专利名称：用于生活污水高效处理菌株的筛选方法
技术领域：
本发明涉及一种处理菌株的方法，尤其是筛选用于生活污水处理的菌株的方法。
背景技术：
随着生活污水处理技术的发展与进步，固定化微生物技术在生活污水处理中已得到广泛应用，现已成为生活污水处理技术中的主流。该技术所用菌株的性能对其处理污水的能力和效果有作巨大的影响，然而，目前污水处理菌株的筛选多是采用LB培养基或在其基础上进行改进的培养基进行筛选。这些培养基均外加了丰富的营养物质，用这些培养基在进行筛选时，一些对生活污水处理不具优势的菌株可能成为优势菌而大量、快速地生长繁殖，使很多生活污水处理性能优异的菌株被抑制或被淹没，从而流失以至筛选失败。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前生活污水处理工程菌的筛选方法会使很多对生活污水处理能力优异的菌株流失的问题，而提供的一种生活污水处理工程菌菌株的筛选方法，直接采用生活污水配制培养基及从生活污水排放地取样分离筛选优势菌种。该方法按如下步骤进行1)筛选用固体培养基的制备在需处理的生活污水中加15_20g琼脂，经灭菌处理后分置于培养皿中，静置冷凝成平板，得到固体培养基平板；2)原混合菌的采集与稀释取生活污水的污泥，用灭菌水按1 10的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密闭后振荡5-15min，澄清后取上清液进行梯度稀释制得不同稀释度的混合菌液；3)混合菌液的涂布从各个稀释度的混合菌液中取0. ImL分别加入到制备好的固体培养基平板上，用灭菌的涂布棒将其均勻涂布，静置使表面水分稍干后倒置放入生化培养箱中，于30°C培养 3-7 天；4)菌株的分离与纯化挑选出菌落数为30-150个的平板，把其中不同性状的菌逐一取出，转移到固体培养基平板上，放入生化培养箱中于30°C培养，使其在培养皿上最后一区形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重复挑选，即可得到分离纯化后的菌株；5)菌株降解活性的鉴定用接种环将分离纯化后的菌接种到经灭菌处理后冷却到室温的生活污水中，放入振荡培养箱中于30°C、120r/min下培养Mh，定时取样测定培养液的化学耗氧量(COD)，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。进一步的，所述灭菌处理为在115_130°C下灭菌10-30min。其中步骤2中澄清后取上清液进行梯度稀释，优选每次稀释10倍，制得稀释倍数为IO4-IO8的原混合菌液；步骤3中将每个稀释度的混合菌液进行三个重复。另外，更具体的情况为，步骤4中使用接种环把菌取出，并采用分区划线法转移到固体培养基平板上。本发明采用的更具体的步骤如下1、固体培养基的制备取所需处理的生活污水IOOOmL,加15_20g琼脂，经 115-130°C灭菌10-30min，然后分置于培养皿中，静置冷凝成平板，得到固体培养基平板。2、原混合菌的采集与稀释从生活污水的排水沟取污泥，然后用灭菌水按1 10 的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密闭后振荡5-15min，澄清后取上清液进行梯度稀释制得不同稀释度的混合菌液。3、混合菌液的涂布从各个稀释度的混合菌液中取0. ImL分别加入到制备好的固体培养基平板上，用灭菌的涂布棒将其均勻涂布，静置使表面水分稍干后倒置放入生化培养箱中于30°C培养3-7天)每个稀释度三个重复)。4、菌株的分离与纯化挑选出菌落数为30-150个的平板，并用接种环把其中不同性状的菌逐一取出并用分区划线法转移到固体培养基平板上，放入生化培养箱中于30°C培养，使其在培养皿上最后一区形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法再挑一次，反复2-3次，即可得到分离纯化后的菌株。5、菌株降解活性的鉴定用接种环将分离纯化获得的菌接种到经115_130°C灭菌 10-30min后冷却到室温的生活污水中，放入振荡培养箱中于30°C、120r/min下培养Mh，每 4h取样测定培养液的C0D，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。本发明通过直接以生活污水加琼脂为固体培养基进行筛选，在平板上生长的均为能分解生活污水中污染物的菌株，与现有方法相比，具有简便，获得的优良菌株多，分离效果好的特点，避免了对生活污水处理能力优异的菌株流失的问题。
具体实施例方式下面将描述本发明的实施例，更进一步了解本发明。实施例1 从城市生活污水排污管取生活污水，分出IOOOmL于2000mL烧瓶中，加18g琼脂， 加热使琼脂溶解，然后放入IOOOmL三角烧瓶中，盖好后经121°C灭菌20min，然后分置于培养皿中，静置冷凝成平板，得到固体培养基平板。从十个地段城市生活污水排污沟各取污泥约100g，混合均勻后取5g左右放入250mL三角瓶中，加入IOOmL无菌水并放入Φ 4玻璃珠约10颗，密闭后振荡lOmin，澄清后取上清液进行梯度稀释，每次稀释10倍，制得稀释倍数为IO4-IO8的原混合菌液。从各个稀释度的混合菌液中取0. ImL分别加入到制备好的固体培养基平板上，用灭菌的涂布棒将其均勻涂布，静置使表面水分稍干后倒置放入生化培养箱中于30°C培养(每个稀释度三个重复)。7天后，稀释倍数为IO6倍的平板上落数符合菌落数在30-150的标准，把稀释倍数为IO6倍的三个平板选出，用接种环把其中不同性状的菌逐一取出并用分区划线法转移到固体培养基平板上，然后放入生化培养箱中于30°C 培养5天，然后把培养皿上最后一区形成的孤立菌落按照上述方法再挑一次，反复2-3次， 即可得到分离纯化后的菌株。把生活污水放入容器中盖好后放入高压灭菌锅内经121°C灭菌20min，然后分装在250mL的三角瓶中，每个瓶加入IOOmL,用接种环将分离纯化获得的菌接种到其中(每个菌株接三瓶，每批用三个不接种的为空白对照)，放入振荡培养箱中于 300C、120r/min下培养Mh，每4h取样测定培养液的C0D，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。实施例2 从某旅游区宾馆污水排污沟取生活污水，分出IOOOmL于2000mL烧瓶中，加20g琼脂，加热使琼脂溶解，然后放入IOOOmL三角烧瓶中，盖好后经115°C灭菌30min，然后分置于培养皿中，静置冷凝成平板，得到固体培养基平板。从这个宾馆的污水沟5个不同段各取污泥约100g，混合均勻后取大约5g放入250mL三角瓶中，加入IOOmL无菌水并放入Φ 4玻璃珠约15颗，密闭后振荡lOmin，澄清后取上清液进行梯度稀释，每次稀释10倍，制得稀释倍数为IO4-IO8的原混合菌液。从各个稀释度的混合菌液中取0. ImL分别加入到制备好的固体培养基平板上，用灭菌的涂布棒将其均勻涂布，静置使表面水分稍干后倒置放入生化培养箱中于30°C培养(每个稀释度三个重复)。7天后，稀释倍数为IO5倍的平板上落数符合菌落数在30-150的标准，把稀释倍数为IO5倍的三个平板选出，用接种环把其中不同性状的菌逐一取出并用分区划线法转移到固体培养基平板上，然后放入生化培养箱中于30°C培养6天，使其在培养皿上最后一区形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法再挑一次，反复2-3次，即可得到分离纯化后的菌株。把宾馆污水放入容器中盖好后放入高压灭菌锅内经115°C灭菌30min，然后分装在250mL的三角瓶中，每个瓶加入IOOmL,用接种环将分离纯化获得的菌接种到其中(每个菌株接三瓶，每批用三个不接种的为空白对照)， 放入振荡培养箱中于30°C、120r/min下培养Mh，每4h取样测定培养液的C0D，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。
权利要求
1.一种用于生活污水高效处理菌株的筛选方法，主要包括如下步骤1)筛选用固体培养基的制备在需处理的生活污水中加15-20g琼脂，经灭菌处理后分置于培养皿中，静置冷凝成平板，得到固体培养基平板；2)原混合菌的采集与稀释取生活污水的污泥，用灭菌水按1 10的比例混合，放入盛有玻璃珠的容器中，密闭后振荡5-15min，澄清后取上清液进行梯度稀释制得不同稀释度的混合菌液；3)混合菌液的涂布从各个稀释度的混合菌液中取0. ImL分别加入到制备好的固体培养基平板上，用灭菌的涂布棒将其均勻涂布，静置使表面水分稍干后倒置放入生化培养箱中，于30°C培养3-7 天；4)菌株的分离与纯化挑选出菌落数为30-150个的平板，把其中不同性状的菌逐一取出，转移到固体培养基平板上，放入生化培养箱中于30°C培养，使其在培养皿上最后一区形成一些孤立的菌落，然后把孤立的菌落按照上述方法重复挑选，即可得到分离纯化后的菌株；5)菌株降解活性的鉴定用接种环将分离纯化后的菌接种到经灭菌处理后冷却到室温的生活污水中，放入振荡培养箱中于30°C、120r/min下培养Mh，定时取样测定培养液的C0D，选出降解速率快、COD 去除率高的菌株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述灭菌处理为在115-130°C下灭菌 10_30mino
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤3中每个稀释度的混合菌液进行三个重复。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤4中使用接种环把菌取出，并采用分区划线法转移到固体培养基平板上。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤4中孤立的菌落重复挑选2-3次。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤2中澄清后取上清液进行梯度稀释， 每次稀释10倍，制得稀释倍数为IO4-IO8的原混合菌液。
全文摘要
本发明涉及一种分离筛选用于处理生活污水的高效菌株的方法，首先取生活污水制成固体培养基，然后取生活污水的污泥，经梯度稀释后涂布在固体培养基上，待表面水分稍干后倒置放入生化培养箱中培养，在形成的菌落中挑取单菌落到固体培养基平板上划线纯化得到纯菌，最后将纯菌菌苔接种于经灭菌后冷却到室温的生活污水中，放入振荡培养箱中培养，定时取样测定培养液的COD，选出降解速率快、COD去除率高的菌株。该法直接以生活污水加琼脂为固体培养基进行筛选，在平板上生长的均为能分解生活污水中污染物的菌株，避免了对生活污水处理能力优异的菌株流失的问题。
文档编号C12N1/02GK102443541SQ20111014725
公开日2012年5月9日 申请日期2011年6月2日 优先权日2011年6月2日
发明者彭清静 申请人:吉首大学