专利名称：一种Asia 1型FMDV复合多表位的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种Asia 1型FMDV复合多表位，特别是涉及一种以Asia 1型FMDV 衣壳蛋白VPl抗原活性区域为骨架的Asia 1型FMDV复合多表位(蛋白)，本发明还涉及编 码该复合多表位(蛋白)的多核苷酸，以及应用这一复合多表位所构建的基因工程疫苗。
背景技术：
口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease, FMD)是由 口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)引起的以牛、猪、羊等多种偶蹄动物为感染对象的一种急性、热性、高 度接触性传染病。该病具有传播扩散迅速、宿主范围广、发病率极高、流行极广等特点，因此 被世界动物卫生组织(OIE)定为必报传染病之一，我国亦将其列为一类传染病。目前，已 发现的口蹄疫病毒有七个血清型(0、A、C、Asia 1和SAT USAT 2、SAT 3)，以及80多种亚 型，血清型间不存在交叉免疫保护，并且病毒极易发生变异。自17世纪有记载以来，口蹄疫 的每一次暴发都会给国家带来巨大的经济损失和严重的政治影响，如1967-1968年英国经 历了一次口蹄疫的大规模流行暴发，超过430 000头牲畜被捕杀；2001年口蹄疫在英国大 规模暴发，之后蔓延到法国、爱尔兰、荷兰等欧洲大陆国家，这一次仅英国农业损失就已超 过31亿欧元。我国于2005年3月首次报道了在香港发生Asia 1型FMD，随后，在2005年 4月，报道了中国大陆发生了 Asia 1型FMD。截止2006年9月，中国有15个地区以上发生 了 Asia 1 型 FMD。与发达国家采取捕杀政策不同，大多数发展中国家以普遍免疫的方法来防控该 病，而我国则采取计划免疫和捕杀相结合的方法。目前我国广泛使用的FMD疫苗主要是灭 活苗，尽管其在FMD防治中占有重要地位，但在生产和使用过程中仍然存在病毒扩散、灭活 不彻底等安全隐患，因此，研制安全、高效的新型疫苗，对于我国防控口蹄疫是非常重要的。纵观口蹄疫疫苗的研究历史，主要经历了不断改进和完善的四个阶段动物组织 灭活苗(20世纪20 40年代)、减毒活疫苗(20世纪50 80年代)、细胞培养病毒灭活 苗(20世纪70年代后应用)、新型疫苗(20世纪80年代后至今)。近年来，随着分子生物 学的发展，以及新免疫理论的提出，使得新型疫苗的研究成为焦点。从安全性、高效性、广谱 性、经济性和可操作性上看，新型疫苗都存在着传统疫苗不可比拟的优势，新型疫苗的出现 为控制并最终消灭FMD带来了新的希望。目前，口蹄疫新型疫苗主要包括合成肽疫苗、蛋 白质载体疫苗、基因缺失疫苗、可饲疫苗、活载体疫苗、亚单位疫苗、核酸疫苗等。多表位疫苗(multi-印itope vaccine)作为新型疫苗的一种，是基于抗原表位的 氨基酸序列而制备的，可同时携带多个目标抗原相关表位以及辅助性表位的疫苗，也称鸡 尾酒式疫苗，是近年来发展起来的一种独特的疫苗设计思路。一般来说，免疫系统识别、递 呈抗原仅需要十几个氨基酸，而与抗体结合仅需要几个氨基酸，因此多表位疫苗可根据设 计需要包含大量的抗原信息，可有效地应对如流感病毒(IV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、丙 型肝炎病毒(HCV)、口蹄疫病毒(FMDV)等具有多个血清型、型间无交叉保护或交叉保护率 低、变异性高的病原微生物，从而减少因病原体变异而造成的疫苗免疫失败。另外，由于多表位疫苗可将多种表位进行串联，有目的的增加某类表位的数量，因此在加强细胞免疫方 面具有独特的优势。1982年Bittle等首次报道了用化学合成的FMDV短肽免疫动物获得成功，揭开了 FMDV多表位疫苗研制的序幕。从此，Bittle，Morgand, Zamorano等国内外研究工作者对 FMDV表位及表位疫苗进行了大量的研究，为FMDV表位疫苗的发展积累了宝贵的经验。目前 研究表明，FMDV衣壳蛋白VPl大部分暴露于病毒粒子表面，是决定病毒抗原性的主要成分。 其第141 160位和200位 213位氨基酸残基是FMDV的主要抗原区，能诱导动物产生中 和抗体，同时也是抗原性的高变区。以VPl全基因或其重要的抗原表位为基础的基因工程 疫苗是现今研究最多的FMD新型疫苗。研究已证实，抗原对机体免疫系统的刺激是通过抗原表位来实现的，因此对抗原 表位的研究现已成为筛选候选疫苗的主要手段之一。但是由于抗原表位数量庞大，通过 传统方法筛选和鉴定表位，费时费力，难以筛选出有效地优势表位。随着分子生物学的发 展，核酸序列、蛋白质序列及结构信息的数量逐渐增加，并建立了相应数据库以供参考，为 免疫生物信息学(Immuno-bioinformatics)的建立打下了基础，使得应用生物信息学软 件对表位进行预测成为可能。经过20多年的发展，目前已经存在有多种表位预测的软 件、数据库及网络服务器。如用于CTL功能表位预测的“BIMAS (http //www-bimas. cit. nih. gov) ”、“SYFPEITHI (http //www. syfpeithi. de)，，、"Predict (http //sdmc. lit. org. sg /predict-demo)，，、"EPIPREDICY(http://www. epipredict. de)，，等；用于 B 细胞表位 予页测的"SYFPEITHI，，、"Bcepred(http://www. imtech. res. in/raghava/bcepred/bcepred_ submission, html) BepiPred (http : //www. cbs. dtu. dk/services/BepiPred/)，，、 "ABcpred (http: //www. imtech. res. in/raghava/abcpred) ” 等；用于 Th 表位预 贝Ij 白勺 "mhc2pred(http//www. imtech. res. in/raghava/mhc2pred/) " MHCPred(http://www. jenner. ac. uk/MHCPred/) " Propred (http://www. imtech. res. in/raghava/propred/)”。 所应用的预测方法主要包括简单基序法(simple motify)、人工神经网络(ANNs)、隐马尔 可夫模型(HMMs)、分子模型法(spatial structure based method)、频率分析及定量矩阵 法(frequency matrix)、支持向量机器法(SVMs)等。
发明内容
本发明的目的是提供一种包含Asia 1型FMDV多个毒株表位的复合多表位，以及 编码该复合多表位的DNA疫苗。为达到上述目的，本发明首先提供一种Asia 1型FMDV复合多表位(CTE-Asia)，其 是以Asia 1型FMDV衣壳蛋白VPl抗原活性区域为基础骨架，包含有Asia 1/JL/05株VPl 的抗原表位、IND 63/72株VPl的抗原表位和YNBS/58株VPl的抗原表位，以及霍乱毒素B 亚单位(CTB)和辅助性T淋巴细胞表位(Th)。其中，所述Asia 1/JL/05株VPl的抗原表位为RLHTDVAFVLDRFVKLTQPKS，TTYGKESSRRGDLAALARRVNNRLP,以及LLALDTTQDRRKQKIIAPEKQTLNFD。其中，所述IND 63/72株的VPl的抗原表位为
KKPITRLALPYTAPHR，以及TYGTQPTRRGDLAVLAQRVSNRLPTSFNY。其中，所述YNBS/58株VPl的抗原表位为
KTTYGEESTRRGDFAALAQRLSRRL,以及KADTITELLIR。上述各表位序列之间通过柔性氨基酸Linker连接。本发明还提供用一种具有上述复合多表位的蛋白，在本发明的一个优选的实施方 式中，该复合多表位蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo. 2所示。本领域技术人员可根据该序列， 在不影响其活性的前提下，取代、缺失和/或添加加一个或几个氨基酸，得到所述蛋白的突 变序列。例如将第249-251位的AAA替换为GPGPG，或者将第132-136位的GGGGS缺失，或 者在第221位添加GP。因此，本发明复合多表位蛋白还包括SEQ ID No. 2所示氨基酸序列 经取代、替换和/或增加一个或几个氨基酸，具有同等功能的由SEQ ID No. 2衍生得到的蛋 白质。本发明还包括编码上述复合多表位或蛋白的基因。在本发明实施例中，编码该复 合多表位蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。应理解，考虑到密码子的简并性以 及不同物种密码子的偏爱性，本领域技术人员可以根据需要使用适合特定物种表达的密码 子。可将本发明上述基因与表达载体可操作地连接，得到能够表达本发明复合多表位 蛋白的重组表达载体。本发明复合多表位蛋白是具有良好的免疫原性，能够使动物体免疫系统产生针对 FMDV的抗体，从而对FMDV产生预防或治疗作用。进而本发明提供一种复合多表位疫苗，其 包括上述的复合多表位蛋白和可接受的载体。本发明还提供一种DNA疫苗，其编码上述复合多表位蛋白。本领域技术人员根据 复合多表位，可以设计相应的核苷酸序列，这种核苷酸序列能够在体内通过生物体的转录 和表达系统产生该复合多表位蛋白。上述技术方案具有如下优点通过详尽了解Asia 1型FMDV基因组结构及其与免 疫紧密相关的抗原表位的基础上，结合以专业网络服务器(CTL Pred :http://www. imtech. res. in/cgibin/ctlpred/ctlpred. pi、Bce Pred :http://www.imtech. res. in/raghava/ bcepred禾口 Harvard :http://bio. dfci. harvard. edu/Tools/antigenic. pi 表位预 贝|J结果， 甄选了 Asia 1/JL/05株VPl的3个抗原活性区域、IND 63/72株的VPl的2个抗原活性区 域和YNBS/58株VPl的2个抗原活性区域。通过柔性小分子多肽Linker，将这些抗原活性 区域组合在一起，应用化学合成获得Asia 1型FMDV多表位基因(Epi-Asia)。利用分子生 物学手段，将末端带有Linker的霍乱毒素B亚单位和辅助性T淋巴细胞表位与Asia 1型 FMDV多表位相连，获得Asia 1型FMDV复合多表位基因(CTE-Asia)。将该Asia 1型FMDV 复合多表位，利用分子生物学软件DNAStar和Insight II进行二级结构和三级结构的预 测，证明复合多表位中相邻表位间二级结构的相互影响较少，并且具有较高的抗原性；同时 有多个表位外显于分子表面，特别是复合多表位Epi-Asia部分，说明设计的复合多表位符 合理论要求，有望成为较好的免疫原。该复合多表位可用于Asia 1型FMDV亚单位疫苗、核 酸疫苗、合成肽疫苗、活载体疫苗等多种基因工程疫苗的制备。
图1是本发明实施例克隆载体pBluescript II KS-Epi-Asia结构图；图2是本发明实施例克隆载体pBluescript II KS-CTE-Asia结构图；图3是本发明实施例Asia 1型FMDV复合多表位(CTE-Asia)的核苷酸与氨基酸 序列及注释。
具体实施例方式下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式
作进一步详细的描述。以下实 施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。本发明综合利用分子生物学、分子病毒学、分子免疫学、生物信息学等不同学科知 识、技术，结合生物信息学模拟、分子设计、表位选择以及基因重组技术，针对引起FMD的病 原体FMDV以及FMD研究领域的经验、教训和最新研究成果，综合考虑FMDV的特性、基因组 结构和特点以及与免疫紧密相关的问题，在分子水平上构建了一种针对Asia 1型FMD的新 型复合多表位(CTE-Asia)。该复合多表位的设计符合理论要求，有望成为较好的免疫原。 可用于Asia 1型FMDV亚单位疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗、活载体疫苗等多种基因工程疫 苗的制备。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。 实施例中大肠杆菌感受态细胞的制备与转化、质粒的提取及限制性内切酶消化、DNA片段的 回收、线性DNA片段的连接、重组质粒的筛选与鉴定等参照金冬雁、黎孟枫等译《分子克隆 实验指南》第二版相关章节进行。实施例1 Asia 1型FMDV复合多表位的构建通过详尽了解Asia 1型FMDV基因组结构及其与免疫紧密相关的抗原表位的基础 上，选择中国Asia 1型FMDV的流行毒株，结合以专业网络服务器(CTL Pred:http://www. imtech. res. in/cgibin/ctlpred/ctlpred. pi、Bce Pred :http://www.imtech. res. in/ raghaVa/bcepred 和 Harvard :http://bio. dfci. harvard. edu/Tools/antigenie, pi)表位 预测结果进行调整，使得到的抗原活性区域尽可能处于多个表位的交集区。以小分子柔性 氨基酸连接甄选的抗原活性区域，形成一段新的人工多表位序列。进行全基因化学合成。 利用分子生物学手段，将末端带有Linker的霍乱毒素B亚单位和辅助性T淋巴细胞表位与 Asia 1型FMDV多表位相连，获得Asia 1型FMDV复合多表位基因(CTE-Asia)。所选抗原活性区域如下表所示 1、Asia 1型FMDV多表位基因的合成由捷瑞生物工程(上海)有限公司，采用全基因合成的方法进行人工化学合成，并 克隆到pBluescript II KS载体中，命名为pBluescriptll KS-Epi-Asia，其质粒图谱如图 1所示。2、Asia 1型FMDV复合多表位基因的构建用BamHI 和 EcoR I 双酶切质粒 pBluescript II KS_CTB_Th2 经琼脂糖凝 胶电泳后，回收目的片段CTB-Th2，在16°C下连入以EcoR I和Bgl II双酶切的质粒 pBluescript II KS-Epi-Asia 中，利用 BamHI 和 Bgl II 是同尾酶，得到质粒 pBluescript II KS-CTB-Th2-Epi-Asia，即 pBluescript II KS-CTE-Asia0所获得Asia 1型FMDV复合多表位基因克隆质粒图谱如图2所示。3、Asia 1型FMDV复合多表位的二级结构分析利用分子生物学软件DNAStar对Asia 1型FMDV复合多表位进行二级结构分析， 结果表明多数Linker在两个肽段或表位之间形成柔性区域和转角，同时许多表位均有出 现在分子表面的可能性，且复合多表位具有较高的抗原性。4、Asia 1型FMDV复合多表位三级结构的预测利用分子生物学软件Insight II对Asia 1型FMDV复合多表位进行三级结构预 测，结果表明有多个表位外显于分子表面，符合多表位的设计要求。5、Asia 1型FMDV复合多表位基因在毕赤酵母中的表达(1)毕赤酵母表达载体的构建用Not I和EcoR I双酶切质粒pBluescript II KS-CTE-Asia和毕赤酵母表达载 体PPIC9K，回收目的片段，在16°C下连接，得到表达质粒pPIC9K-CTE-Asia。利用碱裂解法 大量制备 pPIC9K-CTE-Asia，保存于 _70°C。(2)表达载体电转化进入毕赤酵母中将毕赤酵母GS115接种于200mL新鲜的YPD培养基中，30°C过夜培养至OD6tltl介于 1. 3 1. 5之间；4°C、3000r/min离心IOmin集菌，分别用200mL冰冷的去离子水和IOmL冰 冷的山梨醇(lmol/L)洗涤菌体沉淀，以400 μ L山梨醇重悬沉淀，备用。取Bgl II线性化的重组质粒10 μ L(约含DNA 5 20 μ g)与80 μ L上述感受态 细胞混勻后，转入电转杯中电击。条件为电压1500V，时间5ms。加入ImL冰冷的山梨醇重 悬菌体后，涂布于MD平板上。
(3)毕赤酵母阳性克隆的筛选用牙签挑取待检菌落分别接种于MD和匪琼脂培养基上，30°C培养2 4d，选取 MD培养基生长良好，而MM培养基生长缓慢或不生长的菌落。以玻璃珠法提取上述酵母基因组DNA，分别用特异性引物和酵母通用引物进行 PCR鉴定。
(4)毕赤酵母阳性克隆的诱导表达将鉴定正确的毕赤酵母菌落接种于YPD中，30°C培养16 18h，取ImL接种于50mL BMGY培养基中，当菌体0D_为2 6时，离心收集菌体，用25mL诱导培养基BMMY重悬， 28°C培养48h，每隔24h加入100%甲醇至终浓度为1.0%。48h以后，离心回收上清液，保 存于-70°C。(5)表达上清中目的蛋白的SDS-PAGE和Western blot检测取酵母表达上清液利用SDS-PAGE进行检测，同时分别以兔抗Asia 1型FMDV血清 和兔抗霍乱毒素血清作为一抗，对目的蛋白进行蛋白免疫印迹分析。结果表明Asia 1型FMDV复合多表位基因可在真核宿主毕赤酵母GSl 15中进行 表达，并且表达产物可被Asia 1型FMDV血清和兔抗霍乱毒素血清所识别，具有抗原活性。6、Asia 1型FMDV复合多表位亚单位疫苗的小鼠免疫实验(1)小鼠免疫程序取6-8周龄雌性BALB/c小鼠15只，共免疫两次，间隔21d，每次免疫亚单位疫苗 40yg/只，采取腹腔注射方式，首免混以弗氏完全佐剂，次免混以弗氏不完全佐剂。分别于 0d、7d、14d、21d、31d尾静脉采血，进行血清ELISA抗体分析。二免后10d，取小鼠脾脏，制备 脾淋巴细胞悬液，进行淋巴细胞增殖转化试验和IFN y -ELISP0T检测。(2)免疫小鼠血清ELISA抗体检测采用间接ELISA方法测定免疫小鼠血清中特异性IgG抗体水平。其方法为用包 被液稀释甲醛灭活的Asia 1型FMDV，100yL/孔，4°C过夜包被ELISA板；次日，用洗涤液洗 板3次，每次3min，最后一在滤纸上浙干，加入封闭液100 μ L/孔，37°C封闭Ih ；洗板后，力口 入待检血清100 μ L/孔(PBS稀释100倍)，37°C孵育Ih ；洗板后，加入辣根过氧化物酶标记 的抗鼠IgG抗体(PBS稀释)37°C孵育Ih ；洗板后，加入100 μ L/孔底物溶液，置暗处5 15min后，加入50 μ L/孔终止溶；检测492nm下的OD值。结果表明Asia 1型FMDV复合多表位可以刺激小鼠机体产生针对Asia 1型FMDV 的特异性抗体。(3)免疫小鼠脾淋巴细胞悬液的制备无菌条件下取出脾脏，用载玻片将小鼠脾脏磨碎，使细胞重悬于4mL小鼠淋巴细 胞分离液中，以尼龙网(200目)将细胞悬液滤到IOmL离心管内，贴壁加入ImL无血清 RPMI-1640，于1500r/min离心15min，吸取淋巴细胞层于新的离心管中，加入4mL 5%血清 的RPMI-1640，混勻，1500r/min离心15min，弃去上清液，加入ImL 10%血清的RPMI-1640 重悬脾淋巴细胞。用血球计数板进行计数，调整淋巴细胞悬液浓度为IX IO7个细胞/mL。(4)小鼠脾淋巴细胞转化增殖实验取96孔细胞培养板，加入稀释的淋巴细胞50 μ L/孔(含2X IO4个)，每个样品 包括非特异性刺激(ConA)、特异性刺激(FMDV)和无刺激(RPMI-1640)，相应的加入50 μ LConA (终浓度为5 μ g/mL)、灭活的FMDV (IMOI)以及培养液，样品各种刺激均设3个复孔。将 培养板置于细胞培养箱中60h后，每孔加入10 μ L WST-I溶液继续培养l_4h。测定450nm 吸光值，计算刺激指数(Si)。刺激指数(Si)=刺激孔OD值/对照孔OD值结果表明经特异性抗原刺激后，小鼠脾淋巴细胞表现出特异性的转化增殖现象。
(5)小鼠脾淋巴细胞IFN- y ELISP0T检测按照北京达科为生物技术有限公司Quick Spot小鼠IFN- y ELISPOT预包被试剂 盒使用说明书进行。①预包被板活化每孔加入200 μ L的RPMI-1640培养基，室温静置 lOmin，倾倒培养基。②加淋巴细胞按照实验卡片的安排加入样品细胞，每孔100 μ L(含 1 X IO5个细胞)。设正对照孔和负对照孔。③加刺激物正对照孔加入100 μ L ConA (终浓 度为5 μ g/mL)；负对照孔加入100 μ L 10%血清的RPMI-1640 ；样品孔加入100 μ L特异性 刺激物。④培养放于细胞培养箱中培养36h。⑤裂解细胞弃去孔内液体，加入预冷的去 离子水200 μ L/孔，4°C冰箱静置lOmin。⑥洗板弃去孔内液体，用IXWashing buffer洗 涤7次，每次30s。最后一次，在滤纸纸上扣干。⑦检测抗体孵育每孔加入100 μ L稀释的 生物素标记抗体，37°C孵育lh。⑧亲和素孵育洗板，加入100 μ L/孔稀释好的酶标亲和素， 37°C孵育lh。⑨显色洗板，加入配好的AEC显色液100 μ L/孔，室温避光显色约25min。 待斑点生长到适合的大小时，以去离子水洗涤2遍，终止显色。在滤纸上拍干细小的水珠， 取下底部的保护层，放在通风的地方，使膜自然晾干。⑩计数ELISP0T板斑点计数。结果表明经特异性抗原刺激后，小鼠脾淋巴细胞表现出特异性的IFN- Y分泌现 象。结合小鼠脾淋巴细胞转化增殖实验表明Asia 1型FMDV复合多表位可以刺激小鼠机 体产生针对Asia 1型FMDV的特异性细胞免疫。上述实验表明，本发明所设计的新型Asia 1型FMDV复合多表位中相邻表位间二 级结构的相互影响较少，并且具有较高的抗原性，同时有多个表位外显于分子表面，符合多 表位的设计要求，有望成为较好的免疫原。同时，Asia 1型FMDV复合多表位基因可在真核 宿主毕赤酵母GSl 15中进行表达，表达产物可被Asia 1型FMDV血清和兔抗霍乱毒素血清 所识别，具有抗原活性。小鼠免疫实验表明，以Asia 1型FMDV复合多表位为亚单位疫苗不 仅可以刺激小鼠机体产生特异性体液免疫，同时还可以产生特异性细胞免疫。本发明所设计的新型Asia 1型FMDV复合多表位具有较高的抗原性，可用于Asia 1型FMDV亚单位疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗、活载体疫苗等多种基因工程疫苗的制备，具 有良好的发展前景。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
权利要求
一种Asia 1型FMDV复合多表位，该复合多表位以Asia 1型FMDV衣壳蛋白VP1抗原活性区域为基础骨架，包含有Asia1/JL/05株VP1的抗原表位、IND 63/72株的VP1的抗原表位、YNBS/58株VP1的抗原表位以及霍乱毒素B亚单位和辅助性T淋巴细胞表位。
2.如权利要求1所述的复合多表位，其中所述Asia1/JL/05株VP1的抗原表位为 RLHTDVAFVLDRFVKLTQPKS，TTYGKESSRRGDLAALARRVNNRLP,以及 LLALDTTQDRRKQKIIAPEKQTLNFD。
3.如权利要求1所述的复合多表位，其中所述IND63/72株的VP1的抗原表位为 KKPITRLALPYTAPHR,以及TYGTQPTRRGDLAVLAQRVSNRLPTSFNY。
4.如权利要求1所述的复合多表位，其中所述YNBS/58株VP1的抗原表位为 KTTYGEESTRRGDFAALAQRLSRRL,以及KADTITELLIR。
5.如权利要求1 4任一项所述的复合多表位，其特征在于，所述各表位序列之间通过 柔性氨基酸Linker连接。
6.一种复合多表位蛋白，其具有权利要求1 5任一项所述的复合多表位。
7.如权利要求6所述的复合多表位蛋白，其特征在于，所述复合多表位蛋白为1)SEQID No. 2所示氨基酸序列组成的蛋白；或，2)由SEQID No. 2所示氨基酸序列经替换、缺失和/或增加一个或几个氨基酸得到的 与1)具有相同功能的蛋白。
8.编码权利要求1 5任一项所述复合多表位或权利要求6或7所述复合多表位蛋白 的基因。
9.含有权利要求8所述基因的重组载体。
10.一种复合多表位疫苗，其包含权利要求6或7所述的复合多表位蛋白和可接受的载体。
全文摘要
本发明提供了一种Asia 1型FMDV复合多表位，该复合多表位以Asia 1型FMDV衣壳蛋白VP1抗原活性区域为基础骨架，包含有Asia 1/JL/05株VP1的抗原表位、IND 63/72株的VP1的抗原表位、YNBS/58株VP1的抗原表位以及霍乱毒素B亚单位和辅助性T淋巴细胞表位。该复合多表位可用于Asia 1型FMDV亚单位疫苗、核酸疫苗、合成肽疫苗、活载体疫苗等多种基因工程疫苗的制备。
文档编号C12N15/63GK101838319SQ20101018073
公开日2010年9月22日 申请日期2010年5月24日 优先权日2010年5月24日
发明者朱战波, 李昌, 李霄, 杜寿文, 田明尧, 胡博, 金宁一, 金扩世, 鲁会军 申请人:吉林大学