专利名称：由ib-qx-样病毒株衍生的感染性支气管炎疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗禽类传染病的疫苗的领域。更具体地，本发明涉及新的抗感染性支气管炎(infectious bronchitis, IB)病毒的疫苗。
背景技术：
感染性支气管炎(IB)病毒是引起家禽(例如，鸡(chicken))呼吸道疾病的冠状病毒。IB病症状包括，例如呼吸窘迫(respiratory distress)，体重下降，产卵下降，坏卵率(frequency of abnormal eggs) ±曾力口，禾口死亡率±曾力口。目前已鉴定出IB病毒的数种不同基因型和血清型。IB病毒的基因分型通常通过测序该病毒Sl (刺突)蛋白编码基因的全部或一部分来完成。Sl蛋白由IB病毒基因组编码的较大S糖蛋白的N-端裂解产物。该S糖蛋白的C-端裂解产物称为S2蛋白。Sl蛋白负责细胞粘附，是IB病毒的主要抗原决定簇。IB病毒的基因型(或"病毒株")例如有 793B, Massachusetts, Italy02, D274, Arkansas, B1648 禾口 D1466。(参见例如 Worthington et al. (June 2008), Avian Pathology 37:247-257)。二十世纪九十年代晚期，在中国发现一种新的IB病毒基因型，称为"QX"(也称〃 QXIBV“)。(参见 Liu et al. (2006) ,Archives of Virologyl51 :1133-1148)。自从鉴定出这株起始的QX基因型后，迄今全球已鉴定出很多种与QX在Sl核苷酸序列水平具有高度相似性/同一性的IB病毒基因型。这些"IB-QX-样"病毒(下文将详述)已经在例如法国、德国、荷兰、比利时、英国、意大利和波兰等国发现。显然，IB-QX-样病毒给禽类产业带来严重危害。尽管IB-QX-样病毒明显地快速出现，迄今尚无特异于这种IB病毒的疫苗或这方面的记载。市售IB疫苗(减毒活毒株)不能保护小鸡抵抗IB-QX-样病毒。因此，该领域需要开发新的疫苗组合物和接种方法以提供抗IB-QX和IB-QX-样病毒的特异性保护作用。发明简述本发明通过提供可以例如在抗IB-QX和IB-QX-样病毒感染的疫苗组合物中作为抗原组分的IB病毒，满足了上述的本领域需求。本发明包括IB-QX-样病毒的减毒活病毒形式。这种减毒活毒株可以通过例如将IB-QX-样病毒连续传代、直至达到足够减毒来制备。 本发明还包括IB-QX-样病毒的灭活形式。用于本发明的IB-QX-样病毒可以通过例如从保藏的IB-QX-样病毒株、野生的IB-QX-样病毒感染病例获得，或通过构建重组IB病毒以表达指定的、预先确定的基因节段如具体Sl基因序列而获得。本发明还提供了含IB-QX-样病毒的减毒活毒株或灭活毒株的疫苗组合物，以及制备IB-QX-样病毒的减毒活毒株和/或灭活毒株的方法。本发明还提供了给禽接种以抵
4抗感染性支气管炎的方法，具体是，对所述禽接种含IB-QX-样病毒的减毒活毒株或灭活毒株的疫苗组合物。本发明其它方面经以下的发明详述和实施例描述之后是显而易见的。
无。发明详述本发明提供了分离的、从IB-QX-样病毒衍生的IB病毒。本文中，术语"IB-QX-样病毒"是指具有以下Sl蛋白的任何病毒，编码所述蛋白的核苷酸序列与编码原始IB-QX病毒株Sl蛋白的核苷酸序列至少95%相同。编码原始 IB-QX病毒株Sl蛋白的核苷酸序列见SEQ ID NO 1 (表1)，能从NCBI Genbank以登录号 AF193423 获得。
权利要求
1.分离的感染性支气管炎(IB)病毒，其衍生自IB-QX-样病毒。
2.权利要求1的分离的IB病毒，其中所述分离的IB病毒是灭活的。
3.权利要求1的分离的IB病毒，其中所述分离的IB病毒是活的而且减毒的。
4.权利要求3的分离的IB病毒，其中所述分离的IB病毒是通过传代而减毒的。
5.权利要求4的分离的IB病毒，其中所述分离的IB病毒是通过传代至少5次而减毒的。
6.权利要求5的分离的IB病毒，其中所述分离的IB病毒是通过传代至少50次而减毒的。
7.权利要求1的分离的IB病毒，其衍生自具有病毒株命名L-1148的IB-QX-样病毒。
8.权利要求1的分离的IB病毒，其衍生自具有病毒株命名1449-2或1449-10的 IB-QX-样病毒。
9.权利要求1的分离的IB病毒，其衍生自具有含氨基酸序列SEQIDNO :2的Sl蛋白的IB-QX-样病毒。
10.权利要求1的分离的IB病毒，其衍生自具有含氨基酸序列SEQIDNO :3或SEQ ID NO 4的Sl蛋白的IB-QX-样病毒。
11.疫苗组合物，包含(i)分离的衍生自IB-QX-样病毒的感染性支气管炎(IB)病毒； 和(ii)可药用载体。
12.权利要求11的疫苗，其中所述分离的IB病毒是灭活的。
13.权利要求12的疫苗，还包含至少一种佐剂。
14.权利要求11的疫苗，其中所述分离的IB病毒是活的而且减毒的。
15.权利要求11的疫苗，还包含至少一种另外的衍生自非-IB-QX-样病毒的减毒活IB 病毒。
16.权利要求15的疫苗，其中所述至少一种另外的减毒活IB病毒衍生自选自下组的非-IB-QX-样病毒:793B, Massachusetts, Italy-02, D274, Arkansas, D1466, B1648,禾口 Georgia_980
17.权利要求11的疫苗，还包含一或多种另外的抗原性组分，所述抗原组分衍生自除了 IB病毒以外的传染性生物。
18.权利要求17的疫苗，其中所述另外的抗原性组分衍生自新城疫病毒，Marek病病毒，传染性Bursal病病毒，呼肠孤病毒，禽流感病毒，鸡贫血病毒，或禽脑脊髓炎病毒。
19.制备活的减毒感染性支气管炎(IB)病毒的方法，该方法包括在家禽胚卵对 IB-QX-样病毒进行传代。
20.权利要求19的方法，其中所述IB-QX-样病毒在家禽胚卵中传代5-400次。
21.权利要求20的方法，其中所述IB-QX-样病毒在家禽胚卵中传代10-100次。
22.对鸟进行抗感染性支气管炎(IB)的免疫接种的方法，该方法包括对所述鸟施用权利要求11的疫苗。
23.保护禽类宿主以抵抗感染性支气管炎(IB)QX或QX-样病毒的方法，包括对所述禽类宿主施用疫苗，所述疫苗基本上由致免疫有效量的、在102-106TCID50/禽类宿主的适当量范围内的IB QX或IB QX-样病毒减毒活毒株组成。
24.权利要求23的方法，包括施用约IO5TCID5c/所述禽类宿主。
25.权利要求23或M的方法，其中所述禽类宿主是鸡。
26.权利要求23-25之一的方法，其中所述疫苗通过滴眼液或通过喷雾来施用。
27.权利要求23-26之一的方法，其中所述QX或QX-样病毒是通过胚卵传代来减毒的。
28.权利要求27的方法，其中所述减毒病毒传代了至少30次。
29.权利要求观的方法，其中所述减毒病毒传代了至少65次。
30.权利要求观的方法，其中所述减毒病毒传代了至少70次。
31.权利要求四的方法，其中所述减毒病毒传代了至少80次。
32.权利要求30的方法，其中所述减毒病毒传代了至少85次。
33.权利要求23-33之一的方法，包括施用以下一或多种病毒株在欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC)以临时保藏号09061002进行保藏的IB QXL1148MSV65，在ECACC以临时保藏号09061004进行保藏的IB QX L1148AMSV80，在ECACC以临时保藏号09061003进行保藏的IB QX L1148A MSV65x+5，或者在ECACC以临时保藏号09061001进行保藏的IB QXL1148A MSV80x+5。
34.权利要求23-33之一的方法，还包括进行免疫接种以抵抗一或多种除了anIB病毒以外的额外传染性生物。
35.分离且减毒的、衍生自IB-QX-样病毒的感染性支气管炎(IB)病毒，所述病毒选自以下病毒株在ECACC以临时保藏号09061002进行保藏的IB QX L1148MSV65，在ECACC以临时保藏号09061004进行保藏的IB QX L1148A MSV80，在ECACC以临时保藏号09061003 进行保藏的IB QX L1148A MSV65x+5，或者在ECACC以临时保藏号09061001进行保藏的IB QX L1148AMSV80x+5。
全文摘要
本发明涉及感染性支气管炎(IB)病毒，其衍生自最近鉴定出的IB病毒基因型IB-QX，或衍生自与IB-QX遗传相关的病毒(在本文中称IB-QX-样病毒)。本发明的IB病毒可以是活病毒，以及减毒病毒或者灭活病毒。本发明的减毒活IB病毒可以通过对IB-QX-样病毒进行系列传代而制得。本发明的IB病毒有多方面用途，其中包括，用于抗IB-QX和IB-QX-样病毒的疫苗。Heretofore，已知的IB病毒疫苗株被证实不足以提供抗IB-QX和IB-QX-样病毒引起的感染性支气管炎的保护作用。
文档编号C12N7/08GK102239252SQ200980139962
公开日2011年11月9日 申请日期2009年8月7日 优先权日2008年8月8日
发明者吉尔特·J·贝尔姆, 哈曼·J·吉尔里格斯, 巴斯琴纳·G·E·斯特曼, 辛迪·A·M·迈因德斯 申请人:惠氏有限责任公司