专利名称：miR-122作为肝脏疾病血清标志物的制作方法
技术领域：
本发明属于医学领域和分子诊断领域，具体而言涉及根据个体的微小 RNA(microRNA)的表达水平进行肝脏疾病的诊断及病情发展的判断。本发明还涉及具体的微小RNA的检测方法及试剂。
背景技术：
转氨酶(aminotransferase，transaminase)是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶，转氨酶参与氨基酸的分解和合成，普遍存在于动物、植物组织和微生物中，心肌、 脑、肝、肾等动物组织以及绿豆芽中含量较高。人体内存在很多不同类型的氨基转移酶，临床上通过抽血化验检测肝功能的转氨酶主要有两种，一种叫丙氨酸转氨酶(ALT)；另一种叫天门冬氨酸转氨酶(AST)。ALT及AST主要存在于肝细胞中，其他脏器中如肾、心肌、胰、肌肉、脾、胆、肺也含有一定量的ALT和AST。ALT主要存在于细胞浆中，当细胞受到损伤时(如肝炎、心肌炎、胰腺炎等)，肝细胞中的ALT会进入血液，使血液ALT值升高。此外，营养不良、酗酒、应用某些药物、发烧等情况均能使转氨酶出现轻度升高。在生理状态下，血液转氨酶值也会出现变动，如剧烈活动、体育锻炼或月经期时，转氨酶值也可暂时升高。由于ALT、 AST主要存在于肝细胞中，其明显升高通常提示出现肝脏损伤。当然，引起肝损伤的原因很多，如肝脏外伤、各种肝脏的急慢性炎症、脂肪肝、肝硬化以及肝癌。一般认为，如果ALT血清值超过正常上限2-3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能，但须排除嗜酒、 心肌炎、化学药物中毒、寄生虫病等其他因素；如果测定值超过正常上限20倍，表明有肝胆疾病存在；此时若伴有阳性肝炎病毒标志物，可以诊断为肝炎。ALT值的正常上限为40单位，急性肝炎时，ALT值的增高幅度较大，多在500单位以上，甚至达到1000单位以上。microRNA研究是近年来肿瘤和分子生物学研究领域的一个热点，microRNA的成熟状态是一类长约19-23个核昔酸的单链RNA分子，在进化上具有高度的保守性，可在转录后水平上对基因表达进行调节，并参与哺乳动物几乎所有的病理和生理活动，如个体发育、 组织分化、细胞凋亡以及能量代谢等，与许多疾病的发生、发展存在着紧密的联系。自发现参与线虫发育时序调控的lin-4与let-7以来，microRNA分别在2002年和2003年两度入选kience杂志评出的年度十大科技突破。2005年的研究预测microRNA至少能调控5300 个人类基因，占所有蛋白编码基因总数的30% ；随着研究的深入和越来越多的microRNA被发现，预测受到microRNA调控的蛋白编码基因的比例还在不断上升。近年来，microRNA与肿瘤发生之间的相关性逐渐成为研究的重点，已经发现若干microRNA通过负调控基因的表达参与慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、乳腺癌、结肠癌等疾病的发生。有学者甚至提出了 “癌microRNAs" (OncomiRs)的观点，认为microRNAs的异常表达在肿瘤的发生发展过程中扮演了类似癌基因的角色。最近的研究表明，血清/血浆中存在上百种的microRNA分子，这类小分子RNA性质稳定、含量丰富、易于定量检测，并且存在显著的疾病特异性。血清 microRNA分子的发现为疾病的检测和诊断提供了一种新的可能性，有可能取代传统的特异性蛋白疾病检测标志物的地位，开拓了生物标志物的新境界。
已有实验证实，microRNA在血液中被有效地保护，使其免受在血液中大量存在的RNase的降解，表现出高度的稳定性。对于血液microRNA能否作为一种无创性检测手段，目前的研究主要集中在癌症的早期诊断方面。比如=CharlesH. Lawrie等人证实 弥漫性B细胞淋巴瘤病人的血清hsa-mir-21水平很高，后者与不复发存活率密切相关 (参见文献 Lawrie CH, Gal S, Dunlop HM, et al. Detection of elevated levels of tumourassociated microRNAs in serum of patients with diffuse large B-cell lymphoma. Br JHaematol 2008;141:672-675)。Chen X 等人在细胞研究杂志上的报道对肺癌、结肠癌和糖尿病的患者血清microRNAs水平进行了分析，确定这些疾病都有其特异性的血清 microRNA 表型(参见文献 Chen X，Ba Y, Ma L, et al. Characterization of miRNAs in serum :a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases. Cell Res 2008 ;18 :997-1006)。hsa-mir-122 (Mature sequence MIMAT0000421)是一种在肝脏中特异性表达的microRNA。无论是在成人或是胎儿肝脏中，都大量存在。成人肝脏中，microRNA-122 的含量占总microRNAs的70%左右。目前对于microRNA-122的报道，主要集中在其对于原发性肝癌、应激反应、脂代谢等肝脏功能的研究上，比如在肝癌形成的过程中，肝脏microRNA-122的含量显著降低，并且逆向表达细胞周期调节蛋白Gl (Gramantieri L， FerracinM, Farnari F, Veronese A, Sabbioni S, Liu CG, et al. Cyclin GI is a target of miR-122a, a microRNA frequently down-regulated in human hepatocellular carcinoma. Cancer Res 2007 ；67 :6092-6099.) ；miR-122 通过作用于 CAT-13 ' UTR 起至IJ对细胞的应激反应作用(Bhattacharyya SN, Habermacher R, Martine U, Closs EI, Filipowicz W. Relief of microRNA—mediated translational repressionin human cells subjected to stress. Cell2006 ；125 :1111-1124.)；另外，研究还表明沉默 microRNA-122 的表达，会导致血浆胆固醇水平的显著增高(Czech MP. MicroRNAs as therapeutic targets. NEngl JMed 2006 ；354 :1194-1195.)。然而，目前还没有将血清/血浆microRNA应用于肝脏疾病的辅助判断、危险度评价等方面的报道，若能筛选与肝脏组织病理状态有关的特异或异常表达的血清/血浆 microRNA作为疾病检测的生物标志物，并研制相应的检测试剂盒，将会大大提升肝脏疾病的检测水平。
发明内容
本发明涉及以下按顺序编号的段落中定义的主题1、一种肝脏疾病的诊断方法，包含以下步骤a)测定人类来源的被检测样本和参考样本中microRNA-122的表达水平；b)比较被检测样本中microRNA-122的表达水平与参考样本中microRNA-122的表达水平；c)被检测样本中microRNA-122的表达水平与参考样本中microRNA-122的表达水平相比出现显著变化，表明该个体存在肝脏疾病。2、根据段落1所述的方法，其特征在于所述样本选自血浆、血清、提取自血清或血浆的总RNA或小RNA组分。3、根据段落1所述的方法，其特征在于所述microRNA表达水平的检测方法选自扩增法、杂交法或者测序法。
4、根据段落3所述的方法，其特征在于所述扩增法为荧光实时定量聚合酶链式反应法。5、根据段落4所述的方法，其特征在于所述方法能够检测样本中至少3X IO2拷贝 / 毫升的 microRNA-122。6、根据段落4所述的方法，其特征在于所述方法能够检测样本中至少5X IO2拷贝 / 毫升的 microRNA-122。7、根据段落4所述的方法，其特征在于荧光实时定量聚合酶链式反应中使用的引物选自表1的引物组合。8、根据段落3所述的方法，其特征在于所述杂交法为芯片杂交法或者Northern杂交法。9、根据段落3所述的方法，其特征在于所述测序法为高通量测序法。10、根据段落1所述的方法，其特征在于所述肝脏疾病为中毒性肝损伤。11、根据段落1所述的方法，其特征在于所述肝脏疾病为肝炎。12、根据段落1所述的方法，其特征在于所述肝脏疾病为肝癌。13、根据段落1所述的方法，其特征在于所述肝脏疾病为肝炎向肝癌的转化过程。
14、根据段落10所述的方法，其特征在于被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加。15、根据段落10所述的方法，其特征在于被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加100%以上。16、根据段落10所述的方法，其特征在于被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加300%以上。17、根据段落11所述的方法，其特征在于被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平减少。18、根据段落11所述的方法，其特征在于被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平减少40%以上。19、根据段落11所述的方法，其特征在于被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平减少60%以上。20、根据段落12所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加。21、根据段落12所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加50%以上。22、根据段落12所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加100%以上。23、根据段落13所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平由减少转化为增加。 24、根据段落13所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平由减少40%以上转化为增加50%以上。
25、根据段落13所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平由减少40%以上转化为增加100%以上。
26、根据段落13所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平由减少60%以上转化为增加50%以上。27、根据段落13所述的方法，其特征在于被测定样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平由减少60%以上转化为增加100%以上。28, microRNA-122检测引物在制备检测肝脏疾病试剂中的应用。29、根据段落观所述的引物选自表1所述的引物组合。30、microRNA-122杂交探针在制备检测肝脏疾病试剂中的应用。31、根据段落30所述的探针选自表10中的任一探针。32、一种诊断肝脏疾病的系统，其特征在于所述系统包含microRNA-122特异性逆转录引物、上游引物、下游引物。33、根据段落32所述的系统，其特征在于所述microRNA-122特异性逆转录引物、 上游引物、下游引物选自表1中的任一组引物。 34、根据段落32或33所述的系统，其特征在于该系统还包括逆转录酶及其反应缓冲液、四种脱氧核糖核苷酸底物、DNA聚合酶、荧光定量PCR反应缓冲液、人工合成的内参及正常人参考品。35、一种诊断肝脏疾病的系统，其特征在于所述系统包含microRNA-122杂交探针。36、根据段落35所述的系统，其特征在于所述杂交探针选自表10中的任一探针。37、根据段落35或36所述的系统，其特征在于所述系统为基因芯片。本发明要解决的技术问题是根据体液样本，尤其是血清/血浆中microRNA的表达水平进行肝脏疾病的诊断，特别是用于涉及到肝脏疾病的早期诊断以及中毒性肝损伤、肝炎、肝癌、肝炎向肝癌的转化过程的诊断和预测。本发明要解决的另一个问题是提供用于肝脏疾病诊断的方法及相应诊断试剂。为解决上述问题，本发明一方面提供了一种肝脏疾病的诊断方法，所述方法包括以下步骤a)测定人类来源的被检测样本和参考样本中microRNA-122的表达水平；b)比较被检测样本中microRNA-122的表达水平与参考样本中microRNA-122的表达水平；c)被检测样本中microRNA-122的表达水平与参考样本中microRNA-122的表达水平相比出现显著变化，表明该个体存在肝脏疾病。具体来讲，所述肝脏疾病为中毒性肝损伤时，被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加；所述肝脏疾病为肝炎时，被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平减少；所述肝脏疾病为肝癌时，被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中 microRNA-122的表达水平增加；所述肝脏疾病为肝炎向肝癌的转化过程时，被检测样本中 microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平由减少转化为增加。在较佳的实施方案中，本发明的样本选自血浆、血清、提取自血清或血浆的总RNA或小RNA组分；在更佳的实施方案中，直接以血清或血浆作为检测样本。“被检测样本中microRNA-122的表达水平与参考样本中microRNA-122的表达水平相比出现显著变化”是指，相对于参考样本中microRNA-122的表达水平来说，被检测样本中microRNA-122的表达水平出现显著的减少或者增加。“增加”在此指的是microRNA-122 水平增加至少10 %，包括例如增加至少15 %、20 %、30 %、40 %、50 %或更多。类似的，“减少”指的是microRNA-122水平减少至少10%，包括例如减少至少15%、20 %、30%、40 %、50% 或更多。具体来讲，在中毒性肝损伤中，被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加100%以上，优选的增加300%以上；在乙型肝炎中，被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平减少40%以上，优选的减少60%以上；在肝癌中，被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平增加50%以上，优选的增加100%以上；在肝炎向肝癌转化过程中，被检测样本中microRNA-122的表达水平比参考样本中microRNA-122的表达水平由减少40%以上转化为增加50%以上，或者由减少40%以上转化为增加100%以上，或者由减少60%以上转化为增加50%以上，或者由减少60%以上转化为增加100%以上。本发明另一方面提供了上述microRNA的检测方法，所述方法选自扩增法、杂交法或测序法。具体地说，扩增法包括实时荧光定量聚合酶链式反应，杂交法包括芯片杂交和 Northern杂交。更具体地，在实时荧光定量聚合酶链式反应中，使用的引物组合为表1中所列的microRNA-122检测的逆转录引物和PCR引物组合。本发明另一方面，实时定量聚合酶链式反应检测也可以使用商业上可购买的试剂来进行，只要该试剂能够检测被检测样本中 microRNA-122的表达水平即可。使用上述方法，优选的能够检测含量低至3X IO2拷贝/毫升的microRNA-122的存在，从而解决检测样本中微量生物标记物的灵敏度问题，实现对疾病的早期诊断。本发明还提供了上述引物组合和商业上可购买的试剂在制备肝脏疾病早期诊断试剂及检测肝脏疾病试剂中的应用。对于杂交检测法，样本中microRNA-122的表达水平通过芯片上或胶片上microRNA-122的杂交信号得到确定；具体地是根据芯片上或胶片上被测定样本中microRNA-122的杂交信号与参考样本microRNA-122的杂交信号之间的比率确定。本发明还提供了一种肝脏疾病的检测系统，所述系统包含检测人源microRNA-122 的特异性引物组合(逆转录引物、上游引物和下游引物)。具体来讲，该引物组合选自表1 所列的引物组合。优选的，该系统还包括用于microRNA-122表达检测的其他组分，如逆转录酶及其反应缓冲液、四种脱氧核糖核苷酸底物、DNA聚合酶、荧光定量PCR反应缓冲液、人工合成的内参及正常人参考品(即参考样本)等。本发明还提供了一种可用于肝癌诊断的标志物，该标志物为人TOsnRNA小核酸分子(GenBank :X07425)，具有如下所示的核酸序列或其部分序列5-aaggucgggcaggaagagggccuauuucccaugauuccuucauauuugcauauacgauacaaggcu guuagagagauaauuagaauuaauuugacuguaaacacaaagauauuaguacaaaauacgugacguagaaaguaau aauuucuuggguaguuugcaguuuuuaaaauuauguuuuaaaauggacuaucauaugcuuaccguaacuugaaag uauuucgauuucuuggcuuuauauaucuuguggaaaggacgaaacaccgugcucgcuucggcagcacauauacua aaauuggaacgauacagagaagauuagcauggccccugcgcaaggaugacacgcaaauucgugaagcguuccaua uuuuuacaucagguuguuuuucuguuuuuacaucagguuguuuuucuguuugguuuuuuuuuuacaccacguuua uacgccggugcacgguuuacca-30本发明还提供了一种肝癌的诊断方法，包含以下步骤a)测定人类来源的被检测样本和参考样本中TOsnRNA的表达水平；b)比较被检测样本中TOsnRNA的表达水平与参考样本中TOsnRNA的表达水平；c)被检测样本中TOsnRNA表达水平同参考样本中TOsnRNA表达水平相比有显著减少，表明该个体存在肝癌。在较佳的实施方案中，本发明的样本选自血浆、血清、提取白血清或血浆的总RNA或小RNA组分；在更佳的实施方案中，直接以血清或血浆作为检测样本。“显著减少”可以是相对参考样本TOsnRNA的表达水平来说，被检测样本中 TOsnRNA的表达水平减少至少10%，包括例如减少至少15 %、20 %、30 %、40 %、50 %或更多。在一优选实施方案中，所述显著变化是指被测定样本中TOsnRNA的表达水平同参考样本中TOsnRNA的表达水平相比，减少至少50%，较佳的减少至少70%。在一较佳的实施方案中，UBsnRNA的表达水平通过扩增法、杂交法或测序法检测；在一更佳的实施方案中， TOsnRNA的表达水平通过逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应进行检测。更具体地，在实时荧光定量聚合酶链式反应中，使用的引物组合选自为表2中所列的引物组合。本发明另一方面，实时定量聚合酶链式反应检测也可以使用商业上可购买的试剂来进行，只要该试剂能够检测被检测样本中TOsnRNA的表达水平即可。本发明还提供了上述引物组合或商业上可购买的试剂在制备肝癌检测的试剂中的应用。本发明还提供了一种肝癌检测系统，所述系统包含人源U6snRNA特异的引物组合 (逆转录引物、上游引物和下游引物)。具体来讲，该系统包括选自表2所列的引物组合。优选的，该系统还包括用于检测的其他组分，如逆转录酶及其反应缓冲液、四种脱氧核糖核苷酸底物、DNA聚合酶、荧光定量PCR反应缓冲液、人工合成的内参及正常人参考品(即参考样本)等。本发明的有益效果本发明提供的血清/血浆微小核糖核酸(microRNAs)标志物作为肝脏疾病诊断标志物的优越性在于(1)血清/血浆microRNAs是一种新型生物标志物，区别于传统蛋白生物标志物， 不仅稳定、微创、易于检测，而且定量精确，提高了疾病诊断的敏感性和特异性，该类小分子 RNA生物标志物的成功开发将为肝脏疾病的早期诊断及优化治疗开创全新的局面，并可能为其他疾病生物标志物的研制提供借鉴。(2)血清/血浆microRNA-122检测系统是一种系统、全面的诊断和检测试剂盒，可用于肝脏疾病患者疾病发生、病情发展的动态监测，有助于了解患者疾病进展情况，反映患者的疾病状态，为临床医生快速准确掌握患者病情、及时采取更具个性化的防治方案提供支持。(3)本发明提供的microRNA-122检测方法及系统，可检测到样本中拷贝数低至 3X IO2拷贝/毫升的microRNA-122的存在，为疾病的早期诊断提供了可靠的方法及试剂。
图1利用实时荧光定量聚合酶链式反应技术分析8例健康人血清样本中4种 microRNA(miR-122、miR-192、miR-483 和 miR-711)的表达情况。图2利用实时荧光定量聚合酶链式反应技术分析8例百草枯中毒患者血清中4种 microRNA(miR-122、miR-192、miR-483和miR-711)的表达情况，8名患者如图例所示具有不同的血液转氨酶(ALT)值。图3按血液转氨酶值将36例百草枯中毒患者血清样本进行分组，检测各组microRNA-122的表达情况。左纵轴表示血清microRNA-122的相对表达倍数，右纵轴表示转
氨酶值。图4同一百草枯中毒患者在治疗过程中血清microRNA-122的表达量与转氨酶值之间的相关性。左纵轴表示血清microRNA-122的相对表达倍数，右纵轴表示转氨酶值。
具体实施例方式对于本发明公开的可作为肝脏疾病早期诊断及病情预后诊断标志物的微小 RNA-122 (microRNA-122)，可通过杂交法、测序法及扩增法对其在生物样本中的存在或含量进行检测。例如，可以通过标准化技术用凝胶电泳将获得的RNA样本进行分离，转移到硝酸纤维素膜，进行Northern杂交，以确定样本中micorRNA-122组分的存在及定量。 其中包括利用加热等本领域技术人员公知的方法将RNA样本固定到杂交膜上，使能与 microRNA-122互补结合的带荧光或其他标记的DNA或RNA探针与样本分子接触，从而确定样本中microRNA-122的存在及含量。也可通过放射性自显影的方法达到这个目的，对样本中microRNA-122组分的含量进行精确的定量。此外，还可以通过光成像计算机计算方法对杂交斑点进行RNA水平的精确定量。microRNA的含量检测也可以通过对microRNA转录本进行逆转录，然后利用实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)来检测。发明人采用表1所示的microRNA-122的逆转录引物和上下游引物组合进行定量RT-PCR检测，经过对反应条件的优化，获得了线性检测结果。然而本领域技术人员应当能够理解，列举上述具体的引物组合仅仅是为了描述本发明， 他们并不起任何限制性作用。本领域技术人员在阅读了本说明书后，能够采用常规的手段根据microRNA-122的序列来选择其他合适的引物组合进行检测。microRNA的含量可以通过与内参相比较来确定，内参可以是同一样本中看家基因的mRNA转录本等。可用作内参的看家基因包括肌球蛋白、磷酸甘油醛脱氢酶或人TOsnRNA 基因。在文献中有定量RT-PCR及其他相关技术的描述。qRT-PCR检测血清microRNA水平对于肝组织病理状态的诊断和分类来说是更灵敏和特异的方法。在某些情况下，microRNA 水平用qRT-PCR方法来检测。在某些情况下，microRNA水平用生物芯片来检测。生物芯片检测中所用的核酸探针可用体外重组或化学合成的方法获得，这在文献中已有报道。另外， 杂交探针可用不同的标记方法来标记，例如放射性同位素、荧光物质、报告系统酶、生物素和其他配体。这些可检测的标记物还可以偶联光学检测物质，进而可以用光化学方法来检测。标记和检测的探针在文献中也有报道。用于microRNA检测的核酸探针可以在严格条件下和样本中的microRNA杂交。根据不同的方法，文献中的成熟技术可以改变条件，从而优化对特定样本中特定microRNA的检测。下面结合具体实施例及附图，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New York =Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。尽管本发明描述了具体的例子，但是有一点对于本领域技术人员来说是明显的，即在不脱离本发明的精神和范围的前提下可对本发明作各种变化和改动。因此，所附权利要求覆盖了所有这些在本发明范围内的变动。
表1. miR-122逆转录及扩增引物组合
权利要求
1.microRNA-122检测引物在制备检测肝脏疾病试剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的引物选自表1所述的引物组合。
3.microRNA-122杂交探针在制备检测肝脏疾病试剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的探针选自表10中的任一探针。
5.一种诊断肝脏疾病的系统，其特征在于所述系统包含microRNA-122特异性逆转录引物、上游引物、下游引物。
6.根据权利要求5所述的系统，其特征在于所述microRNA-122特异性逆转录引物、上游引物、下游引物选自表1中的任一组引物。
7.根据权利要求5或6所述的系统，其特征在于该系统还包括逆转录酶及其反应缓冲液、四种脱氧核糖核苷酸底物、DNA聚合酶、荧光定量PCR反应缓冲液、人工合成的内参及正常人参考品。
8.一种诊断肝脏疾病的系统，其特征在于所述系统包含microRNA-122杂交探针。
9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于所述杂交探针选自表10中的任一探针。
10.根据权利要求35或36所述的系统，其特征在于所述系统为基因芯片。
全文摘要
本发明公开了一种用于肝脏疾病的早期诊断或者病情发展、预后判断的微小核酸标志物，具体来讲该标志物为microRNA-122。本发明还公开了一种肝脏疾病的诊断方法，包含以下步骤a)测定人类来源的被检测样本和参考样本中microRNA-122的表达水平；b)比较被检测样本中microRNA-122的表达水平与参考样本中microRNA-122的表达水平；c)被检测样本中microRNA-122的表达水平与参考样本中microRNA-122的表达水平相比出现显著变化，表明该个体存在肝脏疾病。本发明还公开了检测样本中microRNA-122表达水平的方法和试剂。
文档编号C12Q1/68GK102206702SQ20111000159
公开日2011年10月5日 申请日期2011年1月6日 优先权日2010年3月29日
发明者丁先锋, 杜权, 梁子才 申请人:北京大学