专利名称：一种快速筛选泌酸菌的方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物快速分离方法，更具体的说是一种快速筛选泌酸菌的方法。
背景技术：
微生物的筛选分离在微生物的基础与应用中起着重要作用，目前，对微生物筛选 的方法很多，如利用革兰氏染色法筛选革兰氏阳性或阴性菌，利用染料脱色法从自然界筛 选能够降解染料的微生物(谭国民，柳荣展等，白腐菌对染料废水脱色及降解的研究，中国 造纸学报，2003)，利用脂肪粒计数法、苏丹III菌泥染色法、碳饥饿检出法来筛选高产油脂微 生物菌株(宋安东，冯冲等，生物油脂高产菌株筛选方法研究，微生物学报，2009)，利用微 板筛选法对植酸酶产生菌菌种筛选(杨平平等，植酸酶菌种筛选方法的研究，工业微生物， 2004)。传统的直接分离纯化方法耗时费力成本高，严重影响了研究进度，快捷的微生筛选 方法可为微生物的研究节约大量时间，降低劳动强度，可大大降低研究成本。泌酸菌是指分泌酸性有机物的一类微生物的统称，泌酸菌在实际生产中具有广泛 的应用，如利用微生物产酸作用实现造纸黑液酸析可以大大降低黑液COD与色度，利用醋 酸菌生产醋酸，利用乳酸菌生产乳酸应用于食品、医药、农业与化工业，利用己酸菌产生己 酸用于白酒的酿造，利用钝齿棒杆菌生产L-精氨酸用于心血管疾病的防治，泌酸发酵细菌 在其所产生的泌酸相中可以具有很强的产氢能力，等等，目前这些泌酸菌的筛选大多是针 对于特定样品进行稀释之后培养活菌，然后进行单菌分离，再针对于具体研究的目标酸进 行定量测试，最后获得目标菌。但是该分离鉴定方法需要对分离的每一株菌都要进行测试， 因此该分离鉴定方法存在成本高、周期长、劳动强度大的缺点。
发明内容
1.发明要解决的技术问题
目前，泌酸菌的筛选大多是针对于特定样品进行稀释之后培养活菌，然后进行单菌分 离，再针对于具体研究的目标酸进行定量测试，最后获得目标菌。但是该分离鉴定方法需要 对分离的每一个菌都要进行测试，因此该分离鉴定方法存在成本高、周期长、劳动强度大的 缺点。针对于这一现状，本发明提供了一种快速筛选泌酸菌的方法，可以快捷直观的筛选出 泌酸的菌种，经过本发明的快速筛选后，再对所筛选到的菌进行目标酸的定量测试，可以大 大降低成本，缩短周期，降低劳动强度。2.技术方案 本发明的技术方案为
一种快速筛选泌酸菌的方法，其包括以下步骤
(1)首先以琼脂和水溶苯胺蓝为实验材料，探索苯胺蓝(C37H27N3Na2O9S3)完全脱色时所 需要的时间，然后再根据总时间来划分时间段，对不同时间段的苯胺蓝溶液进行吸光度的 测量，然后计算出吸附率；(2)将已经褪色的琼脂-苯胺蓝溶液过滤获得吸附染料的琼脂条，将其置于蒸馏水中 并以不同浓度的酸加入其中进行解吸，测量出在不同酸浓度的情况下，溶液的吸光值，据此 计算解吸率；
(3)取不同真菌接种于苯胺蓝-PDA培养基上，观察蓝色深度，根据蓝色深浅判断泌酸 菌(真菌)分泌酸性有机物的强弱。步骤(2)中将吸附染料的琼脂条取出，置于与苯胺蓝溶液等体积的蒸馏水中，加入 0、0. 05,0. 01，0. 1，0. 2ml浓盐酸观察解吸后溶液颜色与加入盐酸量的关系。步骤(3)中同时将几种真菌进行液体发酵，来测定所得发酵液的pH值与培养基的 颜色深度关系。3.有益效果
本发明提供了一种快速筛选泌酸菌的方法，该方法可以快捷直观的筛选出分泌酸性有 机物的菌种，筛选过程简单易操作。与液体发酵相比，该方法具有直观、快捷等优点。特别 是进行土壤或水体微生物泌酸菌筛选时，可以不用单独进行菌的分离而直接快捷地可以鉴 定出泌酸菌。整个过程耗时较短，克服了表型表达不稳定、敏感性不高、测试项目多、费时费 力等问题，为筛选泌酸菌及科研提供了极大地方便。
具体实施例方式以下通过实例进一步说明本发明。实施例1
实验步骤
1.取五只150ml的锥型瓶，分别标记为A，B，C，D，E，F，G。分别称取2g琼脂置于五只
锥形瓶中。2.配制100mg/L苯胺蓝溶液，每只锥形瓶量取IOOml配制好的苯胺蓝溶液，从加 入苯胺蓝时开始分别计时。3.取不同时间段的溶液过滤，测定不同时间段苯胺蓝溶液的吸光值以计算琼脂的 吸附率，计算公式琼脂吸附率=(初始苯胺蓝溶液吸光值-吸附后滤液的吸光值)/初始苯 胺蓝溶液吸光值。结果如表一
表一不同时间段各组吸光值及吸附率
权利要求
1.一种快速筛选泌酸菌的方法，其包括以下步骤(1)首先以琼脂和水溶苯胺蓝为实验材料，探索苯胺蓝由于琼脂吸附而完全脱色时所 需要的时间，然后再根据总时间来划分时间段，对不同时间段的苯胺蓝溶液进行吸光度的 测量，然后计算出琼脂吸附率；(2)以不同浓度酸加入已经褪色的琼脂-苯胺蓝溶液中进行解吸，并测量出在不同浓 度酸作用下，解吸后溶液的吸光值，据此计算出解吸率；(3)取不同真菌接种于苯胺蓝-PDA培养基上，观察蓝色深度，根据蓝色深浅判断泌酸 菌分泌酸性有机物的强弱。
2.根据权利要求1所述的快速筛选泌酸菌的方法，其特征在于步骤(2)中将吸附 苯胺蓝染料的琼脂条取出，置于与苯胺蓝溶液等体积的无菌水中，加入0、0. 05,0.01, 0. 1，0. 2ml浓盐酸观察解吸后溶液颜色浓度与加入盐酸量的关系。
3.根据权利要求2所述的快速筛选泌酸菌的方法，其特征在于步骤(3)中同时将几种 真菌进行液体发酵，来测定所得发酵液的PH值与菌在苯胺蓝-PDA培养基上生长时所显示 的颜色深度的关系，由此判断快速筛选泌酸菌的准确性。
全文摘要
本发明公开了一种快速筛选泌酸菌的方法，属于微生物筛选鉴定领域。其包括以下步骤首先以琼脂和水溶苯胺蓝为实验材料，探索苯胺蓝完全脱色时所需要的时间，然后再根据总时间来划分时间段，对不同时间段的苯胺蓝溶液进行吸光度的测量，然后计算出吸附率；将已经褪色的琼脂-苯胺蓝溶液过滤获得吸附染料的琼脂条，将其置于蒸馏水中并以不同浓度的酸加入其中进行解吸，测量出在不同酸浓度的情况下，溶液的吸光值，据此计算解吸率；取不同真菌接种于苯胺蓝-PDA培养基上，观察蓝色深度，根据蓝色深浅判断泌酸菌(真菌)分泌酸性有机物的强弱。本发明能够快捷直观的筛选出泌酸微生物，为研究筛选泌酸微生物提供了极大方便。
文档编号C12Q1/02GK102061331SQ20101056982
公开日2011年5月18日 申请日期2010年12月2日 优先权日2010年12月2日
发明者何兴兵, 何瑶庆, 林永慧, 田启建, 肖竹平, 胡文勇, 陈亮 申请人:吉首大学