专利名称：一株植物乳杆菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株植物乳杆菌及其应用。
背景技术：
乳酸菌细菌素(Bacteriocins of LAB)是指乳酸菌在代谢过程中通过核糖体合成 的一类具有抗菌活性的多肽或蛋白质类物质。它们通常可以抑制一些常见的腐败菌和致病 菌，如金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌等。而且大部 分乳酸菌细菌素稳定性较好，可与食品一起加热使用，而且易被人体中的蛋白酶降解，不会 在体内蓄积引起不良反应，被认为是一种具有广阔应用前景的天然食品防腐剂和饲料添加 剂。
发明内容
本发明的目的是提供一株的产细菌素的植物乳杆菌及其应用，该菌株生产的细菌 素抑制常见的G+和G—腐败菌和病原菌。本发明提供的植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3号，其在中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No . 3698。上述植物乳杆菌是以一些最常见的G+和G+腐败菌和病原菌为指示菌，筛选出产广 谱细菌素的乳酸菌菌株，已于2010年03月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生 物研究所)，保藏登记号为CGMCC Na . 3698。本发明提供的应用，即植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3号CGMCC Na · 3698在抑制细菌中的应用，以及植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3号CGMCC Na . 3698在生产细菌素中的应用。所述细菌为上述所述G+和G—腐败菌和病原菌，具体可为藤黄微球菌 (Micrococcus luteus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、沙门氏菌(Salmonella enterica)、铜绿假单孢杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia coli),优选为藤黄微球菌(Micrococcus luteus) 28001、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 26003、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)63501、沙门氏菌(Salmonella enterica) 50094、铜绿假单孢杆菌(Pseudomonas aeruginosa) 10104、大肠杆菌(Escherichia coli) 30105。本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3号可以产生对多种病原菌和 腐败菌具有抑制作用的细菌素，该细菌素对蛋白酶敏感，并且该细菌素具有很好的酸稳定 性和热稳定性，在121°C高温下处理30分钟不影响其抑菌活性，抑菌谱广等优点。可以应用 为具有广阔应用前景的天然食品防腐剂和饲料添加剂。
图1为细菌素对酶的敏感性检测结果；图2为不同硫酸铵浓度下沉淀细菌素后，活性检测的结果；图3为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3号产细菌素对藤黄微球菌生长 曲线的影响
具体实施例方式实施例1、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3号的获得一、植物IL杆菌(Lactobacillus plantarum) 3 号的获得菌种来源分离自蒙古国发酵乳制品。本发明以一些最常见的G+和G—腐败菌和 病原菌为指示菌，筛选出产广谱细菌素的乳酸菌菌株，具体方法为在无菌条件下，取乳制 品材料5g，加入到45mL无菌蒸馏水中，充分震荡5min，以10倍系列稀释，从ICT1 10_7梯 度，选合适的梯度，取100 μ L分别涂布于装有MRS培养基(购自上海沪峰生物科技有限公 司，货号为HB0384)的培养皿，30°C静置培养并计数。其中，含MRS培养基培养皿为厌氧培养 48h，厌氧培养设备采用三菱株式化学社出品的厌氧包与厌氧培养盒。从含MRS培养基的培 养皿中挑取单菌落，划线纯化2次，并进行革兰氏染色试验，镜检。利用牛津杯双层平板法 含1. 5%琼脂的指示菌培养基冷却至50°C左右，按每平皿15mL倾倒在无菌培养皿中，超净 工作台中冷却；制备含0.8%琼脂的指示菌培养基，冷却至50°C左右，按的接种量加入 指示菌菌悬液作为上层培养基，倾倒5mL上层培养基于含1. 5%琼脂培养基的平板中冷却， 然后用无菌镊子将牛津杯轻轻放置于平板上，将无细胞发酵上清液加入牛津杯中于超净工 作台上扩散5h，置于适宜的培养条件下培养24h后观察抑菌圈的出现，选取牛津杯周围有 明显抑菌圈的菌株做复筛。结果获得一株广泛抑制指示菌的菌株，命名为3号。二、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3 号的鉴定3号菌株生理生化实验结果如表1所示；16S rRNA基因序列如序列表中序列1所 示。根据细胞显微形态、生理生化数据和16S rRNA基因序列数据，将3号菌株鉴定为植物 乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，并于2010年03月26日保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中 国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No . 3698。表1、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum) 3号理化实验结果
实验项目结果实验项目结果革兰氏染色阳性碳水化合物产酸续细胞形态杆状核糖+形成芽孢海藻糖+
权利要求
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)3号，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC №.3698。
2.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum) 3号CGMCC Ns. 3698在抑制细菌中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述细菌为藤黄微球菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢杆菌、沙门氏菌或大肠杆菌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述细菌为藤黄微球菌28001、金黄色葡 萄球菌26003、枯草芽孢杆菌63501、短小芽孢杆菌63202、铜绿假单孢杆菌10104、沙门氏菌 50094或大肠杆菌30105。
5.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum) 3号CGMCC Ns . 3698在生产细菌素中的应用。
6.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum) 3号CGMCC Ns . 3698在制备食品或饲料防 腐剂中的应用。
7.培养植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum) 3号CGMCC Ns . 3698的培养基，由葡 萄糖3%，胰蛋白胨2%，蛋白胨1 %，酵母膏1 %，硫酸镁0. 058%，吐温80 0.2%和水组成， 其中百分含量为质量百分含量。
8.植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum) 3号CGMCC Ns . 3698在制备细菌抑制剂中 的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述细菌为藤黄微球菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢杆菌、沙门氏菌或大肠杆菌。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述细菌为藤黄微球菌28001、金黄色葡 萄球菌26003、枯草芽孢杆菌63501、短小芽孢杆菌63202、铜绿假单孢杆菌10104、沙门氏菌 50094或大肠杆菌30105。全文摘要
本发明公开了一株植物乳杆菌及其应用。该植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)3号，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC №.3698。本发明的植物乳杆菌3号可以产生对多种病原菌和腐败菌具有抑制作用的细菌素，并且该细菌素具有很好的热稳定性和酸稳定性，抑菌谱广等优点。可以应用为具有广阔应用前景的天然食品防腐剂和饲料添加剂。
文档编号C12R1/25GK101974449SQ20101028148
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月13日 优先权日2010年9月13日
发明者常胜合, 庞会利, 李宗伟, 杨飞飞, 焦浈, 王雁萍, 秦广雍, 蔡义民, 谈重芳 申请人:郑州大学