专利名称：一种cyp2b6基因多态性检测特异性引物和液相芯片的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种CYP2B6基因多态性检测特异性引物和液相芯片。
背景技术：
CYP2B6是CYP家族中重要的药物代谢酶，广泛分布于人体肝脏、肾脏、肺、小肠、子宫内膜、支气管肺泡的巨噬细胞，外周血淋巴细胞和脑部等，参与多种内源性和外源性物质的合成和代谢。CYP2B6基因定位在19ql2 13. 2，全长28kb，由8个内含子将9个外显子分隔开来，编码的蛋白质由491个氨基酸组成，相对分子质量为58268。有研究表明，CYP2B6蛋白表达水平不仅在种族之间，而且在不同性别之间存在着差异，个体差异超过250倍，甚至某些人的表达无法检测到。造成CYP2B6表达个体差异的主要因素是遗传和环境，已知CYP2B6能被多种药物抑制和诱导，此外，众多的基因多态性也已被发现，种族、性别、年龄等·因素对CYP2B6表达和活性都有影响。本发明目标检测的CYP2B6基因突变位点(多态性位点)，如表所示
权利要求
1.一种CYP2B6基因多态性检测液相芯片，其特征在于，包括有 (A).针对CYP2B6基因不同多态性位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因多态性位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为针对C123T位点的SEQ ID NO. 13及SEQ ID NO. 14 ;针对AlOlG位点的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16 ;针对 G118T 位点的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ；针对 A77G 位点的 SEQ ID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20 ;针对 T139C 位点的 SEQ ID N0.21 及 SEQID NO. 22 ;和/或针对C288T位点的SEQ ID NO. 23及SEQ ID NO. 24 ;所述tag序列选自SEQ ID NO. I SEQ IDNO. 12 (B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO. 25 SEQ ID NO. 36，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).用于扩增出需要检测的、具有相应多态性位点的目标序列的引物。
2.根据权利要求I所述的CYP2B6基因多态性检测液相芯片，其特征在于，所述扩增引物为针对 C123T 位点的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38 ;针对 AlOlG 位点的 SEQ ID NO. 39及SEQ IDNO. 40 ;针对G118T位点的SEQ ID NO. 41 及SEQ ID NO. 42 ;针对A77G位点的SEQ IDNO. 43 及 SEQ ID NO. 44 ;和 / 或针对 T139C、C288T 位点的 SEQ ID NO. 45 及 SEQ ID NO. 46。
3.根据权利要求I所述的CYP2B6基因多态性检测液相芯片，其特征在于，所述ASPE引物为针对C123T位点的由SEQ ID NO. I和SEQ ID NO. 13组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ IDNO. 14组成的序列；针对AlOlG位点的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 15组成的序列及由SEQ IDNO. 4和SEQ ID NO. 16组成的序列；针对G118T位点的由SEQ ID NO. 5和SEQID NO. 17组成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 18组成的序列；针对A77G位点的由SEQ ID NO. 7和SEQID NO. 19组成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 20组成的序列；针对T139C位点的由SEQID NO. 9和SEQ ID NO. 21组成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQID NO. 22组成的序列；和/或针对C288T位点的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 23组成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ IDNO. 24组成的序列。
4.根据权利要求I所述的CYP2B6基因多态性检测液相芯片，其特征在于， (A).所述ASPE引物为针对C123T位点的由SEQID NO. I和SEQ ID NO. 13组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 14组成的序列；针对AlOlG位点的由SEQ ID NO. 3和SEQ IDNO. 15组成的序列及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 16组成的序列；针对G118T位点的由SEQ IDNO. 5和SEQ ID NO. 17组成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 18组成的序列；针对A77G位点的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 19组成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 20组成的序列；针对T139C位点的由SEQ ID NO. 9和SEQ ID NO. 21组成的序列及由SEQ ID NO. 10和SEQID NO. 22组成的序列；和针对C288T位点的由SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 23组成的序列及由SEQ ID NO. 12和SEQ ID NO. 24组成的序列； (B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO. 25 SEQ ID NO. 36，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).针对C123T 位点的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38 ;针对 AlOlG 位点的 SEQIDNO. 39 及 SEQ ID NO. 40 ;针对 G118T 位点的 SEQ ID NO. 41 及 SEQ ID NO. 42 ;针对 A77G位点的 SEQ ID NO. 43 及 SEQ ID NO. 44 ;和针对 T139C、C288T 位点的 SEQ ID NO. 45 及 SEQID NO. 46。
5.根据权利要求1-4任一项所述的CYP2B6基因多态性检测液相芯片，其特征是，所述间隔臂为5-10个T。
6.一种用于CYP2B6基因多态性检测的特异性引物，其特征是，所述特异性引物序列为针对 C123T 位点的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14 ;针对 AlOlG 位点的 SEQ ID NO. 15及 SEQ IDNO. 16 ;针对 G118T 位点的 SEQ ID NO. 17 及 SEQ ID NO. 18 ;针对 A77G 位点的 SEQID NO. 19 及 SEQ ID NO. 20 ;针对 T139C 位点的 SEQ ID NO. 21 及 SEQ ID NO. 22 ;和 / 或针对 C288T 位点的 SEQID NO. 23 及 SEQ ID NO. 24。
全文摘要
本发明公开了一种CYP2B6基因多态性检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为针对C123T位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14；针对A101G位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；针对G118T位点的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18；针对A77G位点的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；针对T139C位点的SEQ ID NO.21及SEQ IDNO.22；和/或针对C288T位点的SEQ ID NO.23及SEQ ID NO.24；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。
文档编号C12N15/11GK102912007SQ20111021924
公开日2013年2月6日 申请日期2011年8月2日 优先权日2011年8月2日
发明者许嘉森, 郭靖 申请人:广州益善生物技术有限公司