专利名称：含有苦参碱或其氧化衍生物的用于改善皮肤状况的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有苦参碱和氧化苦参碱作为活性成分的组合物，对皮肤状况呈现出极好的改善作用，并具有稳定性和安全性。相关技术的描述皱纹由皮肤老化引起，并且老化的皮肤是与老化过程相关的天然变化的结果。皮肤老化可以宽泛地分成生理老化和光老化。前者表示与整个皮肤表面老化相关的皮肤功能和结构的变化，而后者是由紫外线照射诱发的。真皮的变化随着老化变得明显，并且真皮萎缩是70岁后的代表性现象之一。成纤维细胞的数量及其生物合成潜能两者的衰减导致胞外基质中具有大分子量的生物分子的变化，使得真皮变化开始出现。变化包括胶原蛋白束的分离、粘多糖合成的降低、胶原蛋白和弹性蛋白的数量和直径的减少、胶原蛋白和弹性蛋白的分解以及血管的扩张。通常，在几个复杂的诱因中，如皮肤的含水量、胶原蛋白含量和对极端环境的免疫应答，皱纹形成的主要因素涉及胶原酶的表达和活性，胶原酶是减少胶原蛋白的合成和含量的胶原蛋白降解酶。同时，人皮肤的颜色主要归因于黑色素的浓度和分布。黑色素是酚基高分子量生物物质之一，并且在防止由UV引发的皮肤损伤中起着重要作用。已经报道了黑素细胞中存在的酪氨酸酶活性是黑色素生物合成的关键因素，酪氨酸酶通过将酪氨酸转化成DOPA和DOPA-醌在皮肤变黑过程中起着关键作用，DOPA和 DOPA-醌是黑色素聚合物产生的中间产物。由于环境污染和汽车排出的废气，激素不平衡变得日益恶化。鉴于此，脱发的发病率变得更高，发病年龄降低，并且由于诱导皮肤免疫系统的失调，已经发生了各种皮肤疾病，如遗传性过敏症和牛皮癣。此外，由于膳食生活的变化，如肉和方便食品集中的膳食，年轻肥胖症患者的数量快速增长。因此，深入地进行了研究以研发能够有效解决已经成为严重社会问题的几种现象 (即，内在的老化和由UV引起的皱纹的发生，黑素瘤或雀斑，肥胖，免疫不平衡或脱发)。贯穿本申请，提及了几篇专利和出版物，并且在括号中提供了引文。将这些专利和出版物的公开内容引入本申请中，以便更全面地描述本发明和本发明所属领域的状况。发明详述本发明人已经进行了深入的研究来研发活性物质，该活性物质在改善皱纹、皮肤增白、UV诱发的皮肤损伤以及防止脱发、氧化和肥胖中具有活性，并且具有高稳定性和安全性，对皮肤没有副作用。因此，本发明人发现了含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的组合物可以提供用于改善皮肤状况、抗氧化和抗肥胖的组合物，具有极好的效果和安全性。
因此，本发明的目的是提供用于改善皮肤状况的组合物，其中皮肤状况是皱纹、增白、UV诱发的皮肤损伤或头发生长。本发明的另一个目的是提供用于抗氧化的组合物。本发明的再一个目的是提供用于抗肥胖的组合物。本发明的另一个目的是提供用于改善皮肤状况的方法。本发明的再一个目的是提供用于防止氧化的方法。本发明的另一个目的是提供用于抑制肥胖的方法。本发明的其他目的和优点将从以下的详述并结合所附的权利要求和附图变得清林疋。在本发明的一个方面中，提供了含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的用于改善皮肤状况的组合物，其中皮肤状况是皱纹、增白、UV诱发的皮肤损伤或头发生长。在本发明的另一个方面中，提供了用于改善皮肤状况的方法，其包括将含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的组合物施用于受试者。在本发明的再一个方面中，提供了苦参碱或氧化苦参碱用于制造改善皮肤状况的组合物的用途。在本发明的另一个方面中，提供了用于抗氧化的含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的组合物。在本发明的再一个方面中，提供了用于防止氧化的方法，其包括将含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的组合物施用于受试者。在本发明的另一个方面中，提供了苦参碱或氧化苦参碱用于制造抗氧化组合物的用途。在本发明的再一个方面中，提供了用于抗肥胖的含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的组合物。在本发明的另一个方面中，提供了用于抑制肥胖的方法，其包括将含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的组合物施用于受试者。在本发明的再一个方面中，提供了苦参碱或氧化苦参碱用于制造抗肥胖组合物的用途。本发明人已经进行了透彻的研究来研发活性物质，该活性物质在改善皱纹、皮肤增白、UV诱发的皮肤损伤以及防止脱发、氧化和肥胖中具有活性，并且具有高稳定性和安全性，对皮肤没有副产。因此，本发明人发现了含有苦参碱或氧化苦参碱作为活性成分的组合物可以提供用于改善皮肤状况、抗氧化和抗肥胖的组合物，具有极好的效果和安全性。因为代表性的生物碱物质主要在槐属根中提取得到，因此也在日本山豆根 (Euchresta jsponica Benth)中观察到本发明中用作活性成分的苦参碱和氧化苦参碱。四环-喹诺里西啶生物碱、苦参碱和氧化苦参碱是源自植物的化合物，由以下的通式I和II 来表示。通常认为具有苦味的苦参碱和氧化苦参碱对癌症、乙肝、硬化、细菌、病毒、心脏病或皮肤疾病如牛皮癣或湿疹具有效果。
用作本发明组合物中活性成分的苦参碱和氧化苦参碱可以从天然来源提取，天然来源为槐属(Sophora),如国槐(Sophora japonica)、苦参(Sophora flavescens)、日本山豆根(Euchresta japonica Benth)。详细地，可以使用常规的各种提取方法来获得苦参碱和氧化苦参碱。优选，可以使用各种提取溶剂来获得苦参碱和氧化苦参碱，例如，在0°C至 50°C的提取温度，提取溶剂为(a)水，(b)含有1-4个碳原子的无水或含水低级醇(甲醇、 乙醇、丙醇、丁醇等)，(c)低级醇和水的混合物，(d)丙酮，(e)乙酸乙酯，(f)氯仿或(g)l， 3-丁二醇。如果需要，可以对本发明中所用的苦参碱和氧化苦参碱进行用本领域公知方法的附加纯化，以及通过提取获得的那些。例如，可以得知使用各种附加纯化方法如使用限定分子量截留值的超滤和各种色谱(为根据大小、电荷、疏水性和亲和性纯化而设计的)获得的苦参碱和氧化苦参碱可以用于本发明中。本发明的组合物具有改善皮肤皱纹的新用途。本发明的组合物与用作抗皱剂的视黄醇相比具有更低的细胞毒性，并且在分子水平呈现出对胶原酶活性的抑制作用和对胶原蛋白生物合成的促进作用，并且作为结果，呈现出改善皮肤皱纹的极好效果。在以下所述的实施例中证明了这样的作用和功效。将认识到皮肤皱纹的改善涵盖了皮肤保护的一般用途 (例如，防止皮肤皱纹、除去皮肤皱纹和防止皮肤老化)。此外，本发明用于改善皮肤状况的组合物具有皮肤增白的新用途。在此所用的术语“增白”指的是防止由黑色素沉着诱发的皮肤黑化病的皮肤问题的改善。在本发明用于皮肤增白的组合物中，苦参碱和氧化苦参碱通过抑制胞内酪氨酸酶活性呈现出对黑色素产生的抑制作用，并且作为结果，呈现出极好的皮肤增白效果。苦参碱和氧化苦参碱显示出高稳定性并且几乎没有副作用，如皮肤过敏诱发。此外，组合物中的苦参碱和氧化苦参碱的含量保持恒定。在以下所述的实施例中证明了这样的作用和功效。此外，本发明用于改善皮肤状况的组合物对UV诱发的皮肤损伤具有缓解、改善、 预防或治疗作用。本发明用于改善皮肤状况的组合物能非常有效地预防脱发或促进头发生长。在此所用的术语“脱发预防”和“头发生长促进”具有相同的意思。作为本发明组合物的活性成分的苦参碱和氧化苦参碱通过消除自由基呈现出抗
5氧化作用。本发明用于抗氧化的组合物可以用于通过抑制或消除氧化情况而能够预防或治疗的各种疾病、失调或异常情况。通过本发明治疗的与抗氧化相关的疾病包括但不限于神经变性失调，如动脉粥样硬化、冠心病、再狭窄、再灌注损伤、帕金森氏症或阿病、中风、癌症、老化、心血管障碍、骨质疏松、中枢神经系统障碍、外周血管疾病和呼吸困难。最优选，本发明用于抗氧化的组合物用于预防或治疗老化。已经概括地报道了各种失调与自由基损伤之间的关联，并且包括酶、离子通道、结构蛋白和膜脂质的各种细胞的成分是对抗反应性自由基物质的潜在目标(Rice-Evans C,Mol Aspects of Med 13(1) :1-111 (1992))。潜在目标和自由基的反应削弱了特定范围的细胞功能，诱发病理变化并最终使细胞死亡。美国专利US 5750351 ；US 5773209 ；US 5773231和US 5846959中公开了由生理氧化引起的各种疾病。本发明用于抗氧化的组合物通过对消除自由基的极好效果来保护DNA、蛋白质 (包括脂蛋白)和膜脂质免受氧化性损伤。此外，作为本发明活性成分的苦参碱和氧化苦参碱具有极好的抗肥胖作用。本领域技术人员清楚由通式I和II表示的苦参碱和氧化苦参碱包括使用取代基通过本领域技术人员通常进行的化学方法获得的衍生物。衍生物通过促进胶原蛋白合成和 /或抑制胶原酶(MMP-I)活性显示出皱纹改善作用，或皮肤增白、UV诱发皮肤损伤改善、皮肤生长促进或防止脱发、抗氧化和抗肥胖作用。更特别地，用作本发明活性成分的苦参碱和氧化苦参碱包括通式I和II的衍生物以及通式I和II的化合物。使用本领域公知的各种取代基通过方法获得具有与通式I和II核相同的结构核的衍生物。例如，提出通过将羟基、 卤素、硝基或C1-4烷基连接通式I和II的环碳形成的衍生物预期发挥与苦参碱和氧化苦参碱相同或相似的作用。这些取代的衍生物也落入本发明的范围内。根据优选的实施方案，本发明中的苦参碱或氧化苦参碱活性成分以 0. 00001-15. Owt %的含量存在，更优选，0. OOOl-IOwt %，最优选，0. 0001_5wt %，基于组合物的总重。如果苦参碱或氧化苦参碱活性成分的含量低于0. 00001wt%，组合物的作用是微不足道的；在超过15. 0wt%的情况中，非常可能发生一些副作用，如皮肤刺激和制剂的不稳定性。根据优选的实施方案，本发明的组合物是化妆品组合物。本发明的化妆品组合物除了作为活性成分的苦参碱或氧化苦参碱外，可以含有助剂以及载体。助剂的非限制性实例包括抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、维生素、着色剂、臭味改善剂或这些成分的混合物。此外，化妆品组合物可以另外含有促进皮肤吸收的物质，以增强效果。本发明的化妆品组合物可以配制成各种形式，对于非限制性实例，包括溶液、悬浮液、乳液、糊剂、凝胶、霜剂、化妆水、粉末、皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉底、粉底乳、粉底蜡和喷雾。详细地，可以以皮肤软化剂(润肤液)、营养乳液(奶液)、营养霜、按摩霜、香精、眼霜、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、面膜、喷雾剂或粉末的形式来提供本发明的化妆品组合物。本发明化妆品组合物中含有的化妆品可接受载体可以根据制剂的类型而改变。例如，糊剂、霜或凝胶的制剂可以含有动物和植物脂肪、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生
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物、聚乙二醇、硅氧烷、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌或这些成分的混合物。在粉末或喷雾的制剂中，可以含有乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末或这些成分的混合物。喷雾剂可以另外含有常规的推进剂，例如，氟氯烃、丙烷/ 丁烷或二甲醚。溶液和乳液的制剂可以含有溶剂、增溶剂或乳化剂，例如，水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3_ 丁二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯或这些成分的混合物。悬浮液的制剂可以含有液体稀释剂，例如，水、乙醇或丙二醇，悬浮剂，例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯山梨聚糖酯、微晶体纤维素、偏氢氧化 (metahydroxide)铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或这些成分的混合物。含有表面活性剂的清洁组合物的制剂可以含有脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、 磺基琥珀酸单酯、isothinate、咪唑衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酰胺醚硫酸盐、 烷基氨基甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯或这些成分的混合物。可以将本发明的组合物制成药物组合物，并且药物组合物中含有药物学上可接受的载体以及活性成分。通常用于药物制剂中的药物学上可接受的载体包括但不限于乳糖、 葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、rubber arable、磷酸钾、arginate、明胶、硅酸钾、微晶体纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、丙基羟基苯甲酸酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。根据本发明的药物组合物可以进一步包括润滑剂、润湿齐IJ、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂和防腐剂。合适的药物学上可接受的载体和制剂的详细内容可以在 Remington，s Pharmaceutical Sciences (第 19 版，1995)中找到。可以通过各种途径将本发明的药物组合物给药于哺乳动物，如大鼠、小鼠、家畜和人，给药途径例如为口服、直肠给药或静脉内注射、肌内注射、皮下注射、子宫内注射或脑室内注射，优选皮下注射，更优选局部施用。本发明药物组合物的合适剂量可以根据药物配制方法、给药方法、患者的年龄、体重、性别、发病状况、饮食、给药时间、给药途径、排泄率和对所用药物组合物的敏感度而改变，并且本领域普通医师可以决定用于所需治疗的药物组合物的有效量。在口服制剂的情况中，一天给药一次至几次合适的单位剂量，基于成人为0. 001-100mg/kgo在外用制剂的情况中，可以通过一天施用一次至五次来给予合适的单位剂量，基于成人为1. 0至3. Oml的含量，并且最好使用超过1个月。然而，单位剂量没有限制本发明的范围。根据本领域技术人员已知的常规技术，本发明的药物组合物可以与如上所述的药物学上可接受的载体和/或介质一起配制，最终提供单位剂型和多剂量形式的几种形式。 制剂的非限制性实例包括但不限于口服制剂，如粉末、颗粒、片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆和气雾剂，外用制剂，如膏剂和霜剂、栓剂和无菌注射液，可以进一步含有分散剂或稳定剂。本发明的组合物可以制成食品组合物。本发明的食品组合物可以含有用于制备食品组合物的常规添加剂，例如，蛋白质、碳水化合物、脂质、营养物质和调味剂。上述碳水化合物的非限制性实例包括但不限于单糖(例如，葡萄糖和果糖)；双糖 (例如，麦芽糖、蔗糖和寡糖)和多糖(例如，糊精和环糊精)；以及糖醇(例如，木糖醇、山梨糖醇和赤藓醇)。调味剂的非限制性实例包括但不限于天然调味剂[竹芋蛋白和蜜叶糖的提取物(例如，甜叶菊甙A和甘草甜素)]和合成调味剂(例如，糖精和阿斯巴甜)。例如，在作为饮料提供本发明的食品组合物的情况中，可以进一步含有柠檬酸、液体果糖、蔗糖、葡萄糖、醋酸、苹果酸、果汁、杜仲提取物、枣提取物或甘草提取物。同时，累积的皮肤刺激的实验结果说明作为天然物质的苦参碱和氧化苦参碱对本发明的特定实施例中对人体是无害的。因此，由于几乎不具有毒性和副作用，本发明的苦参碱和氧化苦参碱有把握可以长期使用，特别可以用于化妆品、药物和食品组合物中，如上所述具有安全性。本发明的特征和优点的概述如下(i)本发明的组合物含有苦参碱和氧化苦参碱作为活性成分。(ii)苦参碱和氧化苦参碱具有比用作抗皱剂的视黄醇具有更低的细胞毒性，并在分子水平呈现出对胶原酶活性的抑制作用和对胶原蛋白生物合成的促进作用，具有改善皮肤皱纹的良好功效。此外，苦参碱和氧化苦参碱两者都通过抑制胞内酪氨酸酶活性呈现出对黑色素产生的抑制，UV诱发的皮肤损伤的改善效果和促进皮肤生长或防止脱发。因此， 苦参碱和氧化苦参碱对皮肤状况具有极好的改善作用。(iii)此外，苦参碱和氧化苦参碱具有极好的抗肥胖和抗氧化作用。(iv)本发明的组合物可以用于化妆品、药物和食品组合物，没有细胞毒性和副作用。附图简述
图1是显示了作为活性成分的苦参碱和氧化苦参碱与RA相比较对抗人成纤维细胞具有更低细胞毒性的图。RA表示视黄酸。RA、苦参碱和氧化苦参碱各自以1μΜ、10μΜ和 50 μ M的含量来处理。图2是显示出苦参碱和氧化苦参碱对胶原蛋白(1型胶原蛋白)的促进作用的图。 RA以ΙμΜ的含量来处理。图3表示作为本发明活性成分的苦参碱和氧化苦参碱对胶原酶(MMP-I)的抑制作用。MMP-I和PMA各自表示1型胶原酶和佛波醇肉豆蔻酸醋酸盐。PMA以IOOnM的含量来处理。现在通过实施例来进一步详细描述本发明。本领域人员将清楚这些实施例是用来更具体地说明，而所附权利要求中列出的本发明的范围不限于这些实施例或不受这些实施例所限。
实施例实施例1 苦参碱和氧化苦参碱对皱纹改善作用的测量通常可以通过胶原蛋白生物合成能力、胶原酶降解抑制能力和人临床测试来测量皱纹改善作用的测试。将人成纤维细胞(通常获自pacific)接种于6-孔平板QXlO5细胞/孔)并将细胞平板在5% CO2培养箱中在37°C孵育M小时。M小时后，除去每个孔中的培养基并用各种浓度处理样品，接着再次孵育M小时。孵育后，收集细胞培养基并用作样品。为了测量样品对成纤维细胞的细胞毒性，以剩余培养基体积的1/10倍将MTT试剂(lmg/ml)加入每个孔中，孵育3小时，并除去培养基。将培养基溶解于DMSO中并测量其在540nm处的吸光度。通过使用I型原骨胶原C-肽EIA试剂盒(MK101，Takara,京都，日本)测量细胞培养基中的I型原骨胶原C-肽(PICP)含量来测定胶原蛋白合成的程度。根据制造商的实验方案来进行该方法。作为测量胶原酶(分解胶原蛋白的酶)活性的方法，使用了针对胶原酶的抗体。作为诱导胶原酶活性的材料，处理了 PMA(佛波醇肉豆蔻酸醋酸酯，Sigma)。为了测量胶原酶活性，使用了 1型胶原酶测试试剂盒(Amersham Biosciences, RPN2629)，并使用ELISA阅读器(Bio-Tek ELx808 系列超微平板阅读器，U. K)测量吸光度。将测量的平均值表示为平均士标准偏差。进行使用SPSS/PC+的T-检验来确定显著性，并且结果显示于表1中。表权利要求
1.苦参碱或氧化苦参碱用于制造抗肥胖组合物的用途。
2.根据权利要求1的苦参碱或氧化苦参碱的用途，其中苦参碱或氧化苦参碱以 0. OOOl-IOwt%的量存在，基于组合物的总重。
3.根据权利要求1或2的苦参碱或氧化苦参碱的用途，其中组合物是化妆品组合物。
4.根据权利要求3的苦参碱或氧化苦参碱的用途，其中组合物是选自溶液、悬浮液、乳液、糊剂、凝胶、霜剂、化妆水、粉末、肥皂、含表面活性剂的清洁剂、油、粉底粉、粉底乳、粉底蜡和喷雾剂之一的形式。
5.根据权利要求1或2的苦参碱或氧化苦参碱的用途，其中组合物是药物组合物。
6.根据权利要求1或2的苦参碱或氧化苦参碱的用途，其中组合物是食品组合物。
全文摘要
本发明涉及用于改善皮肤状况的含有苦参碱和氧化苦参碱作为活性成分的组合物。苦参碱和氧化苦参碱比用作抗皱剂的视黄醇具有更低的细胞毒性，并在分子水平呈现出对胶原酶活性的抑制作用和对胶原蛋白生物合成的促进作用，对皮肤皱纹的改善具有极好的功效。此外，苦参碱和氧化苦参碱通过抑制胞内酪氨酸酶活性呈现出对黑色素产生的抑制作用，UV诱发的皮肤损伤的改善作用和促进皮肤生长或防止脱发。因此，苦参碱和氧化苦参碱对皮肤状况具有极好的改善作用。此外，苦参碱和氧化苦参碱具有极好的抗肥胖和抗氧化作用。本发明的组合物可以用于化妆品、药物和食品组合物中，没有细胞毒性和副作用。
文档编号A23L1/30GK102423312SQ20111026607
公开日2012年4月25日 申请日期2008年2月21日 优先权日2007年2月21日
发明者朴德勋, 李钟星, 郑恩善 申请人:生物光谱公司