专利名称：一种大豆分离蛋白基因组dna的提取方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，是一种适用于PCR扩增的大豆分离蛋白的基因组DNA 的提取方法。
背景技术：
目前，关于植物全基因组DNA的提取已有不少研究和报道，但由于不同的植物或同一种植物的不同组织材料的组分各异，所适宜的提取方法也有所不同。大豆分离蛋白蛋白含量高，不利于DNA的溶出与提取。一般的植物基因组DNA提取方法无法从大豆分离蛋白中提取到基因组DNA，为下一步的以基因为基础的生物检测带来困难。现有大豆基因组DNA 提取方法的是以大豆幼苗叶片、大豆干种子、鼓粒期鲜豆荚为材料进行提取，上述提取方法无法从富含蛋白质的大豆分离蛋白中提取到基因组DNA。
发明内容
本发明的目的是为解决现有大豆基因组DNA提取方法的是以大豆幼苗叶片、大豆干种子、鼓粒期鲜豆荚为材料进行提取，上述提取方法无法从富含蛋白质的大豆分离蛋白中提取到基因组DNA的问题，进而提供一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法。本发明解决其技术问题所采用的方案是首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混勻，室温裂解。 加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。本发明的有益效果是可以从大豆分离蛋白中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。用本发明的方法得到的DNA的浓度为 1558 μ g/ml，DNA 的 OD260/OD28。的值为 1. 666。
具体实施例方式本发明较佳的实施方式是首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混勻，室温裂解。加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤， 室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。所述的TE混合液中大豆分离蛋白为30 80mg，TE缓冲液为120 320 μ L。较佳的范围为大豆分离蛋白50mg，TE缓冲液200 μ L。所述的异硫氰酸胍裂解液其中50 IOOmM ρΗ 6. 0 8. OTris-HCl ；10 IOOmM ρΗ 8. OEDTA ;5Μ 异硫氰酸胍；1. 3% Triton X-100。较佳的范围 50mM ρΗ 6. 5Tris-HCl ； 20mMpH 8. OEDTA ；5M 异硫氰酸胍；1. 3% Triton X-100。
所述的室温裂解时间为20 60min，较佳的裂解时间为30min。所述的酚、氯仿/异戊醇的比例为25 24 1。所述的氯仿/异戊醇的比例为24 1。 所述的洗涤DNA沉淀的乙醇浓度为70 95%，较佳洗涤DNA的乙醇浓度为70%。所述异丙醇的沉淀温度为-20 30°C，较佳的沉淀温度为-20°C。所述异丙醇的沉淀时间为20 60min。所述室温晾干的时间为10 15min。
权利要求
1.一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，首先将大豆分离蛋白与TE 缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混勻，室温裂解，加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。
2.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的TE混合液中大豆分离蛋白为30 80mg，TE缓冲液为120 320 μ L。
3.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的异硫氰酸胍裂解液其中50 IOOmM ρΗ 6. 0 8. OTris-HCl ；10 IOOmM ρΗ 8. OEDTA ； 5Μ 异硫氰酸胍；1. 3% Triton X-IOO0
4.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的室温裂解时间为20 60min。
5.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的酚、氯仿/异戊醇的比例为25 24 1。
6.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的氯仿/异戊醇的比例为24 1。
7.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述的洗涤DNA沉淀的乙醇浓度为70 95%。
8.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述异丙醇的沉淀温度为-20 30°C。
9.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述异丙醇的沉淀时间为20 60min。
10.根据权利要求1所述的一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，其特征在于，所述室温晾干的时间为10 15min。
全文摘要
本发明公开了一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法，本发明的技术方案是首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混匀，室温裂解。加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。本发明从大豆分离蛋白中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，其浓度为1558μg/ml，OD260/OD280的值为1.666。本发明操作简单、耗时短、利于快速检测。
文档编号C12N15/10GK102206628SQ20111008161
公开日2011年10月5日 申请日期2011年4月1日 优先权日2011年4月1日
发明者徐伟丽, 李启明, 马莺 申请人:哈尔滨工业大学