结合于psca蛋白的用于癌症诊断的抗体的制作方法

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专利名称::结合于psca蛋白的用于癌症诊断的抗体的制作方法
技术领域
:本文所描述的发明涉及结合于被称为PSCA的蛋白质的抗体及其结合片段、及由其工程化改造得到的分子。本发明还涉及用于治疗表达PSCA的癌的诊断、预测、预防和治疗方法和组合物。
背景技术
:癌症是仅次于冠心病的第二大人类死亡原因。世界范围内每年有数百万人死于癌症。仅在美国,如美国癌症协会的报告,癌症每年造成50万以上的人死亡,同时每年有120万人被新诊断患有癌症。虽然死于心脏病的人数明显减少,但死于癌症的人数正在逐渐上升。在下世纪初,预计癌症将成为头号死亡原因。世界范围内,有几种癌症是主要的杀手。尤其是肺癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌和膀胱癌,它们是癌症死亡的主要原因。这些癌以及事实上所有其它癌都具有相同的致命特征。几乎没有例外地,转移性癌疾病是致命的。此外,即便对于那些在原发性癌中存活下来的癌症患者而言,一般经验显示,他们的生活都发生了显著的改变。许多癌症患者由于担心复发或治疗失败而产生了强烈的焦虑感。许多癌症患者在治疗后身体虚弱。此外,许多癌症患者会经历复发。世界范围内,前列腺癌是男性第四大流行癌症。在北美和北欧,它几乎是男性中最常见的癌症,同时是造成男性癌症死亡的第二大原因。仅在美国,每年有30,000以上的男性死于这种疾病-仅次于肺癌。除了这些数字数值巨大,还没有转移性前列腺癌的有效治疗方法。外科前列腺切除术、放疗、激素注射治疗、手术阉割和化疗仍然是主要的治疗手段。不幸的是,这些治疗方法对于许多人无效,并且常常会带来不快结果。就诊断而言,缺乏能准确检测早期局限性肿瘤的前列腺肿瘤标记仍旧是这种疾病诊断和治疗中的一个重要限制。尽管血清前列腺特异性抗原(PSA)检测已经成为一种有效工具,但广泛认为它在一些重要方面缺乏特异性和通用性。通过产生可再现小鼠中疾病不同阶段的前列腺癌异种移植物促进了其它前列腺癌特异性标记的鉴定。LAPC(洛杉矶前列腺癌)异种移植物是在严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠中有存活传代的前列腺癌异种移植物,并显示出模拟从雄激素依赖转变为雄激素不依赖性(Klein等,1997,Nat.Med.3:402)。最近鉴定的前列腺癌标记包括PCTA-I(Su等,1996,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7252)、前列腺特异性膜(PSM)抗原(Pinto等,ClinCancerRes1996-9-2(9)1445-51)、STEAP(Hubert等,ProcNatlAcadSciUSA.1999-12-7;96(25):14523-8)和前列腺干细胞抗原(PSCA)(Reiter等,1998,Proc.Natl.Acad.ki.USA95:1735)。尽管以前鉴定的标记如PSA、PSM、PCTA和PSCA具有有助于诊断和治疗前列腺癌的作用,但还需要鉴定出前列腺癌和相关癌症的其它标记和治疗靶以进一步促进诊断和治疗。肾细胞癌(RCC)占到成人恶性肿瘤的约3%。一旦腺瘤的直径达到2-3cm就可能恶化。在成人中,两种主要的恶性肾肿瘤是肾细胞腺癌和肾盂或输尿管移行细胞癌。估计在美国肾细胞腺癌的发病率超过29,000例,并且1998年有超过11,600名患者死于这种疾病。移行细胞癌较为少见,其在美国的发病率约为每年500例。数十年来,手术一直是肾细胞腺癌的主要治疗方法。直到最近,转移性疾病还很难用任何全身疗法来控制。随着最近全身疗法尤其是免疫疗法的发展,持续性应答可能会在合适的患者中进攻转移性肾细胞癌。不过,仍然需要治疗这些患者的有效方法。在美国所有的新癌症病例中,膀胱癌在男性中约占5%(第五种最常见的瘤),在女性中占3%(第八种最常见的瘤)。该发病率缓慢增加,且随着老年人口的增加这一数字也在升高。在1998年,估计有M,500病例,其中包括39,500名男性和15,000名女性。在美国,这种年龄调整发病率为每100,000男性32人,每100,000女性8人。历史上男性/女性31的比例可能会由于女性吸烟而降低。估计1998年有11,000人死于膀胱癌(7,800名男性和3,900名女性)。膀胱癌的发病率和死亡率随着年龄增加而急剧上升,并且随着人口老龄化而成为日益严重的问题。大多数膀胱癌在膀胱中会复发。膀胱癌通过经尿道膀胱切除术(TUR)和膀胱内化疗或免疫疗法的组合来治疗。膀胱癌的多病灶和复发特性指出了TUR的局限性。大多数肌肉浸润性癌症不能仅通过TUR治愈。根治性膀胱切除术和尿流改道术是最有效的根治这种癌症的方法,但会对泌尿和性功能造成不可否认的影响。显然还需要对膀胱癌患者有益的治疗方法。估计2000年美国共发生130,200例结肠直肠癌,包括93,800例结肠癌和36,400例直肠癌。结肠直肠癌是男性和女性中的第三大癌症。在1992-1996年间其发病率显著减低(每年降低2.1%)。研究表明,这些降低是由于检查和息肉切除增加,从而防止了息肉发展成浸润性癌症。估计2000年有56,300人死亡07,700人死于结肠癌,8,600人死于直肠癌),占美国癌症死亡总人数的约11%。目前,外科手术是最常见的治疗结肠直肠癌的方法,对于还未扩散的癌症经常采用这种方法。对于大多数已经深度肠壁穿孔或已经扩散到淋巴结的癌症患者,通常在手术前或手术后进行化疗,或化疗加放疗。对结肠癌有时也需要永久性结肠造口术(在腹部形成一开口以排除人体废物),同时直肠癌也偶尔需要这种手术。仍需要有效的诊断和治疗结肠直肠癌的方法。估计2000年新增164,100例肺和支气管癌症,占美国总癌症诊出人数的14%。肺和支气管癌症症的发病率在男性中显著降低,从1984年的86.5/100,000降低到1996年的70.0。在20世纪90年代,女性中发病率的增加势头开始放慢。在1996年,女性中的发病率为42.3/100,000。估计2000年肺和支气管癌症造成156,900人死亡,占总癌症死亡人数的观%。1992-1996年间,肺癌的死亡率在男性中显著降低(每年降低1.7%),而在女性中该比例却显著上升(每年0.9%)。从1987年以来,相比乳腺癌,每年有更加多的女性死于肺癌,而乳腺癌在过去40年中都是女性癌症死亡的主要原因。肺癌发病率和死亡率降低很大可能与过去30年吸烟率降低有关;然而,女性吸烟率的降低滞后于男性。需要关注的是,尽管成年人的吸烟率已经慢慢降低,但青年人的吸烟率却又在升高。肺和支气管癌症的治疗方案是由癌症的类型和阶段决定的,其中包括手术、放疗和化疗。对许多局限性癌症而言,通常选择手术治疗。由于这种疾病通常随发现时间而扩散,放疗和化疗通常需要与手术联合使用。可选择化疗本身或与结合放疗来治疗小细胞肺癌;采用这种方案时,大多数患者的症状会缓解,其中有些是长效的。然而,仍旧需要有效的治疗和诊断肺和支气管癌症的方法。2000年,估计美国妇女中有182,800例新发乳腺癌病例。此外,估计2000年在男性中新诊断出约1,400例乳腺癌病例。在20世纪80年代,女性中乳腺癌的发病率每年增加约4%,而在90年代该发病率比较平稳,约为每100,000人110.6例。仅在美国,估计2000年有41,200人(40,800名女性,400名男性)死于乳腺癌。乳腺癌在女性癌症死亡中位居第二位。根据最新数据,无论是白人还是黑人,该死亡率在1992-1996年间显著降低,同时在年轻妇女中降低程度最大。这些降低可能是由于早期检查和治疗方法改进的结果。考虑到医疗环境和患者的状况,乳腺癌的治疗方法可包括局部病灶切除术(局部切除肿瘤)并除去手臂下的淋巴结;乳房切除术(手术切除乳房)并除去手臂下的淋巴结;放疗;化疗;或激素疗法。通常可联合使用两种或多种方法。大量研究显示,对于早期疾病,局部病灶切除术加放疗后的长期存活率与乳房改良根治术后的存活率类似。重建技术的重大进步能够在乳房切除术后提供一些关于乳房再造术的选项。最近,这种再造术已经与乳房切除术同时进行。局部切除导管原位癌(DCIS)及周围适量正常乳房组织可防止DCIS复发。照射乳房和/或他莫昔芬治疗可降低剩余乳房组织发生DCIS的机会。这是重要的,因为如果DCIS不治疗的话将发展成浸润性乳腺癌。而且,这些治疗方法有严重的副作用或后遗症。因此,需要有治疗乳腺癌的有效方法。估计2000年在美国新发23,100例卵巢癌。这占所有妇科癌症的4%并且是第二大妇科癌症。1992-1996年间,卵巢癌发病率显著降低。卵巢癌的结果是,估计2000年有14,000人死亡。相比妇女生殖系统的其它癌症,卵巢癌造成更多人死亡。治疗卵巢癌的方法有手术、放疗和化疗。手术通常包括除去一侧或两侧的卵巢、输卵管(输卵管-卵巢切除术)以及子宫(子宫切除术)。在一些非常早期的肿瘤中,只有有关卵巢会被切除,尤其是对于那些希望生孩子的年轻女性。在晚期疾病中,需要除去腹内所有疾病部位以增强化疗效果。有效治疗卵巢癌的方法仍是重要需求。估计2000年在美国新发28,300例胰腺癌。在过去20年中,男性胰腺癌的发病率有所降低。女性发病率仍保持几乎恒定,但也可能开始减低。估计2000年在美国胰腺癌造成观,200人死亡。在过去20年中,男性中死亡率有轻微但明显的降低(每年约降低0.9%),而该比例在女性中轻微升高。可通过手术、放疗和化疗来治疗胰腺癌。在大多数患者中,这些治疗方法可延长存活时间和/或缓解症状,但不可能全部治愈。迫切需要有其它治疗和诊断癌症的方法。这些方法包括将抗体、疫苗和小分子用作治疗形式(modality)。此外,还需要将这些形式用作癌症治疗和研究所有领域中诊断、检测、监测的研究工具,和技术发展水平。人们已认识到单克隆抗体(MAbs)的治疗用途(G.Kohler和C.Milstein,Nature256:495-497(1975))。目前,单克隆抗体已获批准用于移植、癌症、传染病、心血管疾病和炎症的治疗中。不同的同种型具有不同的效应子功能。这些功能上的不同对应于各种免疫球蛋白同种型的不同三维结构(P.M.Alzari等,AnnualRev.Immunol.,6555-580(1988))。由于将小鼠用于免疫和识别大多数异质的人抗原中十分便利,针对具有治疗潜力的人靶标的MAbs通常均为鼠源性。然而,鼠MAbs在人类治疗中本身具有缺陷。由于MAbs在人体中的循环半衰期比人抗体短,需要更频繁地给予MAbs。更关键的是,重复将鼠抗体给予人免疫系统会造成人免疫系统通过将小鼠蛋白质识别为异质物并产生人抗小鼠抗体(HAMA)的应答。这种HAMA应答会造成过敏反应,并从免疫系统中迅速清除鼠源抗体,从而使得采用鼠源抗体的治疗无效。为了避免这种影响,已进行了在小鼠中建立人免疫系统的尝试ο在初期的尝试中希望建立能以具有人序列的抗体应答抗原的转基因小鼠(参见Bruggemann等,Proc.Nat'1.Acad.Sci.USA86:6709-6713(1989)),但却受限于能由可用的克隆载体所稳定保持的DNA的量。采用酵母人工染色体(YAC)克隆载体开辟了将人Ig座位的大种系片段导入转基因哺乳动物的道路。基本上大部分人V、D和J区域基因以在人基因组中发现的相同间隔排列,并采用YAC将人恒定区导入小鼠。已知一种此类转基因小鼠品系称作XenoMouse(r)小鼠,其可购自Abgenix,he.(FremontCA)。发明_既述本发明提供了结合于PSCA蛋白和PSCA蛋白多肽片段的抗体及其结合片段和它们经工程化改造所得到的分子。本发明包括多克隆和单克隆抗体、鼠和其它哺乳动物抗体、嵌合抗体、人化和全长人抗体、以及用可检测标记或治疗剂标记的抗体。在某些实施方式中,前提是图3的核酸序列不被整个编码和/或图2的氨基酸序列不被整个制备。在某些实施方式中,编码图3的整个核酸序列和/或制备图2的整个氨基酸序列,两者中的任一均为各自的人单位剂型。本发明还提供了检测各种生物样品中PSCA多核苷酸和蛋白质的存在及状态的方法,以及鉴定表达PSCA的细胞的方法。本发明的一个实施方案提供了监测含有或疑有某些生长失调形式如癌症的组织或血液样品中的PSCA基因产物的方法。本发明还提供了各种免疫原性或治疗性组合物以及治疗表达PSCA的癌症(如表I中列出的组织的癌症)的方法,包括针对抑制PSCA转录、翻译、加工或发挥功能的疗法,以及癌症疫苗。一方面,本发明提供了组合物和包含组合物的方法,以治疗病人表达PSCA的癌症,其中所述组合物包含适合人使用的载体和人单位剂量的一种或多种抑制PSCA制造或功能的试剂。优选所述载体是单一人载体。在本发明的另一方面,所述试剂是与PSCA蛋白发生免疫反应的部分。这种部分的非限制性例子包括但不限于抗体(如单链、单克隆、多克隆、人源化、嵌合或人抗体)、其功能等价物(包括天然产生或合成的)以及它们的组合。所述抗体可与诊断性或治疗性部分缀合。在另一方面,所述试剂是上面定义的小分子。图1。PSCA(也称为PSCAv.1”或“PSCA变体1”)的cDNA(SEQIDNO1)和氨基酸序列(SEQIDNO2)示于图1A。Kozak序列以黑体表示,起始的甲硫氨酸用下划线表示。开放阅读框从18号氨基酸延伸到389号氨基酸,其中包括了终止密码子。PSCA变体2(也称为“PSCAv.2")的cDNA(SEQIDNO3)和氨基酸序列(SEQIDNO4)示于图IB中。Kozak序列以黑体表示,起始甲硫氨酸的密码子用下划线表示。开放阅读框从56号氨基酸延伸到427号氨基酸,其中包括了终止密码子。PSCA变体3(也称为“PSCAν·3”)的cDNA(SEQIDNO:5)和氨基酸序列(SEQIDNO6)示于图IC中。Kozak序列以黑体表示,起始甲硫氨酸的密码子用下划线表示。开放阅读框从423号氨基酸延伸到707号氨基酸,其中包括了终止密码子。PSCA变体4(也称为“PSCAν·4”)的cDNA(SEQIDNO:7)和氨基酸序列(SEQIDNO8)示于图ID中。起始甲硫氨酸的密码子用下划线表示。开放阅读框从4M号氨基酸延伸到993号氨基酸,其中包括了终止密码子。PSCA变体5(也称为“PSCAν·5”)的cDNA(SEQIDNO:9)和氨基酸序列(SEQIDNO10)示于图IE中。起始甲硫氨酸的密码子用下划线表示。开放阅读框从910号氨基酸延伸到1479号氨基酸,其中包括了终止密码子。PSCA变体6(也称为“PSCAv.6”)的cDNA(SEQIDNO:11)和氨基酸序列(SEQIDNO12)示于图IF中。Kozak序列以黑体表示,起始甲硫氨酸的密码子用下划线表示。开放阅读框从83号氨基酸延伸到427号氨基酸,其中包括了终止密码子。图IG0PSCAv.2、PSCAv.7至v.18的SNP变体。PSCAv.7至v.18蛋白质含有123个氨基酸。变体PSCAv.7至v.18是有一个核苷酸不同于PSCAv.2的变体,并编码与v.2相同的蛋白质。虽然分别显示了这些SNP变体,但它们也可以上面图1A-1F中列出的任何组合和任何转录变体存在。图1H。PSCAv.4、PSCAv.19至v.30的SNP变体。PSCAv.19至v.30蛋白质含有189个氨基酸。变体PSCAv.19至v.30是有一个核苷酸不同于PSCAv.4的变体。PSCAv.9、v.10、v.11、v.24和v.25蛋白质只有一个氨基酸不同于PSCAν·1。PSCAv.23、v.28、v.29和v.30编码与v.4相同的蛋白质。虽然分别显示了这些SNP变体,但它们也可以任何组合和以任何转录变体v.3和v.4存在。图II。PSCA变体的表达。(11(a))设计引物来区分PSCAv.1/v.2/v.4,PSCAv.3和PSCAv.5。图中在外显子上方用小箭头标示出的是引物A和B,通过这些引物得到PSCAv.1/v.2/v.4的425bp的PCR产物、PSCAv.3的300bp的PCR产物和PSCAv.5的910bp的PCR产物。(11(b))制备的第一链cDNA,其得自正常膀胱、脑、心、肾、肝、肺、前列腺、脾、骨骼肌、睾丸、胰、结肠、胃、前列腺癌混合物、膀胱癌、肾癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、转移癌和胰腺癌。通过PCR用肌动蛋白的引物进行标准化。使用变体特异性引物以30轮扩增进行半定量PCR。结果显示,PSCAv.5主要在乳腺癌、转移癌和胰腺癌中表达,而在结肠癌和肺癌表达水平较低。在前列腺癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、转移癌和胰腺癌中检出PSCAv.1/v.2/v.4的PCR产物。在正常组织中,仅在前列腺和胃中检出PSCAv.1/v.2/v.4的PCR产物,在肾和肺中水平较低,而未在任何正常组织中检出PSCAv.5。未在任何测试样品中检出PSCAv.3的PCR检测产物。图1J。PSCAv.4和PSCAv.5的表达。IJ(a)设计如图中箭头所示标记为B和C的引物来区分PSCAv.4和PSCAv.5。PSCAv.4特异性引物产生了460bp的PCR产物、而PSCAv.5特异性引物产生了大小为94^p的PCR产物。lj(b)制备的第一链cDNA得自正常膀胱、脑、心、肾、肝、肺、前列腺、脾、骨骼肌、睾丸、胰、结肠、胃、前列腺癌混合物、膀胱癌和多种异种移植物混合物(前列腺癌、肾癌和膀胱癌异种移植物)。通过PCR用肌动蛋白的引物进行标准化。使用变体特异性引物以30轮扩增进行半定量PCR。结果显示,PSCAv.4在前列腺癌、膀胱癌以及多种异种移植物混合物、正常肾脏和前列腺中表达。仅在正常前列腺和膀胱癌中检出PSCAv.5。图2。PSCA抗体的氨基酸。图2A。Ha1-4.117VH的氨基酸序列(SEQIDNO13)。下划线处为重链恒定区。图2B。Hal-4.117VL的氨基酸序列(SEQIDN0:14)。下划线处为轻链恒定区。图2C。Ha1-4.120VH的氨基酸序列(SEQIDNO:15)。图2D。Ha1-4.120VL氨基酸序列(SEQIDN0:16)。下划线处为轻链恒定区。图2E。Hal_5.99VH的氨基酸序列(SEQIDNO17)ο下划线处为重链恒定区。图2F。Hal_5.99VL的氨基酸序列(SEQIDNO:18)。下划线处为轻链恒定区。图2G。Hal-4.121VH的氨基酸序列(SEQIDN0:19)。下划线处为重链恒定区。图2H。Hal-4.121VLc.5的氨基酸序列(SEQIDNO:20)。下划线处为轻链恒定区。图21。Hal-4.121VLc.26的氨基酸序列(SEQIDNO21)。下划线处为轻链恒定区。图2J。Hal-1.16VH的氨基酸序列(SEQIDNO:22)。下划线处为重链恒定区。图I。Hal-L16VL的氨基酸序列(SEQIDNO23)。下划线处为轻链恒定区。图2L。Hal-4.5VH的氨基酸序列(SEQIDNO24)。下划线处为重链恒定区。图2M。Hal_4.5VL的氨基酸序列(SEQIDNO25)下划线处为轻链恒定区。图2N。Hal_4.40VH的氨基酸序列(SEQIDNO:26)。下划线处为重链恒定区。图20。Hal-4.40VL的氨基酸序列(SEQIDNO:27)。下划线处为轻链恒定区。图2P。Hal-4.37VH的氨基酸序列(SEQIDNO:28)。下划线处为重链恒定区。图2Q。Hal-4.37VL的氨基酸序列(SEQIDNO:29)。下划线处为轻链恒定区。图2R。Hal-1.43VH的氨基酸序列(SEQIDNO:30)。下划线处为重链恒定区。图2S。Hal-1.43VL的氨基酸序列(SEQIDN0:31)。下划线处为轻链恒定区。图2T。Hal-1.152VH的氨基酸序列(SEQIDN0:32)。下划线处为重链恒定区。图2U。Hal_l.152VL的氨基酸序列(SEQIDN0:33)。下划线处为轻链恒定区。图3。PSCA抗体的核苷酸和氨基酸序列。图3A。Hal_4.117VH的cDNA(SEQIDNO34)和氨基酸序列(SEQIDNO:35)。下划线处为重链恒定区。图3B。Hal_4.117VL的cDNA(SEQIDNO:36)和氨基酸序列(SEQIDNO:37)。下划线处为轻链恒定区。图3C。Hal-4.120VH的cDNA(SEQIDNO38)和氨基酸序列(SEQIDNO39)。下划线处为重链恒9定区。图3D。Hal-4.120VL的cDNA(SEQIDNO:40)和氨基酸序列(SEQIDNO:41)。下划线处为轻链恒定区。图3E。Hal-5.99VH的cDNA(SEQIDNO:42)和氨基酸序列(SEQIDNO43)ο下划线处为重链恒定区。图3F。Hal-5.99VL的cDNA(SEQIDNO:44)和氨基酸序歹丨J(SEQIDN0:45)。下划线处为轻链恒定区。图3G。Hal_4.121VH的cDNA(SEQIDNO:46)和氨基酸序列(SEQIDN0:47)。下划线处为重链恒定区。图3H。Hal_4.121VLc.5的cDNA(SEQIDNO:48)和氨基酸序列(SEQIDNO:49)。下划线处为轻链恒定区。图31。Hal-4.121VLc.26的cDNA(SEQIDNO50)和氨基酸序列(SEQIDNO51)。下划线处为轻链恒定区。图3J。Hal-L16VH的cDNA(SEQIDNO52)和氨基酸序列(SEQIDNO53)。下划线处为重链恒定区。图3K。Hal-1.16VL的cDNA(SEQIDNO:54)和氨基酸序列(SEQIDNO55)ο下划线处为轻链恒定区。图3L。Hal-4.5VH的cDNA(SEQIDNO:56)和氨基酸序列(SEQIDN0:57)。下划线处为重链恒定区。图3M。Hal_4.5VL的cDNA(SEQIDNO58)和氨基酸序歹Ij(SEQIDN0:59)。下划线处为轻链恒定区。图3N。Hal_4.40VH的cDNA(SEQIDN0:60)和氨基酸序列(SEQIDNO:61)。下划线处为重链恒定区。图30。Hal-4.40VL的cDNA(SEQIDNO:62)和氨基酸序列(SEQIDNO:63)。下划线处为轻链恒定区。图3P。Hal-4.37VH的cDNA(SEQIDNO:64)和氨基酸序列(SEQIDNO65)。下划线处为重链恒定区。图3Q。Hal-4.37VL的cDNA(SEQIDNO:66)和氨基酸序列(SEQIDNO:67)。下划线处为轻链恒定区。图3R。Hal-1.43VH的cDNA(SEQIDNO:68)和氨基酸序列(SEQIDNO:69)。下划线处为重链恒定区。图3S。Hal-1.43VL的cDNA(SEQIDNO:70)和氨基酸序列(SEQIDN0:71)。下划线处为轻链恒定区。图3T。Hal-1.152VH的cDNA(SEQIDNO72)和氨基酸序列(SEQIDNO73)。下划线处为重链恒定区。图3U。Hal-1.152VL的cDNA(SEQIDNO74)和氨基酸序列(SEQIDNO:75)。下划线处为轻链恒定区。图4。PSCA抗体与种系V-D-J序列的的比对。图4A。Hal-4.117VH(SEQIDNO:13)与人VH4-31的比对。图4B。Hal-4.117VL(SEQIDNO:14)与人L19的比对。图4C。Hal-4.120VH(SEQIDNO:15)与人VH4-31的比对。图4D。Hal_4.120VL(SEQIDNO:16)与人02的比对。图4E。Hal-5.99VH(SEQIDNO:17)与人VH4-34的比对。图4F。Hal_5.99VL(SEQIDNO18)与人A27的比对。图4G。Hal-4.121VH(SEQIDNO:19)与人VH4-34的比对。图4H。Hal-4.121c.5VL(SEQIDNO:20)与人08的比对。图41。Hal-4.121c.26VL(SEQIDNO21)与人A3的比对。图4J。Hal-1.16VH(SEQIDNO:22)与人VH6-1的比对。图4K。Hal-1.16VL(SEQIDNO:23)与人B3的比对。图4L。Hal_4.37VH(SEQIDNO:28)与人VH4-31的比对。图4M。Hal-4.37VL(SEQIDNO:29)与人02的比对。图5。重组小鼠、大鼠和人细胞系中PSCA蛋白的表达。所示的小鼠、大鼠和人细胞系用载有人PSCAcDNA和新霉素抗性基因的反转录病毒感染或用仅载有新霉素抗性基因的对照病毒感染。在G418的存在下筛选稳定的重组细胞系。采用1G8抗-PSCAMAb(5μg/ml)染色的FACS测定PSCA的表达。所示为各细胞系中的FACS分布图,显示荧光漂移仅在受PSCA感染的细胞系中存在,指示PSCA在细胞表面表达。这些细胞系可在MAb开放中用作免疫源、MAb筛选试剂,以及用在功能分析中。图6。获自大肠杆菌的PSCA蛋白的纯化。用编码PSCAcDNA21_94氨基酸的pET_21b载体转化大肠杆菌菌株BL21pLysS。通过用IPTG诱导对数生长期培养来表达PSCA蛋白,并从裂解细菌的可溶性或不溶性部分中用亲和层析法纯化该蛋白。所示为洗脱部分的SDS-PAGE考马斯蓝染色凝胶。该蛋白质可用作MAb和pAb免疫原以及用作抗体筛选试剂。图7。由细胞表达的重组糖基化PSCA蛋白的纯化。用载有编码PSCAcDNA^-lOO氨基酸的psecTag2载体转染细胞。通过用潮霉素B进行药物筛选建立稳定的重组PSCA-分泌型细胞系。通过采用1G8MAb的亲和层析法纯化存在于条件培养基中的PSCA蛋白。所示为低ρΗ洗脱部分的考马斯蓝染色SDS-PAGE凝胶。在内源表达的PSCA中观察到的宽分子量蛋白质拖尾指示了重组PSCA蛋白的糖基化。图8。获自大肠杆菌的GST-PSCA蛋白的纯化。用编码融合于谷胱甘肽_S_转移酶(GST)的PSCA的18-98氨基酸的pGEX_2T转化大肠杆菌菌株BL21DE3。在对数生长期培养物中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导GST-PSCA蛋白,并从裂解的细菌中用谷胱甘肽葡聚糖基质亲和层析法来纯化该蛋白。所示为含有GST-PSCA的谷胱甘肽洗脱部分的SDS-PAGE考马斯蓝染色凝胶。表明存在完整的GST-PSCA融合蛋白和少量含GST的降解产物。该蛋白质可用作MAb和pAb免疫原以及用作Ab筛选试剂。图9A-B。采用FACS的人PSCA抗体筛选。采用ELISA测定上清液中抗体浓度。将(纯)50μ1/孔加入96孔FACS板中,并进行系列稀释。加入表达PSCA的细胞(内源或重组,50,000个细胞/孔),在4°C下孵育该混合物2小时。孵育后,用FACS缓冲液洗涤细胞,然后于4°C下在100μ1检测抗体(抗-hlgG-PE)中孵育45分钟。孵育结束后,用FACS缓冲液洗涤细胞,甲醛固定,用FACScan分析。采用CellQuestPro软件分析数据。实心直方图表示获自阴性对照细胞的数据,空心直方图表示获自PSCA阳性细胞的数据。图10。通过FACS测定的PSCAMAb相对亲和力等级。在4°C下,将21个系列12稀释的各个PSCA抗体与SW780细胞(50,000个细胞/孔)孵育过夜(MAb终浓度为40nM-0.038pM)。孵育结束后,洗涤细胞,于抗_hIgG_PE检测抗体共同孵育。洗去未结合的二抗后,用FACS分析细胞,采用CellQuestPro软件得出各点的平均荧光强度。采用S型剂量响应(可变斜率)公式,以GraphpadPrism软件计算亲和力。图中所示为描述PSCAMAb4.121结合滴度的代表性FACS分析。图11。细胞中小鼠和猕猴PSCA的表达以及采用抗人PSCAMAb的识别。用载有小鼠PSCAcDNA、猿猴PSCAcDNA的pCDNA3.1载体或空载体(新,neo)瞬时转染细胞。转染后2天,收集细胞并用人抗PSCAMAbHal-4.117或小鼠MAb168(5μβ/πι1)染色。所示为FACS分布图,显示了由人PSCA蛋白产生的MAbHal-4.117结合于在细胞中表达的小鼠和猿猴PSCA蛋白。小鼠1G8MAb结合于猿猴PSCA,但不结合小鼠PSCA。该结果表明可与其它物种的抗原交叉反应的所选MAb的能力。交叉反应的MAb可用于那些物种的表达和毒性研究中。图12。与MAb4.121共同孵育后的PSCA内化作用。在4°C下,将PSCAMAb4.121与PC3-PSCA共同孵育90分钟,以使所述抗体结合于所述细胞表面。然后将细胞分成两等份,在37°C(使得抗体内化)或4°C(无内化对照)下孵育。在37°C或4°C下孵育后,用酸洗去除结合于细胞表面的残留PSCAMAb4.121。随后的检测二抗渗透和孵育使得内化的PSCAMAb4.121得以检测。采用FACS分析细胞或在荧光显微镜下进行观察。在37°C下孵育2小时后,约30%的PSCAMAb4.121被内化。图13。PSCA表达细胞中的PSCA抗体介导皂草素依赖性杀伤。在第一天时将B300.19细胞(750个细胞/孔)接种入96孔板。第二天在各孔中加入等体积的含2X浓度的指示一抗和2倍过量的连接有皂草素毒素的抗人(Hum-Zap)或抗山羊(山羊-Zap)多克隆抗体(AdvancedTargetingSystems,SanDiego,CA)在37°C下孵育细胞5天。孵育期结束后,向各孔中加入MTS(Promega),并继续孵育4小时。测定450nM的OD0图13(A)中的结果显示在B300.19-PSCA细胞中存在PSCA抗体HA1-4.121和HA1-4.117介导的皂草素依赖性细胞毒性,而在对照非特异性IgGl抗体中则无作用。图13(B)中的结果显示加入不能识别人Fc的皂草素结合的二抗,不能介导细胞毒作用。图14是B300.19/PSCA中幼兔补体介导的细胞毒作用(100,000个细胞/孔)。用RHB缓冲液(RPMI1640,GibcoLifeTechnologies,20mMHEPES)稀释PSCA抗体(0-50μg/ml)。在RHB缓冲液中洗涤表达B300.19-PSCA的细胞,以IO6个细胞/ml的密度重新悬浮。在典型试验中,将50μ1PSCA抗体、50μ1稀释的兔补体血清(Cedarlane,Ontario,Can)和50μ1的细胞悬液同时加入到平底组织培养96孔板中。在37°C、5%C02的培养箱中孵育混合物2小时以促进补体介导的细胞裂解。将50μ1的Alamar蓝(BiosourceIntl.Camarillo,CA)加入各孔中,在37°C下继续孵育4-5小时。用96孔荧光计在530nm处激发、590nm处发射读取各孔的荧光值。结果显示具有IgGl(HA1-4.121)或IgG2同种型(HA1-5.99.1)而不是IgG4同种型(HA1-6.46)的PSCA抗体能介导靶细胞的补体依赖性裂解。图15。通过胃蛋白酶消化产生MAbHa1-4.121的F(ab,)2片段。将2Omg的MAbHa1-4.121的20mM醋酸钠缓冲液(pH4.5)与和不与固定化的胃蛋白酶(Pierce.RockfordIL)孵育指定的时间。通过蛋白A层析去除完整的MAb和消化的Fc片段。所示为完整的未经消化、未被还原的MAb、在指定时间取出的未还原等份的经消化的材料以及最终消化F(ab')2产物的还原样品的PAGE考马斯染色凝胶。图16。通过流式细胞计量术测定的重组抗PSCA人MAb于PSCA的结合。(16A)用编码抗PSCA人MAb重链和轻链的表达构建物转染细胞。48小时后收集上清,分析与PSCA的结合。(16Β)从杂交瘤上清液中纯化抗PSCA人MAb并用于PSCA结合分析。如下测试PSCA的结合性。将PC3亲本或PC3-PSCA细胞与如上所述的抗PSCA人MAbs在冰上一起孵育30分钟。洗涤细胞,与PE结合的抗人Ig在冰上共同孵育30分钟。洗涤细胞,然后用流式细胞计量术进行分析。图17。通过免疫组化法对PSCA蛋白的检测。使用抗体ΗΑ1-4.117检测PSCA蛋白在获自癌症患者的肿瘤标本中的表达。将经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切成4微米的切片,置于玻璃载玻片上。对切片进行脱蜡、重新水化并用抗原回收溶液(AntigenRetrievalCitraSolution;BioGenex,4600NorrisCanyonRoad,SanRamon,CA,94583)在高温下处理。然后在4°C下将切片孵育在荧光素结合的人单克隆抗PSCA抗体Hal-4.117中16小时。在缓冲液中洗涤所述载玻片3次,再与兔抗荧光素共同孵育1小时,在缓冲液中洗涤后,浸渍在DAKOEnVision+过氧化物酶结合的山羊抗兔免疫球蛋白二抗(DAK0Corporation,Carpenteria,CA)中30分钟。然后在缓冲液中洗涤切片,用DAB试剂盒(SIGMAChemicals)显影,用苏木精复染,采用亮视野显微术进行分析。结果显示PSCA在前列腺癌(图A、图B)、膀胱移行细胞癌(图C)和胰导管腺癌(图D)的肿瘤细胞中表达。这些结果表明PSCA在人癌症中表达,抗这一抗原的抗体可用作诊断试剂。图18。PSCAMAbHa1-4.120对皮下前列腺癌异种移植物生长的抑制。将LAPC-9AI肿瘤细胞O.0X106个细胞)注射入雄性SCID小鼠皮下。将小鼠随机分组(各组中的η=10),按照指示在第0天时,通过腹膜内注射(i.p.)HAl-4.120或同种型MAb对照开始治疗。每周对动物进行2次治疗,总共给药7次,直至研究的第观天。按照指示每3-4天用测径仪检测肿瘤的生长。结果显示人抗PSCA单克隆抗体Hal-4.120显著地抑制了SCID小鼠中皮下植入的人前列腺癌异种移植物的生长(P<0.05)。图19。PSCAMAbHal_5.99对SCID小鼠中建立的前列腺癌异种移植物生长的抑制。将LAPC-9AI肿瘤细胞O.OXlO6个细胞)注射入雄性SCID小鼠皮下。当肿瘤体积达到50mm3时,将小鼠随机分组(各组中的n=10),按照指示腹膜内注射(i.p.)HAl_5.99.1或同种型MAb对照开始治疗。每周对动物进行2次治疗,总共给药5次,直至研究的第14天。按照指示每3-4天用测径仪检测肿瘤的生长。结果显示全人抗PSCA单克隆抗体Hal-5.99显著抑制了皮下植入SCID小鼠的建立的非雄激素依赖性人前列腺癌异种移植物的生长(ρ<0.05)。图20。PSCAMAbHA1-4.121对建立的雄激素依赖性人前列腺癌异种移植物生长的抑制。将LAPC-9AD肿瘤细胞(2.5XIO6个细胞)注射入雄性SCID小鼠皮下。当肿瘤体积达到40mm3时,将小鼠随机分组(各组中的η=10),按照指示腹膜内注射(i.p.)高浓度的HA1-4.121或同种型MAb对照开始治疗。每周对动物进行2次治疗,总共给药7次,直至研究的第21天。按照指示每3-4天用测径仪检测肿瘤的生长。本研究的结果显示Hal-4.121抑制了皮下植入SCID小鼠中的建立的人雄激素依赖性前列腺癌异种移植物的生长。结果在统计学上为显著的是:300μg剂量组第14、17和21天(ρ<0.05,Kruskal-Wallis检验,双尾α=0.05)和700μg剂量组第10、14、17和21天(ρ<0.05,Kruskal-Wallis检验,双尾α=0.05)。图21。将获自患者的雄激素依赖性LAPC-9AD肿瘤细胞(2.0XIO6个细胞)注射入雄性SCID小鼠前列腺的背瓣。使肿瘤生长约10天,对小鼠进行随机分组。在植入肿瘤10天后用500μg人HA1-4.117、HA1-4.121或同种型对照开始治疗。每周2次经腹膜内递送抗体,总共给药7次。最后一次给药4天后,处死动物,取出原发肿瘤并称重。结果显示人抗PSCA单克隆抗体Hal-4.121(ρ<0.01)和Hal-4.117(ρ<0.05)显著抑制了常位(orthotopically)移植入SCID小鼠的LAPC-9AD前列腺癌异种移植物的生长。图22。PSCAMAbHA1-4.121对带有已建立的常位人雄激素依赖性前列腺肿瘤的SCID小鼠存活时间的延长。将获自患者的雄激素依赖性LAPC-9AD肿瘤细胞O.OXIO6个细胞)注射入雄性SCID小鼠前列腺的背瓣中。使肿瘤生长约9天,对小鼠进行随机分组。随机分入存活组的动物包括同种型MAb对照的11只小鼠和HA1-4.121治疗组的12只小鼠。每周2次用1000μgHal-4.121或1000μg同种型MAb对照经腹膜内对动物进行治疗,共给药9次。结果显示HA1-4.121显著(对数分级检验p<0.01)延长了带有人雄激素依赖性前列腺肿瘤的SCID小鼠的存活时间。在最后一次治疗后110天,HA1-4.121治疗组中的2只小鼠保持无可触知的肿瘤的状态。图23。HA1-4.21和泰索帝(taxotere)联合治疗对前列腺肿瘤生长抑制作用的增强。将LAPC-9AI肿瘤细胞QXlO6个细胞/动物)皮下注射入雄性SCID小鼠。当肿瘤体积达到65mm3时,按照指示将动物随机编成4个不同的组(各组中的η=10)。在第0天时开始每周2次以500μg的剂量腹膜内给予Hal-4.121或同种型MAb对照,总共给药6次。在第17天时给予最后一剂。在第0、3和7天时以5mg/kg的剂量经静脉内给予泰索帝。每3-4天用测径仪检测肿瘤的生长。本研究的结果显示与单用对照抗体治疗第观天相比,Hal-4.121作为单用的药剂对SCID小鼠中非雄激素依赖性前列腺癌异种移植物的生长抑制达45%(ANOVA/Tukey检验p<0.05)。与单独给予对照抗体治疗相比,给予同种型MAb对照加上泰索帝对肿瘤生长的抑制达观%,不具有统计学上的显著性。与单独的对照抗体相比,联合给予HA1-4.121和泰索帝具有增强的效果并使得肿瘤生长的抑制达到69%(ANOVA/Tukey检验:p<0.01)。当将HA1-4.121与泰索帝的联合组与HA1-4.121或同种型MAb对照加上泰索帝组相比时,均显示出了统计学上的显著差异(ANOVA/Tukey检验p<0.05)。图Μ。人PSCAMAb在SCID小鼠/人HPAC中对胰腺癌异种移植物生长的抑制。将胰腺癌细胞OxIO6个/小鼠)皮下注射入免疫缺陷型ICRSCID小鼠(TaconicFarm,Germantown,NY)。将小鼠随机分组(n=10只动物/组),于同一天用指定的人PSCA单克隆抗体开始治疗。每周2次经腹膜内递送抗体(500mg/小鼠),总共给药8次。结果显示人抗PSCA单克隆抗体Hal-4.121,Hal-4.117和Hal-1.16显著抑制了移植在SCID小鼠皮下的人胰腺癌异种移植物的生长。使用t检验进行统计学分析(双尾,α=0.05)。图25。PSCAMAbΗΑ1-4.121对SCID小鼠常位移植胰腺肿瘤生长的抑制。将HPAC细胞(3.OXIO6个细胞)常位移植入SCID小鼠的胰腺中。按照指示将小鼠随机分配为3组(每组的η=9)。在移植当天用ΗΑ1-4.12Κ250μg或ΙΟΟΟμg)或同种型MAb对照(IOOOyg)开始治疗。每周2次腹膜内给予抗体,总共给药10次。最后一剂13天后,处死动物,取出原发肿瘤并称重。本研究的结果显示所测试的两种剂量水平的HA1-4.121均显著抑制了SCID小鼠中人胰腺癌异种移植物的常位生长。250μg和1000μgAGS-PSCA分别抑制了肿瘤生长达66%和70%(Kruskal-ffallis/Tukey检验分别为ρ<0.01和ρ<0.01)。图26。PSCAMAbΗΑ1-4.121对转移灶的抑制。在尸体解剖中,在对照抗体治疗组中观察到可见的向淋巴结和远端器官的转移灶。在两个ΗΑ1-4.121治疗组中均未观察到可见的转移灶。从所有动物中取出淋巴结、肺和肝,组织学检测移行性肿瘤的存在。用人细胞角蛋白对取自各动物肺和淋巴结的切片进行染色,显微镜下确定转移灶的数量。组织学分析结果显示用ΗΑ1-4.121治疗的动物中的淋巴结(LN)转移灶显著减少(p=0.0152,由Fishers精确性检验测得)。转移和侵入的发生率在用两种浓度HA1-4.121治疗的动物中也显著降低(P=0.0152,Fishers精确性检验测得)。仅用1.Omg剂量的HA1-4.121治疗小鼠的肺转移灶数量显著降低(P=0.0498,由Fishers精确性检验测得)。图27。人PSCAMAb在SCID小鼠中对SW780膀胱肿瘤生长的抑制。将人SW780膀胱癌细胞OxIO6个/小鼠)皮下注射入免疫缺陷型ICRSCID小鼠(TaconicFarm,Germant0Wn,NY)。将小鼠随机分组(n=10只动物/组),在同一天用所示的人PSCAMAb开始治疗。每周2次腹膜内递送抗体Q50mg/小鼠),总共给药7次。结果显示HA1-4.117(p=0.014)、HA1-4.37(p=0.0056)、HAl-l.78(ρ=0.001)、Hal_5.99(ρ=0.0002)和ΗΑ1-4.5(ρ=0.0008)显著抑制了SCID小鼠中皮下植入的SW780膀胱肿瘤的生长。用t检验进行统计学分析(双尾,α=0.05)。发明详述14章节概述I.)定义II.)PSCA多核苷酸II.A.)PSCA多核苷酸的用途II.Α.1.)监测遗传异常II.A.2.)反义实例II.A.3.)引物和引物对II.A.4.)分离编码PSCA的核酸分子II.A.5.)重组核酸分子和宿主-载体系统III.)PSCA相关蛋白III·A.)带有基序的蛋白质的实例III.B.)PSCA相关蛋白的表达III.C.)PSCA相关蛋白的修饰III.D.)PSCA相关蛋白的用途IV.)PSCA抗体V.)PSCA细胞免疫应答VI.)PSCA转基因动物VII.)检测PSCA的方法VIII.)监测PSCA-相关基因状态及其产物的方法IX.)鉴定与PSCA相互作用的分子X.)治疗方法和组合物X.A.)抗癌疫苗X.B.)PSCA作为抗体疗法的靶标X.C.)PSCA作为细胞免疫应答的靶标X.C.1.小基因疫苗X.C.2.CTL肽和辅助肽的组合X.C.3.CTL肽和T细胞引发剂的组合X.C.4.含有用CTL和/或HTL肽脉冲的DC的疫苗组合物X.D.)过继免疫治疗X.E.)出于治疗或预防目的的疫苗接种XI.)PSCA的诊断和预后实施方案XII.)抑制PSCA蛋白的功能XII.A.)用胞内抗体抑制PSCAXII.B.)用重组蛋白抑制PSCAXII.C.)抑制PSCA转录或翻译XII.D.)治疗方法的总体考虑XIII.)PSCA调节剂的鉴定、特性分析和用途XIV.)RNAi和小干扰RNA的治疗用途(siRNAs)XV.)试剂盒/制品的生产I.)定义:除非另有说明,本文所用的所有技术术语、符号以及其它科学名词或术语具有本发明所属
技术领域
的熟练技术人员常规理解的含义。一些情况下,具有常规理解的术语在这里被定义以便澄清和/或用来参考,本文在的这种定义不应该被解释为它与本领域的通常理解的含义有实质性区别。这里描述或引用的许多技术和方法是容易理解的并且通常可由精通本领域的技术人员使用常规方法来进行,例如广泛采用的在Sambrook等的《分子克隆实验室手册》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)(第二版,1989,ColdSpringHarborLaboratoryI^ress,冷泉港,纽约)中所述的分子克隆法。除非另有说明,使用市售试剂盒和试剂的方法宜通常按照制造商规定的过程和/或参数进行。术语“晚期前列腺癌”、“局部晚期前列腺癌”、“晚期疾病”和“局部晚期疾病”是指已经扩展突破前列腺包膜的前列腺癌,包括美国泌尿学会(AUA)系统定义的第C期疾病、Whitmore-Jewett系统定义的第C1-C2期疾病和Μ(肿瘤、结节、转移)系统定义的第Τ3-Τ4期及N+期疾病。通常不推荐对局部晚期疾病患者进行手术,相比临床局限性(器官局限性)前列腺癌患者,这些患者的手术结果基本上都不好。在临床上可通过前列腺的外侧缘上有可触及的硬化或前列腺底部不对称或硬化来确定局部晚期疾病。如果肿瘤侵入或透过前列腺包膜,扩展到手术边缘或侵入精囊,局部晚期前列腺癌目前通过根治性前列腺切除术进行病理学检查作出诊断。“改变天然糖基化模式”在这里是指删除在天然PSCA序列上发现的一个或多个糖部分(通过除去潜在的糖基化位点或通过化学和/或酶方法删除糖基化位点),和/或加入一个或多个天然PSCA序列中不存在的糖基化位点。此外,该短语包括天然蛋白质糖基化的性质改变,包括存在的各种糖部分的性质和比例的改变。术语“类似物”是指与另一分子(例如PSCA相关蛋白)结构类似或共同具有类似或相应属性的分子。例如,PSCA蛋白的类似物可被特异性结合PSCA的抗体或T细胞特异性结合。除非另有说明,术语“抗体”以最广泛含义使用。因此,“抗体”可以是天然产生的或人造的,如通过常规杂交瘤技术制造的单克隆抗体。抗-PSCA抗体包括单克隆和多克隆抗体,以及含有这些抗体的抗原结合域和/或一个或多个互补决定区的片段。本文所用的术语"抗体"是指特异性结合PSCA和/或具有所需生物活性的任何形式的抗体或其片段,该定义具体覆盖了单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如,双特异性抗体)和抗体片段,只要它们特异性结合PSCA和/或显示所需生物活性。本文所提供的方法和组合物中可使用任何特异性抗体。因此,在一个实施方式中,术语“抗体”包括如下的分子该分子包含相互结合的轻链免疫球蛋白的至少一个可变区和重链分子的至少一个可变区,以形成对靶抗原的特异性结合位点。在一个实施方式中,所述抗体是IgG抗体。例如,所述抗体是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗体。用于本发明方法和组合物的抗体可在细胞培养物、噬菌体或各种动物中产生,所述的动物包括但不限于牛、兔、山羊、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、绵羊、狗、猫、猴、猩猩、猿。因此,在一个实施方式中,本发明的抗体是哺乳动物抗体。可采用噬菌体技术分离原始的抗体或产生具有改变的特异性或亲和力特性的变体。这些技术是常规的,且在本领域中是众所周知的。在一个实施方式中,所述抗体是采用本领域已知的重组方法产生的。例如,可通过用包含编码抗体的DNA序列的载体转染宿主细胞来产生重组抗体。可用一种或多种载体在宿主细胞中转染表达至少一个VL和一个VH区的DNA序列。抗体发生和生产重组方法的示例性描述包括Delves,ANTIBODIESPRODUCTION=ESSENTIALTECHNIQUES(Wiley,1997);ShephardMONOCLONALANTIBODIES(OxfordUniversityPress,2000);Goding,MONOCLONALANTIBODIESPRINCIPLESANDPRACTICE(AcademicPress,1993);CURRENTPROTOCOLSINIMMUNOLOGY(JohnWiley&Sons,最近的版本)。可通过重组方法来修饰本发明的抗体,从而提高该抗体在介导所需功能中的更大效应。因此,采用重组方法通过取代来修饰本发明的抗体也在本发明的范围内。通常,所述取代是保守取代。例如,可用不同的残基取代抗体恒定区中的至少一个氨基酸。参见,例如美国专利5,624,821、美国专利6,194,551、专利申请WO9958572;以及Angal等,Mol.Immunol.30:105-08(1993)。对氨基酸的修饰包括氨基酸的缺失、插入、取代。在某些情况下,进行这些变化是为了减少不良活性,例如,补体依赖性细胞毒性。经常性将抗体与提供可检测信号的底物共价或非共价连接。已知很多种类的标记和连接技术,科技和专利文献对它们作了广泛的报道。可筛选这些抗体以用于结合正常或有缺陷的PSCA。参见例如,ANTIBODYENGINEERING:APRACTICALAPPROACH(OxfordUniversityPress,1996)。可通过以下体外分析法来识别具有所需生物活性的适宜抗体,这些分析法包括但不限于增殖、迁移、黏附、软琼脂生长、血管生成、细胞-细胞通讯、凋亡、转运、信号转导,以及以下体内分析法,例如肿瘤生长抑制。本文提供的抗体还可用于诊断用途。作为捕获或非中和抗体,可对它们结合特异性抗原而不抑制受体结合或该抗原的生物活性的能力进行筛选。作为中和抗体,所述抗体可用于竞争性结合分析。它们还可用于PSCA或其受体的定量。“抗体片段”被定义为与其靶分子结合的免疫球蛋白分子的至少部分可变区,即抗原结合区。在一个实施方案中,它特别包括单个抗-PSCA抗体及其克隆(包括激动、拮抗和中和抗体)和具有多表位特异性的抗-PSCA抗体组合物。本文的方法和组合物中的抗体可为单克隆抗体或多克隆抗体。抗体可为抗原结合抗体片段,所述抗体片段包括Fab片段、F(ab’)2片段、单链可变区等。可采用本领域熟知的方法来产生完整分子的片段,包括酶消化和重组方法。如本文所用,可使用任何形式的“抗原”来产生对PSCA特异性的抗体。因此,引发性抗原(elicitingantibody)可为单抗原表位、多抗原表位或单独使用或与本领域已知的一种或多种免疫原性增强剂联用的全蛋白。该引发性抗原可为分离的全长蛋白质、细胞表面蛋白(例如,用抗原的至少一部分转染的细胞来进行免疫)或可溶性蛋白(例如,仅用蛋白质胞外区部分免疫)。可在遗传工程化改造的细胞中产生所述抗原。编码该抗原的DNA可为基因组的或非基因的(例如,cDNA)和编码至少部分胞外区。本文所用的术语“部分”是指用于构建感兴趣抗原的免疫原性抗原表位的恰如其分的最少数量氨基酸或核酸。可采用适于转化感兴趣细胞的任何遗传载体,包括但不限于腺病毒载体、质粒和非病毒载体,例如阳离子脂质体。在一个实施方式中,本文的方法和组合物中的抗体特异性结合感兴趣PSCA胞外区的至少一部分。本文提供的抗体或抗原及其结合片段可结合于“生物活性剂”。本文所用的术语“生物活性剂”是指结合抗原和/或促进或介导所需生物学效应以增强细胞杀伤毒性的任何合成或天然存在的化合物。在一个实施方式中,用于本发明的结合片段是生物学活性片段。本文所用的术语“生物学活性”是指能结合所需抗原表位和直接或间接赋予生物效应的抗体或抗体片段。直接作用包括但不限于调节、刺激和/或抑制生长信号,调节、刺激和/或抑制抗凋亡信号,调节、刺激和/或抑制凋亡或坏死信号,调节、刺激和/或抑制ADCC级联反应,和调节、刺激和/或抑制CDC级联反应。在本发明的方法和组合物中还可使用“双特异性”抗体。本文所用的术语“双特异性抗体”是指对至少两种不同的抗原表位具有结合特异性的抗体,通常为单克隆抗体。在一个实施方式中,所述表位来自同一抗原。在另一实施方式中,所述表位来自两个不同的抗原。制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。例如,可通过使两种免疫球蛋白重链/轻链对共表达的方法来产生双特异性抗体。参见,例如,Milstein等,Nature305537-39(1983)。或者,可用化学连接法制备双特异性抗体。参见,例如,Brerman等,Science229:81(1985)。双特异性抗体包括双特异性抗体片段。参见例如,Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A。90:6444-48(1993),Gruber等,J.Immunol.152:5368(1994)。本文的单克隆抗体具体包括"嵌合"抗体以及该抗体的片段,只要它们特异性结合靶抗原和/或具有所需的生物活性,该嵌合抗体中的部分重链和/或轻链与衍生自特定物种或属于特定抗体家族或亚家族的抗体的相应序列相同或同源,而链的其余部分则与衍生自另一特定物种或属于另一抗体家族或亚家族的抗体的相应序列相同或同源(美国专利4,816,567;和Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855(1984))。术语“化疗剂”是指所有有效抑制肿瘤生长的化学化合物。化疗剂的非限制性例子包括烷化剂,例如氮芥、氮丙啶化合物和烷基磺酸酯;抗代谢物,例如叶酸、嘌呤或嘧啶拮抗剂;有丝分裂抑制剂,例如长春花属生物碱和鬼白毒素衍生物、细胞毒性抗生素、破坏或干扰DNA表达的化合物、以及生长因子受体拮抗剂。此外,化疗剂包括细胞毒剂(如本文所定义)、抗体、生物分子和小分子。术语“密码子优化序列”是指通过置换在特定种类宿主中使用频率低于约20%的密码子而优化的核苷酸序列。除密码子最优化之外,通过去除假聚腺苷化序列、去除外显子/内含子剪接信号、去除转座子样重复序列和/或优化GC含量而最优化在给定的宿主中的表达的核苷酸序列在这里被称为“表达增强序列”。“组合文库”是通过化学合成或生物合成将许多化学“构件”(如试剂)组合而产生的不同化合物的集合。例如,线性组合化学文库,如多肽(如突变蛋白)文库,是用所有可能的方法将一组叫做氨基酸的化学构件组合成给定的化合物长度(即多肽化合物中氨基酸的数目)而形成的。大多数化合物是通过这种化学构件的组合混合合成的(fellop等,J.Med.Chem.37(9)1233-1251(1994))。组合文库的制备和筛选是精通精通本领域是技术人员熟知的。这种组合化学文库包括但不限于,肽文库(见例如美国专利第5,010,175号,Furka,Pept.Prot.Res.37:487-493(1991),Houghton等,Nature,;354:84-88(1991))、类肽(PCT公布WO91/19735),编码肽(PCT公布WO93/20242)、随机生物寡聚物(PCT公布WO92/00091)、苯并二氮杂罩(美国专利号5,沘8,514)、diversomers如乙内酰脲、苯并二氮杂革和二肽(Hobbs等,Proc.Nat.Acad.Sci.USA90:6909-6913(1993))、插烯多肽(Hagihara等,J.Amer.Chem.Soc.114:6568(1992)),具有β-D-葡萄糖支架的非肽的肽模拟物(Hirschmann等,J.Amer.Chem.Soc.114:9217-9218(1992))、小化合物的类似有机综合体文库(Chen等,J.Amer.Chem.Soc.116:2661(1994))、oligocarbamate(Cho等,Science2611303(1993)),和/或肽酰膦酸酯(Campbell等,J.Org.Chem.59:658(1994))。通常可见Gordon等,J.Med.Chem.37:1385(1994),核酸文库(见例如Stratagene,Corp.)、肽核酸文库(见例如美国专利5,539,083)、抗体文库(见例如Vaughn等,NatureBiotechnology14(3):309-314(1996)和PCT/US96/10287)、糖类文库(见例如Liang等,Science2741520-1522(1996)和美国专利号5,593,853),以及小有机分子文库(见例如苯并二氮杂萆,Baum,C&EN,1-18,第33页(1993);类异戊二烯,美国专利号5,569,588;噻唑烷酮(thiazolidinone)和间噻嗪烷酮(metathiazanone),美国专利号5,549,974;吡咯烷,美国专利号5,525,735和5,519,134;吗啉代化合物,美国专利号5,506,337;苯并二氮杂革,美国专利号5,288,514;等等)。制备组合文库的装置可通过商业获得(见例如;357NIPS,390NIPS,AdvancedChemTech,LouisvilleKY;Symphony,Rainin,ffoburn,MA;433A,AppliedBiosystems,FosterCity,CA;9050,?1118,1^11丨?0仪,86(^0『(1力认)。还开发了许多熟知的机器系统来解决相化学(phasechemistry)问题。这些系统包括自动工作站,如TakedaChemicalIndustries,LTD.(日本大阪)开发出的自动合成仪,以及采用模拟化学家手工合成操作的机器臂的机器系统(ZymateH,ZymarkCorporation,Hopkinton,Mass.;Orca,Hewlett-Packard,PaloAlto,Calif.)。上述任何装置都适用于本发明。对精通本领域的技术人员而言,改进这些装置(如果需要的话)的特性和运行方式使它们能够按本文所述进行运作。此外,许多组合文库自身可通过商业获得(见例如ComGenex,Princeton,NJ;Asinex,Moscow,RU;Tripos,Inc.,St.Louis,MO;ChemStar,Ltd,Moscow,RU;3DPharmaceuticals,Exton,PA;MartekBiosciences,Columbia,MD;等等)。本文所用的术语“保守取代”是指本领域技术人员已知的氨基酸取代,且进行该取代通常不会改变所得分子的生物活性。本领域的技术人员认识到通常在多肽非必需区中的单个氨基酸取代不会实质性改变生物活性(参见例如,Watson等,MOLECULARBIOLOGYOFTHEGENE,TheBenjamin/CummingsPub.Co.,第224页(第4版,1987))。优选按照表III(a-b)中所述进行这些示例性取代。例如,这些改变可包括用异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)和亮氨酸(L)取代其它这些疏水性氨基酸;用天冬氨酸(D)取代谷氨酸(E),反之亦然;用谷胺酰胺(Q)取代天冬酰胺(N),反之亦然;用丝氨酸(S)取代苏氨酸(T),反之亦然。其它取代也可被认为是保守性的,这取决于具体氨基酸所处的环境和它在该蛋白质三维结构中的作用。例如,甘氨酸(G)和丙氨酸(A)常可互换,就如丙氨酸(A)和缬氨酸(V)也可互换。相对疏水的甲硫氨酸(M)常可与亮氨酸和异亮氨酸互换,有时也可与缬氨酸互换。赖氨酸(K)和精氨酸(R)在氨基酸残基的显著特征为其电荷且这两种氨基酸残基的差异PK并不显著的位置上常可互换。在特定的环境下还有可被认为是“保守性”的其它变化(参见例如本文的表III(a);"Biochemistry”第2版第13-15页。LubertStryer编(StanfordUniversity);Henikoff等,PNAS1992,卷89,10915-10919;Lei等,JBiolCheml995五月19;270(20):11882-6)。其它取代也是被允许的,并可凭经验或根据已知的保守取代决定。术语“细胞毒剂”是指抑制或阻止细胞表达活性、细胞功能和/或造成细胞破坏的物质。该术语包括放射性同位素化学治疗剂,以及毒素,如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素,包括其片段和/或变体。细胞毒剂的例子包括但不限于金他汀(auristatin)、金霉素、美登醇(maytansinoid)、钇、铋、篦麻毒素、篦麻毒素A-链、康勒他丁(combrestatin)、朵卡霉素(duocarmycin)、多罗他汀(dolostatins)、阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、顺钼、ccl065、溴化乙锭、丝裂霉素、依托泊甙、鬼白噻吩甙、长春新碱、长春碱、秋水仙素、二羟基炭疽菌素二酮、放线菌素、白喉毒素、假单胞菌外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒素、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌、白树毒素、米托洁林、局限曲菌素(retstrictocin)、酚霉素、酚霉素、居里菌素(curicin)、巴豆毒素、刺孢霉素、Sapaonariaofficinalis抑制剂以及糖皮质激素和其它化学治疗剂,以及放射性同位素,如At211、1131、1125、丫90、1^186、1^188、5111153、81212或213、卩32和Lu的放射性同位素,包括Lul77。抗体也可与能够将前药转化成其活性形式的抗癌前药活化酶偶联。本文所用的术语"双体"是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段,该片段包含在同一多肽链(VH-VL)中连接于轻链可变区(VL)的重链可变区(VH)。通过使用短至不能使同一链中两个区域间配对的接头,所述区域被迫与另一链中的互补区域配对,并产生了两个抗原结合位点。双体在以下文献中有更全面的描述例如,欧洲专利404,097;WO93/11161;和Hollinger等,Proc.Natl.Acad.ki.USA90:6444-48(1993)。“基因产物”在本文中是指肽/蛋白质或mRNA。例如,“本发明的基因产物”在本文中有时是指"癌的氨基酸序列"、“癌蛋白"、“表I所列癌的蛋白质”、“癌的mRNA"、“表I所列癌的mRNA”等等。在一个实施方案中,癌蛋白由图1的核酸编码。所述癌蛋白可以是片段,或者可以是由图1的核酸编码的全长蛋白质的片段。在一个实施方案中,癌氨基酸序列被用来确定序列的相同性或类似性。另一实施方案中,该序列是由图1的核酸编码的天然存在蛋白质的等位变体。另一实施方案中,该序列是本文进一步描述的序列变体。在本发明的方法和组合物中可使用“异源偶联”抗体。本文所用的术语“异源偶联抗体”是指两个共价连接的抗体。可用合成蛋白质化学中已知的方法来制备这些抗体,包括使用交联剂。参见例如,美国专利4,676,980。用来测定特定核酸或蛋白质产物的存在、不存在、定量或其它性质的“高通量筛选”试验是精通本领域的技术人员熟知的。类似地,结合试验和报告基因试验也是熟知的。因此,例如美国专利号5,559,410揭示了蛋白质的高通量筛选法;美国专利号5,585,639揭示了检测核酸结合的高通量筛选法(即用阵列检测);而美国专利号5,576,220和5,541,061揭示了检测配体/抗体结合的高通量筛选法。此外,高通量筛选系统可通过商业获得(见例如AmershamBiosciences,Piscataway,NJ;ZymarkCorp.,Hopkinton,MA;AirTechnicalIndustries,Mentor,OH;BeckmanInstruments,Inc.Fullerton,CA;PrecisionSystems,Inc.,Natick,MA;等等)。这些系统通常自动完成全部过程,包括所有样品和试剂的吸取、液体分配、定时培育以及最后在适合检测的检测器上阅读微板。这些可配制系统提供高通量并能快速启动,并且是高度灵活和客户定制。这种系统的制造商提供了各种高通量系统的详细方案说明。因此,例如ZymarkCorp.提供了描述用来检测对基因转录、配体结合等进行调节的筛选系统的技术说明小册子。术语“同系物”是指通过例如在相应位置具有化学性质相同或类似的残基的序列而显示与另一分子同源的分子。在一个实施方式中,本文提供的抗体是“人抗体”。本文所用的术语“人抗体”是指轻链和重链序列(包括互补决定区(CDR))的整个序列基本上都来自人基因的抗体。在一个实施方式中,通过三源杂交瘤技术、人B细胞技术(参见例如,Kozbor等,Immunol.Today4:72(1983)),EBV转化技术(参见例如,Cole等,MONOCLONALANTIBODYANDCANCERTHERAPY77-96(1985))或使用噬菌体展示(参见例如,Marks等,J.Mol.Biol.222581(1991))制备人单克隆抗体。在某一具体的实施方式中,所述人抗体在转基因小鼠中产生。制备这些部分人抗体至全长人抗体的技术在本领域中是已知的,任何此类技术均可使用。根据一个优选的实施方式,在经工程化改造以表达人重链和轻链抗体基因的转基因小鼠中制备全长人抗体序列。制备转基因小鼠的一个示例性描述见专利申请WO02/43478和美国专利6,657,103(Abgenix)及其后续申请。然后可融合转基因小鼠来源的、能产生所需抗体的B细胞以制备连续产生该抗体的杂交瘤细胞系。参见例如,美国专利5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,661,016;和5,545,806;以RJakobovits,Adv.DrugDel.Rev.31:33-42(1998);Green等,J.Exp.Med.188:483-95(1998)。“人白细胞抗原”或“HLA”是人I型或II型主要组织相容性复合物(MHC)蛋白(参见例如,Stites等,IMMUNOLOGY,第8版,LangePublishing,LosAltos,CA(1994)。本文所用的术语"人源化抗体"是指含有来自非人(例如,小鼠和人抗体)的抗体序列的抗体形式。这些抗体是含有源自非人免疫球蛋白最小序列的嵌合抗体。通常,所述人源化抗体会包含至少一个和通常两个可变区的基本上全部,在这些可变区中对应于那些非人免疫球蛋白的全部或基本上全部超变环和全部或基本上全部FR区是人免疫球蛋白序列中的那些。所述人源化抗体还会任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fe)的至少部分,所述Fc通常为人免疫球蛋白的Fe。参见例如,Cabilly的美国专利4,816,567;Queen^(1989)Proc.Nat'1Acad.Sci.USA86:10029-10033;和ANTIBODYENGINEERING:APRACTICALAPPROACH(OxfordUniversityPress1996)。术语“杂交”等用于多核苷酸时是指常规杂交条件,优选例如在50%甲酰胺/6XSSC/0.1%SDS/100mg/mlssDNA中杂交,其中,杂交温度高于37°C,同时用0.1XSSC/0.1%SDS洗涤的温度高于550C。短语"分离的"或"生物纯的"是指基本上或完全不含在天然状态时通常所伴随物质的成分。因此,本发明所述的分离的肽优选不含在天然环境中通常伴随该肽的物质。例如,一种多核苷酸当与PSCA基因之外的基团或编码PSCA基因产物或其片段之外的多肽的基因相对应或互补的污染性多核苷酸基本分离时则称为是“分离的”。熟练的技术人员可方便地采用核酸分离方法来获得分离的PSCA多核苷酸。例如,当采用物理、机械或化学方法除去细胞成分中PSCA蛋白中通常伴随的蛋白质,则称为PSCA蛋白是“分离的”。熟练的技术人员可方便地采用标准纯化方法以获得分离的PSCA蛋白。或者可通过化学方法制备分离的蛋白质。适宜的“标记”包括放射性核素、酶、底物、辅助因子、抑制剂、荧光部分、化学发光部分、磁性颗粒等。教述这些标记的使用的专利包括美国专利3,817,837;3,850,752;3,939,350;3,996,345;4,277,437;4,275,149;和4,366,241。此外,本文提供的抗体可用作荧光体的抗原结合成分。参见例如,Zeytun等,Nat.Biotechnol.21:1473-79(2003)。术语“哺乳动物”是指任何分类为哺乳动物的生物,包括小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、21马和人。在本发明的一个实施方案中,所述哺乳动物是小鼠。在本发明的另一个实施方案中,所述哺乳动物是人。术语“转移性前列腺癌”和“转移性疾病”指已经扩散到局部淋巴结或扩散到远处部位的前列腺癌,包括AUA系统的第D期疾病和Μ系统的第TxNxM+期疾病。对于局部晚期前列腺癌病例,通常不对转移性疾病患者进行手术,而激素(雄激素消融)疗法是优选的治疗方法。转移性前列腺癌患者最终会在治疗开始后的12-18个月内发展成雄激素难治状态。这些雄激素难治患者中几乎有半数会在发展到这一阶段后6个月内死亡。前列腺癌转移的最常见部位是骨。前列腺癌骨转移通常是成骨性而不是溶骨性(即导致净骨形成)。骨转移最常见在脊柱中,然后是股骨、骨盘,肋架,颅骨和肱骨。其它常见转移部位包括淋巴结、肺、肝和脑。转移性前列腺癌通常通过手术切开或腹腔镜盆腔淋巴结切除术、全身放射性核素扫描、骨骼X线照相术和/或骨病灶活组织检查来诊断。术语"调节剂"或"检测化合物"或"药物候选物"或语法上的等价表述在这里描述将被检测以了解直接或间接改变癌的表型或癌序列(例如核酸或蛋白质序列)的表达的能力,或癌序列的效应(例如产生信号、基因表达、蛋白质相互作用等)的任何分子,例如蛋白质、寡肽、小有机分子、多糖、多核苷酸等。一方面,调节剂将中和本发明的癌蛋白的效应。“中和"是指蛋白质的活性以及随后对细胞的效应被抑制或阻遏。在另一方面,调节剂使所述蛋白质水平正常化可中和本发明的基因及其相应蛋白质的功效。在优选的实施方案中,调节剂改变表达特征,或这里提供的核酸或蛋白质的表达特征,或改变下游效应子途径。在一个实施方案中,所述调节剂抑制癌症表型,例如正常组织指纹。另一实施方案中,调节剂诱导癌症表型。通常用不同的试剂浓度平行进行检测多个混合物以获得对不同浓度的差异应答反应。通常,将这些浓度之一即零浓度或低于检测水平的浓度作为阴性对照。调节剂、候选药物或检测化合物包括多种类别的化学试剂,但它们通常是有机分子,优选分子量大于100小于约2,500道尔顿的小有机化合物。优选的小分子小于2000,或小于1500,或小于1000,或小于500D。候选试剂包含在结构上与蛋白质相互作用必需的官能团,具体说是氢键,且通常包含至少一个胺基、羰基、羟基或羧基,优选至少两个化学官能团。所述候选试剂通常包含碳环或杂环结构和/或被一个或多个上述官能团取代的芳香性结构或芳香性聚合结构。调节剂还包括以下生物分子,如肽类、糖类、脂肪酸、类固醇、嘌呤、嘧啶、衍生物、结构类似物或其组合。特别优选的是肽。一种类别的调节剂是肽,例如含有约5-35个氨基酸,优选含有约20个氨基酸,更优选含有约7-15个氨基酸的肽。优选癌症调节蛋白是可溶的,包括一个非跨膜区和/或一个N-末端Cys以助溶解。在一个实施方案中,片段的C-末端被保留作为游离酸同时N-末端是游离的胺以助偶合,即与半胱氨酸偶合。在一个实施方案中,本发明的癌蛋白与这里所述的免疫原性剂缀合。在一个实施方案中,所述癌蛋白与BSA缀合。本发明的肽,例如优选长度的肽,可相互结合或与其它氨基酸结合以形成较长的肽/蛋白质。这种调节肽可被消化成天然产生的蛋白质(如上文所述)、随机肽或“偏置(biased)”随机肽。在一优选的实施方案中,基于肽/蛋白质的调节剂是这里定义的抗体及其片段。癌症的调节剂也可以是核酸。核酸调节剂可以是天然产生的核酸、随机核酸或"偏置"随机核酸。例如,原核或真核基因组的消化产物可用于上述蛋白质的相应类似物中。本文中术语“单克隆抗体”指获自一群基本上均质性抗体的抗体,即包含一群相同的抗体但可能存在少量天然产生的突变体的抗体。单克隆抗体是高度特异性的,其直接针对单一抗原表位。相反,常规(多克隆)抗体制剂通常包括针对(或特异性针对)不同表位的多种抗体。在一个实施方式中,所述多克隆抗体多个单克隆抗体,它们具有对含有多个抗原表位的单个抗原具有不同表位特异性、亲和力或亲合力。修饰语"单克隆的"是指所述抗体的性状是获自基本上同源的抗体群,且不是解释为需要通过任何特殊的方法来产生该抗体。例如,用于本发明的单克隆抗体可采用由Kohler等,Nature256:495(1975)首次描述的杂交瘤技术来制备,或可通过重组DNA方法(参见例如,美国专利4,816,567)来制备。也可采用例如Clackson等,Nature352:624-628(1991)和Marks等,J.Mol.Biol.222581-597(1991)所描述的技术从噬菌体抗体文库中分离出"单克隆抗体"。这些单克隆抗体通常以至少约IyMWKd结合,更通常至少约为300nM,通常至少约为30nM,优选至少约为ΙΟηΜ,更优选至少约为3nM或更佳,通常通过ELISA测定。“基序”,如PSCA相关蛋白的生物学基序中指组成蛋白质一级序列一部分的任何氨基酸模式,该模式与某具体功能(例如蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-DNA相互作用等)或修饰(例如磷酸化、糖基化或酰胺化修饰)、或定位(例如分泌序列、核定位序列等)或与产生体液或细胞免疫性相关的序列有关。基序可以是毗连的或能够排列成通常与某种功能或特性有关的某种位置。在HLA基序中,“基序"是指确定长度的肽中残基的模式,对I类HLA基序而言通常是约8-13个氨基酸的肽,对II类HLA基序而言通常是约6_25个氨基酸的肽,它可被特定的HLA分子识别。由各自的人HLA等位基因编码的各个蛋白质的结合HLA的肽基序通常不同,且主要(primary)和次要(secondary)锚定残基的模式也不同。常见的基序列于表V中。“药用赋形剂”包括佐剂、载体、pH调节剂和缓冲剂、张力调节剂、湿润剂、防腐剂等物质。“药学上可接受的”是指无毒的、惰性的和/或与人或其它哺乳动物生理上相容的组合物。术语“多核苷酸”表示长度至少为10个碱基或碱基对的核糖核苷酸或脱氧核苷或修饰形式的两种核苷酸类型的聚合形式,指包括DNA和/或RNA的单链和双链形式。在本领域中,该术语通常与“寡核苷酸”互换使用。多核苷酸可包括这里揭示的核苷酸序列,如图1所示,其中的胸腺嘧啶(T)也可以是尿嘧啶(U);这种定义涉及DNA和RNA化学结构之间的区别,具体地说,RNA中四个主要碱基之一是尿嘧啶(U)而不是胸腺嘧啶(T)。术语“多肽”表示至少约4、5、6、7或8个氨基酸的聚合物。在该说明书中使用氨基酸的标准三字母或单字母符号。在本领域中,该术语通常与“肽”或“蛋白质”互换使用。HLA“主要锚定残基(primaryanchorresidue)”是沿肽序列特定位置上的一个氨基酸认为其能够提供免疫原性肽和HLA分子之间的接触点。确定长度的肽内1-3个,通常是2个主要锚定残基限定了免疫原性肽的一个“基序”。这些残基被认为适合与HLA分子的结合沟紧密接触,同时将它们的侧链插入结合沟的特定口袋中。例如,在一个实施方案中,HLAI类分子的主要锚定残基位于位置2(从氨基末端位置算起)并位于本发明所述肽表位羧基末端第8、9、10、11或12残基位置上。或者,另一实施方案中,结合HLAII类分子的肽的主要锚定残基相互间隔而不是在肽的末端,这里的肽的长度通常至少有9个氨基酸。各个基序和超基序(supermotif)的主要锚位置列于表IV(a)。例如,可通过改变表IV所示主要和/或次要锚位置中的特定残基的存在或缺失来产生类似物肽。这种类似物被用来调节包含特定HLA基序或超基序的肽的结合亲和力和/或细胞群覆盖(populationcoverage)范围。“放射性同位素”包括但不限于以下这些(在表IV(I))中还列出了非限制性的示范用途)。“随机"或语法等价表述在这里用于核酸和蛋白质,表示每种核酸和肽分别都由基本上随机(连接)的核苷酸和氨基酸构成。这些随机肽(或这里讨论的核酸)可在任何位置掺入任何核苷酸或氨基酸。可设计合成方法来产生随机蛋白质或核酸,以在序列长度上形成所有或大多数可能的组合,从而形成随机的候选生物活性蛋白质试剂文库。在一个实施方案中,文库是“完全随机化的”,在任何位置都没有优选序列或恒定的序列。另一实施方案中,文库是“偏置随机”文库。即序列中的一些位置或保持恒定,要么选自数目有限的可能残基。例如,核苷酸或氨基酸残基可在规定的类别(例如疏水性氨基酸、亲水性残基,空间偏置(小的或大的)残基)中随机选择以形成核酸结合域,形成交联用的半胱氨酸,SH-3结构域用的脯氨酸,磷酸化位点等用的丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或组氨酸,或者对于嘌呤等亦是如此。“重组体”DNA或RNA分子是在体外制作的DNA或RNA分子。本文所用的术语丨'单链Fv丨'或丨'scFv丨'或“单链”抗体是指包含抗体VH和VL区的抗体片段,其中这些区域是存在于一个多肽链中的。通常,Fv多肽还包含VH和VL区之间的多肽接头,该接头使得所述sFv可形成抗原结合所需的结构。对于sFv而言,可参见Pluckthun,THEPHARMACOLOGYOFMONOCLONALANTIBODY,卷113,Rosenburg和Moore编Springer-Verlag,NewYork,第269—315页(1994)。“小分子”的非限制性例子包括与PSCA结合或相互作用的化合物、配体(包括激素类、神经肽类、趋化因子、添味剂、磷脂以及结合并优选抑制PSCA蛋白功能的其功能等价物)。这种非限制性小分子的分子量宜小于约约IOkDa,更优选小于约9、约8、约7、约6、约5或约4kDa。在某些实施方案中,小分子能物理性与PSCA蛋白缔合或结合PSCA蛋白;未在天然产生的代谢途径中被发现;和/或相比非水性溶液更易溶于水溶液。本文所用的术语“特异性”是指抗体对靶抗原表位的选择性结合。可在给定的条件下,将抗体和适宜抗原的结合与抗体和无关抗原或抗原混合物的结合相比,来测试抗体的结合特异性。如果所述抗体与适宜抗原的结合至少比其与无关抗原或抗原混合物结合高出2、5、7和更优选10倍,则认为其是特异性的。在一个实施方式中,特异性抗体是一种仅结合PSCA抗原而不结合无关抗原的抗体。在另一实施方式中,特异性抗体是一种结合人PSCA抗原但不与该PSCA抗原具有结合70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%,97^^98^^99%或更多氨基酸同源性的非人PSCA抗原结合的抗体。在另一实施方式中,特异性抗体是一种结合人PSCA抗原和结合小鼠PSCA抗原、但与人抗原结合程度更高的抗体。在另一实施方式中,特异性抗体是一种结合人PSCA抗原和结合灵长类PSCA抗原、但与人抗原结合程度更高的抗体。在另一实施方式中,所述特异性抗体结合人PSCA抗原和任何非人PSCA抗原但与人抗原或其任何组合结合程度更高的抗体。杂交反应的“严格性”易由本领域的一般技术人员来确定,且通常可根据探针长度、洗涤温度和盐浓度凭借经验来计算。通常,探针越长,合适退火需要的温度越高,而较短的探针需要较低的温度。杂交通常取决于当互补链存在于低于解链温度的环境下时变性的核酸序列重退火的能力。探针和可杂交序列之间所需同源性程度越高则可使用相对较高的温度。其结果是,相对较高的温度使反应条件越严格,而温度越低则反应条件的严格度越低。杂交反应严格性的其它细节解释可见Ausubel等,《分子生物学最新方法》(CurrentProtocolsinMolecularBiology),WileyIntersciencePublishers,(1995)。本文定义的“严格条件”或“高严格条件”可通过以下特征来鉴定,但不限于此,它们是(1)洗涤时采用低离子强度和高温,例如0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1%十二烷基硫酸钠,温度为50°C;(2)杂交过程中使用甲酰胺等变性剂,例如50%(ν/ν)甲酰胺和0.牛血清白蛋白/0.Ficoll/0.聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液(pH6.5)和750mM氯化钠、75mM柠檬酸钠,温度为42°C;或⑶使用50%甲酰胺、5χSSC(0.75ΜNaCl,0.075Μ柠檬酸钠)、50mM磷酸钠(pH6.8)、0.焦磷酸钠、切登哈特溶液、超声处理的鲑精DNA(50mg/ml)、0.SDS和10%硫酸葡聚糖,温度为42°C,42°C用0.2χSSC(氯化钠/柠檬酸钠)洗涤并在用50%甲酰胺洗涤,然后用在55°C用含有EDTA的0.1χSSC以高严格性洗涤。“中等严格条件"描述在,但不限于,Sambrook等在《分子克隆实验手册》(MolecularCloning:ALaboratoryManual,NewYork:CoIdSpringHarborPress,1989)中的描述,并且包括使用严格程度低于上述条件的洗涤溶液和杂交条件(例如温度、离子强度和%SDS)。中等严格条件的一个例子是在65°C在含有以下成分的溶液中培养一夜牛血清、0.5%磷酸钠pH7.5、1.25mMEDTA禾口7%SDS5XSSC(150mMNaCl,15mM柠檬酸三钠),然后在约50°C用2XSSC/SDS和在50°C用0.2XSSC/0.1%SDS洗涤滤膜。熟练的技术人员将了解如何调节温度、离子强度等以适应探针长度等因素。HLA“超基序”是由两个或多个HLA等位基因编码的HLA分子共享的肽结合特异性。不同种族人群中HLA-超型的所有表型频率列于表IV(f)。各种超型(supertype)的非限制性组成如下A2:A*0201,A*0202,A*0203,A*0204,A*0205,A*0206,A祁802,A祁901,A*0207A3:A3,All,A31,A*3301,A祁801,A*0301,A*1101,A*3101B7:B7,B*3501_03,B*51,B*5301,B*5401,B*5501,B*5502,B*5601,B*6701,B*7801,B*0702,B*5101,B*5602B44:B*3701,B*4402,B*4403,B*60(B*4001),B61(B*4006)Al:A*0102,A*2604,A*3601,A*4301,A*8001A24:A*24,A*30,A*2403,A*2404,A*3002,A*3003B27:B*1401-02,B*1503,B*1509,B*1510,B*1518,B*3801_02,B*3901,B*3902,B氺3903-04,B氺4801-02,B*7301,B*2701_08B58:B*1516,B*1517,B*5701,B*5702,B58B62:B*4601,B52,B*1501(B62),B*1502(B75),B*1513(B77)不同HLA-超型组合计算出的人群覆盖率列于表IV(g)中。“治疗”或“治疗的”以及语法上相关的术语在本文中是指对任何疾病后果的任何改善,如存活时间延长、发病率降低和/或副作用减轻,这些是更换治疗模式的副产品;在本领域中很容易理解,虽然不要求完全根治疾病,但能完全根除疾病则是优选的结果。“转基因动物”(例如小鼠或大鼠)是具有含有转基因的细胞的动物,所述转基因被引入动物或在出生前(例如胚胎阶段)被引入动物的祖先。“转基因”是被整合入细胞的基因组内的DNA,以产生转基因动物。HLA或细胞免疫应答“疫苗”在这里表示含有或编码一种或多种本发明的肽的组合物。有许多此类疫苗的实例,如一种或多种肽的混合物;多表位(poly印itopic)肽所含的一种或多种本发明的肽;或编码这种单独的肽或多肽的核酸,例如编码多表位肽的小基因。“一种或多种肽”可包含1-150或更多中的任何整数,例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145或150或更多本发明的肽。所述肽或多肽可任选被修饰,如通过脂化、加入靶序列或其它序列。本发明的HLAI类肽可与HLAII类肽混合或连接以易于活化细胞毒T淋巴细胞和辅助T淋巴细胞的活化。HLA疫苗可包含肽-脉冲的抗原呈递细胞,例如树突细胞。术语“变体”是指显示不同于所述类型或正常类型的变化的分子,如在明确描述的蛋白质(如图1所示的PSCA蛋白)的相应位置上含有一个或多个不同氨基酸残基的蛋白质。变体蛋白质的一个例子是类似物。剪接同种型和单核苷酸多态性(SNP)是变体的其它例子。本发明的“PSCA相关蛋白”包括这里特别描述的那些,以及等位变体、保守取代变体、类似物和同系物,它们可按照这里列出的方法或本领域容易获得的方法无需过度实验便可分离/产生并作特征性鉴定。也包括将不同PSCA蛋白或其片段的部分组合产生的融合蛋白以及PSCA蛋白和异源多肽形成的融合蛋白。这种PSCA蛋白统称为PSCA相关蛋白、本发明的蛋白质或PSCA。术语“PSCA相关蛋白”是指有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或25个以上氨基酸;或至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、225、250、275、300、325、330、335、339或更多氨基酸的多肽片段或PSCA蛋白质序列。II.)PSCA多核苷酸本发明的一个方面提供了与所有或部分PSCA基因、mRNA和/或编码序列相对应或互补的多核苷酸,优选以分离形式,包括编码PSCA相关蛋白及其片段的多核苷酸、DNA、RNA、DNA/RNA杂合体及有关分子、与PSCA基因或mRNA序列或其部分相互补的多核苷酸或寡核苷酸、以及与PSCA基因、mRNA或与编码PSCA的多核苷酸(统称为“PSCA多核苷酸”)杂交的多核苷酸或寡核苷酸。在章节提及的所有情况下,图1中T也可以是U。PSCA多核苷酸的实例包括具有图1所示序列的PSCA多核苷酸,图1所示的PSCA的核苷酸序列,其中将T换成U;具有图1所示序列的多核苷酸的至少10个毗连核苷酸;或具有图1所示序列但将T换成U的多核苷酸的至少10个毗连核苷酸。编码PSCA蛋白相对长部分的多核苷酸也在本发明的范围内。例如,可通过多种本领域熟知的技术来产生编码图1所示或图3所示PSCA蛋白或“变体”的约氨基酸1(或20或30或40等)到约氨基酸20(约30或40或50等)的多核苷酸。这些多核苷酸片段可包括图1中所示PSCA序列中的任何部分。II.A.)PSCA多核苷酸的用途II.Α.1.遗传异常的监测上面所述的多核苷酸有多种不同用途。人PSCA基因的染色体定位图列于题为"PSCA的染色体绘图”的实施例中。例如,由于这种染色体的PSCA基因图,编码PSCA蛋白不同区域的多核苷酸被用来确定该染色体部位的细胞遗传异常,例如鉴定为与各种癌症有关的异常。在某些基因中,包括重排在内的多种染色体异常已经被鉴定为许多不同癌症中经常出现的细胞遗传异常(见例如Krajinovic等,Mutat.Res.382(3-4):81-83(1998);Johansson等,Blood86(10):3905-3914(1995)禾口Finger等,P.N.A.S.85(23)9158-9162(1988))。因此,编码PSCA蛋白特定区域的多核苷酸最可能是用来描绘编码可能会造成恶性表型的PSCA的染色体区域中的细胞遗传异常的比原先可能更精确的新工具。文中,这些多核苷酸满足了本领域对提高染色体筛选的灵敏度以鉴定出更加精细和更不常见的染色体异常的需求(见例如Evans等,Am.J.Obstet.GyneC01171(4)1055-1057(1994))。此外,已证明PSCA在前列腺和其它癌中高表达,PSCA多核苷酸被用于评定正常组织和癌组织中PSCA基因产物状况的方法。通常,编码PSCA蛋白特定区域的多核苷酸被用来评定PSCA基因特定区域(如含有一个或多个基序的区域)是否存在紊乱(如缺失、插入、点突变或导致抗原性丧失的变化)。示范性的检测法包括RT-PCR测定和单链构象多态性(SSCP)分析(见例如Marrogi等,J.Cutan.Pathol.26(8):369-378(1999),它们都利用编码蛋白质特定区域的多核苷酸来检测蛋白质内的这些区域。II.A.2.反义实施方式与这里所述本发明的实施方案有关的其它具体的核酸是基因组DNA、cDNA、核酶和反义分子,以及基于可替换主链或包含可替换碱基的核酸分子,它们可以来自天然来源或者是合成的,并且包括能够抑制RNA或PSCA蛋白质表达的分子。例如,反义分子可以是RNA或其它分子,包括肽核酸(PNA)或非核酸分子,如以碱基对依赖方式特异性结合DNA或RNA的硫代磷酸酯衍生物。熟练的技术人员可用这里所述的PSCA多核苷酸和多核苷酸序列容易获得这些类型的核酸分子。反义技术需要使用结合细胞内靶多核苷酸的外源寡核苷酸。术语"反义〃是指这种寡核苷酸与它们的胞内靶(例如PSCA)互补。见例如JackCohen,Oligodeoxynucleotides,AntisenseInhibitorsofGeneExpression,CRCPress,1989;和Synthesis1:1-5(1988)。本发明的PSCA反义寡核苷酸包括衍生物,如S-寡核苷酸(硫代磷酸酯衍生物或S-oligo,见JackCohen,同上),这种物质具有增强的抑制癌细胞生长的活性。S-oligo(核苷硫代磷酸酯)是寡核苷酸(Ο-oligo)的等电子类似物,其中磷酸基的非桥接氧原子被硫原子替代。本发明的S-oligo可用硫原子转移剂3H-1,2-苯并二硫醇-3--1,1-二氧化物处理相应的0-OIigo来制备。见例如Iyer,R.P.等,J.Org.Chem.55:4693-4698(1990);和Iyer,R.P.等,J.Am.Chem.Soc.112:1253-1254(1990)。本发明的其它PSCA反义寡核苷酸包括本领域已知的吗啉代反义寡核苷酸(见例如Partridge等,1996,Antisense&NucleidAcidDrugDevelopment6:169-175)。本发明的PSCA反义寡核苷酸通常可以是与PSCA基因组序列的前100个5’密码子和后100个3’密码子或相应的mRNA互补或稳定杂交的RNA或DNA。尽管互补性程度高是优选的,但不要求完全互补。使用与该区域互补的寡核苷酸能够与PSCAmRNA选择性杂交而不与蛋白激酶其它调节亚基的mRNA杂交。在一个实施方案中,本发明的PSCA反义寡核苷酸是含有与PSCAmRNA杂交的序列的反义DNA分子的15至30个残基的片段。任选地,PSCA反义寡核苷酸是与PSCA前10个5’密码子或后10个3’密码子互补的30-个残基的寡核苷酸。或者,所述反义分子被修饰以便用核酶来抑制PSCA表达,见例如L.A.Couture&D.T.Stinchcomb;TrendsGenet12:510-515(1996)。II.Α.3.引物和引物对本发明这些核苷酸的其它具体实施方案包括能够特异性扩增本发明的多核苷酸或其任何特定部分的引物和引物对,以及与本发明的核酸分子或其任何部分选择性或特异性杂交的探针。探针可用可检测标记标识,如放射性同位素、荧光化合物、生物发光化合物、化学发光化合物、金属螯合剂或酶标记。这种探针和引物被用来检测样品中是否存在PSCA多核苷酸并被作为检测表达PSCA蛋白的细胞的工具。这种探针的例子包括含有全部或部分图1所示人PSCAcDNA序列的多肽。能够特异性扩增PSCAmRNA的引物对的例子也在实施例中描述。熟练的技术人员将了解,可基于这里提供的序列来制备大量不同的引物和探针并将它们用来有效扩增和/或检测PSCAmRNA。本发明的PSCA多核苷酸可用于许多目的,其中包括但不限于将它们用作扩增和/或检测PSCA基因、mRNA或其片段的探针和引物;作为诊断和/或预测前列腺癌以及其它癌症的试剂;作为能够引导PSCA多肽表达的编码序列;作为调节或抑制PSCA基因表达和/或PSCA转录物翻译的工具;以及作为治疗剂。本发明包括使用这里所述的任何探针鉴定并分离来自天然来源(如人或其它哺乳动物)的PSCA或PSCA相关核酸序列,以及分离的核酸序列本身,所述序列可包含在所用探针中发现的全部或大多数序列。II.A.4.PSCA-编码的核酸分子的分离这里所述的PSCAcDNA序列能够分离编码PSCA基因产物的其它多核苷酸,以及分离编码PSCA基因产物同系物、交替剪切同种型、等位变体和PSCA基因产物突变形式的多核苷酸,以及编码PSCA相关蛋白类似物的多核苷酸。已经熟知各种用来分离编码PSCA基因的全长cDNA的分子克隆方法(见例如Sambr00k,J.等,《分子克隆实验手册》(第二版),ColdSpringHarborPress,NewYork,1989;Ausubel等编的《分子生物学最新方法》,WileyandSons,1995)。例如,可用市售的克隆系统(例如LambdaZAPExpress,Stratagene)方便地进行λ噬菌体克隆法。可用标记的PSCAcDNA或其片段作为探针来鉴定含有PSCA基因cDNA的噬菌体克隆。例如,在一个实施方案中,可合成PSCAcDNA(例如图1)或其部分并将其用作探针来检索与PSCA基因相对应的重叠和全长cDNA。可通过用PSCADNA探针或引物筛选基因组DNA文库、细菌人造染色体文库(BAC)、酵母人造染色体文库(YAC)等来分离PSCA基因本身。II.A.5.重组核酸分子和宿主-载体系统本发明还提供了含有PSCA多核苷酸、其片段、类似物或同系物的重组DNA或RNA分子,包括但不限于噬菌体、质粒、噬菌粒、粘粒、YAC、BAC、以及本领域熟知的各种病毒和非病毒载体,以及被这种重组DNA或RNA分子转化或转染的细胞。产生这种分子的方法可熟知的(见例如Sambrook等,1989,同上)。本发明还提供的宿主-载体系统含有能在合适的原核或真核宿主细胞内(表达)的含有PSCA多核苷酸、其片段、类似物或同系物的重组DNA。合适的真核宿主细胞的例子包括酵母细胞、植物细胞护动物细胞,如哺乳动物细胞或昆虫细胞(例如可被杆状病毒感染的细胞,如Sf9或HighFive细胞)。合适的哺乳动物细胞的例子包括各种前列腺癌细胞系,如DU145和TSUft~l,其它可转染或可转导的前列腺癌细胞系,原代细胞(PrEC),以及许多通常用来表达重组蛋白的哺乳动物细胞(如C0S、CH0J93J93T细胞)。更具体地说,可用任何一种本领域通常使用并被广泛了解的宿主-载体系统,利用含有PSCA编码序列或其片段、类似物或同系物的多核苷酸来产生PSCA蛋白残基片段。可获得许多适合表达PSCA蛋白或其片段的宿主-载体系统,见例如Sambrook等,1989,同上;《分子生物学最新方法》,1995,同上)。用于哺乳动物表达的优选的载体包括但不限于pcDNA3.lmyc-His-tag(Invitrogen)和反转录病毒载体pSRtkneo(Muller等,1991,MCB11:178。使用这些表达载体,能够在一些前列腺癌和非前列腺细胞系中表达PSCA,其中包括例如293、293T、rat-l、NIH3T3和TsuPrl细胞。本发明的宿主-载体系统可用来制造PSCA蛋白或其片段。这种宿主-载体系统可被用来研究PSCA和PSCA突变体或类似物的功能特性。重组人PSCA蛋白或其类似物或同系物或片段可用被编码PSCA-相关核苷酸的构建物转染的哺乳动物细胞来制造。例如,293T细胞可被编码PSCA或其片段、类似物或同系物的表达质粒转染,从而PSCA相关蛋白在细胞中表达,并可用标准纯化方法(例如用抗-PSCA抗体亲和纯化)来分离重组PSCA蛋白。另一实施方案中,PSCA编码序列白亚克隆入反转录病毒载体pSRMSVtkneo并用来感染各种哺乳动物细胞系,如NIH3T3,TsuPrU293和rat-Ι,以建立PSCA表达细胞系。也可用本领域熟知的各种其它表达系统。编码连接到PSCA编码序列读框的前导肽的表达构建物可用来产生分泌形式的重组PSCA蛋白。如这里所论述的,遗传密码的冗余性允许PSCA基因序列中存在变化。具体地说,本领域已知特定种类的宿主通常具有特定密码子的偏爱,因此可以采纳已知的所需宿主偏爱的序列。例如,优选的类似物密码子序列通常用高频密码子代替罕用密码子(即在所需宿主的已知序列中使用频率不到20%的密码子)。例如可利用在因特网上获得的密码子使用表(URL为dna.affrc.go.jp/nakamura/cocon.html)可计算出特定种类优选的密码子,。已知其它的序列修饰可增强细胞宿主内的蛋白质表达。这些修饰包括删除编码假聚腺苷化信号、外显子/内含子剪接位点信号、转座子样重复的序列,和/或其它此类充分了解的对基因表达有害的序列。序列的GC含量可被调节至给定细胞宿主的平均水平,该水平可参考在细胞宿主内表达的已知基因来计算。可能的话,可对序列进行修饰以避免预测的mRNA发夹二级结构。其它有用的修饰包括在开放读框开始处加入翻译启动共有序列,如Kozak所述,Mol.CellBiol.,9:5073-5080(1989)。熟练的技术人员知道以下一般原则,即真核核糖体无一例外地从最接近5’端的AUG密码子开始翻译,该原则只在极少情况下失效(见例如KozakPNAS92(7):2662-2666,(1995),和KozakNAR15(20)8125-8148(1987))。III.)PSCA相关蛋白本发明的其它方面提供了PSCA相关蛋白。PSCA蛋白的具体实施方案包括具有图291,优选图IA所示人PSCA全部或部分氨基酸序列的多肽。或者,PSCA蛋白的实施方式包括在图1所示的PSCA氨基酸序列中有改变的变体、同系物或类似物多肽。PSCA多核苷酸的实施方式包括具有图1所示序列的PSCA多肽,图1所示的PSCA的肽序列,其中将T换成U;具有图1所示序列的多肽的至少10个毗连核苷酸;或具有图1所示序列但将T换成U的多肽的至少10个毗连核苷酸。表II提供了氨基酸缩写。通常可在蛋白质内进行保守性氨基酸取代而不改变蛋白质的构象或功能。本发明的蛋白质可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个保守性取代。本文所述的本发明的实施方案包括大量本领域可接受的PSCA蛋白的变体或类似物,如带有氨基酸插入、缺失和取代的多肽。PSCA变体可用本领域已知的方法,例如定点诱变、丙氨酸扫描和PCR诱变来制造。定点诱变(Carter等,Nucl.AcidsRes.,13:4331(1986);Zoller等,Nucl.AcidsRes.,10:6487(1987))、盒式诱变(Wells等,Gene,34:315(1985))、限制选择诱变(Wells等,Philos.Trans.R.Soc.LondonSerA,317415(1986))或其它已知技术可在克隆的DNA上进行来产生PSCA变体DNA。扫描氨基酸分析也可用来鉴定毗连序列上与特定生物活性如蛋白质-蛋白质相互作用有关的一个或多个氨基酸。优选的扫描氨基酸是相对较小的中性氨基酸。这种氨基酸包括丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸和半胱氨酸。丙氨酸通常是该组中优选的扫描氨基酸,因为它的β碳原子上没有侧链并且不太可能改变变体的主链构象。丙氨酸通常也是优选的,因为它是最常见的氨基酸。此外,它通常发现于被埋没及被暴露的位置(Creighton,Proteins,(W.H.Freeman&Co.,N.Y.);Chothia,J.Mol.Biol.,1501(1976))。如果丙氨酸取代未产生适量的变体,则可使用等构氨基酸。如本文的定义,PSCA变体、类似物或同系物的至少一个可鉴别的属性是具有一个表位能与含有图1氨基酸序列的PSCA蛋白起“交叉反应”。在该句中,“交叉反应”是指特异性结合PSCA变体的抗体或T细胞也特异性结合具有图1所示氨基酸序列的PSCA蛋白。当一多肽不再含有任何能够被特异性结合起始PSCA蛋白的抗体或T细胞识别的表位时,该多肽不再是图1所示蛋白质的变体。精通本领域的技术人员知道,识别蛋白质的抗体结合不同大小的表位,从集的约4或5个毗连或不毗连的氨基酸认为是最小表位中典型的氨基酸数目。见例如Nair等,J.Immunol2000165(12):6949-6955;Hebbes等,MolImmunol(1989)26(9):865-73;Schwartz等,JImmunol(1985)135(4):2598_608。其它类型的PSCA相关蛋白变体与图1的氨基酸序列或其片段具有70%、75%、80%、85%或90%或更高的类似性。其它特定类型的PSCA蛋白变体或类似物包含一种或多种这里所述的或本领域目前已知的PSCA生物基序。因此,本发明包括相比起始片段功能(例如免疫原性)特性已经改变的PSCA片段的类似物(核酸或氨基酸)。还知道这种基序或本领域已知的基序将被用于图1的核酸或氨基酸序列。如这里所论述的,本发明的实施方案包括含有小于图1所示PSCA蛋白全长氨基酸序列的多肽。例如,本发明的典型实例包括含有图1所示PSCA蛋白任何4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15个或更多毗连氨基酸的肽/蛋白质。PSCA相关蛋白是用标准肽合成技术或用本领域熟知的化学剪接法产生的。或者可用重组方法来产生编码PSCA相关蛋白的核酸分子。在一个实施方案中,可用核酸分子来产生PSCA蛋白的规定片段(或其变体、同系物或类似物)。III.A.)带有基序的蛋白质的实施方式本文所揭示的本发明的其它示范性实施方案包括含有图1所示PSCA多肽序列中所含的一个或多个生物基序的氨基酸残基的PSCA多肽。本领域已知各种基序,并且可通过许多可公开获得的因特网站点(例如有以下URL:pfam.wustl.edu/;searchlauncher.bcm.tmc.edu/seq-search/struc-predict.html;psort.ims.u-tokyo.ac.jp/;cbs.dtu.dk/;ebi.ac.uk/interpro/scan,html;expasy.ch/tools/scnpsitl.html;Epimatrix禾口Epimer,BrownUniversity,brown.edu/Research/TB_HIV_Lab/epimatrix/epimatrix·html;以及BIMAS,bimas.dcrt.nih.gov/.)来评估这种基序的存在情况。在表V-XVIII和XXII-LI中列出并鉴定了带有所有PSCA变体蛋白质带有基序的子序列。表IV(h)列出了基于pfam检索(见URLpfam.wustl.edu/)的一些常见的基序。表IV(h)的栏⑴列出了(1)基序名称的缩写,(2)该基序家族不同成员之间的相同性百分比,(基序名称或描述,以及(4)最常见的功能;如果该基序与定位有关则还包括位置fn息ο鉴于上述PSCA基序与生长失调有关并且由于PSCA在某些癌症(见例如表I)中过度表达,含有上述一个或多个PSCA基序的多肽对于阐明恶性表型的具体特征是有用的。例如,已知酪蛋白激酶II、cAMP和依赖于camp的蛋白激酶以及蛋白激酶C是与恶性表型的发展有关的酶(见例如Chen等,LabInvest.,78(2):165-174(1998);Gaiddon等,Endocrinology136(10):4331-4338(1995);Hall等,NucleicAcidsResearch24(6)1119-1126(1996);Peterziel等,Oncogene18(46):6322-6329(1999)和0,Brian,Oncol.Rep.5(2):305-309(1998))。此外,糖基化和肉豆蔻酰化也是与癌症和癌发展有关的蛋白质修饰(见例如Dennis等,Biochem.Biophys.Acta1473(1):21-34(1999);Raju等,Exp.CellRes.235(1):145-1(1997))。酰胺化是另一种也与癌症和癌发展有关的蛋白质修饰(见例如Treston等,J.Natl.CancerInst.Monogr.(13)169—175(1992))。另一实施方案中,本发明的蛋白质包含一个或多个用本领域可接受的方法鉴定出的免疫反应性表位(如表V-XVIII和XXII-LI中列出的方法)。可用特定的算法鉴定出PSCA蛋白内能够最佳结合特定HLA等位基因的肽来确定CTL表位(例如表IV;Epimatrix禾口Epimer,BrownUniversity,URLbrown.edu/Research/TB_HIV_Lab/epimatrix/epimatrix.html;以及BIMAS,URLbimas.dcrt.nih.gov/)。此外,鉴定与HLA分子有足够的结合亲和力且与成为免疫原性表位有关的肽的方法是本领域熟知的,并且无需过度实验便可进行。此外,鉴定成为免疫原性表位的肽的方法是本领域熟知的,并且无需过度实验便可在体外或体内进行。本领域还知道产生这种表位的类似物以调节免疫原性的原理。例如,我们可以从带有CTL或HTL基序(见例如表IV的HLAI类和HLAII类基序/超基序)的表位开始。通过取代一个指定位置的氨基酸并用为该位置指定的另一个氨基酸代替它可以产生类似的表位。例如,基于表IV定义的碱基,我们可以用任何其它残基,例如优选的残基,取代出有害的残基;用优选的残基取代不太优选的残基;或用另一个优选的残基取代最初产生的优选的残基。取代可发生在某肽的主要锚定位置或肽内的其它位置;见例如表IV。许多参考资料都反映了鉴定并产生感兴趣的蛋白质及其类似物中的表位的技术。见例如Chesnut等的WO97/33602;Sette,Immunogenetics199950(3-4):201-212;Sette等,J.Immunol.2001166(2):1389-1397;Sidney等,Hum.Immunol.199758(1):12-20;Kondo等,Immunogenetics199745(4):249-258;Sidney等,J.Immunol.1996157(8):3480-90;和Falk等,Nature351:290-6(1991);Hunt等,Science255:1261-3(1992);Parker等,J.Immunol.149:3580-7(1992);Parker等,J.Immunol.152:163-75(1994));Kast等,1994152(8):3904-12;Borras-Cuesta等,Hum.Immunol.200061(3):266-278;Alexander等,J.Immunol.2000164(3);164(3):1625-1633;Alexander等,PMID:7895164,UI95202582;0,Sullivan等,J.Immunol.1991147(8):2663-2669;Alexander等,Immunity19941(9):751-761,以及Alexander等,Immunol.Res.199818(2):79_92。本发明的有关实施方案包括含有表IV(a)、IV(b)、IV(c)、IV(d)和IV(h)列出的不同基序,和/或一个或多个表V-XVIII和XXII-LI的预测的CTL表位,和/或一个或多个表XLVIII-LI的预测的HTL表位,和/或一个或多个本领域已知的T细胞结合基序的组合的肽。优选的实施方案在基序或多肽的间插序列中不含插入、缺失或取代。此外,也可以考虑在这些基序的任一侧上有多个N-末端和/或C-末端氨基酸残基的实例(例如,包括含有基序的多肽结构的较大部分)。通常,基序任一侧上N-末端和/或C-末端氨基酸残基的数目为约1-100个氨基酸残基,优选5-50个氨基酸残基。PSCA相关蛋白的实例可以有许多形式,优选分离形式。纯化的PSCA蛋白分子将基本上不含会削弱PSCA与抗体、T细胞或其它配体结合的其它蛋白质或分子。分离和纯化的类型和程度将取决于所需用途。PSCA相关蛋白的实例包括纯化的PSCA相关蛋白和功能化的可溶性PSCA相关蛋白。在一个实施方案中,功能化的可溶性PSCA蛋白或其片段保留被抗体、T细胞或其它配体结合的能力。本发明还提供了含有图1所示PSCA氨基酸序列的生物活性片段的PSCA蛋白。这种蛋白质具有原始PSCA蛋白的特性,例如能够诱导产生能特异性结合原始PSCA蛋白相关表位的抗体产生;能够被这种抗体结合;能够诱导HTL或CTL的活化;和/或能够被同样特异性结合原始蛋白质的HTL或CTL识别。含有特别感兴趣结构的PSCA相关多肽可用本领域熟知的各种分析技术来预测和/或鉴定,这些技术包括,例如,Chou-Fasman,Garnier-Robson、Kyte-Doolittle、Eisenberg、Karplus-Schultz或Jameson-Wolf的分析方法,或基于免疫原性的方法。含有这种结构的片段对于产生亚单位特异性抗-PSCA抗体或T细胞,或鉴定结合PSCA的细胞因子特别有用。例如,可用Ηορρ,Τ.P.和Woods,K.R.的方法(1981,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.78:3824-3828)生成亲水性图谱并鉴定免疫原性肽片段。可用Kyte,J.和Doolittle,R.F.的方法(1982,J.Mol.Biol.157105-132)生成亲水性图谱并鉴定免疫原性肽片段。可用JaninJ.的方法(1979,Nature277:491-492)生成可接触残基百分比(%)图谱并鉴定免疫原性肽片段。用BhaskaranR.,PonnuswamyP.K.的方法(1988,Int.J.Pept.ProteinRes.32=242-255)生成平均屈曲性图谱并鉴定免疫原性肽片段。可MDeleage,G.,RouxB.的方法(1987,ProteinEngineeringl:289-294)生成β-转角图谱并鉴定免疫原性肽片段。可用特定算法确定CTL表位从而鉴定PSCA蛋白内能够最佳结合特定HLS等位基因的肽(例如,通过使用SYFPEITHI站点,其万维网URL地址为syfpeithi.bmi-heidelberg.com/;表IV(A)-(E)的列出的算法;Epimatriχ和Epimer,BrownUniversity,URL(brown.edu/Research/TB-HIV_Lab/epimatrix/epimatrix.html);以及BIMAS,URLbimas.dcrt.nih.gov/)。用上述算法可预测在本文人MHCI类分子部分所述的来自PSCA的肽表位,例如HLA-AUA2、A3、All、A24、B7和B35(见例如表V-XVIII,XXII-LI)。具体地说,PSCA蛋白的整个氨基酸序列以及其它变体的有关部分,即与该变体相对应的预测的HLAI类点突变或外显子两侧任一侧上的9个侧接残基,和预测的HLAII类点突变或外显子两侧任一侧上的14个侧接残基,被用于HLA肽基序检索算法,该算法可在上述BioinformaticsandMolecularAnalysisSection(BIMAS)网址中找到;此外还有SYFPEITHI站点,其URL为syfpeithi.bmi-heidelberg.com/。HLA肽基序检索算法是由KenParker博士根据HLAI类分子,尤其是HLA-A2沟槽中的特定肽序列的结合建立的(见例如i^alk等,Nature351:290-6(1991);Hunt等,Science255:1261-3(1992);Parker等,J.Immunol.149:3580-7(1992);Parker等,J.Immunol.152:163-75(1994))。该算法能够对来自完整蛋白质序列的8-肽、9-肽和10-肽进行定位和分级以便预测性地结合HLA-A2和许多其它HLAI类分子(的能力)。许多HLAI类结合肽是8_、9_、10或11-肽。例如,对I类HLA-A2而言,该表位优选在2位含有亮氨酸(L)或甲硫氨酸(M)并在C-末端含有缬氨酸(V)或亮氨酸(L)(见例如Parker等,J.Immunol.149:3580-7(1992))。选出的PSCA预测的结合肽结果示于这里的表V-XVIII和XXII-LI。在表V-XVIII和XXII-XLVIII中显示了选出的每个家族成员的候选(9-肽和10-肽)以及它们的位置、每个特定肽的氨基酸序列和估算的结合力评分。在表XLVIII-LI中显示了选出的每个家族成员的候选15肽以及它们的位置,各具体肽的氨基酸序列和估算的结合力评分。结合力评分对应于含肽复合体在37°CpH6.5的条件下解离的预计半衰期。预计具有最高结合评分的肽细胞表面的HLAI类分子结合最紧密而半衰期最长,因此给T细胞识别提供了最佳的免疫原性靶标。肽与HLA等位基因的实际结合可通过抗原加工缺陷细胞系T2上HLA表达的稳定情况来评估(见例如Xue等,Prostate30:73-8(1997)和Peshwa等,Prostate36129-38(1998))。具体肽的免疫原性可通过体外在抗原呈递细胞(如树突细胞)存在时⑶8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)的激活来评估。宜将每个通过BIMAS站点、Epimer和Epimatriχ站点预测的表位,或由HLAI类或II类基序指定的表位将被“用于”本发明所述的PSCA蛋白,所述HLAI类或II类基序可用所述技术获得或成为所述技术的一部分,如列于表IV(或用万维网站点URLsyfpeithi.bmi-heidelberg.com/,或BIMAS,bimas.dcrt.nih.gov/确定)。“用于”在文中表示评价PSCA蛋白,例如通过视觉评价或通过基于计算机的模式找寻方法,精通相关领域的技术人员可方便地进行。PSCA蛋白的每个带有HLAI类基序的8、9、10或11个氨基酸残基的子序列,或带有HLAII类基序的9个或更多个氨基酸残基的子序列都属于本发明范围之内。III.B.)PSCA相关蛋白的表达在下面的实施例描述的一个实施方案中,PSCA可在商品化的表达载体转染的细胞(如细胞)内方便地表达,商品表达载体例如有CMV-驱动的编码含C-末端6个组氨酸和MYC标记的PSCA的表达载体(pcDNA3.1/mycHIS,Invitrogen或Tag5,GenHunterCorporation,NashvilleTN)。Tag5载体提供了一个IgGK分泌信号,可用于促进转染的细胞产生分泌的PSCA蛋白。例如,可采用标准技术用镍柱纯化分泌到培养基中的HIS-标记的PSCA。III.C.)PSCA相关蛋白的修饰PSCA相关蛋白的修饰,如共价修饰包括在本发明范围之内。共价修饰的一种类型包括使PSCA多肽的靶氨基酸残基与能够和PSCA蛋白的所选侧链或N-或C-末端残基反应的有机衍生剂反应。本发明范围内的PSCA多肽共价修饰的另一种类型包括改变本发明蛋白质的天然糖基化模式。PSCA共价修饰的另一种类型包括以美国专利4,640,835;4,496,689;4,301,144;4,670,417;4,791,192或4,179,337中列举的方式将PSCA多肽连接到多种非蛋白质类型聚合物之一,这些聚合物如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯。本发明的PSCA相关蛋白可被修饰以形成含有融合到其它异源多肽或氨基酸序列的PSCA的嵌合分子。这种嵌合分子可通过化学或重组方法合成。嵌合分子可含有融合到其它肿瘤相关抗原或其片段的本发明的蛋白质。或者,本发明所述的蛋白质可含有PSCA序列(氨基酸或核酸序列)片段的融合物,这样便形成了在其长度上不与图1所示氨基酸或核酸序列直接同源的分子。这种嵌合分子可含有多个相同的PSCA子序列。嵌合分子可包含带有多组氨酸表位标记(提供了固定的镍可选择性结合的表位)的PSCA相关蛋白与细胞因子或与生长因子的融合物。该表位标记通常置于PSCA蛋白的氨基-或羧基-末端。在另一个实施方案中,嵌合分子可包含PSCA相关蛋白与免疫球蛋白或免疫球蛋白特定区域的融合物。对于这种嵌合分子的二价形式(也成为"免疫粘附素"),这种融合物可以是IgG分子的Fc区域。Ig融合物宜包含用PSCA多肽的可溶(跨膜结构域被删除或失活)形式代替Ig分子至少一个可变区的取代。在一优选的实施方案中,所示免疫球蛋白融合物包含IgGl分子的绞链、CH2和CH3区,或绞链、CHI、CH2和CH3区。为制造免疫球蛋白融合物,可参见,例如,1995年6月27日发表的美国专利号5,428,130。III.D.)PSCA相关蛋白的用途本发明的蛋白质有许多不同的用途。由于PSCA在前列腺癌和其它癌症中高度表达,PSCA相关蛋白被用于评估正常组织和癌组织中PSCA基因产物的状态从而确定恶性表型的方法。通常,来自PSCA蛋白特定区域的多肽被用来评估那些区域(如含有一个或多个基序的区域)中是否存在错乱(如缺失、插入、点突变等)。示范性的试验利用靶向含有PSCA多肽序列中所含的一个或多个生物基序的氨基酸残基的PSCA相关蛋白的抗体或T细胞,以评价正常组织和癌组织中该区域的特性,或引发对该表位的免疫应答。或者,含有PSCA蛋白一个或多个生物学活性基序的氨基酸残基的PSCA相关蛋白被用于筛选与PSCA的该区域相互作用的因子。PSCA蛋白片段/子序列对于产生或特征分析结构域特异性抗体(例如识别PSCA蛋白胞外或胞内表位的抗体)以鉴定结合PSCA或其特定结构域的自己或细胞因子特别有用,并且在各种治疗和诊断应用中特别有用,包括但不限于诊断测定、癌疫苗和制备这种疫苗的方法。PSCA基因或其类似物、同系物或片段编码的蛋白质有许多用途,包括但不限于产生抗体和用来鉴定结合PSCA基因产物的配体和其它试剂和细胞成分。产生的抗PSCA蛋白或其片段的抗体可用于诊断和预后测定,并被用于人以表达PSCA蛋白为特征的表I中列出的那些癌症的成象方法。这种抗体可在胞内表达并被用于治疗这种癌症患者的方法。PSCA-相关核酸或蛋白质也被用来产生HTL或CTL应答。使用了各种对于检测PSCA蛋白有效的免疫试验,其中包括但不限于各种类型的放射免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫荧光测定(ELIFA)、免疫细胞化学法等等。抗体可被标记并被用作能够检测表达PSCA的细胞的免疫显象剂(例如在放射闪烁成象法中)。PSCA蛋白对于产生癌症疫苗也特别有用,这将在文中进一步描述。IV.)PSCA抗体本发明的另一方面提供了结合PSCA相关蛋白的抗体。优选的抗体特异性结合PSCA相关蛋白但在生理条件下不结合(或弱结合)不与PSCA相关的蛋白质的肽或蛋白质。文中,生理条件的例子包括1)磷酸缓冲盐水;2)含25mMTris和150mMNaCl的Tris缓冲盐水;或生理盐水(0.9%NaCl);4)动物血清如人血清;或幻1)-4)中任一项的组合;这些反应宜在PH7.5下发生,或在pH7.0-8.0的范围内发生,或在pH6.5-8.5的范围内发生;同时,这些反应在4-37°C的温度下发生。例如,结合PSCA的抗体可结合PSCA相关蛋白,例如其同系物或类似物。本发明的PSCA抗体对于癌症(见例如表I)诊断和预后检测以及成象方法特别有用。类似地,这种抗体对于治疗、诊断和/或预测前列腺和其它癌症也是有用的,只要PSCA也在这些其它癌症中表达或过度表达。此外,胞内表达的抗体(例如单链抗体)在处理与PSCA的表达有关的癌症(例如晚期或转移性前列腺癌)或其它晚期或转移性癌症中也有治疗作用。本发明还提供了各种用来检测和量化OSCA和突变型PSCA相关蛋白的免疫试验。这种试验可包括一种或多种能够适当识别并结合PSCA相关蛋白的PSCA抗体。这些试验可用本领域熟知的各种免疫测定模式进行,其中包括各种类型的放射免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫荧光测定(ELIFA)等等。本发明的非抗体免疫测定还可包括T细胞免疫原性测定(抑制或刺激)以及主要组织相容性复合体(MHC)结合检测。此外,本发明还提供了能够检测前列腺癌和其它表达PSCA的癌症的免疫成象法,其中包括但不限于使用标记的PSCA抗体的放射闪烁成象法。这种检测法在临床上用于表达PSCA的癌症(如前列腺癌)的检测、监控和预测。PSCA抗体也被用于纯化PSCA相关蛋白和分离PSCA同系物及相关分子的方法。例如,纯化PSCA相关蛋白的方法包括在允许PSCA抗体结合PSCA相关蛋白的条件下将含有PSCA相关蛋白的裂解液或其它溶液与已与固体基质偶联的PSCA抗体一起孵育;洗涤该固体基质以除去杂质;并从偶联的抗体洗脱PSCA相关蛋白。本发明所述PSCA抗体的其它用途包括产生模拟PSCA蛋白的抗-独特型抗体。各种制造抗体的方法是本领域熟知的。例如,可通过用分离形式或免疫缀合形式的PSCA相关蛋白、肽或片段免疫哺乳动物宿主来制备抗体(《抗体实验室手册》(Antibodies:ALaboratoryManual),CSHPress,Harlow禾口Lane编辑(1988);Harlow,《抗体》(Antibodies),ColdSpringHarborPress,NY(1989))。此外,也可使用PSCA的融合蛋白,如PSCAGST-融合蛋白。在一具体实施方案中,制造了包含图1的全部或大部分氨基酸序列的GST融合蛋白,然后将其用作免疫原来产生合适的抗体。另一实施方案中,合成了PSCA相关蛋白并将其用作免疫原。此外,本领域已知的裸DNA免疫技术被用来(有或没有纯化的PSCA相关蛋白或PSCA表达细胞)产生对编码的免疫原的免疫应答(参见Donnelly等,1997,Ann.Rev.Immunol.15:617-648)。可分析图1中所示的PSCA蛋白的氨基酸序列以选择出产生抗体的PSCA蛋白的特定区域。例如,可利用PSCA氨基酸序列的疏水性和亲水性分析来鉴定PSCA结构中的亲水区域。具有免疫原性结构的PSCA蛋白区域以及其它区域和结构域可方便地用本领域已知的各种其它方法来鉴定,这些方法例如Chou-Fasman、Garnier-Robson、Kyte-Doolittle、Eisenberg、Karplus-Schultz或Jameson-Wolf的分析法。可用Ηορρ,Τ·P.禾口Woods,K.R.的方法(1981,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.78:3824-3828)生成亲水性图谱。可用Kyte,J.和Doolittle,R.F.的方法(1982,J.Mol.Biol.157:105-132)生成亲水性图谱。可用JaninJ.的方法(1979,Nature277:491-492)生成可接触残基百分比(%)图谱。用BhaskaranR.,PonnuswamyP.K.的方法(1988,Int.J.Pept.ProteinRes.32:242-255)生成平均屈曲性图谱。可用Deleage,G.,RouxB.的方法(1987,ProteinEngineering1:289-294)生成转角图谱。因此,用这些程序或方法中的任何一种鉴定出的各个区域在本发明范围之内。本文还通过实施例的方式进一步阐述了产生PSCA抗体的优选方法。制备用作免疫原的蛋白质或多肽的方法是本领域熟知的。本领域还熟知制备蛋白质与载体(如BSA、KLH或其它载体蛋白)的免疫原性缀合物的方法。一些情况下,采用直接结合,例如使用碳二亚胺试剂;其它情况下,例如由PierceChemicalCo.(Rockford,IL)提供的结合试剂是有效的。像本领域知晓的那样,经常通过在适当时间内与合适的佐剂一起注射来施用PSCA免疫原。在免疫过程中,可通过抗体的滴度来确定是否形成足够抗体。PSCA单克隆抗体可用各种本领域熟知的方法来制造。例如,众所周知,用Kohler和Milstein的标准杂交瘤技术或改进技术使产生抗体的B细胞不死化来制备了分泌所需单克隆抗体的不死细胞系。分泌所需抗体的不死细胞系通过以PSCA相关蛋白作为抗原的免疫测定来筛选。当鉴定出合适的不死细胞培养物时,可扩充细胞并从体外培养物或从腹水液中制造抗体。本发明的抗体或片段可通过重组方法制造。特异性结合所需PSCA蛋白区域的区域也可在多物种来源的嵌合或互补决定区(CDR)移植抗体形式来生产。也可制造人源化或人PSCA抗体,且它们宜用于治疗。通过用一个或多个非人抗体CDR来代替相应的人抗体序列制备人源化鼠抗体或其它非人抗体的方法是熟知的(见例如Jones等,1986,Nature321:522-525;Riechmannφ,1988,Nature332:323-327;Verhoeyenφ,1988,Science239:1534-1536)。也可参见Carter等,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285和Sims等,1993,J.Immunol.151:2296。制造完全的人单克隆抗体的方法包括噬菌体展示和转基因方法(参见例如Vaughan等,1998,NatureBiotechnology16:5;35_539)。完全的人PSCA单克隆抗体可利用人Ig基因大组合文库通过克隆技术产生(即噬菌体展示)(Griffiths和Hoogenboom,“建立体外免疫系统来自噬菌体展示文库的人抗体”(Buildinganinvitroimmunesystemhumanantibodiesfromphagedisplaylibraries)。弓|自Clark,Μ·编写的《用于男性诊断和治疗的抗体分子的蛋白质工程》(ProteinEngineeringofAntibodyMoleculesforProphylacticandTherapeuticApplicationsinMan),NottinghamAcademic,第45-64页,(1993);Burton禾口Barbas,《来自组合文库的人抗体》(HumanAntibodiesfromcombinatoriallibraries)。同上,第65-82页)。完全的人PSCA单克隆抗体也可用经过工程构建而含有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠来制造,如1997年12月3日公开的Kucherlapati和Jakobovits等的PCT专利申请W098/24893所述(也可参见Jakobovits,1998,Exp.Opin.Invest.Drugs7(4):607-614;2000年12月19日发表的美国专利6,162,963;2000年11月12日发表的6,150,584;和2000年9月5日发表的6,114598)。该方法避免了噬菌体展示技术要求的体外操纵,并可有效制造高亲和性真正的人抗体。PSCA抗体与PSCA相关蛋白的反应性可通过许多熟知的方法来建立,其中包括使用合适PSCA相关蛋白、表达PSCA的细胞或其提取物的Wfestern印迹、免疫沉淀、ELISA和FACS分析。PSCA抗体或其片段可用可检测标记物标记或与第二分子缀合。合适的可检测标记物包括但不限于放射性同位素、荧光化合物、生物发光化合物、化学发光化合物、金属螯合剂或酶。此外,用本领域通常了解的方法产生对两个或多个PSCA表位的双特异性抗体。均二聚(Homodimeric)抗体也可通过本领域已知的交联技术制得(例如,Wolff等,CancerRes.53:2560-2565)。在一个优选的实施方式中,本发明所提供的称为Hal-1.16、Hal_5.99、Hal_4.117、Ha1-4.20、Hal-4.121、Hal-4.37的单克隆抗体是在2005年5月4日被送至美国典型培养物保藏中心(ATCC),并分别被给予保藏号PTA-6698、PTA-6703、PTA-6699、PTA-6700、PTA-6701和PTA-6702。V.)PSCA细胞免疫应答T细胞识别抗原的机制已被阐明。有效的本发明的肽表位疫苗组合物能在全世界大多数人群中诱导治疗性和预防性免疫应答。为了解本发明的缀合物诱导细胞免疫应答的价值和功效,提供对免疫学相关技术的简单回顾。HLA-限制性T细胞识别HLA分子和作为配体的肽抗原的复合体(Buus,S.等,Cell47:1071,1986;Babbitt,B.P.等,Nature317359,1985;Townsend,A.禾口Bodmer,H.,Annu.Rev.Immunol.7:601,1989;Germain,R.N.,Annu.Rev.Immunol.11:403,1993)。通过研究单个氨基酸取代的抗原类似物和天然加工的内源结合肽的序列测定,已经鉴定出了与HLA的特异性结合抗原分子所需基序相对应的关键残基,列于表IV(也可参见例如,Southwood等,J.Immunol.160:3363,1998;Rammensee等,Immunogenetics41:178,1995;Rammensee等,SYFPEITHI,访问万维网的URL站点(134.2.96.221/scripts.hlaserver.dll/home.htm);Sette,Α.禾口Sidney,J.Curr.Opin.Immunol.10:478,1998;Engelhard,V.H.,Curr.Opin.Immunol.6:13,1994;Sette,A.禾口Grey,H.Μ.,Curr.Opin.Immunol.4:79,1992;Sinigaglia,F.和Hammer,J.Curr.Biol.6:52,1994;Ruppert等,Cell74:929-937,1993;Kondo等,J.Immunol.155:4307-4312,1995;Sidney等,J.Immunol.157:3480-3490,1996;Sidney等,人Immunol.45:79-93,1996;Sette,Α.禾口Sidney,J.Immunogenetics1999-11;50(3-4):201_12,综述)。此外,HLA-肽复合体的X射线晶体分析显示,HLA分子的肽结合裂隙/沟内的口袋可以等位基因特异性模式容纳肽配体的残基;这些残基又决定了带有它们的肽结合HLA的能力。(见例如Madden,D.R.Annu.Rev.Immunol.13:587,1995;Smith等,Immunity4203,1996;Fremont等,Immunity8:305,1998;Stern等,Structure2:245,1994Jones,Ε.Y.Curr.Opin.Immunol.9:75,1997;Brown,J.H.等,Nature364:33,1993;Guo,H.C.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:8053,1993;Guo,H.C.等,Nature360:364,1992;Silver,Μ.L.等,Nature360:367,1992;Matsumura,Μ.等,Science257:927,1992;Maddenφ,Cell70:1035,1992;Fremont,D.H.等,Science257:919,1992;Saper,Μ.Α.,Bjorkman,P.J.和Wiley,D.C.,J.Mol.Biol.219:277,1991)。因此,确定I类和II类等位基因特异性HLA结合基序,或者I类或II类超基序能够鉴定出蛋白质内与特定HLA抗原结合的相关区域。因此,通过鉴定HLA基序可鉴定出基于表位的疫苗候选物;还可通过HlA-肽结合检测进一步评价这种候选物以确定与表位和它相应的HLA分子有关的结合亲和力和/或结合周期。可进行其它证实工作以在这些疫苗候选物中选择在群体覆盖和/或免疫原性上具有较佳特性的表位。可用多种方法来评价细胞的免疫原性,包括1)评价正常个体的原代T细胞培养物(见例如flfentworth,P.Α.等,Mol.Immunol.32:603,1995;Celis,Ε.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA91:2105,1994;Tsai,V.等,J.Immunol.158:1796,1997;Kawashima,I.等,HumanImmunol.59:1,1998)。该过程包括当存在抗原呈递细胞时在体外用测试肽刺激正常人的外周血淋巴细胞(PBL)数周。该肽的特异性T细胞在此期间将被激活,可用例如肽致敏靶细胞的淋巴因子-或51Cr-释放试验进行检测。2)免疫HLA转基因小鼠(见例如ffentworth,P.A.等,J.Immunol.26:97,1996;ffentworth,P.A.等,Int.Immunol.8:651,1996;Alexander,J.等,J.Immunol.159:4753,1997)。例如,在该方法中,皮下给予Hla转基因小鼠用弗氏不完全佐剂配的肽。免疫接种数周后取得脾细胞,在测试肽存在时体外培养约1周。用例如肽致敏靶细胞和表达内源产生抗原的靶细胞的51Cr-释放试验检测肽特异性T细胞。3)证实已有效接种疫苗的免疫个体和/或慢性病患者中的记忆T细胞应答(见例如Rehermann,B.等,J.Exp.Med.181:1047,1995;Doolan,D.L.等,Immunity7:97,1997;Bertoni,R.等,J.Clin.Invest.100:503,1997;Threlkeld,S.C.等,J.Immunol.159:1648,1997;Di印older,H.Μ.等,J.Virol.71:6011,1997)因此,可通过培养由于疾病已经接触过抗原因此产生了“天然”免疫应答,或接种过这种抗原的疫苗者的PBL来检测记忆应答。将患者的PBL在测试肽和抗原呈递细胞(APC)存在时在体外培养1-2周以激活“记忆”T细胞,与“原初”T细胞作比较。在培养期结束时,使用包括与肽致敏靶细胞的51Cr释放、T细胞增殖或淋巴因子释放等试验检测T细胞活性。VI.)PSCA转基因动物编码PSCA相关蛋白的也可用来产生转基因动物或"敲除"动物,这种动物然后可用于开发和筛选有治疗作用的试剂。根据已有技术,编码PSCA的cDNA可用来克隆编码PSCA的基因组DNA。然后可用克隆的基因组序列来产生含有表达编码PSCA的DNA的细胞的转基因动物。制造转基因动物,尤其是例如小鼠或大鼠之类的动物,的方法已成为本领域的常规方法,并描述在,例如,1988年4月12日发表的美国专利4,736,866和1989年9月26日发表的4,870,009。通常,特定的细胞将成为带有组织特异性增强子的PSCA转基因掺38入的靶点。包含编码PSCA的转基因拷贝的转基因动物可被用来检查编码PSCA的DNA表达增强的效应。这种动物也可被用作药剂的实验动物,所述药剂被认为可提供例如与其过度表达有关的病理状态的保护。根据本发明的这一方面,相比具有该转基因的未治疗动物,用药剂治疗的动物病理状态的发病率降低,这说明该药剂对该病理状态有潜在治疗作用。或者,可用PSCA的非人同系物来构建PSCA"敲除"动物,所述动物由于编码PSCA的外源基因和引入动物胚胎细胞的改变的编码PSCA的基因组DNA之间的同源重组而导致编码PSCA的基因缺陷或被改变。例如,根据已有技术,可用编码PSCA的cDNA来克隆编码PSCA的基因组DNA。部分编码PSCA的基因组DNA的一部分可被删除或被用另一基因(例如编码可用来监控整合的可选标记的基因)替代。通常,载体中包含数千个碱基的未改变的侧接DNA(同时在5,和3,末端)(见例如Thomas和Capecchi,Cell,51:503(1987)关于同源重组载体的描述)。载体被引入胚胎干细胞系(例如通过电穿孔)并选择引入的DNA已经与内源DNA同源重组的细胞(见例如Li等,Cell,69:915(1992))。然后将选出的细胞注射到动物(例如小鼠或大鼠)的胚泡以形成聚集嵌合体(见例如Bradley,引自E.J.Robertson编写的《畸胎癌和胚胎干细胞实际进展》(TeratocarcinomasandEmbryonicStemCellsAPracticalApproach)(IRL,Oxford,1987),第113-152页)。然后可将嵌合胚胎植入合适的假孕雌性养育动物,然后使所述胚胎足月妊娠以产生"敲除"动物。在其生殖细胞内带有同源重组DNA的后代可通过标准技术鉴定并用来繁殖所有动物细胞都含有同源重组DNA的动物。可特征鉴定敲除动物它们抵抗疾病的能力或者由于缺乏PSCA多肽而发病。VII.)用于检测PSCA的方法本发明的另一方面涉及检测PSCA多核苷酸和PSCA相关蛋白的方法,以及鉴定表达PSCA的细胞的方法。PSCA的表达特征使其成为转移疾病的诊断标记物。因此,PSCA基因产物的状态便为预测包括发生晚期疾病的易感性、进展速度和/或肿瘤侵袭性等各种因素提供了有用信息。如本文详细讨论的,患者样品中PSCA基因产物的状态可用本领域熟知的各种方法来分析,其中包括免疫组织化学分析、包括原位杂交在内的各种Northern印迹技术、RT-PCR分析(例如在激光捕获显微切割样品上进行RT-PCR),Western印迹分析和组织阵列分析。更具体地说,本发明提供了检测生物样品(如血清、骨、前列腺、以及其它组织、尿、精液、细胞制品等)中的PSCA多核苷酸的试验。可检测的PSCA多核苷酸包括,例如,PSCA基因或其片段、PSCAmRNA、PSCAmRNA交替剪接变体以及含有PSCA多核苷酸的重组DNA或RNA分子。许多扩增和/或检测PSCA多核苷酸存在的方法是本领域熟知的并且可用于本发明这个方面的实践。在一个实施方案中,检测生物样品中PSCAmRNA的方法包括用至少一种引物通过逆转录从样品制造cDNA;用PSCA多核苷酸作为正义和反义引物扩增如此制得的cDNA以扩增其中的PSCAcDNA;以及检测是否存在扩增的PSCAcDNA。可任选确定扩增的PSCAcDNA序列。另一实施方案中,检测生物样品中PSCA基因的方法包括首先分离样品的基因组DNA;用PSCA多核苷酸作为正义和反义引物扩增分离的基因组DNA;以及检测是否存在扩增的PSCA基因。可从PSCA核苷酸序列(见例如图1)设计出任意数目的合适正义和反义探针的组合,并用于此目的。本发明还提供了检测组织或其它生物样品(如血清、精液、骨、前列腺、尿、细胞制品等)中PSCA蛋白存在情况的试验。检测PSCA相关蛋白的方法也是熟知的,包括例如免疫沉淀、免疫组织化学分析、Western印迹分析、分子结合检测、ELISA、ELIFA等。例如,检测生物样品中PSCA相关蛋白存在情况的方法包括首先使样品接触PSCA抗体、抗体的PSCA-反应性片段或含有PSCA抗体抗原结合区的重组蛋白;然后检测样品中PSCA相关蛋白的结合。鉴定表达PSCA的细胞的方法也在本发明范围之内。在一个实施方案中,鉴定表达PSCA基因的细胞的检测法包括检测细胞中是否存在PSCAmRNA。检测细胞内特定mRNA的方法是熟知的,其中包括,例如,使用互补DNA探针进行杂交试验(如用标记的PSCA核糖核酸探针原位杂交、Northern印迹以及相关技术)和各种核酸扩增试验(如用PSCA的特异性互补引物进行RT-PCR,以及其它类型的扩增检测法,如例如分支DNA、SISBA、TMA等等)。或者,鉴定表达PSCA基因的细胞的试验包括检测细胞内或细胞分泌的PSCA相关蛋白的存在情况。各种检测蛋白质的方法是本领域熟知的,并被用来检测PSCA相关蛋白和表达PSCA相关蛋白的细胞。PSCA表达分析也被用作鉴定和评价调节PSCA基因表达的试剂的工具。例如,PSCA表达在前列腺癌中显著上调,并在表I所列组织的癌症中表达。鉴定抑制PSCA在癌细胞内表达或过度表达的分子或生物试剂具有治疗价值。例如,可采用通过RT-PCR、核酸杂交或抗体结合来量化PSCA表达的筛选方法来鉴定这种试剂。VIII.)监测PSCA-相关基因及其产物状态的方法已知肿瘤形成是一个多步骤过程,其中,细胞生长逐步失调同时细胞由正常生理状态发展到癌前状态然后到癌症状态(见例如Alers等,LabInvest.77(5)437-438(1997)和Isaacs等,CancerSurv.2319-32(1995))。文中,检查生物样品细胞生长失调的证据(如癌症中的异常PSCA表达)能够在病理状态(如癌症)发展到治疗选项更加有限或预后更加不良的阶段之前早期察觉这种异常生理状态。在这种实施方案中,可将感兴趣的生物样品内PSCA的状态与例如相应的的正常样品(如来自个体或未受病理影响的其它个体的样品)内PSCA的状态进行比较。生物样品中PSCA状态的改变(相比正常样品)提供了细胞生长失调的证据。除使用未受病变影响的生物样品作为正常样品,我们也可使用预定的标准值,例如预定的正常mRNA表达水平(见例如Grever等,J.Comp.Neurol.1996-12-9;376(2):306-14以及美国专利5,837,501)与样品的PSCA状态进行比较。文中,术语"状态"具有本领域可接受的含义,是指基因及其产物的情况或状态。通常,熟练的技术人员可使用许多参数来评价基因及其产物的情况或状态。这些参数包括但不限于表达的基因产物的定位(包括PSCA表达细胞的定位)和水平、表达的基因产物(如PSCAmRNA、多核苷酸和多肽)的生物活性。通常,PSCA状态的改变包括PSCA和/或PSCA表达细胞定位的变化,和/或PSCAmRNA和/或蛋白质表达增加。样品的PSCA状态可用许多本领域熟知的方法来分析,包括但不限于免疫组织化学分析、原位杂交、在激光捕获显微切割样品上进行RT-PCR分析、Western印迹分析和组织阵列分析。评价PSCA基因和基因产物状态的典型方法可在以下文献中找到,例如=Ausubel等编的《分子生物学最新方法》,1995,第2(Northern印迹)、4(Southern印迹)、15(免疫印迹)和18(PCR分析)单元。因此,熟练的技术人员可用各种方法来评价生物样品的PSCA状态,其中包括但不限于基因组Southern分析(用来检测例如PSCA基因内的紊乱)、PSCAmRNA的Northern分析和/或PCR分析(用来检测例如多核苷酸序列或PSCAmRNA表达水平的变化)、以及Western和/或免疫组织化学分析(用来检测例如多肽序列的变化、多肽在样品内定位的变化、PSCA蛋白表达水平的变化和/或PSCA蛋白与多肽结合伴侣的结合)。可检测的PSCA多核苷酸包括,例如,PSCA基因或其片段、PSCAmRNA、交替剪接变体、PSCAmRNA以及含有PSCA多核苷酸的重组DNA或RNA分子。PSCA的表达特征使其成为局限性和/或转移疾病的诊断标记,并为生物样品的生长或致癌潜能提供了信息。具体地说,PSCA的状态为预测对特定疾病阶段的易感性、进展和/或肿瘤侵袭性提供了有用信息。本发明提供了确定PSCA状态和诊断表达PSCA的癌症(如表I所列组织的癌症)的方法和试验。例如,由于相比正常前列腺组织,PSCAmRNA在前列腺和其它癌症中如此高度地表达,评价生物样品内PSCAmRNA转录物或蛋白质水平的试验可被用来诊断与PSCA失调有关的疾病,并可在确定合适的治疗方法时提供有用的预测信息。PSCA的表达状态提供的信息包括发育异常细胞、癌前细胞和癌细胞的存在、状态和定位;预测对各种疾病阶段的易感性和/或测量肿瘤的侵袭性。此外,这种表达特征使其可用作转移疾病的显象剂。因此,本发明的一个方面涉及检测生物样品(如来自患有或疑有以细胞生长失调为特征的病变(如癌症)的个体的样品)中PSCA状态的各种分子预测和诊断方法。如上所述,生物样品的PSCA状态可通过许多本领域熟知的方法检测。例如,取自机体特定部位的生物样品的PSCA状态可通过评估样品内存在或不存在PSCA表达细胞(如表达PSCAmRNA或PSCA蛋白的细胞)加以检测。例如,当在正常情况下不含表达PSCA的细胞的生物样品(如淋巴结)内发现这种细胞时,由于生物样品中PSCA状态的这种变化通常与细胞生长失调有关,因此这种检测可提供细胞生长失调的证据。具体地说,细胞生长失调的一个指标是癌细胞从原来的器官(如前列腺)转移到身体的其它区域(如淋巴结)。文中,细胞生长失调的证据是重要是,这是由于,例如,可在一定比例的前列腺癌患者内检出隐性淋巴结转移,且这种转移与已知的疾病发展预测器有关(见例如Murphy等,Prostate42(4):315-317(2000);Su等,Semin.Surg.Oncol.18(1):17-28(2000)和Freeman等,JUrol1995-8154(2Pt1):474-8)。一方面,本发明提供了监测PSCA基因产物的方法,该方法通过确定个体细胞表达的PSCA基因产物的状态,所述个体疑有与细胞生长失调有关的疾病(如增生或癌症),然后将如此确定的状态与相应的正常组织的PSCA基因产物的状态进行比较。相对正常组织,测试样品内存在异常PSCA基因产物说明该个体的细胞内存在细胞生长失调。在另一方面,本发明提供了对于确定个体内存在癌症有用的试验,该方法包括检测测试细胞或组织样品内PSCAmRNA或蛋白质的表达相对于对应的正常细胞或组织内的表达水平显著升高。可在例如但不限于表I所列的组织内评价PSCAmRNA的存在。由于相应的正常组织不表达PSCAmRNA或以较低水平表达,所以任何这些组织内出现显著的PSCA表达可用来说明癌症的再现、存在和/或严重性。在有关实施方案中,PSCA状态是在蛋白质水平而不是核酸水平确定的。例如,这种方法包括确定测试组织样品的细胞表达的PSCA蛋白的水平,并将这样确定的水平与相应的正常样品内表达的PSCA水平进行比较。在一个实施方案中,例如用免疫组织化学的方法评估了PSCA蛋白的存在。能够检测PSCA蛋白表达的PSCA抗体或结合伴侣被用于本领域熟知的用于此目的的各种测定模式。在另一实施方案中,我们可评价生物样品中PSCA核苷酸和氨基酸序列的状态,以鉴定这些分子结构内的紊乱。这些紊乱可包括插入、缺失、取代等。这种评价是有用的,因为在大量与生长失调表型有关的蛋白质中观察到核苷酸和氨基酸序列的紊乱(见例如Marrogi等,1999,J.Cutan.Pathol.26(8):369-378)。例如,PSCA序列中的突变可说明肿瘤的存在或促进。因此,PSCA的突变表明潜在的功能损失或肿瘤生长加快,这种测定具有诊断和预测价值。许多观察核苷酸和氨基酸序列内紊乱的试验是本领域熟知的。例如,通过这里所述的Northern、Southern、Western、PCR和DNA测序法观察PSCA基因产物核酸或氨基酸序列的大小和结构。此外,观察核苷酸和氨基酸序列内紊乱的其它方法,如单链构象多态性分析,是本领域熟知的(见例如1999年9月7日发表的美国专利5,382,510,和1995年1月17日发表的5,952,170)。此外,我们可检测生物样品中PSCA基因的甲基化状态。基因5’调节区CpG岛的异常去甲基化和/或超甲基化经常出现于不死细胞和转化细胞,并且可导致不同基因的表达改变。例如,η-类谷胱甘肽S-转移酶(一种在正常前列腺中表达的蛋白质,但在90%以上的前列腺癌中不表达)的启动子超甲基化将永久沉默转录该基因,并且是前列腺癌中最经常检测到的基因组变化(DeMarzo等,Am.J.Pathol.155(6)1985-1992(1999))。此外,这种变化在至少70%的高级前列腺上皮内瘤样病变(PIN)中出现(Brooks等,CancerEpidemiol.BiomarkersPrev.,1998,7:531-536)。在另一实施例中,成淋巴细胞样细胞中脱氧-氮杂胞苷诱导LAGE-I肿瘤特异性基因(该基因不在正常前列腺中表达,但在25-50%的前列腺癌中表达)的表达,说明肿瘤表达是由于去甲基化造成的(Lethe等,Int.J.Cancer76(6):903-908(1998))。许多检测基因甲基化状态的试验是本领域熟知的。例如,我们可在Southern杂交方法中使用对甲基化敏感但不能切割含甲基化CpG位点的序列的限制性酶来了解CpG岛的甲基化状态。此外,MSP(甲基化特异性PCR)可迅速显示所给基因CpG岛中存在的所有CpG位点的甲基化状态。该过程包括先用亚硫酸氢钠(它将把所有未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶)修饰DNA,然后用甲基化和非未甲基化DNA的特异性引物进行扩增。关于甲基化紊乱的方法也可在例如FrederickΜ.Ausubel等编的《分子生物学最新方法》(19%)第12单元中找到。基因扩增是另一种获得PSCA状态的方法。直接测定样品的基因扩增,例如通过常规的Southern印迹或Northern印迹来量化mRNA的转录(Thomas,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:52015205)、斑点印迹(DNA分析)或原位杂交,使用根据这里提供的序列的合适标记的探针。或者,可使用识别特定双链体的抗体,其中包括DNA双链体、RNA双链体和DNARNA杂合体双链体或DNA蛋白质双链体。然后抗体被标记并进行测定,其中双链体结合到表面,从而在表面形成双链体,因此可检测是否存在结合到双链体的抗体。通常可检测活检组织或外周血以了解癌细胞的存在,使用例如Northern印迹、斑点印迹或RT-PCR分析来检测PSCA表达。存在RT-PCR可扩增的PSCAmRNA表明了癌症的存在。RT-PCR试验是本领域熟知的。目前评价了外周血肿瘤细胞的RT-PCR试验是否可用于诊断和处理多种人类实体瘤。在前列腺癌领域,这些包括检测表达PSA和PSM的细胞的RT-PCR试验(Verkaik等,1997,Urol.Res.25:373-384;Ghossein等,1995,J.Clin.Oncol.13:1195-2000;Heston等,1995,Clin.Chem.41:1687-1688)。本发明的另一方面是评估个体对癌症的易感性。在一个实施方案中,预测对癌症易感性的方法包括检测组织样品内的PSCAmRNA或PSCA蛋白,其存在说明对癌症易感,其中PSCAmRNA的表达程度与易感性程度相对应。在以具体实施方案中,检测了前列腺或其它组织内PSCA的存在情况,样品内存在PSCA说明对前列腺癌易感(或出现或存在前列腺肿瘤)。类似地,我们可评估生物样品内PSCA核苷酸和氨基酸序列的完整性以鉴定这些分子结构内的紊乱,所述紊乱如插入、缺失、取代等。样品PSCA基因产物内存在一种或多种紊乱是癌症易感性(或出现或存在肿瘤)的指标。本发明还包括测定肿瘤侵袭性的方法。在一个实施方案中,测定肿瘤侵袭性的方法包括确定肿瘤细胞表达的PSCAmRNA或PSCA蛋白的水平,将如此确定的水平与取自同一个体或正常组织参考样品的相应的正常组织内表达的PSCAmRNA或PSCA蛋白的水平进行比较,其中,相对正常样品,肿瘤样品中PSCAmRNA或PSCA蛋白的表达程度说明了侵袭性程度。在一具体实施方案中,肿瘤的侵袭性是通过确定肿瘤细胞内PSCA的表达程度来评价的,表达水平越高说明越是侵袭性肿瘤。其它实施方案评价了生物样品中PSCA核苷酸和氨基酸序列的完整性,以鉴定这些分子结构内的紊乱,所述紊乱如插入、缺失、取代等。存在一种或多种紊乱说明是侵袭性更强的肿瘤。本发明的另一个实施方案涉及观察一段时间内恶性肿瘤在个体的发展的方法。在一个实施方案中,观察一段时间内恶性肿瘤在个体的发展的方法包括确定肿瘤样品内细胞表达的PSCAmRNA或PSCA蛋白的水平,将如此确定的水平与不同时间取自同一个体的相同组织样品内表达的PSCAmRNA或PSCA蛋白的水平进行比较,其中,一段时间内肿瘤样品中表达的PSCAmRNA或PSCA蛋白的程度提供了癌症发展的信息。在一具体实施方案中,通过测定一段时间内肿瘤细胞中表达的PSCA来评价癌症的发展,一段时间内表达升高表明癌症发展。同时,我们可评价生物样品中PSCA核苷酸和氨基酸序列的完整性,以鉴定这些分子结构内的紊乱,所述紊乱如插入、缺失、取代等,存在一种或多种紊乱说明了癌症发展。上述诊断方法也可与本领域已知的多种预测和诊断方法中的任何一种联合。例如,本发明的另一个实施方案涉及观察PSCA基因和PSCA基因产物的表达(或PSCA基因和PSCA基因产物中的紊乱)与恶性肿瘤相关因子相一致的方法,该方法被作为诊断和预测组织样品状态的手段。可采用多种与恶性肿瘤有关的因子,如恶性肿瘤相关基因的表达(例如前列腺癌的PSA、PSCA和PSM的表达,等等)以及总的细胞学观察(见例如Bocking等,1984,Anal.Quant.Cytol.6(2):74-88;Epstein,1995,Hum.Pathol.26(2):223-9;Thorson等,1998,Mod.Pathol.11(6):543-51;Baisden等,1999,Am.J.Surg.Pathol.23(8)918-24)。例如,由于存在一组与疾病相一致的特定因子,这为诊断和预测组织样品状态提供了重要信息,因此观察PSCA基因和PSCA基因产物的表达(或对PSCA基因和PSCA基因产物的紊乱)与其它恶性肿瘤相关因子相一致的方法是有用的。在一个实施方案中,观察PSCA基因和PSCA基因产物的表达(或PSCA基因和PSCA基因产物中的紊乱)与其它恶性肿瘤相关因子相一致的方法必需检测组织样品内PSCAmRNA或蛋白质的过度表达,检测组织样品内PSAmRNA或蛋白质的过度表达(或者PSCA或PSM的表达),并观察PSCAmRNA或蛋白质与PSAmRNA或蛋白质的过度表达(或者PSCA或PSM的表达)的一致性。在一具体实施方案中,检测了前列腺组织内PSCA和PSAmRNA的表达,样品内PSCA和PSAmRNA的过度表达相一致说明了前列腺癌的存在、对前列腺癌的易感性或前列腺肿瘤的复发或状态。这里描述了检测并量化PSCAmRNA或蛋白质的表达的方法,标准核酸和蛋白质检测和量化技术是本领域熟知的。检测和量化PSCAmRNA的标准方法包括使用标记的PSCA核糖核酸探针的原位杂交、使用PSCA多核苷酸探针的Northern印迹和相关技术、使用PSCA特异性引物的RT-PCR分析以及其它扩增类型的检测方法,例如有分支DNA、SISBA、TMA等等。在一具体实施方案中,采用半定量RT-PCR来检测和量化PSCAmRNA的表达。出于该目的可使用任何数量的能够扩增PSCA的引物,包括但不限于这里具体描述的各种引物组。在一具体实施方案中,在活检组织的免疫组织化学测定中从使用与野生型PSCA蛋白质特异性反应的多克隆或单克隆抗体。IX.)与PSCA相互作用分子的鉴定通过本领域可接受的多种方法中的任何一种,熟练的技术人员可用这里揭示的PSCA蛋白和核酸序列来鉴定与PSCA相互作用的蛋白质、小分子和其它试剂。例如,我们可利用一种所谓相互作用阱的系统(也成为“双杂交试验”)。在该系统中,分子与指导报告基因表达的转录因子相互作用并重建,从而可检测报告基因的表达。其它系统通过真核转录激活蛋白的重建在体内鉴定蛋白质-蛋白质相互作用,见例如1999年9月21日发表的美国专利5,955,280,1999年7月20日发表的5,925,523,1998年12月8日发表的5,846,722和1999年12月21日发表的6,004,746。本领域也存在基于基因组的预测蛋白质功能的算法(见例如Marcotte等,Nature40241999年11月4日,83-86)。或者,我们可筛选肽文库来鉴定与PSCA蛋白质序列相互作用的分子。在该方法中,通过筛选文库中编码随机或受控氨基酸集合来鉴定结合PSCA的肽。该文库编码的肽被作为噬菌体外被蛋白的融合蛋白表达,然后可选出抗PSCA蛋白的噬菌体颗粒。因此,无需之前对配体或受体分子的结构有任何了解就鉴定出了具有多种用途的肽,例如治疗、预测或诊断肽。可用来鉴定与PSCA蛋白质序列相互作用的分子的典型肽文库和筛选方法描述于,例如,1998年3月3日发表的美国专利5,723,286和1998年3月31日发表的5,733,731。或者,表达PSCA的细胞系被用来鉴定PSCA介导的蛋白质-蛋白质相互作用。这种相互作用可用免疫沉淀技术来检测(见例如HamiltonB.J.^Biochem.Biophys.Res.Commun.1999,261:646-51)。可用抗-PSCA抗体从表达PSCA的细胞系中免疫测定PSCA蛋白。或者,可在经工程改造的表达PSCA和His-tag(上述载体)融合物的细胞系内采用抗His-tag抗体。可通过以下方法检测免疫沉淀的复合体的蛋白质结合,例如Western印迹、35S-甲硫氨酸标记蛋白质、蛋白质微测序、银染和双向凝胶电泳。可通过与这种筛选测定有关实施方案来鉴定与PSCA相互作用的小分子和配体。例如,可鉴定紊乱蛋白质功能的小分子,包括紊乱PSCA介导磷酸化和去磷酸化能力、与DNA或RNA分子相互作用的分子,作为调节细胞周期、第二信使信号转导或肿瘤发生的指标。类似地,可鉴定调节PSCA-相关离子通道、蛋白质泵或细胞通讯功能的小分子,并用来治疗具有表达PSCA的癌症的患者(见例如Hille,B.,《可兴奋膜的离子通道》(IonicChannelsofExcitableMembranes),第二版,SinauerAssoc.,Sunderland,MA,1992)。此夕卜,调节PSCA功能的配体可基于其结合PSCA和活化受体构建物的能力加以鉴定。典型的方法叙述于例如1999年7月27日发表的美国专利5,928,868,并包括形成至少有一个配体是小分子的杂交配体的方法。在一示范性实施方案中,利用经工程改造能表达PSCA和DNA-结合蛋白融合蛋白的细胞来共表达杂交配体/小分子的融合蛋白和cDNA文库转录激活蛋白。该细胞还含有报告基因,报告基因的表达使第一和第二融合蛋白相互接近,相互接近只有当杂交配体结合两个杂交蛋白上的靶位点时才会发生。选择表达报告基因的那些细胞,并鉴定未知小分子或未知配体。该方法可鉴定激活或抑制PSCA的调节剂。本发明一个实施方案包括筛选与图1所示PSCA氨基酸序列相互作用的方法,该方法包括使一群分子接触PSCA氨基酸序列、使这群分子和PSCA氨基酸序列在易于相互作用的条件下相互作用、确定存在与PSCA氨基酸序列相互作用的分子、然后将不和PSCA氨基酸序列相互作用的分子与和PSCA氨基酸序列相互作用的分子分离的步骤。在一具体实施方案中,该方法还包括纯化、特征分析和鉴定与PSCA氨基酸序列相互作用的分子。鉴定出的分子可用来调节PSCA的功能。在一优选的实施方案中,PSCA氨基酸序列与肽文库相连.X.)治疗方法和组合物鉴定在有限的组织内正常表达但也在表I所列的癌中表达的PSCA将开创了许多治疗此类癌症的方法。注意,即便当靶蛋白在正常组织(甚至是正常的生命器官组织)内表达时靶向抗肿瘤疗法也是有效的。生命器官是维持生命必需的器官,如心脏或结肠。非生命器官是可切除但个体仍能存活的器官。非生命器官的例子有卵巢、乳腺和前列腺。例如,Herceptin是一种FDA批准的药物,它是由各种称为HER2、HER2/neu和erb-b-2的蛋白质发生免疫反应的抗体组成的。它由Genentech销售并且是一种获得商业成功的抗肿瘤药。2002年Herceptin的销售额达到约4亿美元。Herceptin用于治疗HER2阳性转移性乳腺癌。然而,HER2的表达不限于这种肿瘤。这种蛋白质在许多正常组织内表达。具体地说,已知HER2/neU存在于正常的肾脏和心脏内,而这些组织存在于所有接受Here印tin的人当中。Latif,Ζ.等也证实正常肾脏内存在HER2/neu(B.J.U.International(2002)89:5_9)。如该文献所示(其评价了肾细胞癌是否应成为抗-HER2抗体如Here印tin的优选适应证),良性肾组织制造这种蛋白和mRNA。特别地,HER2/neu蛋白在良性肾组织内强烈过度表达。尽管HER2/neu在心脏和肾脏等生命组织内表达,但Here印tin是一种非常有效的、获得FDA批准并取得商业成功的药物。Here印tin对心脏组织的影响,即“心脏毒性(cardiotoxicity)”仅是一种治疗副作用。当单独用Here印tin治疗患者时,仅在极少患者内会发生显著心脏毒性。为了使心脏毒性最小化,对于用HER2/neU进行的治疗具有更为严格的准入要求。在能够进行治疗之前,需评估例如遗传缺陷对心脏条件影响的因素。特别值得注意的是,尽管肾组织显示正常表达,甚至可能高于心脏组织的表达,但肾脏未出现任何可评价的Here印tin副作用。此外,在表达HER2的各种正常组织中,只有极少会发生副作用。只有心脏组织出现可评价的副作用。在HER2/neU表达尤其显著的组织,如肾组织,未出现任何副作用。45此外,发现以表皮生长因子受体(EGFR);Erbitux(ImClone)为靶点的抗肿瘤疗法有良好的治疗效果。EGFR也在许多正常组织内表达。使用抗-EGFR疗法之后正常组织内的副作用非常有限。EGFR治疗中常见的副作用是在接受治疗的100%的患者中都观察到严重的皮疹。因此,正常组织甚至正常生命组织内靶蛋白的表达不会破坏以该蛋白质为靶向的靶向制剂在对某些该蛋白也过表达的肿瘤中作为治疗剂的作用。例如,生命器官中的表达本身并不是有害的。此外,可去除被认为可给药的器官(例如前列腺和卵巢)而不会导致死亡。最后,某些生命器官由于具有免疫特权(immuno-privilege)而不受正常器官表达的影响。具有免疫特权的器官是通过血液-器官屏障来免受血液影响并由此不易受免疫治疗影响的器官。具有免疫特权的器官的例子是脑和睾丸。因此,抑制PSCA蛋白活性的治疗方法可用于患有表达PSCA的癌症的患者。这些治疗方法通常分为3类。第一类是因PSCA与肿瘤细胞生长相关,通过调整PSCA功能使得肿瘤细胞生长受抑制或生长迟缓或者诱导对其的杀伤。第二类包括各种抑制PSCA蛋白与其结合伴侣或其它蛋白质结合或缔合的方法。第三类包括各种抑制PSCA基因转录或PSCAmRNA翻译的方法。X.A.)抗癌疫苗本发明提供了含有PSCA相关蛋白或PSCA-相关核酸的癌症疫苗。就PSCA的表达而言,癌症疫苗可预防和/或治疗表达PSCA的癌症,而对非靶组织的影响很小或没有影响。在疫苗中使用产生细胞-介导的体液免疫应答的肿瘤抗原以进行抗癌治疗的方法是本领域熟知的,并被用于将人PSMA和啮齿动物PAP免疫原用于前列腺癌的治疗(Hodge等,1995,Int.J.Cancer63:231-237;Fong等,1997,J.Immunol.159:3113-3117)。通过使用PSCA相关蛋白或编码PSCA的核酸分子以及能够表达和呈递PSCA免疫原的重组载体(通常包含许多T细胞表位或抗体)不难实施这种方法。本领域技术人员知道,本领域已知许多输送免疫反应性表位的疫苗系统(见例如Heryln等,ArmMed1999-231(1):66-78;Maruyama^,CancerImmunolImmunother2000—649(3):123-32)。简言之,这种在哺乳动物内产生免疫应答(例如细胞-介导的和/或体液免疫应答)的方法包括以下步骤使哺乳动物的免疫系统接触某免疫反应性表位(例如图1所示PSCA蛋白或其类似物或同系物上的表位)从而使哺乳动物产生该表位的特异性免疫应答(例如产生特异性识别该表位的抗体)。完整的PSCA蛋白、其免疫原性区域或表位可加以组合通过各种方法输送。这种疫苗组合物可包括,例如,脂肽(例如Vitiello,A.等,J.Clin.Invest.95:341,1995)、包裹在聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)(“PLG”)微球体中的肽组合物(见例如Eldridge等,Molec.Immunol.28:287-294,1991=Alonso等,Vaccine12:299-306,1994Jones等,Vaccine13:675-681,1995)、含在免疫刺激复合物(ISCOM)内的肽组合物(见例如Takahashi等,Nature344:873-875,1990;Hu等,ClinExpImmunol.113:235-243,1998)、多重抗原肽系统(MAP)(见例如Tam,J.P.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.Α.85:5409-5413,1988;Tam,J.P.,J.Immunol.Methods196:17-32,1996)、配制成多价肽的肽;用于弹道输送系统的肽(通常是结晶的肽)和病毒输送载体的肽(Perkus,M.E.等,引自=Kaufmarm,S.H.E.编的《疫苗发展概述》(Conceptsinvaccinedevelopment),第379页,1996;Chakrabarti,S.等,Nature320535,1986;Hu,S.L.等,Nature320:537,1986;Kieny,M.-P.等,AIDSBio/Technology4:790,1986;Top,F.H.等,J.Infect.Dis.124148,1971;Chanda,P.K.等,Virology175535,1990)、病毒或合成来源的颗粒(例如,Kofler,N.等,J.Immunol.Methods.192:25,1996;Eldridge,J.H.等,km.Hematol.3016,1993;小Falo,L.D.等,NatureMed.7:649,1995)、佐剂(Warren,H.S.,Vogel,F.R.和Chedid,L.A.Annu.Rev.Immunol.4:369,1986;Gupta,R.K.等,Vaccine11:293,1993)、脂质体(Reddy,R.等,J.Immunol.148:1585,1992;Rock,K.L.,Immunol.Today17:131,1996),或者裸cDNA或颗粒吸收的cDNA(Ulmer,J.B.等,Science2591745,1993;Robinson,H.L.、Hunt,L.Α.禾口Webster,R.G.,Vaccine11:957,1993;Shiver,J.W.等,引自=Kaufmann,S.H.Ε.编的《疫苗发展概述》(Conceptsinvaccinedevelopment),第423页,1996;Cease,K.B.禾口Berzofsky,J.Α.,Annu.Rev.Immunol.12:923,1994,以及Eldridge,J.H.等,Sem.Hemato1.30:16,1993)。也可使用靶向毒素的输送技术,也成为受体介导的寻靶,如AvantImmunotherapeutics,Inc.(Needham,Massachusetts)的那些技术。在患有PSCA相关癌症的患者中,本发明的疫苗组合物也可与其它治疗癌症的方法例如手术、化疗、药物治疗、放疗等结合,包括与IL-2、IL-12、GM-CSF等免疫佐剂联合使用。细胞疫苗可用特定的算法鉴定PSCA蛋白内结合相应HLA等位基因的肽以确定CTL表位(见例如表IV;EpimerTM禾口Epimatrix,BrownUniversity(URLbrown.edu/Research/TB-HIV_Lab/epimatrix/epimatrix.html);以及BIMAS(URLbimas.dcrt.nih.gov/;SYFPEITHI,URLsyfpeithi.bmi-heidelberg.com/)。在一优选的实施方案中,PSCA免疫原含有一个或多个用本领域熟知的技术鉴定的氨基酸序列,如表V-XVIII和XXII-LI所示的序列,或有8、9、10或11个HLAI类基序/超基序(例如表IV(A)、表IV⑶或表IV(E))特有氨基酸的肽和/或至少有9个氨基酸的包含HLAII类基序/超基序(例如表IV(B)或表IV(C))的肽。本领域已知,HLAI类结合沟末端基本关闭,因此只有特定大小范围的肽才能与沟相符合并与之结合,HLAI类表位的长度通常有8、9、10或11个氨基酸。相反,HLAII类结合沟末端基本开放;因此有约9个或更多氨基酸的肽可被HLAII类分子结合。由于HLAI和II类的结合沟不同,因此HLAI类基序是长度特异的,即I类基序的位置2是肽氨基到羧基方向的第二个氨基酸。II类基序的氨基酸位置只是相互之间相对的,而不是相对于整个肽,即带有基序的序列的氨基和/或羧基末端可结合其它氨基酸。HLAII类表位是长度通常有9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸,或25个氨基酸以上。本领域已知许多在哺乳动物内产生免疫应答的方法(例如产生杂交瘤的第一个步骤)。在哺乳动物内产生免疫应答的方法包括使哺乳动物的免疫系统暴露于蛋白质的免疫原性表位(例如PSCA蛋白)以产生免疫应答。一个具体的实施方案包括在宿主内产生针对PSCA的免疫应答的方法,该方法是使宿主接触足量的至少一种PSCAB细胞或细胞毒T细胞表位或其类似物;并在这之后至少一定实践间隔使宿主再接触PSCAB细胞或细胞毒T细胞表位或其类似物。一个具体的实施方案包括产生抗PSCA相关蛋白或人造多表位肽的免疫应答的方法给予人或其它哺乳动物含在疫苗制品内的PSCA免疫原(例如PSCA蛋白或其肽片段、PSCA融合蛋白或类似物等)。通常,这种疫苗制品还含有合适的佐剂(见例如美国专利6,146,635)或通用辅助表位,如PADRETM肽(EpimmuneInc.,SanDiego,CA;见例如Alexander等,J.Immunol.2000164(3);164(3):1625-1633;Alexander等,Immunity19941(9):751_761,和Alexander等,Immunol.Res.199818(2):79-92)。另一种方法包括在个体内产生抗PSCA免疫原的免疫应答,方法如下在哺乳动物机体的肌肉或皮肤中体内给予包含编码PSCA免疫原的DNA序列的DNA分子,该DNA序列操作性连接于控制DNA序列表达的调节序列;其中所述DNA分子被细胞摄取,DNA序列在细胞内表达,并产生抗该免疫原的免疫应答(见例如美国专利号5,962,428)。也可任选给予基因疫苗促效剂(facilitator),如阴离子脂质;皂苷;凝集素;雌激素类化合物;羟基化低级烷基;二甲基亚砜;以及尿素。此外,可给予模拟PSCA的抗独特型抗体以产生对于靶抗原的反应。核酸疫苗本发明的疫苗组合物包括核酸-介导的形式。可给予患者编码本发明蛋白质的DNA或RNA。可采用基因免疫接种法来产生抗表达PSCA的癌细胞的预防性或治疗性体液和细胞免疫应答。可将含有编码PSCA相关蛋白/免疫原的DNA和适当调节序列的构建物直接注射到个体的肌肉或皮肤内,从而肌肉或皮肤细胞摄取该构建物并表达编码的PSCA蛋白/免疫原。或者疫苗中包含PSCA相关蛋白。PSCA相关蛋白免疫原的表达导致产生抗带有PSCA蛋白的T细胞的预防性或治疗性体液和细胞免疫力。可使用本领域已知的各种预防性和治疗性基因免疫接种技术(参见例如互联网地址genweb.com上公布的信息和参考资料)。基于核酸的输送描述在,例如,Wolff等,kience247=1465(1990)以及美国专利5,580,859;5,589,466;5,804,566;5,739,118;5,736,524;5,679,647;WO98/04720。基于DNA的输送技术的例子包括“裸DNA”、促效(布比卡因(bupivicaine)、聚合物、肽-介导的)输送、阳离子脂质复合体和颗粒-介导的输送(“基因枪”)或压力介导的输送(见例如美国专利5,922,687)。出于治疗性或预防性免疫接种的目的,本发明的蛋白质可通过病毒载体或细菌载体表达。可用于本发明实践的各种病毒性基因输送系统包括但不限于牛痘、禽痘、金丝雀痘、腺病毒、流感病毒、脊髓灰质炎病毒、腺伴随病毒、慢病毒和辛德毕斯病毒(见例如Restifo,1996,Curr.Opin.Immunol.8:658-663;Tsang等J.Natl.CancerInst.87982-990(1995))。也可使用非病毒输送系统,方法是在患者内引入编码PSCA相关蛋白的裸DNA(例如在肌肉内或真皮内)以诱导抗肿瘤应答反应。例如,牛痘病毒可被用作载体以表达编码本发明的肽的核苷酸序列。引入宿主之后,重组牛痘病毒表达蛋白质免疫原性肽,因而引发宿主的免疫应答。牛痘载体以及免疫接种用的方法描述在例如美国专利4,722,848中。另一种载体是BCG(BacilleCalmetteGuerin)。BCG载体描述在Mover等,Nature351:456-460(1991)。通过这里的描述,本领域技术人员直到许多其它载体可用治疗性给予或免疫接种本发明的肽,例如腺病毒和腺伴随病毒载体、反转录病毒载体、伤寒沙门菌(Salmonellatyphi)载体、解毒的炭疽毒素载体寸。因此,基因输送系统被用来运送PSCA-相关核酸分子。在一个实施方案中使用了全长人PSCAcDNA。另一实施方案中使用了编码特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)和/或抗体表位的PSCA核酸分子。离体疫苗也可用各种离体方法来产生免疫应答。一种方法包括使用抗原呈递细胞(APC),如树突细胞(DC),以将PSCA抗原呈递到患者的免疫系统。树突细胞表达MHCI和II类分子、B7共刺激物和IL-12,因此是高度专一的抗原呈递细胞。在前列腺癌中,前列腺特异性膜抗原(PSMA)脉冲的自体树突细胞被用于I期临床试验以刺激前列腺癌患者的免疫系统(Tjoa等,1996,Prostate28:65-69;Murphy等,1996,Prostate29:371-380)。因此,树突细胞可用来将PSCA肽呈递到T细胞的MHCI或II类分子。在一个实施方案中,自体树突细胞被能够结合到MHCI类和/或II类分子的PSCA肽脉冲。另一实施方案中,树突细胞被完整的PSCA蛋白脉冲。再一个实施方案包括用本领域已知的各种执行载体使PSCA基因在树突细胞内过度表达,所述载体例如腺病毒(Arthur等,1997,CancerGeneTher.417-25)、反转录病毒(Henderson等,1996,CancerRes.56:3763-3770)、慢病毒、腺伴随病毒、DNA转染(Ribas等,1997,CancerRes.57:2865-2869)或肿瘤衍生的RNA转染(Ashley等,1997,J.Exp.Med.186:1177-1182)。也可工程改造表达PSCA的细胞来表达免疫调节剂,如GM-CSF,并将其用作免疫剂。X.B.)将PSCA作为以抗体为基础的治疗的靶标PSCA在基于抗体的治疗策略中是很有吸引力的靶标。本领域中已知许多种用于靴向胞外和胞内分子的抗体策略(参见例如,complementandADCCmediatedkillingaswellastheuseofintrabodies)。由于PSCA较相应的正常细胞而言由各种癌细胞系表达,制备了全身性给予的PSCA-免疫反应性组合物,该组合物具有优良的敏感性,且不会因该免疫反应性组合物与非靶标器官和组织的结合而产生毒性、非特异性和/或非靶向性作用。与PSCA结构域发生特异性反应的抗体可用于全身性治疗表达PSCA的癌症,其可与毒素或治疗剂联用,或用作能抑制细胞增殖或功能的裸露抗体。可将PSCA抗体导入患者,从而使得该抗体结合于PSCA并调整如下功能例如与结合对象的相互反应以及其后介导的破坏肿瘤细胞和/或抑制肿瘤细胞生长。此类抗体具有治疗效果的机制可包括补体介导的细胞溶解、抗体依赖性细胞毒性、对PSCA生理功能的调节、对配体结合或信号转导途径的抑制、对肿瘤细胞分化的调节、对肿瘤血管生成因子分布的改变、和/或凋亡。举例包括用于非霍奇金淋巴瘤的Rituxan、用于转移性乳腺癌的Here印tin以及用于结肠直肠癌的Erbitux。本领域技术人员会理解抗体可用于特异性靶向和结合免疫原性分子,例如图1所示的PSCA序列的免疫原性区域。此外,熟练的技术人员会理解将抗体与细胞毒剂偶联是很常规的(参见例如,Slevers等,Blood93:113678-3684(1999年6月1日))。将细胞毒剂和/或治疗剂通过例如将它们与该细胞表达的分子Gf^nPSCA)特异性结合的抗体偶联的方法直接递送给细胞时,所述细胞毒剂将对那些细胞发挥其已知的生物效应(即,细胞毒性)。本领域已知用于抗体-细胞毒剂偶联物以杀伤细胞的许多组合物和方法。在癌症方面,常用的方法包括给予带有肿瘤的动物生物学有效量的偶联物,所述偶联物包含与靶向剂(例如抗PSCA抗体)结合的所选细胞毒剂和/或治疗剂,易于结合或定位到细胞表面。一个典型的实施方式是将细胞毒剂和/或治疗剂递送给表达PSCA的细胞的方法,所述方法包括使细胞毒剂与免疫特异性结合于PSCA表位的抗体偶联,然后使所述细胞与该抗体-药物偶联物接触。另一示例性的实施方式是治疗疑似患有转移性癌症的个体的方法,所述方法包括以下步骤非胃肠道给予所述个体包含治疗有效量的与细胞毒剂和/或治疗剂偶联的抗体的药物组合物。可按照已在其它类型癌症的治疗中成功应用的各种途径来进行采用抗PSCA的癌症免疫治疗,所述其它类型的癌症包括但不限于结肠癌(Arlen等,1998,Crit.Rev.Immunol.18:133-138)、多发性骨髓瘤(Ozaki等,1997,Blood90:3179-3186,Tsunenari等,1997,Blood90:2437-2444)、胃癌(Kasprzyk等,1992,CancerRes.52:2771-2776)、B细胞淋巴瘤(Funakoshi等,1996,J.Immunother.EmphasisTumorImmunol.19:93-101)、白血病(Zhong等,1996,Leuk.Res.20:581-589)、结肠直肠癌(Moun等,1994,CancerRes.546160-6166;Velders等,1995,CancerRes.55:4398-4403)以及乳腺癌(Sh印ard等,1991,J.Clin.Immunol.11:117-127)。一些治疗途径涉及将裸露抗体与毒素或放射性同位素偶联,例如分别将Y91或I131与抗CD20抗体(例如,ZevalinTM,IDECPharmaceuticalsCorp.或Bexxar,CoulterPharmaceuticals)偶联,而其它则涉及共同给予抗体和其它治疗剂,例如共同给予Here印tinTM(曲妥单抗)和紫杉醇(Genentech,Inc.)。可将所述抗体与治疗剂偶联。对于前列腺癌的治疗,例如可同时给予PSCA抗体和放疗、化疗护激素去除。还可将抗体与以下物质偶联毒素(例如,Mylotarg,Wyeth-Ayerst,Madison,NJ,一种与抗肿瘤抗生素刺孢霉素偶联的重组人化IgG4κ抗体)或美登醇(maytansinoid,例如基于紫杉烷的肿瘤活性前药,TAP,platform,ImmunoGen,Cambridge,MA,也可参见例如,美国专利5,416,064)或AuristatinE(NatBiotechnol.2003年7月;21(7):778_84。(SeattleGenetics))。虽然PSCA抗体治疗可用于癌症的所有阶段,但抗体治疗尤为适宜用于晚期或转移癌中。可为已接受了一或多轮化疗的患者指定进行本发明的抗体治疗。或者,对于未接受化疗的患者,可将本发明的抗体治疗与化疗或放疗方案结合进行。此外,抗体治疗能使得采用降低剂量的联用化疗剂成为可能,尤其是在对化疗剂毒性的耐受性不是很好的患者中。Fan等(CancerRes.53:4637-4642,1993)>Prewett等(InternationalJ.ofOnco.9217-224,1996)和Hancock等(CancerRes.51:4575-4580,1991)中描述了多种抗体与化疗剂的共同使用。虽然PSCA抗体治疗可用于癌症的所有阶段,但抗体治疗尤为适宜用于晚期或转移癌中。可为已接受了一或多轮化疗的患者指定进行本发明的抗体治疗。或者,对于未接受化疗的患者,可将本发明的抗体治疗与化疗或放疗方案结合进行。此外,抗体治疗能使得采用降低剂量的联用化疗剂成为可能,尤其是在对化疗剂毒性的耐受性不是很好的患者中。可评价癌症患者的PSCA表达或水平,优选采用肿瘤组织的免疫组织化学评定、定量PSCA成象或其它可靠指示PSCA表达的存在和程度的技术。肿瘤活检或手术标本的免疫组织化学分析优选用于此目的。肿瘤组织的免疫组织化学分析法是本领域熟知的。治疗前列腺癌和其它癌症的抗-PSCA单克隆抗体包括那些能诱导抗肿瘤强效免疫应答的抗体或直接导致细胞毒性的抗体。就这点而言,抗-PSCA单克隆抗体(MAb)可通过补体介导的或抗体依赖的细胞细胞毒性(ADCC)机制导致肿瘤细胞溶解,这两种机制都要求免疫球蛋白分子的完整!7C部分与补体蛋白上的效应细胞Fc受体位点相互作用。此外,对肿瘤生长发挥直接生物效应的抗-PSCAMAb可用于治疗表达PSCA的癌症。细胞毒MAb的直接作用机制包括抑制细胞生长、调节细胞分化、调节肿瘤血管形成因子的特性和诱导凋亡。用多种评价细胞死亡的体外试验评价了特定抗-PSCAMAb发挥抗肿瘤作用的机制,这些试验通常是本领域已知的,如ADCC、ADMMC、补体介导的细胞溶解等等。一些患者中,使用鼠类或其它非人单克隆抗体或人/小鼠嵌合MAb可诱导中等至强的抗非人抗体的免疫应答。这可导致从循环中清除抗体和降低功效。最严重时,这种免疫应答可导致大量形成免疫复合体,这种复合体可能造成肾衰竭。因此,优选的用于本发明治疗方法的单克隆抗体是完全长人的或人源化的,并以高亲和力特异性结合靶PSCA抗原,但在患者内有低抗原性或没有抗原性。本发明的治疗方法包括单独给予的抗-PSCAMAb以及其它MAb的组合物或混合物。这种MAb混合物具有某些优点,这是由于它们含有的MAb可靶向不同表位、采用不同的效应机制或将细胞毒MAb与依赖于免疫效应功能的MAb直接组合。这种组合的MAb可发挥协同治疗作用。此外,抗-PSCAMAb可与其它治疗形式一起给予,包括但不限于各种化学治疗剂、雄激素阻断剂、免疫调节剂(例如IL-2、GM-CSF)、手术或放疗。抗-PSCAMAb以其“裸露”形式或非结合形式给予,或者可与治疗剂结合。抗-PSCA抗体制剂可通过任何能够将抗体输送到肿瘤细胞的途径给予。给药途径包括但不限于静脉内、腹膜内、肌肉内、瘤内、真皮内等等。治疗一般包括通过可接受的给药途径如静脉注射(IV)重复给予抗-PSCA抗体制剂,其剂量范围一般约为每千克体重0.1、.2、.3、.4、.5、.6、.7、.8、.9.、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或25毫克。通常,每周IO-IOOOmgMAb的剂量是有效的并且是可以耐受的。基于用Here印tin治疗转移性乳腺癌的临床试验,一种可接受的剂量方案是,起始负荷剂量约为每千克患者体重静脉注射細g,然后以约ang/kg的剂量每周静脉注射一次抗-PSCAMAb制剂。优选地,起始负荷剂量是以90分钟或更长时间灌输给予的。定期维持剂量以30分钟或更长时间的灌输给予,只要起始剂量可良好耐受。精通本领域的技术人员都知道,在具体病理中,许多因素会影响理想的剂量方案。这些因素包括,例如,所用Ab或MAb的结合亲和力和半衰期、PSCA在患者内的表达程度、循环排除PSCA抗原的程度、所需稳定状态的抗体浓度水平、治疗频率、与本发明的治疗方法联合使用的化疗剂或其它试剂的影响以及具体患者的健康状况。任选地,可评价患者给定样品内PSCA的水平(例如循环PSCA抗原和/或PSCA表达细胞的水平)以帮助确定最有效的剂量方案等。这种评价也可用来监测整个治疗的目的,并且可结合其它参数的评估(例如膀胱癌治疗中的尿细胞学和/或免疫细胞化学水平,或通过类推,前列腺癌治疗中的血清PSA水平)来衡量治疗效果。抗-独特型抗-PSCA抗体也可用作抗癌疗法的疫苗素诱导对表达PSCA相关蛋白的细胞的免疫应答。具体地说,抗-独特型抗体的产生是本领域熟知的;该方法适合产生模拟PSCA相关蛋白上的表位的抗-独特型抗-PSCA抗体(见例如Wagner等,1997,Hybridoma1633-40;Foon等,1995,J.Clin.Invest.96:334-342;HerIyn等,1996,CancerImmunol.Immunother.43:65-76)。这种抗-独特型抗体可用于癌症疫苗方法。本发明的一个目的是提供抑制或延缓表达PSCA的肿瘤细胞生长的PSCA抗体。本发明的另一目的是提供在哺乳动物中(优选为人类)抑制血管生成和其它生物学功能从而减少肿瘤生长的方法,所述方法采用PSCA抗体、尤其是将这些PSCA抗体与放疗或化疗剂或这两者联用。在一个实施方式中,当联用PSCA抗体和化疗剂或放疗剂或它们的组合治疗包括人肿瘤在内的肿瘤时,具有协同作用。换言之,PSCA抗体对肿瘤生长的抑制作用在联用化疗剂或放疗或它们的组合时,比预想中提高得更多。协同作用可通过例如与单用PSCA抗体治疗或用PSCA抗体和化疗剂或放疗的加合效果相比,联合治疗对肿瘤生长的抑制作用比预想中更大来显示。优选,采用癌症的减轻来证明协同作用,这一减轻相对于采用裸露PSCA抗体的治疗或采用PSCA抗体和化疗剂或放疗的加合治疗是意想不到的。采用PSCA抗体以及化疗或放疗的组合或同时采用两者来抑制肿瘤细胞生长的方法包括在开始化疗或放疗之前、期间或之后给予PSCA抗体,以及它们的任何组合(即,在开始化疗和/或放疗之前和期间、之前和之后、或之前、期间和之后)。例如,通常在开始放疗和/或化疗前1-60天之间,优选3-40天之间,更优选5-12天之间给予所述PSCA抗体。然而,可根据治疗记录和特殊患者的需要,以可提供最有效的治疗和最终延长患者生命的方式实施该方法。化疗剂的给予可通过多种方式进行,包括通过胃肠道外和途径进行全身性给药。在一个实施方式中,将所述PSCA抗体和化疗剂作为分开的分子给药。在另一实施方式中,所述PSCA抗体是附着(例如,通过偶联)于化疗剂的。(参见标题为“通过体内使用人抗PSCA抗体治疗和诊断人癌的人临床试验”的实施例)和(参见标题为“将PSCA作为以抗体为基础的治疗的靶标”的部分)。化疗剂或化疗的具体实例包括顺钼、达卡巴嗪(DTIC)、放线菌素D、二氯甲二乙胺(氮芥)、链佐星、环磷酰胺,、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、多柔比星(阿霉素)、柔红霉素、丙卡巴胼、丝裂霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、长春碱、长春新碱、博来霉素、紫杉醇(泰素)、多西他赛(泰索帝)、阿地白介素、天冬酰胺酶、白消安、卡钼、克拉屈滨、达卡巴嗪、氟尿苷、氟达拉滨、羟基脲、异环磷酰胺、干扰素α、亮丙瑞林、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、光辉霉素、米托坦、培门冬酶、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、链佐星、它莫西芬、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、塞替派、尿嘧啶氮芥、长春瑞滨、苯丁酸氮芥、紫杉醇或它们的组合。用于与PSCA抗体联用的放射源可位于接受治疗的患者的外部或内部。当所述放射源位于患者的外部,这种治疗被称为外线束放射疗法(EBRT)。当所述放射源位于患者的内部,这种治疗被称为近距离放射疗法(BT)。根据熟知的标准技术采用为了该目的制造的标准设备(例如AECL放射治疗机和Varian医用直线加速器)来给予该放射。放射剂量取决于本领域已知的多种因素。这些因素包括接受治疗的器官、在放射路径中可能会受到不良影响的健康器官、患者对放疗的耐受性以及需要进行治疗的身体区域。该剂量通常为Ι-lOOGy,更具体为2-80Gy。已报道的一些剂量包括对脊髓施予35Gy,对肾脏施予15Gy,对肝脏施予20Gy以及对前列腺施予65-80Gy。然而应强调的是本发明并不限于任何具体的剂量。可由治疗医生按照给定情况下的具体因素(包括上述的因素)来确定剂量。外部放射源与进入患者的点之间的距离可为能使对靶T细胞的杀伤和使副作用最小化达到适宜平衡的任何距离。通常外部放射源与进入患者的点之间的距离为70-100cm。近距离放射疗法通常是通过将放射源置于患者中来进行的。通常,将放射源放置在距离要治疗的器官的约0-3cm处。已知的技术包括间质、腔内和表面近距离放射疗法。可永久性植入或暂时性植入放射性粒源。一些已用于永久性植入的典型放射性原子包括碘-125和氡。一些已用于暂时性植入的典型放射性原子包括镭、铯-137和铱-192。一些已用于近距离放射疗法的其它放射性原子包括镅-241和金-198。用于近距离放射疗法的辐射剂量可与上述的外线束放射治疗的剂量相同。除了上述用于确定外线束放射治疗剂量的因素以外,在确定近距离放射疗法的剂量时还要考虑到所用放射性原子的性质。X.C.)PSCA作为细胞免疫应答的靶标疫苗和制备疫苗的方法是本发明的另一实施方案,所述疫苗含有免疫有效量的一种或多种这里所述HLA-结合肽。此外,本发明的疫苗包含一种或多种所述肽的组合物。肽可单独存在于疫苗中。或者,所述肽可作为含有同一肽多个拷贝的均聚物或作为不同肽的杂聚物存在。聚合物的优点在于有增强的免疫反应,并且由于使用了不同的表位而使聚合物具有额外的诱导与免疫应答寻靶的病原生物或肿瘤-相关肽的不同抗原决定子反应的抗体和/或CTL的额外能力。所述组合物可以是天然产生的抗原区域或这可以通过例如重组或化学合成方法制备。可与本发明的疫苗一起使用的载体是本领域熟知的,其中包括,例如甲状腺球蛋白,白蛋白如人血清白蛋白,破伤风类毒素,聚氨基酸如聚L-赖氨酸、聚L-谷氨酸,流感病毒、乙肝病毒核蛋白等等。疫苗可含有生理上可耐(即可接受的)稀释剂,如水或盐水,优选磷酸缓冲盐水。疫苗中通常还可含有佐剂。不完全弗氏佐剂、硫酸铝、氢氧化铝或明矾等佐剂都是本领域熟知的材料的例子。此外,如本文所述,将本发明的肽与脂质如三棕榈酰-S-甘油基半胱氨酰丝氨酸-丝氨酸(P3CSQ结合可引发CTL应答。此外,发现佐剂,如含有合成胞嘧啶-硫代磷酸化-鸟嘌呤(CpG)的合成寡核苷酸可使CTL应答提高10-100倍(见例如Davila禾口Celis,J.Immunol.165:539-547(2000))通过注射、气溶胶、口服、透皮、透粘膜、胸膜内、鞘内或其它合适途径用本发明的肽组合物免疫之后,宿主的免疫系统可通过产生大量所需抗原特异性的CTL和/或HTL对疫苗产生反应。之后,宿主对随后产生的表达或过度表达PSCA的细胞至少有部分免疫力,或者对该抗原相关的肿瘤至少能产生一些治疗作用。在一些实施方案中,宜将I类肽组分与诱导或促进产生对该靶抗原的中和抗体和或辅助T细胞应答的组分组合。这种组合物的一个优选的实施方案包含本发明的I类和II类表位。这种组合物的另一个实施方案包含本发明的I类和/或II类表位以及交叉反应性HTL表位,如PADREa(Epimmune,SanDiego,CA)分子(描述在例如美国专利5,736,142中)。本发明的疫苗还可包含抗原呈递细胞(APC),如树突细胞(DC),作为呈递本发明的肽的载体。可在体外产生疫苗组合物,然后活动并收获树突细胞,从而在体外加载树突细胞。例如,树突细胞可用例如本发明的小基因转染或用肽脉冲。然后将该树突细胞给予患者并在体内引发免疫应答。基于DNA或肽的疫苗组合物也可体内施用,同时活动树突细胞,从而在体内加载树突细胞。在选择多表位组合物的表位阵列时优选采用以下原则,所述多表位组合物被用于疫苗或者用来选择疫苗中所包含的和/或由核酸(如小基因)编码的不连续表位。为进行此种选择宜平衡以下原则。加入给定疫苗组合物内的多个表位可以是但不需要是产生该表位的天然抗原序列中毗连的表位。1.)选择在施用后模拟与清除肿瘤有关的免疫应答的表位。对于HLAI类而言,包括来自至少一个肿瘤相关抗原(TAA)的3-4个表位。对于HLAII类采用了类似的原理;又从至少一个TAA中选择了3-4个表位(见例如Rosenberg等,Science278:1447-1450)。来自一个TAA的表位可与来自一个或多个其它TAA的表位组合以产生能靶向肿瘤并改变常见的TAA表达模式的疫苗。2.)选择具有与免疫原性有关的必需结合亲和力的表位对HLAI类分子,IC50为500nM或更低,通常为200nM或更低;对II类分子,IC50为IOOOnM或更低。3.)选择具有足够超基序的肽,或具有足够等位基因特异性基序的肽阵列,以得到较宽的群体覆盖率。例如优选有至少80%的群体覆盖率。可用本领域已知的统计计算法-MonteCarlo分析来评价群体覆盖的宽度或冗余。4.)当选择癌症相关抗原表位时经常选择类似物,这是由于患者可能已经建立了对天然表位的耐受。5.)特别适合的表位称为“嵌套表位(nestedepitope)”。嵌套表位见于某一给定肽序列的至少两个表位重叠处。嵌套的肽序列可包括B细胞、HLAI类和/或HLAII类表位。当提供嵌套表位时,一般的目的是提供每个序列的最大表位数。因此,一方面是避免提供比肽氨基末端表位的氨基末端长或比肽羧基末端表位的羧基末端长的肽。当提供多表位序列时,例如含有嵌套表位的序列时,为确保不具有致病或其它有害生物学性能,筛选序列通常是重要的。6.)如果产生了多表位蛋白质或在产生小基因时,一个目的是产生包括感兴趣表位的最小的肽。该原则与选择包含嵌套表位的肽的原则相同或类似。然而,若是人造多表位肽,长度最小化的目的是使整合在该多表位蛋白质中各表位之间的间隔序列相平衡。例如,可引入间隔氨基酸残基以避免相连表位(可被免疫系统识别但靶抗原中不存在并且只能通过人为并列表位而产生的表位)相连,或便于在各表位之间切断从而增强表位呈递。由于受体可产生针对非天然表位的免疫应答,所以通常需要避免表位相连。当相连表位是“优势表位”时需要特别注意。优势表位可导致对其它被削弱或被抑制表位的零应答。7.)当存在同一靶蛋白多个变体的序列时,也可根据它们的保密性选择可能的肽表位。例如,保密性的标准可规定,HLAI类结合肽的整个序列或II类结合肽的整个9-肽核心对某具体蛋白质抗原所指定的序列评价其百分率是保守的。X.C.1.小基因疫苗有许多不同的能够同时输送多个表位的方法。编码本发明的肽的核酸是本发明的一个特别有用的实例。根据以上章节设定的指南,优选包含在小基因中的表位。一个优选的给予编码本发明肽的核酸的方法使用编码含有一个或多个本发明表位的肽的小基因构建物。下文和以下文献描述了多表位小基因的应用=Ishioka等,J.Immunol.1623915-3925,1999;An,L.和ffhitton,J.L.,J.Virol.71:2292,1997;Thomson,S.Α.等,J.Immunol.157:822,1996;ffhitton,J.L.等,J.Virol.67:348,1993;Hanke,R.等,Vaccine16:似6,1998。例如,可经工程改造产生一种多表位DNA质粒,该质粒编码带有超基序和/或基序的PSCA衍生表位、PADRE0通用辅助T细胞表位或PSCA的多个HTL表位(见例如表V-XVIII和XXII-LI)以及内质网-转运信号序列。疫苗也可包含衍生自其它TAA的表位。可在转基因小鼠内验证多表位小基因的免疫原性以评估针对测试表位诱导的CTL应答反应的数量级。此外,DNA编码表位的体内免疫原性可与特定CTL品系针对被该DNA质粒转染的靶细胞的体外应答相关联。因此,这些实验可显示这种小基因的两种作用1.)产生CTL应答,和2.)诱导CTL识别的细胞表达编码的表位。例如,为产生编码所选表位(小基因)的DNA序列以在人类细胞中表达,可反翻译该表位的氨基酸序列。可用人密码子表来选择各个氨基酸的密码子。这些编码表位的DNA序列可直接毗邻,因此当翻译时可产生连续的多肽序列。为使表达和/或免疫原性最优,可在设计小基因时加入其它元件。可被反翻译的小基因序列内的氨基酸序列的例子包括HLAI类表位、HLAII类表位、抗体表位、遍在蛋白化信号序列和/或内质网靶向信号。此外,可通过加入合成的(例如聚丙氨酸)或天然产生的毗邻CTL或HTL表位的侧接序列来改进CTL和HTL表位的HLA呈递;这些较大的肽包括的表位属于本发明范围。可通过组装编码小基因正链和负链的寡核苷酸将小基因序列转化成DNA。可用熟知的技术在适当条件下合成、磷酸化、纯化和退火重叠寡核苷酸(长30-100个碱基)。可用例如T4DNA连接酶连接寡核苷酸的末端。然后将这种合成的编码表位多肽的小基因克隆入所需表达载体。载体中优选包含精通本领域的技术人员熟知的标准调节序列以确保在靶细胞内表达。需要一些载体元件带有下游克隆位点以插入小基因的启动子;有效终止转录的聚腺苷化信号;用来复制的大肠杆菌起点;和大肠杆菌可选择标记(例如氨苄青霉素或卡那霉素抗性)。许多启动子可用于该目的,例如人巨细胞病毒(hCMV)启动子。参见例如美国专利5,580,859和5,589,466以了解其它合适的启动子序列。可加入其它载体修饰以优化小基因的表达和免疫原性。一些情况下,需要内含子以进行有效的基因表达,可在小基因的转录区掺入一个或多个合成的或天然产生的内含子。在哺乳动物细胞内加入mRNA稳定序列以及复制的序列也可提高小基因的表达。—旦选择了表达载体,可将小基因克隆到启动子下游的多接头区。将该质粒转化到合适的大肠杆菌菌株并用标准技术制备DNA。通过限制性酶切绘图和DNA序列分析验证小基因的取向以及DNA序列以及载体内的所有其它元件。包含正确质粒的细菌细胞可保存作为主细胞库和工作细胞库。此外,免疫刺激序列(ISS或CpG)似乎在DNA疫苗的免疫原性中发挥作用。如果需要增强免疫原性,可在载体的小基因编码序列之外包含这些序列。一些实施方案中,可使用能够制造小基因编码表位和第二蛋白质(可增强或降低免疫原性)的双顺反子表达载体。共同表达时可有利地增强免疫应答的蛋白质或多肽的例子包括细胞因子(例如IL-2、IL-12、GM-CSF)、诱导细胞因子产生的分子(例如LeIF)、共刺激分子,或者对于HTL应答有pan-DR结合蛋白(PADRES,Epimmune,SanDiego,CA)。辅助(HTL)表位可结合到胞内寻靶信号并与CTL表位独立表达;这可将HTL表位导向不同于CTL表位的细胞区室。需要的话,这可使HTL表位更有效地进入HLAII类途径,从而促进HTL诱导。与HTL或CTL诱导相反,通过共表达免疫抑制分子(例如TGF_b)特异性降低免疫应答对于某些疾病有益。55可通过例如在大肠杆菌内发酵培养然后再纯化来生产治疗量的质粒DNA。按照熟知的技术,将等量的工作细胞库接种到生长培养基,在摇瓶或生物反应器内生长至饱和。质粒DNA可用标准生物分离技术纯化,例如QIAGEN,Inc.(Valencia,California)提供的固相阴离子交换树脂。需要的话可用凝胶电泳或其它方法将开环形式和线型形式中的DNA与超螺旋DNA相分离。可制备纯化的质粒DNA以便用各种制剂进行注射。最简单的方法是用无菌磷酸缓冲盐水(PBQ重建冻干的DNA。这种称为“裸DNA”的方法目前在临床试验中被用于肌肉内(IM)给药。为尽可能提高基因DNA疫苗的免疫治疗作用,可以采用其它配制纯化的质粒DNA的方法。已经描述过许多方法,并且也可使用新技术。该试剂可采用阳离子脂质、糖脂和促融脂质体(见例如以下文献所述W093/24640;Mannino&Gould-Fogerite,BioTechniques6(7):682(1988);美国专利5,279,833;W091/06309;以及Feigner等,Proc.Nat'1Acad.Sci.USA84:7413(1987)。此外,肽以及统称为保护性、交互反应性、非凝聚化合物(PINC,protective,interactive,non-condensingcompound)的化合物也可与纯化的质粒DNA形成复合物,以改变例如稳定性、肌肉内分散性或对特定器官或细胞类型的运输等变量。靶细胞致敏可被用作小基因编码的CTL表位的表达和HLAI类呈递的功能测定。例如,质粒DNA被引入适合作为标准CTL铬释放测试的靶的哺乳动物细胞系。所用转染方法将千里眼最终的制剂。电穿孔可用于"裸"DNA,而阳离子脂质可用于直接体外转染。表达绿色荧光蛋白(GFP)的质粒可被共转染以便通过荧光激活细胞分选(FACQ富集转染的细胞。这些细胞然后用铬-51(51Cr)标记并被用作表位特异性CTL系的靶细胞;通过51Cr释放检测细胞溶解,它表明了小基因编码的CTL表位的产生以及HLA呈递。可用类似的试验评价HLA表位的表达以便评估HLA活性。体内免疫原性是检测小基因DNA制剂功能的第二种方法。用DNA产物免疫接种表达合适人HLA蛋白的转基因小鼠。给药剂量和途径取决于所用的制剂(例如,对用PBS配的DNA采用IM途径,对脂质复合的DNA采用腹膜内(i.p.)途径)。免疫21天后收获脾细胞并在存在编码各个测试表位的肽时再刺激一周。然后可用标准技术检测CTL效应细胞溶解中带有肽的51Cr标记的靶细胞试验。被带有与小基因编码表位相对应的肽表位的HLA致敏的靶细胞溶解证实了DNA疫苗制剂体内诱导CTL应答。用类似的方法证实HTL表位在转基因小鼠内的免疫原性。或者,可用例如美国专利5,204,253中所述的弹道输送法施用核酸。采用这种技术时,给予仅含有DNA的颗粒。在再一个实施方案中,可使DNA附着到颗粒例如金颗粒上。也可用本领域树脂的细菌或病毒输送系统来输送小基因,例如可将编码本发明表位的表达构建物掺入牛痘等病毒载体。X.C.2.CTL肽和辅助肽的组合含有本发明的肽的疫苗组合物可被修饰,例如被类似化,以提供所需特性,如血清半衰期改进、群体覆盖率变宽或免疫原性增强。例如,可使肽连接到含有至少一个能够诱导T辅助细胞应答的表位的序列来增强肽诱导CTL活性的能力。尽管CTL肽可直接连接到T辅助肽,但通常通过间隔分子使CTL表位/HTL表位结合。这种间隔分子通常含有相对较小的中性分子,如在生理条件下基本上不带电荷的氨基酸或氨基酸模拟物。间隔分子通常可选自,例如Ala、Gly或其它非极性氨基酸或中性极性氨基酸的中性间隔分子。可以理解,任选存在的间隔分子不一定要含有相同的残基,因此可以是杂-或同-寡聚物。当存在间隔分子时,间隔分子通常有至少一个或两个残基,更通常有3-6个残基,有时甚至有10个或更多残基。可将CTL肽表位可直接或通过CTL肽氨基或羧基末端的间隔连接到T辅助肽表位。免疫原性肽或T辅助肽的氨基末端可被酰化。HTL肽表位也可被修饰以改变其生物特性。例如,它们可被修饰以包含D-氨基酸从而增强它们对蛋白酶的抗性并因此延长它们的血清半衰期,或者它们可与其它分子(如脂质、蛋白质、糖类等)结合以增强其生物活性。例如,T辅助肽可在氨基或羧基末端结合一条或多条棕榈酸链。X.C.3.CTL肽和T细胞引发(priming)剂的组合一些实施方案中,本发明的药物组合物中可包含至少一种能引发B淋巴细胞或T淋巴细胞的组分。已鉴定脂质能在体内引发CTL。例如可将棕榈酸残基附加到赖氨酸残基的e-和a-氨基上然后再通过一个或多个连接基(如Gly、Gly-Gly-,Ser,Ser-Ser等)连接到免疫原性肽。脂质化的肽然后可作为掺入脂质体的微团或颗粒直接施用,或用乳剂(如不完全弗氏佐剂)乳化后施用。在一优选的实施方案中,特别有效的免疫原性组合物包含附加到Lys的e-和a_氨基上的棕榈酸,然后通过接头(如krler)使其结合于免疫原性肽的氨基末端。引发CTL应答的脂质的另一个例子是大肠杆菌脂蛋白,如三棕榈酰-S-甘油基半胱氨酰丝氨酰-丝氨酸(P3CSS)当共价结合到合适的肽时可被用来引发病毒特异性CTL(见例如Deres等,Nature342:561,1989)。本发明的肽可与例如P3CSS偶联,并将脂肽施用给个体以引发针对靶抗原的特异性免疫应答。此外,由于用P3CSS-缀合的表位引发也可诱生中和抗体,因此可将这样的两种组合物结合以更有效地引发体液和细胞介导的应答。X.C.4.含有用CTL和/或HTL肽脉冲的DC的疫苗组合物本发明所述疫苗组合物的一个实施方案包括离体给予来自患者血液的PBMC或从中分离的DC带有表位的肽的混合物。可使用有利于收获DC的药物,如ftx)genip0ietinTM(Pharmacia-Monsanto,St.Louis,MO)或GM-CSF/IL-4。用肽脉冲DC并在再输注到患者之前洗涤DC以除去未结合的肽。该实施方案中,疫苗包含肽脉冲的DC,其表面存在脉冲肽表位与HlA分子形成的复合物。可用肽的混合物离体脉冲DC,混合物中有一些肽刺激针对PSCA的CTL应答。可任选地含有辅助T细胞(HTL)肽,如天然或人造的疏松限制的HLAII类肽,以促进CTL应答。因此,本发明的疫苗被用来治疗表达或过度表达PSCA的癌症。X.D.)过继免疫治疗抗原性PSCA-相关肽也被用来离体诱导CTL和/或HTL应答。所得CTL或HTL细胞可被用来治疗患者体内的肿瘤,所述患者对其它传统治疗模式无反应或将对本发明的治疗性疫苗肽或核酸无反应。通过在组织培养液内一起培养患者的或遗传相容的CTL或HTL前体细胞以及抗原呈递细胞(APC)如树突细胞和合适的免疫原性肽,离体诱导对特定抗原的CTL或HTL应答。培养适当的时间(通常约7-天)之后,这期间前体细胞被激活并扩增成为效应细胞,将其灌输回患者,它们将在这里破坏(CTL)或帮助破坏(HTL)它们的特异性靶细胞(例如肿瘤细胞)。转染的树突细胞也可被用作抗原呈递细胞。Χ.E.)出于治疗或预防目的施用疫苗本发明的药物组合物和疫苗组合物通常可用来治疗和/或预防表达或过表达PSCA的癌症。在治疗应用中,可给予患者一定量的肽和/或核酸组合物,所述量足以引发有效的针对抗原的B细胞、CTL和/或HTL应答,或者可治愈或至少部分阻止或减缓症状和/或并发症。适合实现该目的的量被称为"治疗有效剂量"。对该用途有效量将取决于,例如,所施用的具体组合物、给药方式、被治疗疾病的阶段和严重性、患者的体重和健康状况以及主治医师的判断。本发明的药物组合物、免疫原性肽或编码它们的DNA给予已经带有表达PSCA的肿瘤的个体。所述肽或其编码DNA可单独给予或以一个或多个肽序列的融合序列的形式给予。患者可用所述免疫原性肽单独治疗,或者适当的话也可与其它治疗方法(如手术)联合治疗。在治疗应用中,给药通常开始于首次被诊断出PSCA相关癌症时。然后增加剂量直到至少症状基本缓解并再持续一段时间。输送到患者的疫苗组合物(即包括但不限于例如肽混合物、多表位多肽、小基因或TAA特异性CTL或脉冲的树突细胞)可根据疾病阶段或患者的健康状况而改变。例如,在患有表达PSCA的肿瘤的患者中,相比其它实例,含有PSCA特异性CTL的疫苗对于杀死晚期癌症患者体内的肿瘤细胞更有效。通过一种给药方式输送足以有效刺激细胞毒T细胞应答量的肽表位通常是重要的;也可按照本发明的实施方案给予刺激辅助T细胞应答的组合物。用于最初治疗免疫的剂量通常以单位剂量出现,其范围下限约为1、5、50、500或1,000μg,上限约为10,000,20,000,30,000或50,000μg。用于人的剂量值范围通常为每70千克体重患者约500μg至约50,000μg。之后的数周至数月内可提高剂量,增加剂量在约1.Omg和约50,OOOmg肽之间,这取决于通过测量获自患者血液的CTL和HTL的比活确定的患者的反应和状况。可连续给药直到临床症状或实验室试验表明肿瘤已被排除或减少,并再持续一段时间。剂量、给药途径以及给药方案将根据本领域已知的方法来判断。在某些实施方案中,本发明的肽和组合物可用于严重的疾病状态,即威胁生命或有可能威胁生命的状态。此时,基于外部物质的最小量和优选的本发明组合物中的肽的相对无毒特性,可以并且有必要给予患者相对所述剂量过量的肽组合物来进行治疗。本发明的疫苗组合物也可仅作为预防剂。最初的预防免疫接种剂量通常以单位剂量出现,其范围下限为约1、5、50、500或1000μg,上限为约10,000,20,000,30,000或50,000μg。用于人的剂量值范围通常为每70千克患者约500μg至约50,000μg。在初次接种疫苗之后以约4周至6个月的预定间隔给予强化剂量,强化剂量在约1.Omg和约50,OOOmg肽之间。疫苗的免疫原性可通过测量获自患者血液样品的CTL和HTL的特异性活性来评估。治疗用的药物组合物可通过肠胃外、外用、口、鼻、鞘内或在局部(例如作为乳膏或外用软膏)施用。优选通过肠胃外施用药物组合物,例如静脉内、皮下、真皮内或肌肉内。因此,本发明提供了供肠胃外用药的组合物,其中包含溶于或悬浮在可接受载体,优选含水载体内的免疫原性肽的溶液。可使用各种含水载体,例如水、缓冲的水、0.8%盐水、0.3%甘氨酸、透明质酸等。这些组合物可用熟知的常规灭菌技术来灭菌,或者可被无菌过滤。所得水溶液可被包装成直接使用的制剂,或被冻干,冻干的制品在给药之前需要用无菌溶液重溶。所述组合物可含有药学上可接受的辅助物质以满足生理条件的需要,如pH-调节剂和缓冲剂、张力调节剂、湿润剂、防腐剂等,具体例如有乙酸钠、乳酸纳、氯化钠、氯化钾、氯化钙、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。药物制剂中本发明的肽的浓度是可变的,即其重量比例可从小于约0.1%(通常为或至少约2%)至20%-50%或更高,并将根据所选特定给药模式主要通过液体体积、粘度等来选择。药物组合物中通常含有人单位剂量单位的组合物,所述药物组合物包含人单位剂量的可接受的载体,在一个实施方案中是含水载体,并以精通本领域的技术人员已知的用来将这种组合物给予人类的体积/质量比进行给药(见例如《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceuticalSciences)第17版,A.Gennaro编,MackPublishingCo.,Easton,Pennsylvania,1985)。例如,70kg体重患者的初次免疫肽剂量可从约1到约50,000mg,通常为100-5,OOOmg。例如,对核酸而言,初次免疫可用以0.5_5mg的量在多个部位通过IM(或SC或ID)给予的裸核酸形式的表达载体进行。核酸(0.I-IOOOmg)也可用基因枪给予。3-4周后给予强化剂量。强化剂可以是以5-107至切109pfu的剂量施用的重组禽痘病毒。对抗体而言,治疗通常包括通过可接受的给予途径,如静脉注射(IV),重复给予抗-PSCA抗体制品,其剂量通常为每千克体重约0.l-10mg。通常,每周10_500mgMAb的剂量是有效并能良好耐受的。此外,一种可以接受的抗-PSCAMAb制品的剂量方案是,每千克体重患者通过IV给予约^ig起始负荷剂量,然后每周通过IV给予约ang/kg的剂量。精通本领域的技术人员知道,在具体病例中,有许多因素会影响理想剂量。这些因素包括,例如,组合物的半衰期、Ab的结合亲和力、物质的免疫原性、PSCA在患者内的表达程度、PSCA抗原的循环排除程度、所需稳定状态的浓度水平、治疗频率、与本发明的治疗方法联合使用的化疗剂或其它试剂的影响以及特定患者的健康状况。非限制性的优选的人单位剂量是,例如,500μg-lmg、lmg-50mg、50mg-100mg、100mg-200mg、200mg-300mg、400mg-500mg、500mg-600mg、600mg-700mg、700mg-800mg、800mg-900mg、900mg-lg或lmg_700mg。在某些实施方案中,剂量范围是每千克体重2-5mg,例如,然后每周给予l-:3mg/kg;例如,然后是0.5mg、l、2、3、4、5、6、7、8、9、10mg/kg体重,每周给予,为期2、3或4周;例如,然后是0.5-10mg/kg体重,每周给予,为期2、3或4周;每周225、250、275、300、325、350、375、400mg/m2体表面积;每周l-600mg/m2体表面积;每周225-400mg/m2体表面积;这些剂量可每周给予,为期2、3、4、5、6、7、8、9、19、11、12或更多周。在一个实施方案中,多核苷酸的人单位剂型包括合适的剂量范围或提供任何治疗效果的有效量。如本领域的一般技术人员所了解的,治疗效果取决于许多因素,其中包括多核苷酸的序列、多核苷酸的分子量和给药途径。剂量通常由医生或其它健康护理专家根据各种本领域已知的参数(例如症状的严重性、病史等)来选择。通常,对于约20个碱基的多核苷酸而言,剂量范围可选自,例如,独立选择的下限,如约0.1,0.25、0.5、1、2、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400或500mg/kg,至独立选择的大于下限的上限,如约60、80、100、200、300、400、500、750、1000、1500、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000或10,000mg/kgo例如,剂量可以是以下任何一种0.I-IOOmg/kg、0.l-50mg/kg>0.卜25mg/kg、0.1-lOmg/kg、l_500mg/kg、100-400mg/kg、200_300mg/kg、l-100mg/kg、100-200mg/kg、300-400mg/kg、400-500mg/kg、500-1000mg/kg、500-5000mg/kg或500-10,000mg/kg。通常,相比将核苷酸更直接地施加到疾病组织,肠胃外给药途径需要较高剂量的多核苷酸,当多核苷酸长度增加时剂量也需增加。在一个实施方案中,T细胞的人单位剂型包括合适的剂量范围或提供任何治疗效果的有效量。如本领域的一般技术人员所了解的,治疗效果取决于许多因素。剂量通常由医生或其它健康护理专家根据各种本领域已知的各种参数(例如症状的严重性、病史等)来选择。剂量可以是约104-106细胞、约106-108细胞、约108-1011细胞或约108-5χ1010细胞。剂量还可以是约106细胞/m2至约1010细胞/m2,或约106细胞/m2至约108细胞/m2。本发明的蛋白质和/或蛋白质的编码核酸也可通过脂质体给予,脂质体具有以下作用1)使蛋白质靶向特定组织如淋巴组织;2)选择性寻靶疾病细胞;或3)延长肽组合物的半衰期。脂质体包括乳剂、泡沫、微团、不溶单层、液晶、磷脂分散体、多层等等。在这些制品中,将被输送的肽被作为脂质体的一部分单独掺入或与结合淋巴细胞普遍受体的分子(如结合CD45抗原的单克隆抗体)或其它治疗性或免疫原性成分一起掺入。因此,装有所需的本发明的肽的脂质体或用这种肽装饰的脂质体可被导向到淋巴细胞部位,然后脂质体将在这里输送所述肽组合物。可用标准载体形成脂质来形成用于本发明的脂质体,其中一般包括电中性和负电荷的磷脂和类固醇(如胆固醇)。选择脂质时通常要考虑以下因素,例如脂质体的大小、酸不稳定性和脂质体在血液中的稳定性。有许多制备脂质体的方法,例如以下文献中所描述的方法:Szoka等,Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9:467(1980)以及美国专利4,235,871,4,501,728,4,837,028和5,019,369。为使细胞靶向免疫系统,被掺入脂质体的配体例如可包括所需免疫系统的细胞表面决定簇的特异性抗体或其片段。含有肽的脂质体悬液可通过静脉内、局部等途径给予,其剂量可根据给药方式、被输送的肽以及被治疗击疾病的阶段等因素而改变。对于固体组合物可使用常规的无毒固体载体,其中包括,例如,药物级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石。纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。为口服给药,可通过掺入任何通常使用的赋形剂(如上面列出的那些载体)来形成药学上可接受的无毒组合物,这种组合物中通常含有10-95%活性成分,即一种或多种本发明的肽,且更优选的浓度为25%-75%。对于气溶胶给药,免疫原性肽优选以细分的形式和表面活性剂及推进剂一起提供。肽的重量比例通常为约0.01%-20%,优选约-10%。当然,表面活性剂必需是无毒的,并且优选溶于推进剂。代表性的这种试剂是含有6-22个碳原子的脂肪酸(如己酸、辛酸、月桂酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、油基硬脂酸(olestericacid)和油酸)与脂族多羟基醇或其环酐的酯或偏酯。可使用混合的酯,例如混合的或天然的甘油酯。表面活性剂占组合物重量的约0.1%-20%,优选约0.25-5%。用常规推进剂平衡组合物。需要的话也可含有载体,例如鼻内输送时可含有卵磷脂。XI.)PSCA的诊断和预后实施方式如本文所述,PSCA多核苷酸、多肽、反应性细胞毒T细胞(CTL)、反应性辅助T细胞(HTL)和抗-多肽抗体被用于熟知的诊断、预测和治疗试验,这用来检测与细胞生长失调有关的疾病,如癌症,尤其是表I列出的癌症(参见,例如,其特定组织表达模式及其在某些癌症中的过度表达,如题为“正常组织和患者标本内PSCA的表达分析”的实施例所述)。由此可知,PSCA是一种前列腺相关抗原PSA,医疗工作者用这种原型标记来鉴定和监测前列腺癌的发生已有多年(见例如Merrill等,J.Urol.163(2)=503-5120(2000);Polascik等,J.Urol.Aug;162(2):293-306(1999)禾口Fortier等,J.Nat.CancerInst.91(19):1635-1640(1999))。也可使用许多其它的诊断标记,其中包括p53和K-ras(见例如Tulchinsky等,IntJMolMedl999-7_4(1):99-102和Minimoto等,CancerDetectPrev2000;24(1):1-12)。因此,公开PSCA多核苷酸和多肽(以及用来鉴定这些分子存在情况的PSCA多核苷酸探针和抗-PSCA抗体)以及它们的特征使得熟练的技术人员能够将这些分子用于类似的方法,例如许多涉及癌症相关症状的诊断试验。使用PSCA多核苷酸、多肽、反应性T细胞和抗体的诊断方法的典型实施方案类似于已经良好建立的使用例如PSA多核苷酸、多肽、反应性T细胞和抗体的诊断试验。例如,就像在监测PSA过度表达或前列腺癌转移的方法中使用PSA多核苷酸作为探针(例如Northern分析,见例如Sharief等,Biochem.Mol.Biol.Int.33(3):567-74(1994))和引物(例如PCR分析,见例如Okegawa等,J.Urol.163(4):1189-1190(2000))以观察PSAmRNA的存在和/或水平一样,可用同样的方法用这里所述的PSCA多核苷酸来监测PSCA的过表达或前列腺癌和其它表达这种基因的癌症的转移。或者,就像在监测PSA蛋白过表达(见例如St印han等,Urology55(4):560-3(2000))或前列腺细胞转移(见例如Alanen等,Pathol.Res.Pract.192(3):233-7(1996))的方法中用PSA多肽来产生PSA特异性的抗体用来观察PSA蛋白的存在和/或水平一样,可用这里所述的PSCA多肽来产生用来监测PSCA的过表达和/或前列腺细胞以及表达这种基因的其它癌症细胞的转移。具体地说,由于转移涉及癌细胞从一种来源的器官(如肺或前列腺等)移动到身体其它区域(如淋巴结),所以可采用检测生物样品是否存在表达PSCA多核苷酸和/或多肽的细胞的试验来提供转移的证据。例如,当发现来自通常不含表达PSCA的细胞的组织(淋巴结)的生物样品中含有表达PSCA的细胞时,例如在分离自淋巴结和骨转移的异种移植物LAPC4和LAPC9中观察到PSCA表达,该发现预示着转移。或者,可用PSCA多核苷酸和/或多肽来提供癌症的证据,例如当发现通常不表达PSCA或以不同水平表达PSCA的生物样品内的细胞表达PSCA或PSCA表达升高时(见例如表I所列癌症中的PSCA表达以及相应的图中所示的患者样品等中的PSCA表达)。在这种测定中,技术人员还希望通过检测生物样品中是否存在除PSCA之外的第二组织限制性标记,如PSA、PSCA等,来产生关于转移的补充证据(见例如Alanen等,Pathol.Res.I^ract.192(3)233-237(1996))。使用免疫组织化学法鉴定组织切片内存在PSCA多肽可说明该组织内某些细胞的状态被改变。如本领域所熟知的,抗体定位到癌细胞表达的多肽的能力是一种诊断疾病存在、疾病所处阶段、发展和/或肿瘤侵袭性的方法。相比相应的非恶性肿瘤组织,这种抗体也可检测癌细胞内该多肽分布的改变。PSCA多肽和免疫原性组合物也可用于了解疾病状态中亚细胞蛋白定位的改变。细胞从正常状态改变成疾病状态会使细胞形态发生变化并通常与亚细胞单位定位/分布的变化有关。例如,以极化方式在正常细胞中表达的细胞膜蛋白质在疾病中会改变,这导致蛋白质以非极性方式分布在整个细胞表面。已通过免疫组织化学方法用MUCl和Her2蛋白表达证实了疾病状态中亚细胞蛋白定位改变的现象。正常的上皮细胞具有典型的MUCl的顶端分布,除此之外还有糖蛋白的核上定位,而在恶性肿瘤病病灶通常呈现非极性染色模式(Diaz等,TheBreastJournal,7;40-45(2001);Zhang等,ClinicalCancerResearch,4;2669-2676(1998):Cao等,TheJournalofHistochemistryandCytochemistry,45:1547—1557(1997))。此夕卜,正常的乳腺上皮是Her2蛋白阴性的或仅显示基底外侧分布,而恶性T细胞可在整个细胞表面表达蛋白质(DePotter等,InternationalJournalofCancer,44;969-974(1989)=McCormick等,117;935-943(2002)).或者,在疾病状态中,蛋白质的分布可从仅定位于表面变为分散到胞质中。对MUCl可观察到这样的例子(Diaz等,TheBreastJournal,7:40-45(2001))。通过免疫组织化学方法检测到的细胞内蛋白质定位/分布的变化也为某些治疗方法的可行性提供了重要信息。这最后一点可通过在正常组织中位于胞内但在恶性细胞中出现在细胞表面的蛋白质的情况来说明;细胞表面定位使得细胞可顺利地用于基于抗体的诊断和治疗方法。当PSCA发生蛋白质定位改变时,PSCA蛋白和与其有关的免疫应答是非常有用的。因此,确定MP4C12亚细胞蛋白定位是否发生变化的能力使PSCA蛋白和与其有关的免疫应答非常有用。使用PSCA组合物使得精通本领域的技术人员能够做出重要的诊断和治疗决定。当PSCA多肽出现在正常情况下不产生PSCA的组织中时,特异于PSCA的免疫组织化学试剂对于检测表达PSCA的肿瘤的转移也是有用的。因此,PSCA多肽及其免疫应答产生的抗体可用于许多重要的方面,如精通本领域的技术人员已知的诊断、预后、预防和/或治疗目的。就像熟练的技术人员将PSA多核苷酸片段和多核苷酸变体用于监测PSA的方法一样,PSCA多核苷酸片段和多核苷酸变体也可以类似方式使用。具体地说,用于监测PSA方法的典型PSA多核苷酸是由PSAcDNA序列片段构成的探针或引物。举例来说,用来PCR扩增PSA多核苷酸的引物必需包含不完整的PSA序列以在聚合酶链式反应中发挥作用。在这种PCR反应中,熟练的技术人员通常产生许多不同的多核苷酸片段,这些片段可被用作引物以扩增感兴趣的多核苷酸的不同部分或使扩增反应最优(见例如Caetano-Anolles,G.Biotechniques25(3):472-476,478-480(1998);Robertson等,MethodsMol.Biol.98121-154(1998))。使用这种片段的另一个例子提供在题为“正常组织和患者标本内PSCA的表达分析”的实施例中,其中将PSCA多核苷酸片段用作探针以显示PSCARNA在癌细胞中的表达。此外,变体多核苷酸序列在PCR和Northern分析中通常被用作相应mRNA的引物和探针(见例如Sawai等,FetalDiagn.Ther.199611-1211(6):407-13和FrederickΜ.Ausubel等编的《分子生物学最新方法》,1995))。多核苷酸片段和变体在这里是有用的,它们在高度严谨条件下能够结合靶多核苷酸序列(例如图1所示的PSCA多核苷酸或其变体)。此外,含有可被抗体或T细胞识别的表位的PSA多肽被用于监测PSA的方法,其中所述抗体或T细胞特异性结合该表位。PSCA多肽片段和多肽类似物或变体也可以类似方式使用。这种用多肽片段或多肽变体产生抗体(如抗-PSA抗体或T细胞)在本领域的许多系统中是常见的,如技术人员使用的融合蛋白系统(见例如FrederickΜ.Ausubel等编的《分子生物学最新方法》,1995,第2卷第16单元)。文中,每个表位的功能是提供抗体或T细胞的反应性结构。通常,熟练的技术人员创建许多不同的多肽片段,这些片段可用来产生特异于感兴趣多肽不同部分的免疫应答(见例如美国专利5,840,501和美国专利5,939,533)。例如,可优选使用含有这里所述的一种PSCA生物基序或带有基序的子序列的多肽,这种子序列是精通本领域的技术人员基于本领域已知序列容易鉴定的。多肽片段、变体或类似物在这里通常是有用的,只要它们含有能够产生靶多肽序列(例如图3所示的PSCA多肽)特异性抗体或T细胞的表位。如本文所示,PSCA多核苷酸和多肽(以及用来鉴定存在这些分子的PSCA多核苷酸探针和抗-PSCA抗体或T细胞)具有特殊的性质,这种特性使它们可用于诊断癌症,如表I所列的癌症。测量存在PSCA基因产物以评价这里所述疾病状况(如前列腺癌)的出现或发生的诊断方法被用于鉴定患者以进行预防性检测或进一步的监测,就像已经获得成功的PSA那样。此外,这些物质满足了本领域在一些情况下对具有与PSA类似或互补特性的小分子的需要,所述情况例如,仅根据PSA的测试不能明确诊断前列腺来源的转移(见例如Alanen等,Pathol.Res.Pract.192(3):233-237(1996)),因此需要用PSCA多核苷酸和多肽(以及用来鉴定存在这些分子的PSCA多核苷酸探针和抗-PSCA抗体)等物质来证实前列腺来源的转移。最后,除了它们在诊断检测中的用途,这里所述的PSCA多核苷酸有许多其它用途,例如它们可用来鉴定PSCA基因染色体区域内与致癌有关的染色体异常(见下文题为“PSCA的染色体绘图”的实施例)。此外,除了用于诊断试验外,这里所述的PSCA相关蛋白和多核苷酸有许多其它用途,,例如它们可用于法医分析未知来源的组织(见例如TakahamaKForensicSciInt1996-6-28;80(1-2):63_9)。此外,本发明的PSCA相关蛋白或多核苷酸可用来治疗以PSCA过度表达为特征的病理状况。例如,图1的氨基酸或核酸序列,或其片段,可用来产生针对PSCA抗原的免疫应答。可用与PSCA反应的抗体或其它分子来调节这种分子的功能,从而可提供治疗益处。XII.)PSCA蛋白功能的抑制本发明包括各种抑制PSCA结合其结合伴侣或与其它蛋白质相互关联的方法和组合物,以及抑制PSCA功能的方法。XII.A.)用胞内抗体对PSCA进行的抑制一种方法中,编码特异性结合PSCA的单链抗体的重组载体被通过基因传递技术引入PSCA表达细胞。因此,编码的单链抗-PSCA抗体在胞内表达,结合PSCA蛋白,并因此抑制其功能。工程改造这种胞内单链抗体的方法是熟知的。这种胞内抗体也称为“胞内抗体”,能特异性靶向细胞内的特定区室,使治疗的抑制作用基重在该区室。这种技术已成功用于本领域(参见例如Richardson和Marasco,1995,TIBTECH第13卷)。胞内抗体事实上可消除高丰度细胞表面受体的表达(见例如Richardson等,1995,Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:3137-3141;Beerli等,1994,J.Biol.Chem.289:23931-23936;Deshane等,1994,GeneTher.1:332-337)。单链抗体包含通过可弯曲的接头多肽连接的重链和轻链的可变区,并作为单个多肽表达。任选地,单链抗体被作为与轻链恒定区结合的单链可变区片段表达。将熟知的胞内运输信号经工程改造成编码这种单链抗体的重组多核苷酸载体以使该胞内抗体精确靶向所需胞内区室。例如,靶向内质网(ER)的胞内抗体经改造而加入前导肽和任选的C-末端ER保留信号肽(如KDEL氨基酸基序)。工程改造使其含有核定位信号因而使胞内抗体在细胞核内具有活性。使脂质部分与胞内抗体结合以将胞内受体限制在质膜的胞质侧。胞内抗体经靶向也在胞质溶胶中发挥作用。例如,使胞质内的胞内抗体与胞质溶胶内的因子螯合,这样可防止它们进入它们的天然细胞目标地点。在一个实施方案中,胞内抗体被用来捕获细胞核内的PSCA,从而防止它在细胞核内的活性。在这种PSCA胞内抗体中加入核靶向信号以实现所需寻靶。可设计这种PSCA胞内抗体来特异性结合特定的PSCA结构域。另一实施方案中,特异性结合PSCA蛋白的胞质胞内抗体被用来防止PSCA与细胞核接触,从而可防止它们在细胞核内发挥任何生物活性(例如防止PSCA与其它因子形成转录复合体)。为具体指导这种胞内受体在特定细胞内表达,使胞内受体在合适的肿瘤特异性启动子和/或增强子的调控之下转录。为使胞内受体在前列腺中特异性表达,可使用例如PSA启动子和/或启动子/增强子(见例如1999年7月6日发表的美国专利5,919,652)。XII.B.)用重组蛋白对PSCA进行抑制另一种方法中,重组分子结合PSCA并因此抑制PSCA的功能。例如,这些重组分子可防止或抑制PSCA接触/结合其结合伴侣或与其它蛋白质关联。例如,这种重组分子可以含有PSCA特异性抗体分子的反应性部分。在一具体实施方案中,PSCA结合伴侣的PSCA结合域经工程改造到二聚融合蛋白中,因此该融合蛋白含有两个与人IgG(如人IgGl)的Fc部分结合的PSCA配体结合域。这种IgG部分可含有,例如,CH2和CH3区域以及绞链区,但不含CHl区域。这种二聚融合蛋白可以可溶形式给予患有与PSCA表达有关的癌症的患者,从而该二聚融合蛋白特异性结合PSCA并阻断PSCA与结合伴侣相互作用。还可用已知的抗体结合技术使这种二聚融合蛋白组合成多聚蛋白。XII.C.)对PSCA转录或翻译的抑制本发明还包括各种抑制PSCA基因转录的方法和组合物。类似地,本发明还提供了抑制PSCAmRNA翻译成蛋白质的方法和组合物。—种方法中,抑制PSCA基因转录的方法包括使PSCA基因接触PSCA反义多核苷酸。另一种方法中,抑制PSCAmRNA翻译的方法包括使PSCAmRNA接触反义多核苷酸。另一个方法中,用PSCA特异性核酶来切割PSCA信使从而抑制翻译。这种基于反义和核酶的方法也可针对PSCA基因的调节区域,如PSCA启动子和/或增强子元件。类似地,能够抑制PSCA基因转录因子的蛋白质被用来抑制PSCAmRNA转录。在上述方法中有用的各种多核苷酸和组合物已经在上文中描述。使用反义和核酶分子抑制转录和翻译的方法是本领域熟知的。通过紊乱PSCA转录活性抑制PSCA转录的其它因子也可用来治疗表达PSCA的癌症。类似地,紊乱PSCA加工的因子也可用来治疗表达PSCA的癌症。使用这类因子的癌症治疗方法也在本发明范围之内。XII.D.)治疗方法的一般过程可用基因转移和基因治疗技术来输送治疗性多核苷酸分子到合成PSCA的肿瘤细胞(即反义、核酶、编码胞内抗体的多核苷酸和其它PSCA抑制分子)。本领域已知许多基因治疗方法。也可用这种基因治疗方法将编码PSCA反义多核苷酸的重组载体、核酶、能够紊乱PSCA转录的因子等输送到靶肿瘤细胞。上述治疗方法可与广泛使用的手术、化疗或放疗方法联合。本发明的治疗方法能够降低化疗(或其它疗法)的剂量和/或施用频率,这对患者是有利的,尤其是对于那些无法良好耐受化学治疗剂毒性的患者。特定组合物(例如反义、核酶、胞内受体)或这些物质组合的抗肿瘤活性可用各种体外和体内测定系统进行评价。评价治疗活性的体外测定包括细胞生长测定、软琼脂测定和其它指示肿瘤生长活性的试验,结合测定能够确定治疗化合物将抑制PSCA与结合伴侣等结合的程度的结合试验等。可在合适的动物模型内评价PSCA治疗组合物的体内效果。例如可使用异种前列腺癌模型,此模型中,人前列腺癌外植体或传代的异种移植物组织被引入免疫能力低下的动物,如裸鼠或SCID小鼠(Klein等,1997,NatureMedicine3:402-408)。例如,PCT专利申请W098/166^和美国专利6,107,540描述了人前列腺癌的各种异种移植物模型,这些模型能够说明原发性肿瘤的发展、微转移和作为晚期疾病特征的成骨细胞转移。可利用测定抑制肿瘤形成、肿瘤消退或转移等预测其功效。评价促进凋亡的体内试验也可用来评价治疗组合物。在一个实施方案中,可检测用治疗组合物处理的带有肿瘤异种移植物的小鼠以了解相比未处理的带有对照异种移植物的小鼠是否存在凋亡病灶。在经过治疗的小鼠的肿瘤内发现的凋亡病灶说明了组合物的治疗功效。用于上述方法的治疗组合物可被配制成药物组合物,该药物组合物中含有适合所述输送方法的载体。合适的载体包括当与治疗组合物混合时保留治疗组合物的抗肿瘤功能且通常不与患者的免疫原性发生反应的任何物质。其例子包括但不限于任何一种标准药用载体,如无菌磷酸缓冲盐水溶液、抑菌水等(通常可见《Remington’sPharmaceuticalSciences))第16版,A.Osal.编,1980)。治疗制剂可被溶解并通过任何能够将治疗组合物输送到肿瘤部位的途径给药。比较有效的给药途径包括但不限于静脉内、肠胃外、腹膜内、肌肉内、瘤内、真皮内、器官内、正位等。优选的静脉注射制剂所含的该治疗组合物可与防腐抑菌水、无菌非防腐水配成溶液或稀释在注射用含有0.9%无菌氯化钠的聚氯乙烯或聚乙烯袋中。治疗性蛋白质制品可被冻干并作为无菌粉末保存,优选在真空下冻干,然后在注射之前用抑菌水(含有例如苯甲醇防腐剂)或无菌水重配。用上述方法治疗癌症的剂量和给药方法可根据方法和靶癌症不同而改变,且通常将取决于许多本领域已知的其它因素。XIII.)PSCA调节剂的鉴定、特征分析和用途鉴定和使用调节剂的方法在一个实施方案中,进行筛选以鉴定调节剂,所述调节剂诱导或抑制特定表达模式、抑制或诱导特定途径,优选因此产生相关表型。另一实施方案中,已经鉴定了对于具体情况重要的差别表达的基因;进行筛选以鉴定改变(提高或降低)个体基因表达的调节剂。另一实施方案中,进行筛选以鉴定改变差别表达基因表达产物的生物功能的调节剂。再者,已经鉴定了基因在特定状态中的重要性,进行筛选以鉴定结合和/或调节基因产物生物活性的试剂。此外,筛选在对候选试剂应答反应中受诱导的基因。鉴定调节剂(抑制癌症表达模式而产生正常表达模式的试剂,或能调节癌基因导致该基因在正常组织中表达的调节剂),然后进行筛选以鉴定在对该试剂的应答反应中受到特异性调节的基因。比较正常组织和用试剂处理的癌组织的表达模式可显示在正常组织或癌组织内不表达但在经过试剂处理的组织内表达的基因,或者反之亦然。用这里所述的用于癌症基因或蛋白质的方法鉴定和使用这些试剂特异性序列。具体地说,这些序列和它们编码的蛋白质被用来标记或鉴定试剂处理的细胞。此外,产生了抗试剂诱导型蛋白质的抗体并被用来使新的治疗剂靶向被治疗的癌症组织样品。与调节剂有关的鉴定和筛诜试验与基因表汰有关的试骑本发明的蛋白质、核酸和抗体被用于筛选试验。与癌症有关的蛋白质、抗体、核酸、修饰的蛋白质以及含有这些序列的细胞被用于筛选测定,例如评价药物候选物对"基因表达模式”、多肽表达模式或改变生物功能的作用。在一个实施方案中,使用表达模式(优选与高通量筛选技术结合)以在用候选试剂处理之后监测基因表达模式(例如Davis,GF等,JBiolScreen7:69(2002);Zlokarnikφ,Science279:84-8(1998);Heid,GenomeRes6:986-94,1996)。癌蛋白、抗体、核酸、修饰的蛋白质和含有天然或修饰癌蛋白或基因的细胞被用于筛选测定。即,本发明包括筛选调节癌症表型或本发明的癌蛋白生理功能的方法。这可基因上完成或通过评价药物候选物的“基因表达模式”或生物学功能而完成。在一个实施方案中,使用表达模式(优选与高通量筛选技术结合)以在用候选试剂处理之后进行监测,见Zlokamik,同上。进行了各种涉及本发明的基因和蛋白质的试验。测定可在个体核酸或蛋白质水平进行。即,鉴定在癌症中上调的特定基因之后可筛选测试化合物以了解调节基因表达或结合本发明的癌蛋白的能力。“调节"在这里包括提高或降低基因表达。优选的调节量将取决于正常组织与癌组织中基因表达的最初变化,其变化至少为10%,优选50%,更优选100-300%,且在一些实施方案中为300-1000%或更高。因此,如果正常组织相比某基因在癌组织中表达增加4倍,常需要降低约4倍;类似地,与正常组织相比在癌组织内降低10倍,常需要测试化合物使其表达提高10倍。也可采用能恶化癌症中基因表达的调节剂,例如,在进一步分析上调靶基因表达。用核酸探针和定量测定来监测基因表达的量及基因表达水平,或者可监测基因产物本身,例如通过使用癌蛋白的抗体和标准免疫试验。也可用蛋白组学和分离技术来定量测定表达。通过监测表达来鉴定修饰基因表达的化合物在一个实施方案中,同时对许多实体进行基因表达监测,即监测表达图谱。这种图谱通常包括一个或多个图1所示的基因。该实施方案中,例如,使癌症核酸探针结合到生物芯片上以检测并量化特定细胞内的癌症序列。或者可采用PCR。因此可使用微量滴定板,其所需孔内分散有引物。然后可进行PCR反应并对每个孔进行分析。进行表达监测以鉴定修饰一种或多种癌症相关序列(如图1所列的多核苷酸序66列)的表达的化合物。通常在分析之前在细胞中加入测试调节剂。此外,还进行筛选以鉴定调节癌症、调节本发明的癌蛋白、结合本发明的癌蛋白或紊乱本发明的癌蛋白与抗体或其结合伴侣结合的分子。在一个实施方案中,高通量筛选方法包括提供包含大量潜在治疗化合物(候选化合物)的库。然后在一个或多个测定中筛选这种"组合化学库"以鉴定那些具有所需化学活性的库成员(尤其是化学种类或亚类)。鉴定出的化合物可作为常规的"先导化合物",如筛选用化合物,或作为治疗剂。在某些实施方案中,筛选潜在调节剂组合文库结合癌多肽的能力或调节活性。通常,通过鉴定具有一些所需特性或活性(例如抑制活性)的化合物(称作“先导化合物”)、产生所述先导化合物的变体并评价这些变体化合物的特性和活性,可产生具有有用特性的新的化学实体。通常,高通量筛选(HTQ法被用于这种分析。如上所述,基因表达监测通常被用来检测候选调节剂(例如蛋白质、核酸或小分子)。加入候选试剂并将细胞培养一段时间之后,含有待分析靶序列的样品例如被加到生物芯片上。需要的话可用已知技术来制备靶序列。例如,用已知的裂解缓冲液、电穿孔等方法处理样品以使细胞裂解,并纯化和/或扩增,例如通过PCR。例如可用共价结合到核苷酸的标记物进行体外转录。核酸通常用生物素-FITC或PE或用cy3或cy5标记。靶序列可用荧光信号、化学发光信号、化学信号或放射性信号标记以便检测与探针特异性结合的靶序列。标记也可以是酶,如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶,当提供合适底物时可检测这些酶产生的产物。或者,标记是被标记的化合物或小分子,如酶抑制剂,它们与酶结合但不被酶催化或改变。标记也可以是例如表位标记或特异性结合链霉亲和素的生物素。以生物素为例,如上所述标记链霉亲和素,从而为结合的靶序列提供了可检测的信号。未结合的标记链霉亲和素通常在分析之前被除去。本领域的技术人员将了解,这些试验可以是直接杂交测定或者是使用多个探针的“夹心试验”,这种方法通常描述在美国专利5,681,702;5,597,909;5,545,730;5,594,117;5,591,584;5,571,670;5,580,731;5,571,670;5,591,584;5,624,802;5,635,352;5,594,118;5,359,100;5,124,246和5,681,697。该实施方案中,通常按上述方法制备靶核酸,然后在能够形成杂交复合体的条件下将其加到含有许多核酸探针的生物芯片上。本发明采用了多种杂交条件,其中包括上述高、中和低严谨条件。通常在仅在靶存在时才能形成标记探针杂交复合体的严谨条件下进行测定。可通过改变热力学可变的步骤参数来控制严谨性,其中包括但不限于温度、甲酰胺浓度、盐浓度、离液盐浓度、PH、有机溶剂浓度等。也可用这些参数来控制非特异性结合,例如美国专利5,681,697所述。因此,在比较高的严谨条件下进行某些步骤以减少非特异性结合较为理想。可用各种方法实现这里列出的反应。反应组分可同时或以不同顺序依次加入,其优选实施方案如下。此外,可在反应物中加入许多其它试剂。这些试剂包括盐、缓冲液、中性蛋白质(如白蛋白)、去污剂等,它们将有利于优化杂交和检测,和/或减少非特异性或背景相互作用。需要的话也可使用能够提高测定效率的试剂,例如蛋白酶抑制剂、核酶抑制剂、抗微生物剂等,这取决于样品制备方法和靶的纯度。分析检测数据以确定各个基因的表达水平以及各种状态之间表达水平的变化,从而形成基因表达图谱。与牛物活件有关的测定本发明提供了鉴定或筛选调节本发明的癌症相关基因或蛋白质的活性的化合物。该方法包括在含有本发明癌蛋白的细胞中加入上文定义的检测化合物。所述细胞含有编码本发明癌蛋白的重组核酸。另一实施方案中,在许多细胞上检测候选试剂的库。一方面,在存在或不存在生理信号,或者之前或之后暴露于生理信号的情况下进行测定,所述生理信号例如有激素、抗体、肽、抗原、细胞因子、生长因子、动作电位、药剂(包括化疗剂)、辐射、致癌物或其它细胞(即细胞-细胞接触)。另一实施例中,在细胞周期的不同阶段进行测定。用这种方法鉴定了调节本发明的基因或蛋白质的化合物。具有药理活性的化合物能够增强或紊乱本发明的癌蛋白的活性。一旦被鉴定,可评估类似的结构以便鉴定化合物的决定性结构特征。在一个实施方案中,提供了调节(例如抑制)癌细胞分裂的方法;该方法包括给予一种癌症调节剂。另一实施方案中,提供了调节(例如抑制)癌症的方法;该方法包括给予一种癌症调节剂。再在其它实施方案中,提供了处理癌细胞或患有癌症的个体的方法;该方法包括给予一种癌症调节剂。在一个实施方案中,提供了调节表达本发明基因的细胞的状态的方法。这里所述的状态包括本领域接受的参数,如细胞的生长、增殖、存活力、功能、凋亡、老化、定位、酶活性、信号转导等。在一个实施方案中,癌症抑制剂是上述抗体。另一实施方案中,癌症抑制剂是反义分子。如本文所述,各种测定细胞生长、增殖和转移的方法是精通本领域的技术人员已知的。通过高通量筛选鉴定调节剂鉴定合适调节剂的试验包括高通量筛选。优选的试验能够检测癌基因转录的增强或抑制、多肽表达的增强或抑制、以及多肽活性的抑制或增强。在一个实施方案中,高通量筛选法鉴定的调节剂是蛋白质,通常是天然产生的蛋白质或是天然产生的蛋白质的片段。因此,例如可使用含有蛋白质的细胞提取物或蛋白质性细胞提取物的随机或定向消化物。通过这种方法制得了在本发明方法中用来进行筛选的蛋白质文库。在该实施方案中,特别优选的是细菌、真菌、病毒和哺乳动物蛋白质文库,优选哺乳动物蛋白质文库,尤其是人蛋白质文库。特别有用的测试化合物将被定向到靶所属蛋白质种类,例如酶和底物,或者配体和受体。京H旨牛长禾Π集落形成来鉴定禾ΠΦ寺征分析i周节齐Π正常细胞需要固体基质以附着和生长。当细胞被转化后便丧失了这种表型并可离开基质生长。例如,转化的细胞可生长在搅拌的悬浮培养物中或悬浮在半固体培养基(例如半固体琼脂或软琼脂)中。当用肿瘤抑制基因转染转化的细胞时,它们可恢复正常表型并又需要固体基质以便附着和生长。在检测中用软琼脂生长或集落形成来鉴定癌症序列的调节剂,当该序列在宿主细胞内表达时可抑制异常细胞增殖和转化。调节剂可降低或消除宿主细胞在固体或半固体培养基(如琼脂)中悬浮生长的能力。悬浮测定中的软琼脂生长或集落形成技术描述在Freshney的《动物细胞培养基础技术手册》(CultureofAnimalCellsaManualofBasic^Technique)(第三版,1994)。也可参见Garkavtsev等(1996,同上)一书的方法部分。68i平雜姊棘限吿丨隱斜口紐俯··正常细胞在细胞培养物中通常以平铺且有组织的模式生长,直到它们接触其它细胞。当细胞接触其它细胞时它们会接触抑制并停止生长。然而,转化的细胞不会接触抑制并在紊乱的病灶内继续生长至高密度。因此,相比正常细胞,转化的细胞生长至较高的饱和密度。这可通过在病灶中形成无序的细胞单层细胞从形态上加以鉴定。或者可用饱和密度时(3H)-胸腺嘧啶的标记指数来测定生长密度限制,类似地,MTT或Alamar蓝检测将显示细胞的增殖能力以及调节剂影响增殖的能力。见Freshney,(1994),同上。转化的细胞当被肿瘤抑制基因转染时可恢复正常表型,受到接触抑制并生长至较低密度。该检测中,饱和密度时(3H)-胸腺嘧啶的标记指数是优选的测量生长密度限制的方法。用癌症相关序列转染转化的宿主细胞并使其在非限制培养条件下在饱和密度生长M小时。通过每分钟掺入的数量来确定(3H)-胸腺嘧啶标记的细胞的百分比。用接触不限制的生长来鉴定癌症序列的调节剂,所述序列以及导致异常细胞增殖和转化。调节剂可降低或消除接触不限制的生长并使细胞回到正常表型。荆介姊附或血磁謝牛·斜口紐俯··转化的细胞相比相对应的正常细胞具有较低的血清依赖性(见例如Temin,J.Natl.CancerInst.37:167-175(1966);Eagle等,J.Exp.Med131:836-879(1970));Freshney,同上。这部分是由于转化的细胞会释放各种生长因子。可将转化的宿主细胞的生长因子或血清依赖性程度与对照细胞相比较。例如,在方法中监测细胞的生长因子或血清依赖性以鉴定和特征分析调节本发明癌症相关序列的化合物。#用肿瘤Φ寺异+牛标记的7k平来鉴定禾ΠΦ寺征分析i周节齐Π肿瘤细胞释放的某些因子(以后称为“肿瘤特异性标记”)的量高于相对应的正常细胞。例如,人胶质瘤以高于正常脑细胞的水平释放纤溶酶原激活剂(PA)(见例如Gullino,“血管生成、肿瘤血管形成和肿瘤生长的潜在紊乱”(Angiogenesis,TumorVascularization,andPotentialInterferencewithTumorGrowth),弓丨自《癌症中的生物应答》(BiologialResponsesinCancer)—书第178-184页(Mihich编,1985))。类似地,肿瘤细胞也以高于相对应的正常细胞的水平释放肿瘤血管形成因子(TAF)。见例如Folkman,《血管生成禾口癌症》(AngiogenesisandCancer),SemCancerBiol.(1992)),而内皮瘤释放bFGF(Ensoli,B等)。测量这些因子的释放的各种技术描述在Freshney(1994),同上。也可参见Unkless等,J.Biol.Chem.249:4295-4305(1974);Strickland&Beers,J.Biol.Chem.2515694-5702(1976);Whur等,Br.J.Cancer42:305312(1980);Gullino,“血管生成、肿瘤血管形成和肿瘤生长的潜在紊乱”,引自《癌症中的生物应答》一书第178-184页(Mihich编,1985);Freshney,AnticancerRes.5:111-130(1985)。例如,可在方法中监测肿瘤特异性标记的水平以鉴定和特征分析调节本发明癌症相关序列的化合物。通过对基质胶的侵袭来鉴定和特征分析调节剂可将侵入基质胶的程度或胞外基质成分用于鉴定和特征分析能调节癌症相关序列的化合物的试验。肿瘤细胞在恶变和侵入基质胶或其它胞外基质成分之间显示为正相关。在该测定中通常将肿瘤发生细胞作为宿主细胞。肿瘤抑制基因在这些宿主细胞内表达将降低对宿主细胞的侵入性。可使用以下文献中描述的技术=CancerRes.1999;59:6010;Freshney(1994),同上。简言之,可用涂有基质胶或其它胞外基质成分的滤器来测量对宿主细胞的侵入水平。侵入凝胶或穿过滤器的远侧被评定为侵袭力,并通过细胞数和移动距离或通过用1251预先标记细胞然后对滤器的远侧或平皿底部进行放射性计数来进行组织学评价。见例如Freshney(1984),同上。评定体内肿瘤牛长以鉴定和特征分析调节剂在转基因生物或免疫抑制生物内检测癌症相关序列对细胞生长的作用。转基因生物用各种本领域可接受的方法制备。例如可制造敲除转基因生物,例如小鼠等哺乳动物,其中的癌基因被破坏或在其中插入癌基因。通过同源重组在小鼠基因组的内源癌症基因位点插入标记基因或其它异源基因从而制造出敲除转基因小鼠。也可用突变的癌基因取代内源癌基因,或使内源癌基因突变(例如通过本领域致癌物)来制造这种小鼠。为制造转基因嵌合动物(如小鼠),可将DNA构建物引入胚胎干细胞的细胞核。具有新构建的遗传缺陷的细胞被注射入宿主小鼠胚胎,并将该胚胎重新植入雌性受体。其中一些胚胎发展成嵌合小鼠,这些小鼠的一些生殖细胞源自突变细胞系。因此,通过饲养这种嵌合小鼠能够获得含有引入的遗传缺陷的新小鼠品系(见例如Capecchi等,Science244:1^8(1989))。可用以下方法获得嵌合小鼠2002年4月2日发表的美国专利6,365,797;2000年8月22日发表的美国专利6,107,540;Hogan等,《小鼠胚胎操作实验室手册》(ManipulatingtheMouseEmbryo:AlaboratoryManual),ColdSpringHarborLaboratory(1988)以及Robertson编写的《畸胎癌和胚胎干细胞实际进展》,IRLPress,Washington,D.C.,(1987)。或者可使用各种免疫抑制或免疫缺陷宿主动物。例如,通过基因方法获得的无胸腺“裸”鼠(见例如Giovanella等,J.Natl.CancerInst.52:921(1974))、SCID小鼠、胸腺切除小鼠或照射小鼠(见例如Bradley等,Br.J.Cancer38:263(1978);Selby等,Br.J.Cancer41:52(1980))可被用作宿主。注射入同基因宿主的可移植的肿瘤细胞(通常约106细胞)以高比例产生侵入性肿瘤,而类似来源的正常细胞则不会这样。在发展了侵入性肿瘤的宿主中皮下或正位注射表达肿瘤相关序列的细胞。然后将小鼠分成对照组和治疗实验组(例如用调节剂治疗)。合适时间后,优选4-8周,测量肿瘤生长(例如通过体积或通过其两个最大尺寸,或重量)并与对照进行比较。统计学上显著减少的肿瘤(采用例如斯氏T检验)被认为生长受到抑制。鉴定和特征分析调节剂的体外检测可在体外进行检测以鉴定具有调节活性的化合物。例如,使癌症多肽首先接触潜在的调节剂,然后培养合适的时间,例如0.5-48小时。在一个实施方案中,通过测量蛋白质或mRNA水平在体外确定癌症多肽水平。蛋白质水平采用免疫测定(例如Western印迹、ELISA等)用选择性结合癌症多肽或其片段的抗体来测量。为测量mRNA,优选用扩增检测(例如用PCR、LCR)或杂交检测(例如Northern杂交、RNA酶保护、斑点印迹)。用直接或剪接标记的检测试剂检测蛋白质或mRNA的水平,所述检测试剂如上所述例如荧光标记或放射性标记的核酸、放射性标记或酶标记的抗体等。或者,可用操作性连接于萤光素酶、绿色荧光蛋白、CAT或P-gal等报告基因的癌蛋白启动子来设计报告基因系统。报告基因构建物通常被转染到细胞中。用潜在的调节剂处理之后,用精通本领域的技术人员已知的标准计数来测量报告基因转录、翻译或活性量70(DavisGF,同上;Gonzalez,J.&Negulescu,P.Curr.Opin.Biotechnol.1998:9:624)。如上所述,对各个基因和基因产物进行体外筛选。这就是说,在鉴定出在特定状态重要的差异性表达的特定基因之后对表达该基因或其基因产物的调节剂进行筛选。在一个实施方案中,筛选表达特定基因的调节剂。通常只评价一个或几个基因的表达。另一实施方案中,筛选被设计成首先寻找结合差别表达的蛋白质的化合物。然后评价这些化合物调节差异性表达活性的能力。此外,一旦鉴定了最初的候选化合物,可进一步筛选其变体以更好地评价结构活性关系。鉴定和特征分析调节剂的结合检测在本发明的结合检测中通常使用纯化或分离的本发明的基因产物。例如,产生本发明蛋白质的抗体,进行免疫测定以确定该蛋白质的量和/或定位。或者,含有癌蛋白的细胞可用于该测定。因此,所述方法包括使本发明的癌蛋白结合候选化合物(如配体),并确定该化合物与本发明的癌蛋白的结合。优选的实施方案使用人癌蛋白;也可建立并使用人类疾病的动物模型。同时,精通本领域的技术人员也可使用其它类似的哺乳动物蛋白质。此外,一些实施方案使用了变体或衍生的癌蛋白。通常,本发明的癌蛋白或配体非扩散性地结合不溶性支持物。例如,所述支持物可以含有独立的样品接受区(微量滴定板、阵列等)。不溶性支持物可用任何组合物制成,它可结合所述组合物,易于从可溶性物质中分离,或者与整个筛选方法相容。这种支持物的表面可以是固体或是多孔的,并具有任何方便操作的形状。合适的不溶性支持物的例子包括微量滴定板、阵列、膜和珠。它们通常由玻璃、塑料(如聚苯乙烯)、多糖、尼龙、硝酸纤维素或Teflon等制成。微量滴定板和阵列尤其方便,因为可用小量试剂和样品同时进行大量测定。对组合物和支持物的具体结合方法没有规定,只要它与本发明的试剂和方法相容、保持组合物的活性且不可扩散即可。优选的结合方法包括使用抗体,当该抗体将蛋白质结合到支持物时对配体结合位点或活化序列都不造成空间阻遏;直接结合到“粘性”或离子支持物;化学交联;在表面合成蛋白质或试剂等。蛋白质或配体/结合剂与支持物结合之后通过洗涤除去过量的未结合的物质。然后与牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白或其它无关蛋白质或其它化学分子一起培育以封闭样品接受区。一旦本发明的癌蛋白与支持物结合,便可加入检测化合物进行测定。或者使候选结合剂结合支持物然后加入本发明的癌蛋白。结合剂包括特异性抗体、通过筛选化学文库鉴定的非天然结合剂、肽类似物等。特别感兴趣的是鉴定对人类细胞具有低毒性的试剂。出于该目的可使用许多检测方法,其中包括增殖分析、cAMP分析、标记的蛋白质-蛋白质结合体外检测、电泳迁移率变动分析、蛋白质结合的免疫测定、功能分析(磷酸化作用分析等),等等。可用许多方法来测定检测化合物(配体、结合剂、调节剂等)与本发明的癌蛋白的结合。检测化合物可被标记,并可直接确定结合作用,例如将全部或部分本发明的癌蛋白加到固体支持物、加入标记的候选化合物(例如荧光素标记)、洗去过量试剂并确定固体支持物上是否存在标记。需要的话可使用不同的封闭和洗涤步骤。在某些实施方案中,只有一种组分被标记,例如标记本发明的蛋白质或配体。或者用不同的标记物标记多个组分,例如用1125标记蛋白质并用荧光团标记化合物。邻近试剂71(proximityreagent),例如淬灭剂或能量转移剂,也是有用的。竞争件结合以鉴定和特征分析调节剂在一个实施方案中,通过与“竞争物”的竞争性结合实验确定“检测化合物”的结合。竞争物是结合靶分子(例如本发明的癌蛋白)的结合部分。竞争物包括抗体、肽、结合伴侣、配体等之类的化合物。某些情况下,竞争物代替检测化合物竞争性结合。在一个实施方案中,检测化合物被标记。可在蛋白质中加入检测化合物或竞争物或这两者,并放置足够进行结合的时间。在使活性最强的温度(通常在4-40°C之间)下进行培育。培育时间通常被最优化,例如以有利于迅速高通量筛选;通常0-1小时就足够了。过量的试剂通常被除去或洗去。然后加入第二组分,之后加入或不加入指示结合的标记的组分。在一个实施方案中,先加入竞争物,然后再加入检测化合物。竞争物被置换说明检测化合物结合癌蛋白,因此能够结合并有可能调节癌蛋白的活性。该实施方案中,任一组分可被标记。因此,例如,如果竞争物被标记,检测后化合物的洗涤液中存在标记说明竞争物被检测化合物置换。或者,如果检测化合物被标记,则支持物上存在标记说明被置换。在另一个实施方案中,首先加入检测化合物,培育并洗涤,然后加入竞争物。竞争物未结合说明该检测化合物结合癌蛋白的亲和力高于竞争物。因此,如果检测化合物被标记,则支持物上存在标记竞争物未能结合说明检测化合物能结合本发明的癌蛋白从而可能调节癌蛋白。因此,竞争性结合法包括差异性筛选以鉴定能够调节本发明癌蛋白活性的试剂。在该实施方案中,所述方法包括使癌蛋白与第一样品内的竞争物结合。第二样品含有检测化合物、癌蛋白和竞争物。确定两个样品竞争物的结合,两个样品之间结合情况的改变或不同说明存在能够结合癌蛋白并有可能调节其活性的试剂。这就是说,如果第二样品内竞争物的结合不同于第一样品,则该试剂能够结合癌蛋白。或者,用差异性筛选来鉴定结合天然癌蛋白但不能结合修饰的癌蛋白的药物候选物。例如,确定癌蛋白的结构并将其用于合理的药物设计,从而合成与该位点相互作用的试剂以及通常不结合位点修饰的蛋白质的试剂。此外,还通过筛选药物增强或降低这种蛋白质活性的能力而鉴定了影响天然癌蛋白活性的药物候选物。分析中也可使用阳性对照和阴性对照。对照样品和测试样品宜进行至少三次以获得统计学上显著的结果。将所有样品培育足以使试剂与蛋白质结合的时间。培育之后洗涤样品以除去非特异性结合的物质并确定结合的且通常是标记的试剂的量。例如,当使用放射性标记时,样品可在闪烁计数器内计数以确定结合的化合物的量。筛选分析中也可使用其它试剂。这些试剂包括盐、中性蛋白质(例如白蛋白)、去污剂等,使用它们将有利于蛋白质-蛋白质最佳结合和/或减少非特异性或背景相互作用。也可使用能够提高测定效率的试剂,例如蛋白酶抑制剂、核酶抑制剂、抗微生物剂等。以一定顺序加入各组分的混合物以提供需要的结合。itm^m^m^nmmm^m^sajir如WO91/04753所述,通过形成与配体结合分子的缀合物可将癌症的多核苷酸调节剂引入含有靶核苷酸序列的细胞。合适的配体结合分子包括但不限于细胞表面受体、生长因子、其它细胞因子或结合细胞表面受体的其它配体。优选配体结合分子的结合基本上不会影响配体结合分子结合其相应分子或受体、或者阻止正义或反义寡核苷酸或其结合形式进入细胞的能力。或者,癌症的多核苷酸调节剂可被引入含有靶核酸序列的细胞,例如通过形成多核苷酸-脂质复合体,如WO90/10448所述。除治疗方法外,在上述筛选方法中也可使用反义分子或敲除及敲入模型。抑制件和反义核苷酸在某些实施方案中,通过使用反义多核苷酸或抑制性核内小RNA(snRNA),即与mRNA编码核酸序列(例如本发明的癌蛋白)、mRNA或其子序列互补并且可较佳地与它们特异性杂交的核酸,下调或完全抑制癌症相关蛋白的活性。反义多核苷酸与mRNA结合降低了mRNA翻译和/或稳定性。在本发明中,反义多核苷酸可包括天然产生的核苷酸或由天然产生的亚单位或其密切同系物形成的合成种类。反义多核苷酸也可含有改变的糖部分或糖内连接。其例子有硫代磷酸酯以及其它含有硫的种类,已知它们都可用于本领域。只要类似物可与本发明的核苷酸有效杂交即包含在本发明之内。见例如IsisPharmaceuticals,Carlsbad,CA;Sequitor,Inc.,Natick,ΜΑ。这种反义多核苷酸可以用重组方法方便地合成,或者可以在体外合成。一些厂商出售这种合成设备,其中包括AppliedBiosystems0制备其它寡核苷酸如硫代磷酸酯和烷基化衍生物的方法也是精通本领域的技术人员熟知的。这里使用的反义分子包括包括反义或正义寡核苷酸。例如,可用正义寡核苷酸与反义链的结合而阻断转录。反义和正义寡核苷酸包括能够结合癌症分子靶mRNA(正义)或DNA(反义)序列的单链核酸序列(RNA或DNA)。本发明所述的反义或正义寡核苷酸包括通常含有至少约12个核苷酸,优选含有约12-30个核苷酸的片段。从编码指定蛋白质的cDNA序列产生反义或正义寡核苷酸的能力描述在,例如,Stein&Cohen(CancerRes.48:26591988)和vanderKrol等(BioTechniques6:958(1988))。除反义多核苷酸,可用核酶来寻靶和抑制癌症相关核苷酸序列的转录。核酶是能催化性切断其它RNA分子的RNA分子。已经描述过不同种类的核酶,其中包括I组核酶、锤头状核酶、发夹状核酶、核糖核酸酶P和斧头状核酶(可参见例如Castanotto等,Adv.inPharmacology25:289-317(1994)以对不同核酶的特性有大致了解)。发夹核酶的一般特性描述在,例如,Hampel等,Nucl.AcidsRes.18299-304(1990);欧洲专利发明者A·B·莱塔诺,A·雅各波维茨,H·邵,J·古达斯,K·J·M·莫里森,P·M·查利塔-埃德,R·K·莫里森,X·贾申请人:艾更斯司股份有限公司
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