专利名称：一种微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及生物工程和微胶囊技术领域，尤其涉及一种微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备方法。
背景技术：
紫菜含有丰富的蛋白质，可用于制备具有生理活性效应的活性多肽如降血压肽。 紫菜细胞壁较坚硬，由多聚半乳糖醛酸硫酸酯构成。要充分地获得紫菜蛋白用以制备紫菜降血压肽，应当尽可能破坏紫菜细胞壁结构，使细胞内容物流出。CN100469894C的发明专利公开了一种利用酶-膜耦合技术制备紫菜降血压肽的方法及其用途，干紫菜经过粉碎、脱脂、溶解、超声处理、蛋白酶解、膜分离耦合、后处理得到紫菜降血压肽产品。CN100535122C 的发明专利公开了一种基于超声波预处理的紫菜多肽的制备方法，包括对紫菜进行粉碎、 溶解，对蛋白酶加水溶解，用超声波对紫菜溶液和蛋白酶溶液分别进行处理，然后用蛋白酶水解的方法将紫菜中的蛋白转化成多肽。但这两种方法均仅采用超声波处理对紫菜细胞进行破碎以溶出紫菜蛋白，紫菜蛋白溶出率较低，在一定程度上影响了紫菜多肽的得率。酶解法具有操作简单、条件温和、容易控制、安全可靠等特点，目前广泛应用于活性物质的提取和制备，但单纯采用酶法提取反应速度较慢，反应时间较长。超声波处理破碎细胞也是目前天然产物提取、活性物质制备中常用的方法，但较大功率、较长时间的超声波处理容易引起活性物质的失活；另一方面，单纯用超声波处理，紫菜细胞壁的多聚半乳糖醛酸硫酸酯基本保持完整，仅产生少量空隙，影响紫菜细胞破碎效率，影响紫菜内容物的溶出。采用酶解法协同超声波破碎提高紫菜中紫菜蛋白的溶出率还研究较少。酵母细胞表面展示表达系统是一种固定化表达异源蛋白质的真核展示系统，具有糖基化作用、蛋白翻译后折叠和与哺乳动物类似的分泌机制的优势，相比噬菌体和大肠杆菌细胞表面展示技术，更有利于高效表达具有生物活性的复杂蛋白。研究表明，多种酶类包括生物素连接酶、有机磷水解酶等都被成功展示在酵母细胞表面，且酶活相比野生型酶均有不同程度的提高。毕赤酵母表达系统作为一种新的展示蛋白系统，具有易于培养、繁殖快、可调控外源基因的表达等特性，相关研究近年发展迅速，成为酵母表面展示系统中极具应用前景的宿主菌。微胶囊技术以成膜材料为壁材，通过包埋固体、液体或气体来保护芯材免受不利环境因素影响，以此来提高产品的稳定性和货架期，扩展芯材的应用范围，并控制芯材释放，广泛应用于食品、化工、医药、生物技术等领域。紫菜降血压肽提取后，与空气接触易发生氧化等影响生物活性的转化过程，严重影响活力持续性。研究紫菜降血压肽的微胶囊包埋技术，有望改善紫菜降血压肽的活力持续性。利用毕赤酵母表面展示酶，通过酶解协同超声波处理从紫菜中提取、制备紫菜降血压肽，再通过微胶囊技术制备高活力持续性的紫菜降血压肽微胶囊，具有一定的应用前景。
发明内容
本发明提供了一种微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备方法，以紫菜为原料，利用毕赤酵母表面展示型聚半乳糖醛酸酶酶解协同超声波处理破碎紫菜细胞，溶出紫菜蛋白， 经毕赤酵母表面展示型蛋白酶酶解获得紫菜降血压肽，再通过微胶囊包埋技术制备紫菜降血压肽微胶囊，产品具有较高的活力持续性。一种微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备方法，包括(1)将紫菜干粉、酵母展示型聚半乳糖醛酸酶加入水中混勻，于35 37°C搅拌反应30 45分钟，再于28 35°C利用功率为730 750W的超声波破碎1 2小时，获得细胞破碎液，分离纯化制得紫菜蛋白；(2)将步骤(1)得到的紫菜蛋白、酵母展示型蛋白酶加入水中混勻，于35 40°C 搅拌反应2 2. 5小时，获得紫菜蛋白酶解液，分离纯化制得紫菜降血压肽；(3)将步骤(2)得到的紫菜降血压肽和质量百分比浓度为15%的β -环糊精水溶液按照重量比1 10 1 15的比例混合均勻，于30 35°C持续研磨1 2小时，再将所得湿浆于3 5°C静置11 13小时，抽滤，干燥，得到微胶囊包埋的紫菜降血压肽。步骤(1)中，所述的紫菜干粉的粒径优选为60 100目。优选地，以每克紫菜干粉的加入量计，所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶的加入量为0. 05 0. 08g ；更优选地，以每升水计，所述的紫菜干粉的加入量为20 25g，所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶的加入量为1 2g。优选地，所述的搅拌速率为100 200转/分钟。通过搅拌，可促进酵母展示型聚半乳糖醛酸酶与紫菜细胞之间的相互作用，提高酵母展示型聚半乳糖醛酸酶对紫菜细胞壁的酶解效率。通过所述的超声波处理促进紫菜细胞的破碎，更有利于酵母展示型聚半乳糖醛酸酶对紫菜细胞壁的降解作用。超声波作为一种物理能，一方面，能通过空化作用产生极大的压力，造成被破碎物的细胞壁甚至整个生物体破裂而使胞内物质释放、扩散或溶解出来；另一方面，适宜强度的超声波能够使酶分子的构象发生正向转化，从而提高酶的活性，加速酶解反应。由于超声波频率高、能量大，作用过程中会产生显著的热效应，为了降低热效应对酵母展示型聚半乳糖醛酸酶酶活的影响，所述的超声波的处理温度为观 35°C，超声波的功率为730 750W。所述的分离纯化包括对细胞破碎液进行离心处理，取上清液，上清液经盐析取沉淀得到紫菜蛋白。所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶可降解解聚组成紫菜细胞壁的多聚半乳糖醛酸硫酸酯，破坏紫菜细胞壁的结构。所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶可以通过如下方法制备将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia paStoriS)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72 144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗和冷冻干燥制得酵母展示型聚半乳糖醛酸酶；所述的重组质粒由原始载体pPIC9K和依次插入原始载体PPIC9K中MF α 1信号肽下游的聚半乳糖醛酸酶基因、毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因组成。
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所述的聚半乳糖醛酸酶基因可选用Genbank号为HQ446162. 1的序列；毕赤酵母 (Pichia pastoris)GS115为商业化产品，可从Invitrogen公司购得；毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因序列的Genbank号为似8164。载体pPIC9K为商业化产品(如Invitrogen公司)，它存在MF α 1信号肽序列(Genbank号Μ17301)，同时该载体内信号肽序列上游存在AOXl启动子(Genbank号 Ζ46233)。重组质粒线性化处理的目的是为了与胞内基因组发生同源重组，提高表达稳定性。步骤O)中，优选地，以每克紫菜蛋白的加入量计，所述的酵母展示型蛋白酶的加入量为0. 04 0. 06g ；更优选地，以每升水计，所述的紫菜蛋白的加入量为18 25g，所述的酵母展示型蛋白酶的加入量为0. 8 1. 5g。优选地，所述的搅拌速率为100 200转/分钟。所述的分离纯化包括对紫菜蛋白酶解液进行离心处理，取上清液，上清液经盐析取沉淀得到紫菜降血压肽。步骤(1)和步骤O)中所述的盐析均可按照如下步骤操作在相应的上清液中加入硫酸铵，于3 5°C静置11 13小时；其中，所述的硫酸铵的加入量以每升上清液计为 200 250g。采用盐析沉淀法，可以将上清液中的紫菜蛋白或紫菜降血压肽沉淀出来，实现与上清液中其它物质间的分离。硫酸铵具有特别显著的盐析作用，在弱酸性溶液或中性溶液中能使蛋白或肽沉淀。所述的酵母展示型蛋白酶可水解紫菜蛋白为多肽，获得紫菜降血压肽。所述的酵母展示型蛋白酶可以通过如下方法制备将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia paStoriS)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72 144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗和冷冻干燥制得酵母展示型蛋白酶；所述的重组质粒由原始载体pPIC9K和依次插入原始载体PPIC9K中MF α 1信号肽下游的蛋白酶基因、毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因组成。所述的蛋白酶基因可选用Genbank号为ΝΜ_012708. 2的序列；毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115为商业化产品，可从hvitrogen公司购得；毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因序列的Genbank号为]\C8164。 载体pPIC9K为商业化产品(如Invitrogen公司)，它存在MF α 1信号肽序列(Genbank号Μ17301)，同时该载体内信号肽序列上游存在AOXl启动子(Genbank号 Ζ46233)。重组质粒线性化处理的目的是为了与胞内基因组发生同源重组，提高表达稳定性。优选地，所述的步骤(3)为将步骤⑵得到的紫菜降血压肽和质量百分比浓度为 15%的β-环糊精水溶液按照重量比1 10的比例混合均勻，于35°C持续研磨80分钟，再将所得湿浆于4°C静置12小时，抽滤，干燥，得到微胶囊包埋的紫菜降血压肽。本发明通过将聚半乳糖醛酸酶基因或蛋白酶基因和细胞壁α凝集素基因导入毕赤酵母细胞GS115，毕赤酵母细胞诱导培养后，酶表达并分泌到胞外，同时利用细胞壁α凝集素将该酶固定在毕赤酵母细胞表面，能有效提高酶的活性。所制得的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶能破坏紫菜细胞壁的结构，通过酶解反应结合超声波处理，则紫菜细胞壁的降解
5解聚可进一步提高后续超声波处理产生的空化效应，促进紫菜细胞破碎，使细胞内容物尽可能流出，从而显著提高紫菜蛋白的溶出率。所制得的酵母展示型蛋白酶能提高对紫菜蛋白的酶解效率，有效获得高得率的紫菜降血压肽，且紫菜降血压肽对血管紧张素转换酶 (ACE)具有较高的抑制活力。紫菜降血压肽经微胶囊包埋后，能显著提高活力持续性。本发明方法以紫菜为原料，能获得高得率、活力持续性高的紫菜降血压肽微胶囊， 工艺简便、条件温和、易于控制、安全可靠，为紫菜降血压肽的工业化生产提供参考。
具体实施例方式酵母展示型聚半乳糖醛酸酶的制备通过人工合成的方法，合成聚半乳糖醛酸酶基因(Genbank号HQ446162. 1) 和毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因(Genbank号164)，同时在聚半乳糖醛酸酶基因C端加上连接肽序列GSSGGSGGSGGSGGSGS(linker)，连接后得到核苷酸序列 PGA-Iinker-α -agglutinin,同时在序列两端添加EcoR I和Not I酶切位点，其中PGA为聚半乳糖醛酸酶基因，α-agglutinin为细胞壁α凝集素基因。以上述人工合成序列为模板，利用下述引物对，进行PCR扩增，上游引物5，-ATGTTGTTATCGACACACAGTATTGTTCTG-3，；下游引物5，-TTTTCCTTTTGCGGCCGCTAATGAAACG-3，PCR反应体系为模板DNA为1 μ 1，高保真DNA聚合酶0. 5 μ 1，dNTP (50mM) 0. 4 μ 1， 上下游引物各0. 5 μ 1，10XPCR缓冲液5 μ 1，加水至50 μ 1。PCR运行条件为94°C 3分钟，；35个循环(94°C 30秒，60°C 1分钟，72°C 30秒)， 72 V 10分钟。用EocR I和Not I同时酶切PCR产物和pPIC9K质粒，并在T4连接酶的作用下过夜连接形成PPIC9K-PGA质粒，通过电泳检验并回收质粒。为使目的基因与毕赤酵母GS115 发生His 4单位点置换重组，用Ml I对pPIC9K-PGA质粒进行酶切线性化处理。将酶切线性化处理好的目的基因约15 μ 1加入到事先准备好的毕赤酵母GS115感受态细胞中，转入电转杯中，冰浴15分钟，然后在1500ν、400Ω、25uF条件下电击10ms，并加入约Iml预冷的山梨醇。将上述混勻的电转产物约400μ 1涂于MD平板上，筛选阳性转化子，然后将阳性转化子涂于不同浓度的G418平板上，根据阳性转化子对G418的抗性筛选出Mut表型的多拷贝阳性重组菌株。将多拷贝阳性重组菌株接种在BMGY培养基中发酵培养30小时，离心收集细胞；再将细胞置于含有0.5% (体积百分比)甲醇的BMMY培养基中诱导培养144小时，离心收集细胞，用水冲洗后，接种至YGC培养基中30°C培养120小时，然后5000g离心10分钟收集菌体，蒸馏水洗涤后再用50mM pH 7. 0磷酸缓冲液洗涤，_80°C下预冻后再经德国Christ真空冷冻干燥机干燥M小时，得到酵母展示型聚半乳糖醛酸酶。酵母展示型蛋白酶的制备通过人工合成的方法，合成蛋白酶基因(Genbank号NM_012708. 2)和毕赤酵母 GS115的细胞壁α凝集素基因(Genbank号Μ28164)，同时在蛋白酶基因C端加上连接肽序列 GSSGGSGGSGGSGGSGS (linker)，连接后得到核苷酸序列 PRO-linker-α -agglutinin，同时在序列两端添加EcoR I和Not I酶切位点，其中PRO为蛋白酶基因，α-agglutinin为细胞壁α凝集素基因。以上述人工合成序列为模板，利用下述引物对，进行PCR扩增，上游引物5，-CCTTCGCCGCACGCCGCTGCTGATTGGAAA-3，；下游引物5，-TTTTCCTTTTGCGGCCGCTAATGAAACG-3，PCR反应体系为模板DNA为1 μ 1，高保真DNA聚合酶0. 5 μ 1，dNTP (50mM) 0. 4 μ 1， 上下游引物各0. 5 μ 1，10XPCR缓冲液5 μ 1，加水至50 μ 1。PCR运行条件为94°C 3分钟，；35个循环(94°C 30秒，60°C 1分钟，72°C 30秒)， 72 V 10分钟。用EocR I和Not I同时酶切PCR产物和pPIC9K质粒，并在T4连接酶的作用下过夜连接形成PPIC9K-PR0质粒，通过电泳检验并回收质粒。为使目的基因与毕赤酵母GS115 发生His 4单位点置换重组，用Ml I对pPIC9K-PR0质粒进行酶切线性化处理。将酶切线性化处理好的目的基因约15 μ 1加入到事先准备好的毕赤酵母GS115感受态细胞中，转入电转杯中，冰浴15分钟，然后在1500ν、400Ω、25uF条件下电击10ms，并加入约Iml预冷的山梨醇。将上述混勻的电转产物约400μ 1涂于MD平板上，筛选阳性转化子，然后将阳性转化子涂于不同浓度的G418平板上，根据阳性转化子对G418的抗性筛选出Mut表型的多拷贝阳性重组菌株。将多拷贝阳性重组菌株接种在BMGY培养基中发酵培养30小时，离心收集细胞；再将细胞置于含有0.5% (体积百分比)甲醇的BMMY培养基中诱导培养144小时，离心收集细胞，用水冲洗后，接种至YGC培养基中30°C培养120小时，然后5000g离心10分钟收集菌体，蒸馏水洗涤后再用50mM pH 7. 0磷酸缓冲液洗涤，_80°C下预冻后再经德国Christ真空冷冻干燥机干燥M小时，得到酵母展示型蛋白酶。实施例1微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备(1)紫菜蛋白的提取取粒径60目的紫菜干粉20克加入1000克水中，混勻，配制成悬浮液；然后加入根据上述方法制备的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶1克，在35°c条件下搅拌反应30分钟，搅拌速率为100转/分钟；进行超声波破碎，超声功率为730W，超声处理时间为65分钟，超声处理温度为30°C ；经5000g离心10分钟，去除沉淀，得到含有紫菜内容物的上清液；在上清液中加入硫酸铵，使上清液中硫酸铵的浓度达到20% (W/V)，于4°C 静置12小时；经5000g离心10分钟，取沉淀，得到紫菜蛋白。(2)紫菜降血压肽的制备取步骤(1)得到的紫菜蛋白加入水中，再加入根据上述方法制备的酵母展示型蛋白酶，混勻，使水中紫菜蛋白的质量百分比浓度为2%，酵母展示型蛋白酶的质量百分比浓度为0. 1%;于36. 5°C搅拌反应130分钟，搅拌速率为160转/分钟，然后5000g离心10分钟，去除沉淀，在上清液中加入硫酸铵，使上清液中硫酸铵的浓度达到20% (W/V)，于4°C静置12小时，再经5000g离心10分钟，沉淀即紫菜降血压肽，可重新溶解于水中。(3)微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备取步骤(2)得到的紫菜降血压肽和质量百分比浓度为15%的β-环糊精水溶液按照重量比1 10的比例混合均勻，于35°C持续研磨80分钟，将所得湿浆于4°C冰箱中静置过夜，抽滤，37°C烘箱中干燥，得到微胶囊包埋的紫菜降血压肽。对比例1未经微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备
实施例1中，不执行步骤(3)，按照步骤(1)至步骤O)的操作制备未经微胶囊包埋的紫菜降血压肽。实施例2微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备(1)紫菜蛋白的提取取粒径100目的紫菜干粉20克加入1000克水中，混勻，配制成悬浮液；然后加入根据上述方法制备的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶1. 6克，在35°C条件下搅拌反应30分钟，搅拌速率为200转/分钟；进行超声波破碎，超声功率为750W，超声处理时间为65分钟，超声处理温度为33°C ；经5000g离心10分钟，去除沉淀，得到含有紫菜内容物的上清液；在上清液中加入硫酸铵，使上清液中硫酸铵的浓度达到20% (W/V)，于 4°C静置12小时；经5000g离心10分钟，取沉淀，得到紫菜蛋白。(2)紫菜降血压肽的制备取步骤(1)得到的紫菜蛋白加入水中，再加入根据上述方法制备的酵母展示型蛋白酶，混勻，使水中紫菜蛋白的质量百分比浓度为2%，酵母展示型蛋白酶的质量百分比浓度为0. 12% ；于36. 5°C搅拌反应130分钟，搅拌速率为160转/ 分钟，然后5000g离心10分钟，去除沉淀，在上清液中加入硫酸铵，使上清液中硫酸铵的浓度达到20% (W/V)，于4°C静置12小时，再经5000g离心10分钟，沉淀即紫菜降血压肽，可重新溶解于水中。(3)微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备取步骤(2)得到的紫菜降血压肽和质量百分比浓度为15%的β-环糊精水溶液按照重量比1 15的比例混合均勻，于35°C持续研磨80分钟，将所得湿浆于4°C冰箱中静置过夜，抽滤，37°C烘箱中干燥，得到微胶囊包埋的紫菜降血压肽。对比例2未经微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备实施例2中，不执行步骤(3)，按照步骤(1)至步骤O)的操作制备未经微胶囊包埋的紫菜降血压肽。紫菜降血压肽降血压活力的测定测定紫菜降血压肽对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性，评价其降血压活力。 50 μ 1反应混合物中含有5mM Hip-His-Leu作为反应底物、0. 3M NaCl、5mU ACE和50mM硼酸盐缓冲液(PH 8. 3) ；50μ1样品加入到上述反应混合液中，在37°C下反应3小时之后，加入250 μ 1 1.0Ν HCl终止反应；向反应体系中再加入1.5ml乙酸乙酯，旋涡震荡器中震荡2 分钟，2500g离心15分钟，静置10分钟后，用移液器吸取1. Oml乙酸乙酯层液体于另外试管中，在干燥箱中干燥60分钟，再加入3. Oml蒸馏水将其溶解，在228nm处测定该溶液的吸光值。ACE 抑制率(％ ) = (A-B)/(A-C) X 100%其中，A为不存在紫菜降血压肽但存在血管紧张素转换酶(ACE)时的吸光度，B为存在紫菜降血压肽与血管紧张素转换酶(ACE)时的吸光度，C为紫菜降血压肽与血管紧张素转换酶(ACE)都不存在时的吸光度。活力持续性测定和比较分别取实施例1、实施例2、对比例1、对比例2制得的紫菜降血压肽，在刚制备好时测定其对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性，即初始ACE抑制率；持续测定，当其对ACE 的抑制活性下降到初始活力的50%以下时，记录持续的时间，具体结果见表1。表1微胶囊包埋和未经微胶囊包埋的紫菜降血压肽的ACE抑制活力持续性比较
权利要求
1.一种微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备方法，包括(1)将紫菜干粉、酵母展示型聚半乳糖醛酸酶加入水中混勻，于35 37°C搅拌反应 30 45分钟，再于28 35°C利用功率为730 750W的超声波破碎1 2小时，获得细胞破碎液，分离纯化制得紫菜蛋白；(2)将步骤(1)得到的紫菜蛋白、酵母展示型蛋白酶加入水中混勻，于35 40°C搅拌反应2 2. 5小时，获得紫菜蛋白酶解液，分离纯化制得紫菜降血压肽；(3)将步骤(2)得到的紫菜降血压肽和质量百分比浓度为15%的环糊精水溶液按照重量比1 10 1 15的比例混合均勻，于30 :35°C持续研磨1 2小时，再于3 5°C静置11 13小时，抽滤，干燥，得到微胶囊包埋的紫菜降血压肽；所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶、酵母展示型蛋白酶通过如下方法制备将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia paSt0riS)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72 144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗和冷冻干燥制得酵母展示型聚半乳糖醛酸酶或酵母展示型蛋白酶；其中，所述的重组质粒由原始载体PPIC9K和依次插入原始载体PPIC9K中MF α 1信号肽下游的相应的酶基因、毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因组成。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，所述的紫菜干粉的粒径为 60 100目。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，以每克紫菜干粉的加入量计，所述的酵母展示型聚半乳糖醛酸酶的加入量为0. 05 0. 08go
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，所述的搅拌速率为100 200转/分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，所述的分离纯化包括对细胞破碎液进行离心处理，取上清液，上清液经盐析取沉淀得到紫菜蛋白。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤O)中，以每克紫菜蛋白的加入量计，所述的酵母展示型蛋白酶的加入量为0. 04 0. 06g。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤( 中，所述的搅拌速率为100 200 转/分钟。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤O)中，所述的分离纯化包括对紫菜蛋白酶解液进行离心处理，取上清液，上清液经盐析取沉淀得到紫菜降血压肽。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的步骤(3)为将步骤⑵得到的紫菜降血压肽和质量百分比浓度为15%的β -环糊精水溶液按照重量比1 10的比例混合均勻，于35°C持续研磨80分钟，再于4°C静置12小时，抽滤，干燥， 得到微胶囊包埋的紫菜降血压肽。
全文摘要
本发明公开了一种微胶囊包埋的紫菜降血压肽的制备方法，包括将紫菜干粉、酵母展示型聚半乳糖醛酸酶加入水中混匀，于35～37℃搅拌反应30～45分钟，再于28～35℃利用功率730～750W的超声波破碎1～2小时，分离纯化制得紫菜蛋白；将紫菜蛋白、酵母展示型蛋白酶加入水中混匀，于35～40℃搅拌反应2～2.5小时，分离纯化制得紫菜降血压肽；利用β-环糊精包埋紫菜降血压肽。本发明利用酵母表面展示型聚半乳糖醛酸酶协同超声波处理溶出紫菜蛋白，再经酵母表面展示型蛋白酶酶解及微胶囊包埋技术制备紫菜降血压肽微胶囊，能获得较高得率、较高活力持续性的紫菜降血压肽。
文档编号C12N15/81GK102296101SQ20111026870
公开日2011年12月28日 申请日期2011年9月8日 优先权日2011年9月8日
发明者何国庆, 周陈伟, 张延 , 徐娟, 杜姗姗, 杨璐, 郭子堃, 阮晖 申请人:浙江大学