mRNA的实际靶序列中，脱氧胸苷将被尿苷(“U”)替代。同样，本发明siRNA中包含的靶序列也将含有替代脱氧胸苷的尿苷。可使用本领域技术人员已知的多种技术来获得siRNA。例如，可使用本领域已知的方法来化学合成或重组产生siRNA，例如Tuschl等的美国公开申请2002/0086356中描述的果蝇体外系统，其全部公开内容通过弓I用并入本文。优选地，使用经适当保护的核糖核苷亚磷酰胺和常规的DNA/RNA合成仪来化学合成siRNA。siRNA可以作为两个独立的互补RNA分子而合成，或者作为带有两个互补区的单个RNA分子而合成。或者，还可以使用任何合适的启动子从重组的环状或线性DNA质粒中表达siRNA。根据本发明，此类实施方案包括于涉及施用siRNA时或者将siRNA掺入药物组合物中时。用于从质粒中表达本发明siRNA的合适的启动子包括例如U6或HlRNA聚合酶III的启动子序列以及巨细胞病毒启动子。选择其它合适的启动子在本领域技术范围之内。包含表达siRNA之核酸序列的核酸分子(例如重组质粒或病毒载体)还可包含用于在特定组织或在特定胞内环境中表达siRNA的诱导型或调节型启动子。从重组质粒中表达的SiRNA可通过标准技术从培养的细胞表达系统中分离，或者可以在细胞内表达。siRNA可以作为两个独立的互补RNA分子或作为带有两个互补区的单个RNA分子从重组载体中表达。选择适于表达siRNA的质粒、用于将表达siRNA的核酸序列插入该质粒的方法以及将重组质粒递送至目的细胞的方法在本领域技术范围之内。还可以在体内从重组病毒载体胞内表达siRNA。所述重组病毒载体包含编码该siRNA的序列以及用于表达该siRNA的任何适当的启动子。所述重组病毒载体还可包含用于在特定组织或在特定胞内环境中表达siRNA的诱导型或调节型启动子。siRNA可以作为两个独立的互补RNA分子或作为带有两个互补区的单个RNA分子从重组病毒载体中表达。转录自人MS4A12基因的mRNA可以通过本领域中公知的技术分析其替代性剪接形式。上述技术包括逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Northern印迹和原位杂交。一种名为“RNA酶保护”的技术也可以用来鉴定替代性剪接的MS4A12mRNA。RNA酶保护包括基因序列转录成合成RNA，它与来源于其它细胞(例如诱导表达MS4A12的细胞)的RNA杂交。然后，杂交的RNA与识别RNA:RNA杂交错配的酶一起孵育。比预期片段小的片段表示存在替代性剪接的mRNA。假拟的替代性剪接mRNA可以通过本领域技术人员公知的方法进行克隆和测序。RT-PCR也可以用于鉴定替代性剪接的MS4A12mRNA。在RT-PCR中，来自已知表达MS4A12之细胞的mRNA由逆转录酶被转换成cDNA，其使用本领域技术人员所公知的方法。然后，cDNA的完整编码序列使用位于3’非翻译区的正向引物和位于5’非翻译区的反向引物通过PCR进行扩增。扩增产物可用于分析替代性剪接形式，例如通过比较扩增产物与正常剪接之mRNA的预期产物的大小来实现，例如通过琼脂糖凝胶电泳来比较。扩增产物大小的任何改变均可指示替代性剪接的存在。从突变的MS4A12基因产生的mRNA也可以容易地使用上述鉴定替代性剪接形式的技术进行分析。本文使用的“突变的”MS4A12基因或者mRNA包括序列与上述MS4A12序列不同的人MS4A12基因或mRNA。因此，MS4A12基因的等位形式及其产生的mRNA在本发明中被认为是“突变体”。本文使用的“降低”或“抑制”指导致水平(例如蛋白质或mRNA的水平)与参照样品(如未经siRNA处理的样品)相比总体降低(优选20%或更多，更优选50%或更多，最优选降低75%、90%或95%或更多)的能力。这种RNA或蛋白质表达的降低或抑制可通过靶mRNA的切割或降解而发生。蛋白质表达或核酸表达的测定为本领域已知，包括例如用于蛋白质表达的ELISA、western印迹分析以及用于RNA的northern印迹或RNA酶保护测定。在一些实施方案中，术语“抑制”指完全抑制，即水平下降100%。术语“肽”包含寡肽和多肽，其是指包含通过肽键共价连接的两个或更多个(优选3个或更多个，优选4个或更多个，优选6个或更多个，优选8个或更多个，优选10个或更多个，优选13个或更多个，优选16个或更多个，优选21个或更多个，直至优选8、10、20、30、40或50特别是100个)氨基酸的物质。术语“蛋白质”是指大的肽，优选具有多于100个氨基酸残基的肽，但一般而言，术语“肽”和“蛋白质”在本文中是同义的并可互换使用。优选地，本发明所述的蛋白质和肽已被分离。术语“分离的蛋白质”或“分离的肽”指该蛋白质或肽已从其天然环境中分离出来。分离的蛋白质或肽可以为基本纯化的状态。术语“基本纯化的”指该蛋白质或肽基本不含在自然界或体内与其相关的其它物质。例如，这样的蛋白质和肽可用于产生抗体以及用于免疫测定或诊断测定或作为治疗剂。本发明所述的蛋白质和肽可从生物样品(如组织或细胞勻浆)中分离，也可在多种原核或真核表达系统中重组表达。就本发明的目的而言，蛋白质或肽或者氨基酸序列的“衍生物”包括氨基酸插入变体、氨基酸缺失变体和/或氨基酸替换变体。氨基酸插入变体包括氨基和/或羧基端融合以及在特定氨基酸序列中一个、两个或多个氨基酸的插入。在含有插入的氨基酸序列变体的情形中，一个或多个氨基酸残基被插入氨基酸序列的特定位点中，但也可以随机插入并对所得产物进行适当筛选。氨基酸缺失变体的特征在于从该序列中去除了一个或多个氨基酸。氨基酸替换变体的特征在于去除了该序列中至少一个残基并在其位置插入另一残基。优选地，该修饰位于氨基酸序列中在同源蛋白质或肽之间不保守的位置中和/或将氨基酸替换为具有相似特性的其它氨基酸。优选地，蛋白质或肽或氨基酸序列的“衍生物”是指多至50个，更优选多至20个、多至15个、多至10个、多至8个、多至5个、多至4个、多至3个、多至2个或仅1个氨基酸是被插入、缺失和/或替换的变体。“保守性替换”可以基于例如所涉及残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两性性质的相似性进行。例如(a)非极性(疏水性)氨基酸包括丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和甲硫氨酸；(b)极性中性氨基酸包括甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺；(C)正电荷(碱性)氨基酸包括精氨酸、赖氨酸和组氨酸；和(d)负电荷(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。替换通常在(a)-(d)组内进行。另外，由于可以破坏α-螺旋结构，甘氨酸和脯氨酸可以互相替换。一些优选的替换可在如下组中进行(i)S和T;(ii)P和G;和(iii)A、V、L和I。鉴于已知的遗传密码和重组DNA与合成DNA的技术，熟练的科学家可以很容易地构建编码保守氨基酸变体的DNA。优选地，本文所述特定氨基酸序列与作为所述特定氨基酸序列之衍生物的序列之间的相似性程度(优选同一性)为至少70%，优选至少80%，优选至少85%，更优选至少90%，或者最优选至少95%、96%、97%、98%或99%。相似性或同一性的程度优选针对至少约20个、至少约40个、至少约60个、至少约80个、至少约100个、至少约120个、至少约140个、至少约160个、至少约200个或250个氨基酸的区域而给出。在一些优选的实施方案中，相似性或同一性程度针对参照氨基酸序列的全长而给出。上述氨基酸变体可借助于已知的肽合成技术(例如固相合成(Merrifield，1964)及类似技术)或通过重组DNA操作而容易地制备。用于制备含有替换、插入或缺失的蛋白质和肽的DNA序列操作详细描述于例如Sambrook等(1989)。根据本发明，蛋白质和肽的“衍生物”还包括该蛋白质或肽中任意相关分子(例如碳水化合物、脂质和/或蛋白质或肽)的一个或多个替换、缺失和/或添加。术语“衍生物”还扩展至所述蛋白质和肽的所有功能性化学等同物。根据本发明，蛋白质或肽的部分或片段优选具有其来源蛋白质或肽的功能特性。这样的功能特性包括与抗体相互作用、与其它肽或蛋白质相互作用、选择性结合核酸和酶活性。蛋白质或肽的部分或片段优选包含该蛋白质或肽中至少6个、特别是至少8个、至少10个、至少12个、至少15个、至少20个、至少30个或至少50个连续氨基酸的序列。蛋白质或肽的部分或片段优选包含该蛋白质或肽中多至8个、特别是多至10个、多至12个、多至15个、多至20个、多至30个或多至55个连续氨基酸的序列。蛋白质或肽的部分或片段优选是蛋白或肽的一部分，其对应于非跨膜部分、尤其是蛋白质或肽的胞外部分，或是包含于其中。根据本发明，编码蛋白质或肽的核酸的部分或片段涉及该核酸中至少编码上述蛋白质或肽和/或所述蛋白质或肽的部分或片段的部分。编码蛋白质或肽之核酸的部分或片段优选为该核酸中对应于开放读码框的部分。根据本发明，术语“结合”优选地指特异性结合。“特异性结合”指，和结合其它靶标相比，试剂(例如抗体)与靶标(例如表位)更强地结合。如果试剂与第一靶标的解离常数(Kd)低于与第二靶标的解离常数，那么与第二靶标相比该试剂更强地与第一靶标结合。优选地，试剂特异性结合靶标的解离常数(Kd)比试剂不特异性结合靶标的解离常数(Kd)低出多于10倍，优选多于20倍，更优选多于50倍，更优选多于100倍、200倍、500倍或1000倍。根据本发明，特异性抗体是指特异性与其靶标结合的抗体。这种特异性抗体可以例如是用其靶标(例如MS4A12蛋白或其部分(如其胞外区域))免疫后获得的抗体。可以通过多种标准方法来制备含有特异性结合靶蛋白的特异性抗体的抗血清，参阅例如"MonoclonalAntibodies:APracticalApproach"PhilipShepherd,ChristopherDeanISBN0-19-963722-9；"Antibodies=ALaboratoryManual"EdHarlow,DavidLane,ISBN0879693142L^l^"UsingAntibodies:ALaboratoryManual=PortableProtocolNOldwardHarlow,DavidLane,EdHarlowISBN0879695447。由此还可以产生识别天然形式复杂膜蛋白的亲合(affine)的特异性抗体(Azorsa等，J.Immunol.Methods229=35-48,1999；Anderson等，J.Immunol.1431899-1904，1989；Gardsvoll,J.Immunol.Methods234:107-116,2000)。这特别适用于制备治疗性应用的抗体。就此而言，可以用完整蛋白质、胞外部分序列以及用表达生理折叠形式之靶分子的细胞来进行免疫。常规地使用杂交瘤技术来制备单克隆抗体(技术细节参阅“MonoclonalAntibodies:APracticalApproach，，PhilipShepherd,ChristopherDeanISBN0-19-963722-9；"Antibodies:ALaboratoryManual"EdHarlow,DavidLaneISBN0879693142；"UsingAntibodies:ALaboratoryManualportableProtocolNO"EdwardHarlow,DavidLane,EdHarlowISBN0879695447)。已知抗体分子中仅有一小部分(互补位(paratope))参与该抗体与其表位的结合(参阅Clark,W.R.(1986),TheExperimentalFoundationsofModernImmunology,Wiley&Sons,Inc.,NewYork;Roitt,I.(1991),EssentialImmunology,第七版，BlackwellScientificPublications,Oxford)。例如，pFc，和Fc区是补体级联的效应物，但不参与抗原结合。已酶促去除pFc’区或以无pFc’区方式产生的抗体(称为F(ab’)2片段)带有完整抗体的两个抗原结合位点。类似地，已酶促去除Fc区或以无所述Fc区方式产生的抗体(称为Fab片段)带有完整抗体分子的一个抗原结合位点。此外，Fab片段由共价结合的抗体轻链和所述抗体的部分重链(称为Fd)组成。Fd片段是抗体特异性的主要决定簇(一个Fd片段可与多达10种不同轻链相关联，而不改变抗体的特异性)，分离的Fd片段保留了与表位结合的能力。位于抗体的抗原结合部分中的是与抗原表位直接相互作用的互补决定区(CDR)以及维持该互补位三级结构的框架区(FR)。IgG免疫球蛋白的重链Fd片段及轻链都包含4个框架区(FRl至FR4)，它们各自被3个互补决定区(⑶Rl至⑶R3)分隔开。⑶R特别是⑶R3区(更特别地为重链的⑶R3区)在很大程度上决定了抗体特异性。已知哺乳动物抗体的非CDR区可以替换为具有相同或不同特异性的抗体的相似区域，而保留原始抗体的表位特异性。这使得有可能开发出“人源化”抗体，其中非人CDR与人FR和/或Fc/pFc’区共价连接而产生功能性抗体。作为另一实例，WO92/04381描述了人源化小鼠RSV抗体的产生和使用，其中至少一部分小鼠FR区被替换为人源的FR区。这类抗体(包括具有抗原结合能力的完整抗体之片段)常称为“嵌合”抗体。根据本发明，术语“抗体”还包括抗体的F(ab，)2、Fab、Fv以及Fd片段；Fc和/或FR和/或CDRl和/或CDR2和/或轻链CDR3区已替换为同源的人或非人序列的嵌合抗体；FR和/或CDRl和/或CDR2和/或轻链CDR3区已替换为同源的人或非人序列的嵌合F(ab’)2片段抗体；FR和/或CDRl和/或CDR2和/或轻链CDR3区已替换为同源的人或非人序列的嵌合Fab片段抗体；以及FR和/或CDRl和/或CDR2区已替换为同源的人或非人序列的嵌合Fd片段抗体。术语“抗体”还包括“单链”抗体。抗体还可以与用于展示表达靶抗原之细胞及组织的特异性标记物质偶联。它们还可以与治疗上有用的物质偶联在一起。标记物质包括发挥以下功能的任何标记(i)提供可检测信号；(ii)与第二标记相互作用以改变由该第一或第二标记所提供的可检测信号，例如FRET(荧光共振能转移)；(iii)通过电荷、疏水性、形状或其它物理参数而影响迁移率，例如电泳迁移率；或(iv)提供捕获部分，例如亲和力、抗体/抗原或离子络合。适于作为标记的是诸如以下的结构荧光标记、发光标记、生色团标记、放射性同位素标记、同位素标记(优选稳定同位素标记)、同量异位标记、酶标记、颗粒标记(特别是金属颗粒标记、磁性颗粒标记、聚合物颗粒标记)、有机小分子如生物素、受体的配体或结合分子(如细胞粘附蛋白或凝集素)、包含可使用结合剂检测的核酸和/或氨基酸残基的标记序列等。标记物质包括但不仅限于硫酸钡、碘西他酸(iocetamicacid)、碘番酸、碘泊酸钙(calciumipodate)、泛影酸钠、泛影葡胺、甲泛葡胺、酪泮酸钠以及放射性诊断剂包括正电子发射体如氟-18和碳-11、Y发射体如碘-123、锝-99m、碘-131和铟-111，用于核磁共振的核素如氟和钆。根据本发明，“小分子化合物”是低分子量的化合物，优选地分子量最高20.OOODa,更优选最高15.OOODa、最高10.OOODa、最高7.500Da、最高5.OOODa、最高2.OOODa或最高1.OOODa0优选地，小分子化合物是有机化合物。小分子化合物可以是经修饰或者未经修饰的天然化合物或化学合成的化合物。优选地，小分子化合物不是聚合的化合物。但是，小分子化合物还可以是多核苷酸或多肽。根据本发明，EGF受体是结合表皮生长因子(印idermalgrowthfactor,EGF)的受体。优选地，EGF受体定位于质膜，并且更优选是跨膜蛋白质。优选地，EGF受体是酪氨酸激酶受体，其活性是磷酸化靶蛋白质。优选的EGF受体是人EGFR、人ErbB-I或者人HER1。但是，EGF受体还可以是上述人EGF受体的种间同源物。根据本发明，术语“治疗上有用的物质”指发挥治疗作用的任何分子。根据本发明，治疗上有用的物质包括抗癌剂、放射性碘标记的化合物、毒素、细胞抑制药物或细胞裂解药物等。例如，抗癌剂包括氨鲁米特(aminoglutethimide)、硫唑嘌呤、硫酸博来霉素、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺钼、环磷酰胺、环孢菌素、阿糖胞苷(cytarabidine)、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素(daimorubin)、多柔比星、紫杉醇、依托泊苷、氟尿嘧啶、干扰素-α、洛莫司汀、巯嘌呤、氨甲喋呤、米托坦、盐酸丙卡巴胼、硫鸟嘌呤、硫酸长春碱和硫酸长春新碱。其它抗癌剂描述于例如Goodman和Gilman，“ThePharmacologicalBasisofTherapeutics，，，第八版，1990，McGraw-Hill,Inc.，特别是第52章(AntineoplasticAgents(PaulCalabresiandBruceA.Chabner)。毒素可以是蛋白质如美洲商陆抗病毒蛋白、霍乱毒素、百日咳毒素、蓖麻毒素、白树毒素、相思豆毒素、白喉外毒素或假单胞菌(Pseudomonas)外毒素。毒素残基(toxinresidue)还可以是高能发射的放射性核素，例如钴-60。本发明的术语“患者”指人、非人灵长类或其它动物，特别是哺乳动物如牛、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫或啮齿动物(如小鼠和大鼠)。在一个特别优选的实施方案中，患者为人。根据本发明，术语“提高的”或“量增加的”优选指提高至少10%，特别是至少20%、至少50%或至少100%。此外，术语“提高”还可以指想要提高的效果或者量在提高之前不存在(即为0)但提高之后存在(即大于0)的情况。根据本发明，术语“癌症”包括任何癌症且优选指特征在于表达MS4A12的癌症，即，该癌症的至少一部分癌细胞表达MS4A12。此外，癌症优选地特征在于表达EGF受体，即，至少该癌症的部分癌细胞表达EGF受体。在一个更优选的实施方案中，癌症的特征在于表达EGF受体并表达EGF受体，即，该癌症的至少一部分癌细胞表达MS4A12且该癌症的至少一部分癌细胞表达EGF受体。最优选地，该癌症的至少一部分癌细胞表达MS4A12和EGF受体。根据本发明，术语“癌症”包括癌症转移。在一些优选的实施方案中，癌症是结肠癌，癌症转移是结肠癌转移(即源自结肠癌的癌症转移)。优选地，癌症是癌(carcinoma)如结肠癌，特别是腺癌如结肠腺癌。本文中互换使用术语“结肠癌”和“结直肠癌”，其包括结肠的癌症以及直肠的癌症。类似地，术语“结肠肿瘤”和“结肠癌”也分别包括“结直肠肿瘤”和“结直肠癌”。“肿瘤”是指通过失控的快速细胞增殖而生长并在起始该新生长的刺激停止后继续生长的异常细胞或组织群。肿瘤显示部分或完全缺少结构组织以及与正常组织的功能协调，并且通常形成可为良性或恶性的独立的组织块。优选地，本发明的肿瘤是结肠肿瘤。根据本发明，赘生性细胞(neoplasticcell)是细胞增殖异常提高的细胞。根据本发明，“癌细胞”是参与癌症疾病的细胞，包括肿瘤细胞、白血病细胞和转移的细胞。根据本发明，肿瘤细胞是存在于肿瘤组织中的细胞。优选地，“癌细胞”或“肿瘤细胞”是赘生性细胞。术语“至少部分的癌细胞”优选指至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或约100%的癌细胞。“转移”是指癌细胞从其原始部位扩散到机体的其它部位。转移的形成是非常复杂的过程，其依赖于恶性细胞从原发肿瘤上脱落，侵袭细胞外基质，穿透内皮基底膜进入体腔和血管，然后通过血液转运，渗入靶器官。最后，靶部位新肿瘤的生长依赖于血管发生。即使在已移除原发肿瘤后仍常常发生肿瘤转移，这是因为肿瘤细胞或组分可能保留并产生转移的潜力。在一个实施方案中，本发明的术语“转移”涉及“远处转移”，其表示距离原发肿瘤和局部淋巴结系统很远的转移。根据本发明，“肿瘤样品”是包含一个或更多肿瘤细胞的样品。肿瘤样品可以是组织样品(包括体液)和/或细胞样品，并可以常规方式获得，例如组织活检(包括穿刺活检)以及采集血、支气管抽吸物、痰、尿、粪便或其它体液。根据本发明，术语“肿瘤样品”还包括肿瘤样品的级分。优选地，肿瘤样品获得自患有肿瘤的患者，并优选分离自所述患者。本发明还提供用于施用的核酸、蛋白质或肽。核酸、蛋白质和肽可使用已知的方法施用。例如，可通过使用载体(如病毒和靶标受控性脂质体)在体内施用核酸。根据本发明，如果涉及核酸药物组合物的施用或掺入时，它包括核酸存在于上述载体中的实施方案。在一个优选的实施方案中，施用核酸的病毒或者病毒载体选自腺病毒、腺相关病毒、天花病毒(包括牛痘病毒和减毒天花病毒)、森林脑炎病毒、逆转录病毒、辛德毕斯病毒和Ty病毒样颗粒。特别优选的是腺病毒和逆转录病毒。逆转录病毒通常是复制缺陷的(即它们无法产生感染性颗粒)。体外或体内向细胞中引入核酸的方法包括磷酸钙沉淀核酸转染、与DEAE相关的核酸转染、用携带目的核酸的上述病毒进行转染或感染、脂质体介导的转染等。在在一些具体实施方案中，优选将核酸导入至特定细胞。在这样的实施方案中，用于将核酸施用至细胞的载体(例如逆转录病毒或脂质体)可与靶向控制分子结合。例如，可将诸如特异性针对靶细胞表面膜蛋白的抗体或者针对靶细胞上受体的配体的分子掺入所述核酸载体中或附着于其上。如果期望通过脂质体施用核酸，则可将与胞吞作用相关表面膜蛋白结合的蛋白质掺入该脂质体制剂中，以使靶向控制和/或摄取成为可能。这样的蛋白质包括对特定细胞类型具有特异性的衣壳蛋白或其片段、针对内化蛋白的抗体、可进入胞内位点的蛋白质等。本发明的治疗性组合物可在药物相容性制剂中施用。这样的制剂通常可包含药物相容性浓度的盐、缓冲物质、防腐剂、载体、补充性免疫增强物质如佐剂(例如CpG寡核苷酸、细胞因子、趋化因子、皂苷、GM-CSF和/或RNA)并在适当时包含其它治疗活性化合物。本发明的治疗活性试剂可通过任何常规途径施用，包括注射或输注。例如，可以经口、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、透皮或直肠内施用。反义核酸优选通过缓慢静脉内施用。本发明的组合物以有效量施用。“有效量”是指单独或与其它给药一起获得期望反应或期望效果的量。在治疗特定疾病或特定病症的情形中，期望的反应优选涉及抑制该疾病的病程。这包括减缓该疾病的发展，特别是中断或逆转该疾病的发展。疾病或病症治疗中期望的反应还可以是延缓或预防所述疾病或所述病症的发病。根据本发明，对癌症的治疗还可以包括治疗已形成或即将形成的肿瘤转移的治疗。根据本发明，术语“治疗”包括治疗和预防性治疗(即预防)。本发明组合物的有效量将取决于诸如以下的因素待治疗的病症；该疾病的严重程度；患者的个体参数，包括年龄、生理状况、身高和体重；治疗的持续时间；联合治疗(如果有的话)的类型；具体的施用途径以及类似的因素。本发明的药物组合物优选为无菌的并含有有效量的治疗活性试剂，以产生期望的反应或期望的效果。所施用的本发明组合物的剂量可取决于多种参数，例如施用类型、患者的状况、期望的施用周期等。对于起始剂量不足以在患者中获得反应的情况，可以使用更高的剂量(或通过不同的更加局部的给药途径实现的更有效剂量)。一般地，本发明针对治疗或者产生或提高免疫应答而配制和施用的试剂剂量从Ing至lmg，优选从IOng至100μg。如果需要施用核酸(DNA和RNA)例如siRNA、反义核酸或编码抗体的核酸分子，则配制和施用的剂量是Ing至0.Img0本发明的药物组合物一般以药物相容性的量在药物相容性组合物中施用。术语“药物相容性”是指不与该药物组合物中活性成分的作用发生相互作用的无毒物质。这类制剂通常可含有盐、缓冲物质、防腐剂、载体，适当时还含有其它治疗活性化合物。药用时，盐应当是药物相容性的。然而，非药物相容性的盐可用于制备药物相容性盐，并包括在本发明中。这类药理学及药物相容性盐包括但不仅限于由以下酸制备的盐盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。药物相容性盐也可制备成碱金属盐或碱土金属盐，例如钠盐、钾盐或钙盐。本发明的药物组合物可包含药物相容性载体。根据本发明，术语“药物相容性载体”是指适于对人施用的一种或多种相容性固体或液体填充剂、稀释剂或包封物质。术语“载体”是指与活性成分组合以利于施加的天然或合成性质的有机或无机组分。本发明药物组合物的成分通常使得不发生显著损害所期望药效的相互作用。本发明的药物组合物可包含合适的缓冲物质，例如盐形式的乙酸、盐形式的柠檬酸、盐形式的硼酸和盐形式的磷酸。适当时，所述药物组合物还可包含合适的防腐剂，例如苯扎氯铵、三氯叔丁醇、对羟基苯甲酸酯和硫柳汞。所述药物组合物通常以均一剂型提供，并可以已知的方式制备。本发明的药物组合物可采用例如胶囊剂、片剂、栓剂、锭剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、酏剂的形式，或者采用乳剂的形式。适于肠胃外施用的组合物通常包含活性化合物的无菌含水或非水制剂，其优选与受试者的血液等渗。相容性载体和溶剂的实例为林格液和等渗氯化钠溶液。此外，通常使用无菌的不挥发油作为溶液或悬液的介质。通过以下附图和实施例详细描述本发明，它们仅用于说明目的，并不意在限制。由于这些描述和实施例，本领域技术人员易于理解同样包括在本发明中的其它实施方案。图1.MS4A12表达限于正常结肠粘膜和结肠癌。(A)终点法RT_PCR(左)和定量实时RT_PCR(右)测定正常组织和结肠癌中的MS4A12。对于每一个正常组织，显示了多达5个独立组织样本的平均表达值。误差线，标准差(STD)；虚线，表达取舍值。(B)转染2种独立的siRNA双链体48小时后LoVo结肠癌细胞中MS4A12蛋白表达的沉默。ns-siRNA，非沉默性siRNA(左)。用抗MS4A12/N端抗血清检测正常组织和结肠癌中MS4A12蛋白表达(右)。β-肌动蛋白用作上样对照，细胞角蛋白18(KRT18)用作表皮细胞特异性标记。(C)正常结肠和结肠癌中MS4A12蛋白表达的IHC检测，高表达(MS4A12+++)和低表达(MS4A12+)。图2.MS4A12是CD20样质膜蛋白。(A)预测的MS4A12的质膜拓扑特征。与⑶20高度同源的区域以灰色框表示。⑶转染MS4A12-eGFP的CHO细胞用抗MS4A12-N端的抗血清染色后的IF显微镜分析。(C)用对照siRNA或MS4A12特异性siRNA转染LoVo细胞48小时后用抗MS4A12/N端抗体染色后的IF显微镜分析。(D)FACS分析转染有N端或C端经eGFP标记的MS4A12的CHO细胞。未经透化的和经透化的细胞用兔多克隆抗eGFP抗体和Cy5标记的抗兔第二抗体进行染色。图3.MS4A12介导的钙池操纵性钙内流。(A)转染有MS4A12或仅转染载体作为对照的CHO细胞中Ca2+(ImM)和Sr2+(ImM)内流在用Tg(300nM)进行Ca2+池消耗后进行测量，分别不用(左)或者用(右)已知的SOC阻断剂La3+(25yM)预处理。(B)分别不用(左)或者用(右)La3+(25μM)预处理LoVo细胞，在用Tg(300nM)进行Ca2+池消耗后的Ca2+(ImM)内流。(C)分别不用(左)或者用(右)La3+(25μM)预处理细胞，测量在Ca2+池消耗后应答于EGF(50ηΜ，上排；2ηΜ，下排)的Ca2+内流。(所示结果是3次独立进行的一式三份实验的代表性结果。)图4.MS4A12沉默降低了LoVo结肠癌细胞的增殖。(A)转染siRNA48小时后，将LoVo细胞与50nMEGF培养48小时。通过向新合成的DNA中掺入BrdU来测量增殖。(B)在相同条件下培养的LoVo细胞的细胞周期分析，显示为在不同细胞周期状态下的细胞级分的柱状图。所有的实验均一式三份进行，重复2次，所显示的是所有实验的平均值+/"STD0*ρ<0.05，〃ρ<0.005。图5.MS4A12沉默降低了LoVo结肠癌细胞的运动力和侵袭。(A)在transwell迁移测定中，向上层小室和下层小室添加不同浓度的EGF，12小时后分析化学激活现象(chemokinesis)(细胞运动力)。(B)在添加不同浓度的EGF作为趋化物至下层小室24小时后，分析向Matrigel趋化侵袭的能力。数据针对每个EGF浓度下的未转染对照细胞进行归一化，显示MS4A12敲低(knockdown)对低EGF浓度下的运动和侵袭的影响最大。所有的实验均一式三份进行，重复2次，所显示的是所有实验的平均值+/-STD0*p<0.05，**p<0.005。图6.使用siRNA进行的MS4A12转录物敲低的定量在转染2种独立的MS4A12特异性siRNA双链体48小时后，利用实时RT-PCR对表达MS4A12的结肠癌细胞系LoVo的细胞中MS4A12转录物敲低进行定量。观察到组成型MS4A12mRNA的表达稳定地、可重复地下降了90%，而乱序的非沉默对照双链体则没有任何影响。图7.正常组织中MS4A12表达的IHC分析。用抗MS4A12/N端抗体对获得自睾丸和胃肠组织(除正常结肠粘膜以外)的切片进行免疫组化分析显示检测不到MS4A12染色，不排除这些复合器官组织中存在表达该蛋白质的较小亚群。图8.MS4A12的氨基酸序列比对(A)MS4A12蛋白质序列与CD20家族其它家族成员的比对。MS4A1=SEQIDNO17；MS4A2=SEQIDNO18；MS4A3:SEQIDNO19；MS4A12:SEQIDNO:2。(B)MS4A12蛋白质序列与CD20结构域(pfam04103；SEQIDNO20)的比对。实施例本文中提到的技术和方法以已知的方式实施，并描述于例如Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual,2ndEdition(1989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y中。除非特别指明，包括使用试剂盒和试剂的所有方法均根据生产商的说明进行操作。筛选在肿瘤中异常活化的胎盘特异性基因组织和细胞系重组DNA工作得到了Rheinland-Palatinate州政府的官方许可并按照其规定进行。新鲜冻存的组织作为常规诊断或治疗操作中的人类剩余材料获得。采取预防措施，以避免长时间暴露并将组织保存于_80°C待用。结肠癌细胞系LoVo用DMEM+10%FBS进行培养。用于发现的数据挖掘策略作为第一步，我们利用所有可用的文库创建了一个人的通用表达序列标签(EST)文件，其在dbEST报告文件(ftp://ncbi.nlm.nih.gov/r印ository/dbEST)的物种字段(organismfield)包含关键词“Homosapiens”。为了降低该方法的复杂程度，只有代表了超过100个EST的文库以及编码已知全长基因的EST才予以考虑。下一步，通过从通用文件中提取在文库名、生物、组织类型、器官或者细胞系字段里包含“colon”的所有EST而产生一个结肠组织特异的子文件。我们总共分析了4021个cDNA文库中的6280883个EST。为了补偿几个EST可能来自同一个基因这一事实，结肠组织EST被分为包含共有一个或多个序列高度同一性节段的EST的聚类。相对于通用列表中所有的人EST，对结肠组织EST子文件中的每条序列依次运行序列同源性检索程序blastn(www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)，其同源性严格程度设置为S=300；V=300；B=300；η=-20。对于来自结肠组织子文件的每个查询EST，检索提取出来自通用EST文件中EST项(命中)的列表，其中每个均注明其组织来源并提供“电子Northern”。确定这样的命中列表中不同的非结肠组织的编号作为每个独立EST的结肠组织特异性程度的量度。将该方法获得的所有候选物均提交SMART(http://smart,embl.de/smart)进行基序和结构分析以鉴定出潜在的表面分子。将该方法获得的候选物提交SMART进行基序和结构分析以鉴定出拓扑特征与CD20相似的表面分子(最低要求至少4个疏水区域根据TMHMM可作为跨膜结构域，并且预测出至少一个胞外环区)。RNA分离、RT-PCR和实时RT-PCR如前所述进行RNA提取、第一链cDNA合成、RT-PCR和实时RT-PCR(Koslowski等，CancerRes.64=5988-93,2004)简单来说，根据生产商的说明，用RNeasyMini试剂盒(Qiagen)从冰冻组织提取细胞总RNA，用dT18寡核苷酸作为引物，并用SuperscriptII(Invitrogen-LifeTechnologies,Inc.)进行逆转录。所获得cDNA的完整性通过30个循环的针对P53转录物的PCR扩增进行检验(有义5'-CGTGAGCGCTTCGAGATGTTCCG-3'(SEQIDNO:15)；反义5'-CCTAACCAGCTGCCCAACTGTAG-3'(SEQIDNO:16)；退火温度67V)。对于终点分析，在35个循环的RT-PCR中使用MS4A12特异性寡核苷酸(有义5，-GAGCTTTCCCGTTGTCTGGTG-3，(SEQIDNO11)；反义5，-GCTGAAGAAGACGCTGGTGTC-3'(SEQIDNO12)，60°C退火)。在40个循环的RT-PCR中一式三份进行实时定量表达分析。以HPRT(有义5，-TGACACTGGCAAAACAATGCA-3，(SEQIDNO13)；反义5'-GGTCCTTTTCACCAGCAAGCT-3，(SEQIDNO:14)，62°C退火)归一化后，使用ΔACT计算相对于正常组织定量肿瘤样品中的MS4A12转录物。PCR反应的特异性通过对任意选择的样品的扩增产物进行克隆和测序来验证。抗血清、免疫荧光和免疫组化通过定制的抗体服务(Squarix)产生针对MS4A12重组表达片段(1_63位氨基酸)的多克隆抗血清，并亲和纯化。根据生产商的说明，用VECTORNovaRED底物试剂盒(Vector)对组织冰冻切片进行免疫组化分析。就Western印迹分析而言，使用从以Triton-X裂解的细胞中提取的20μg总蛋白质。用还原性样品缓冲液(Roth，Karlsruhe,Germany)稀释提取物，进行SDS-PAGE，随后电转至PVDF膜(Pall)上。对于免疫染色来说，使用对MS4A12、KRT18(Abeam)和β-肌动蛋白(Abeam)具有反应性的抗体，其后使用与辣根过氧化物酶缀合的山羊抗小鼠和山羊抗兔第二抗体(Dako)检测第一抗体。siRNA双链体设计了两个独立的MS4A12siRNA双链体(Qiagen)，其分别靶向MS4A12mRNA序列(NM017716.1；SEQIDNO1)的344-363位核苷酸(siRNA#l，有义:5，_r(UCAUGGUUGGAUUGAUGCA)dTdT-3，(SEQIDNO:4)，反义:5，_r(UGCAUCAAUCCAACCAUGA)dTdC_3，(SEQIDNO5))以及247-266位核苷酸(siRNA#2，有义5，-r(CAACCGGGUCAAGGAAAUA)dTdA-3，(SEQID而7)，反义5，-r(UAUUUCCUUGACCCGGUUG)dAdC_3，(SEQIDNO:8))。使用非沉默siRNA双链体(有义5，-r(UAACUGUAUAAUCGACUAG)dTdT_5，(SEQIDNO:9)，反义5，-r(CUAGUCGAUUAUACAGUUA)dGdA_3，(SEQIDNO10))作为对照。为进行MS4A12沉默研究，根据生产商的说明，使用HiPerFect转染试剂(Qiagen)以IOnMsiRNA双链体转染细胞。钙成像所有缓冲液均含有125mMNaCl、5mMKClUmMMgCl2、20mMHEPES，并用NaOH将pH调整为7.4。CaCl2和SrCl2以所示终浓度ImM加入到缓冲液中。不含Ca2+的缓冲液含有0.2mMEGTA。Thapsigargin、EGF和La3+按照所示浓度使用。根据生产商的说明，用FLII3RCalcium3测定试剂盒(MolecularDevices)对细胞进行荧光团标记。细胞内钙的变化用奥林巴斯-1X71倒置显微镜和TILLvisION软件(TILLPhotonics)进行记录。在注入各种试剂时在大于50个细胞的视野中记录荧光值。所有测试均一式四份进行，并重复2次。细胞增殖分析转染SiRNA双链体24小时后，将IXIO4个细胞在无血清培养基中培养12小时。向培养基补充EGF(50nM)48小时后，根据生产商的说明，使用DELFIA细胞增殖试剂盒(PerkinElmer)利用WallacVictor2多标记计数器(PerkinElmer)测量新合成DNA链中的BrdU掺入，以分析增殖。所有测试均一式三份进行，并重复2次。细胞周期分析转染siRNA双链体24小时后，将1XIO5个细胞在无血清培养基中培养12小时。向培养基补充EGF(50nM)48小时后，收集细胞，用乙醇固定，并用碘化丙锭染色，然后进行流式细胞术DNA含量分析。使用FlowJo(TreeStar)流式细胞分析软件定量处于不同细胞周期中的细胞。所有测试均一式三份进行，并重复2次。细胞迁移和体外侵袭测定细胞运动力(化学激活现象)测定在具有8.0μm孔径的膜(BDBiosciences)的transwell小室中进行，其中使细胞培养于不同浓度EGF的培养基中。转染siRNA双链体24小时后，将细胞在无血清培养基中培养12小时，然后将4XIO4个细胞加至上层小室。上层和下层小室均含有相同浓度EGF(50、10、2或0.4nM)的培养基。24小时后将迁移到膜底面的细胞固定于冰冷的甲醇中。切下膜，置于显微镜载玻片上，并用Hoechst(Dako)封片以供荧光显微镜镜检。针对每个膜计数5个随机视野(100X放大)中的细胞数。所有实验均一式三份进行。对于体外侵袭测定来说，在上层小室中准备100μ1用无血清培养基稀释成lmg/ml的Matrigel(BDBiosciences)。在37°C孵育小室5小时以形成凝胶。所有测定均一式三份进行，并重复2次。统计学分析使用GraphPadPrism软件包(GraphPadSoftware)利用Kruskal-Wallis非参数ANOVA检验对不同肿瘤阶段和分级的结肠癌样品中归一化的MS4A12mRNA表达水平进行相关性分析。使用GraphPadPrism软件包(GraphPadSoftware)利用非配对t_检验计算，与未经处理的细胞相比，在经siRNA处理的细胞中MS4A12沉默对LoVo细胞的增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭的统计学显著性。结果和讨论应用基因组范围内的数据挖掘策略来搜索用于对结肠癌单克隆抗体治疗的靶标。基于数字cDNA文库消减，该方法发现了对结肠上皮细胞具有极高特异性的、结构类似于⑶20的、具有至少4个作为跨膜结构域的疏水区的分化基因。随后，测试这些候选物在源自该谱系的癌症中的保守性表达。计算机筛选出的与所使用搜索标准完全吻合的命中基因之一是MS4A12。事实上，该分子是MS4A家族的成员，所述MS4A家族包括结构上相关的细胞表面蛋白例如⑶20(MS4A1)、高亲和力IgE受体β链(FeεRIB)(MS4A2)和HTm4(MS4A3)(Ishibashi等，Gene264:87_93，2001；Liang等，Immunogenetics53:357-68，2001;Liang等，Genomics72:119_27，2001)。与MS4A家族中的大多数成员(先前显示为造血或淋巴细胞谱系的分化基因)不同，MS4A12尚未在这些细胞中检测到(Liang等，Immunogenetics53:357_68,2001；Liang等，Genomics72:119_27,2001)。为了确定哪些人组织表达MS4A12，通过特异性终点RT-PCR和定量实时RT-PCR对覆盖较广的27种不同的正常人组织样本(每种组织类型来自多至5个供者)进行分析。如果在终点RT-PCR中如果没有可见的扩增产物并且如果没有超出所有正常非结肠组织样品中表达的平均取舍值+3倍STD(99%)的话，则组织被归类为阴性。发现MS4A12的表达仅限于正常结肠粘膜。在所有其它正常组织中，转录物水平低于标准35个循环RT-PCR的检出限(图la，左图)，只有痕量的MS4A12转录物可在40个循环的定量实时RT-PCR后被检出(图la，右图)，只有1/5睾丸样本略微超出表达取舍值(表1)。表1.通过定量实时RT-PCR检测MS4A12在组织中的表达。针对每种正常组织类型，研究了获得自2-5个不同个体的样本。正常组织的取舍值设定为除结肠之外正常组织中表达平均值+3倍STD(相对表达高于检出限10倍的)。在肿瘤组织中，只有表达值高出检出限至少100倍时才被认定为阳性。权利要求1.降低或者抑制细胞中MS4A12之表达或活性的试剂。2.权利要求1的试剂，其中所述降低或者抑制细胞中MS4A12之表达或活性降低或抑制所述细胞的生长、增殖、生存力、细胞周期进程、迁移、趋化性和/或侵袭。3.权利要求1或2的试剂，其中所述细胞中MS4A12的活性是提高或产生所述细胞对EGF的应答性，其中所述细胞对EGF之应答性的提高优选为所述细胞在下述方面的提高EGF诱导的生长、EGF诱导的增殖、EGF诱导的细胞周期进程、EGF诱导的迁移、EGF诱导的趋化性和/或EGF诱导的侵袭。4.权利要求1-3中任一项的试剂，其选自(i)特异性靶向MS4A12mRNA的siRNA，()能够与编码MS4A12的核酸选择性杂交的反义核酸，(iii)能够选择性结合MS4A12的抗体，和(iv)能够表达(i)的siRNA、(ii)的反义核酸或者(iii)的抗体的核酸分子。5.权利要求1-4中任一项的试剂，其中所述细胞中MS4A12的活性涉及提高或产生所述细胞的钙池操纵性Ca2+内流。6.包含权利要求1-5中任一项之试剂的组合物。7.权利要求6的组合物，其还包含降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂。8.权利要求6或7的组合物，其是药物组合物。9.权利要求1-5中任一项的试剂或权利要求8的组合物，其用于医药中。10.权利要求1-5中任一项的试剂或权利要求8的组合物，其用于治疗癌症或癌症转移。11.降低或者抑制细胞对EGF之应答性的方法，其包括使所述细胞与权利要求1-5中任一项的试剂相接触。12.权利要求11的方法，其还包括使所述细胞与降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂相接触。13.治疗患者中癌症或癌症转移、优选结肠癌或结肠癌转移的方法，其包括向该患者施用权利要求1-5中任一项的试剂。14.权利要求13的方法，其还包括向该患者施用降低或者抑制细胞中EGF受体之表达或活性的试剂。15.权利要求13或14的方法，其中所述组合物降低或者抑制患者中的肿瘤生长、肿瘤侵袭和/或肿瘤转移。16.权利要求13-15中任一项的方法，其中癌细胞中的至少一部分对EGF具有应答性。17.测定细胞对EGF之应答性的方法，其包括测定所述细胞中MS4A12的表达和/或活性的水平。18.权利要求17的方法，其中所述测定细胞中MS4A12的表达水平包括测定所述细胞中MS4A12mRNA和/或MS4A12蛋白质的量，和/或所述测定细胞中MS4A12的活性水平包括测定所述细胞中的钙池操纵性Ca2+内流，其中所述钙池操纵性Ca2+内流优选在存在和不存在降低或抑制细胞中MS4A12之表达或活性之试剂的情况下进行测定。19.权利要求18的方法，其中所述测定细胞中钙池操纵性Ca2+内流包括测定Ca2+或Sr2+进入细胞的量和/或时程，其中Ca2+或Sr2+进入细胞的量和/或时程优选在细胞内Ca2+池消耗之后测定。20.权利要求17-19中任一项的方法，其中所述细胞是肿瘤细胞，并且其中所述方法优选地用于测定肿瘤对EGF的应答性和/或肿瘤针对抗EGF肿瘤疗法的应答性。21.用于提高细胞对EGF之应答性的方法，其包括提高所述细胞中MS4A12的表达或活性。全文摘要本发明涉及可用于治疗、诊断和测试疾病状态(特别是癌症疾病)的涉及MS4A12的方法以及靶向MS4A12的试剂。特别地，本发明涉及降低或抑制MS4A12的表达或活性的试剂、包含这些试剂的组合物以及用于减少、测定或提高细胞对EGF之应答性的方法。文档编号C12N15/113GK101998992SQ200980112819公开日2011年3月30日申请日期2009年3月30日优先权日2008年4月10日发明者乌尔·沙欣,厄兹莱姆·图雷奇,米夏埃尔·科斯洛夫斯基申请人:加尼梅德药物公司;约翰内斯·古滕伯格美因兹大学