专利名称：一种长期保持捕食线虫真菌活性的保存方法
技术领域：
本发明涉及一种长期保持捕食线虫真菌活性的保存方法。适用于植物线虫生防 菌，动物寄生线虫生防菌及微生物学等研究.
背景技术：
自然界中存在一部分可以捕食、寄生或定殖于线虫上的真菌，这类真菌为食线虫 真菌。其中通过营养菌丝特化的捕食器官如粘性菌丝，粘性分枝，粘性网，粘性球，收缩环及 非收缩环来捕捉线虫，这一类食线虫真菌为捕食线虫真菌。捕食线虫真菌是对植物寄生线 虫的防治具有潜在能力的一类生防菌。但研究人员在研究的过程中，对分离出的菌株进行 进一步研究时，涉及到菌种的保存问题。因此，一个好的保存方法对其研究具有重要的意 义。常用的保存法为试管斜面培养基。其方法是将待保存菌种接入PDA或玉米粉琼脂 试管培养基内斜面，在25°C下培养2-3天，然后置于4°C条件下保存。这种保存方法存在的 不足是保存时间短，仅为半年，且很容易受螨类污染，占用空间大，易破碎，不易携带，转管 频率高，成本相对高，易降低真菌的捕食能力，影响研究进展。
发明内容
本发明的目的在于克服常规保存方法的不足，提供一种长期保持捕食线虫真菌活 性的保存方法，利用饱和含水量的自然土壤在离心管内尤其是在微量离心管内长期保存捕 食线虫真菌，捕食线虫在接近自然条件下，保持其活性，延长保存时间，从而用于进一步研为达到上述目的，本发明采取的技术方案是第一步培养基的制备在离心管中装入三分之一管体积的饱和含水量的自然土壤，用铝箔包裹离心管， 在121°C条件下对离心管和内部的土壤高压灭菌1小时即刻。第二步待存菌种的培养与保存在无菌条件下，将需要保存的菌种转入离心管中的土壤表面，盖紧盖子，在25°C下 培养2天，然后将培养好的菌种连同离心管在4°C条件下保存即可。为了使保存菌种便于保存和携带，所述的离心管为1. 5ml的微量离心管(英文名 称印pendorf管，简称EP管)。本发明的优点是1、通过利用饱和含水量的土壤对菌种保存，其条件接近菌种在培养基的水分条 件，其中的土壤更接近捕食线虫真菌的自然生存环境，所以保存时间长。2、避免了现有保存方法因多次转管而降低真菌的捕食能力，在保存期间管中带菌 土壤可多次使用，克服了常规保存方法易被螨类取食污染，保存时间短等不足，为研究该菌 种提供了便利。
3、利用EP管保存易携带，轻便，体积小，不易破碎，不易污染，保存基质来源广，易 获得，成本低，保存期长。为了验证本发明保存方法菌种的活力，在同等条件下利用本发明保存方法和现有 保存方法进行比较试验，结果发现利用本发明保存方法可以使捕食线虫真菌活性保存保持 至少1年，而利用现有保存方法可以使捕食线虫真菌活性保存仅保持半年，这说明本发明 方法保存远优于现有保存方法。具体实施方法下面结合具体实施例详细说明本发明保存方法的步骤。第一步制备饱和含水量的土壤沿着漏斗内表面铺一层定性滤纸，让滤纸吸足水，将土壤放入漏斗内部(不要超 过滤纸边缘)，逐渐加水，直到滤纸折角处有一滴水且未滴下为止。第二步利用饱和含水量土壤制备培养基将制备好的土壤用药匙转入1. 5ml印pendorf管(简称EP管)中，土壤的量占EP 管体积的三分之一，将EP敞口用铝箔包裹，小心放入高压灭菌锅中，，在121 °C温度、20磅压 力条件下灭菌1小时。第三步待存菌种的培养和保存在无菌条件下，将需要保存的菌种转入EP管中土壤表面，盖紧盖子，在25°C下培 养2天，然后将其放入冰箱在4°C条件下保存即可。
权利要求
1.一种长期保持捕食线虫真菌活性的保存方法，其特征在于，步骤如下 第一步培养基的制备在离心管中装入三分之一管体积的饱和含水量的自然土壤，用铝箔包裹EP管，在 121°C条件下对离心管和内部的土壤高压灭菌1小时； 第二步待存菌种的培养与保存在无菌条件下，将需要保存的菌种转入离心管中的土壤表面，盖紧盖子，在25°C下培养 2天，然后将培养好的菌种连同离心管在4°C条件下保存即可。
2.如权利要求1所述的长期保持捕食线虫真菌活性的保存方法，其特征在于，步骤如下第一步制备饱和含水量的土壤沿着漏斗内表面铺一层定性滤纸，让滤纸吸足水，将土壤放入漏斗内部且不要超过滤 纸边缘，逐渐加水，直到滤纸折角处有一滴水且未滴下为止； 第二步利用饱和含水量土壤制备培养基将制备好的土壤用药匙转入1.5ml微量离心管中，土壤的量占离心管体积的三分之 一，将离心管敞口用铝箔包裹，小心放入高压灭菌锅中，在121°C温度、20磅压力条件下灭 菌1小时；第三步待存菌种的培养和保存在无菌条件下，将需要保存的菌种转入EP管中土壤表面，盖紧盖子，在25°C下培养2 天，然后将其放入冰箱在4°C条件下保存即可。
全文摘要
本发明公开了一种长期保持捕食线虫真菌活性的保存方法，它主要是利用离心管对饱和含水量的自然土壤进行高压灭菌，然后将待存菌种转入离心管中的土壤表面进行培养并保存。本发明通过利用饱和含水量的土壤对菌种保存，其条件接近菌种在培养基的水分条件，其中的土壤更接近捕食线虫真菌的自然生存环境，所以保存时间长。避免了现有保存方法因多次转管而降低真菌的捕食能力，在保存期间管中带菌土壤可多次使用，克服了常规保存方法易被螨类取食污染，保存时间短等不足，为研究该菌种提供了便利。
文档编号C12N1/04GK102146343SQ201010617000
公开日2011年8月10日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者吴海燕, 周勋波, 毕建杰 申请人:吴海燕