专利名称：一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种保健食品，具体是一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片及其制备方法。
背景技术：
免疫力是机体以免疫器官和免疫球蛋白等免疫组分为物质基础，识别和排除抗原性异物的功能，即机体区分自己和非己的功能，从而抵抗疾病、维持机体生理平衡，它能通过人体免疫系统识别人体内正常与不正常的微生物和细胞等，并通过免疫应答排除内、外致病微生物和变性、衰老的细胞，通俗地说免疫力就是免疫系统发挥出来的保护机体的能力。随着社会竞争的加剧、各种压力的增加、生活习惯的改变以及环境污染越来越严重，各种内在外在的因素导致人体的免疫系统不能正常发挥作用，人体健康受到影响，易导致细菌、病毒、真菌等感染，常患病，且易感体质虚弱、营养不良，表现出精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等症状。研究发现，目前亚健康人群的比例在地域分布和年龄范围上都不断扩大，约70%左右的人群处于健康和患病之间的过渡状态，即“亚健康”状态。长期处于“亚健康”或免疫力低下的状态下，会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。因此，要维护身体健康，增强免疫力是关键。
发明内容
本发明目的在于提供一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，它具有可以增强人体免疫力的功效，适用于免疫力低下的4岁以上儿童、青少年和成人。为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，由以下重量百分比的原料组成碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、甘露醇10-30%、白砂糖10-20%、二氧化硅0. 5-1. 5%、硬脂酸镁0. 5-1. 0%。所述的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，其制备方法包含如下步骤
(1)按重量百分比取碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、甘露醇 10-30%、白砂糖 10-20%、二氧化硅 0. 5-1. 5%、硬脂酸镁 0. 5-1. 0% ；
(2)将碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10_30%、经粉碎并过100目筛的甘露醇10-30%、白砂糖10-20%混合10-15分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与二氧化硅0. 5-1. 5%、硬脂酸镁0. 5-1. 0%进行混合后，压制成片，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。
本发明相对于现有技术的有益效果是
(1)钙是生命活动必不可少的矿物元素，它与人体免疫系统活力密切相关，且在胸腺中参与T细胞的激活；牛初乳除了含有丰富的优质蛋白质、维生素等，还富含免疫球蛋白等功效组分，能攻击侵入人体的致病原，抑制病菌繁殖，具有促进生长发育、增进免疫调节等保健功能；本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片以碳酸钙和牛初乳相配伍，通过其各自不同的的途径对免疫系统发挥调节作用；
(2)本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片配方中使用全脂奶粉、甘露醇、白砂糖作为辅料调节口感，使产品有浓郁的牛奶香甜味，具有口感佳，易吸收的特点，能更好的满足消费者的需求；同时，本发明产品在剂型选择上采用咀嚼片，易于携带、服用方便；
(3)本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片适用于免疫力低下的4岁以上儿童、青少年和成人用于增强免疫力；
(3)本发明增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片的制备方法严格按照保健食品良好生产规范要求生产，生产过程质量控制合理，食用安全，方便。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。实施例1采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。所采用原料(以重量百分比计)碳酸钙18%，牛初乳粉18%、全脂奶粉22%、甘露醇 22%、白砂糖18. 8%、二氧化硅0. 6%、硬脂酸镁0. 6%。采用如下制备步骤
(1)按重量百分比取以下原料碳酸钙18%，牛初乳粉18%、全脂奶粉22%、甘露醇22%、 白砂糖18. 8%、二氧化硅0. 6%、硬脂酸镁0. 6% ；
(2)将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、 白砂糖混合10分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。实施例2采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。所采用原料(以重量百分比计)碳酸钙20%，牛初乳粉20%、全脂奶粉13. 5%、甘露醇30%、白砂糖15%、二氧化硅0. 75%、硬脂酸镁0. 75%。采用如下制备步骤
(1)按重量百分比取以下原料碳酸钙20%，牛初乳粉20%、全脂奶粉13.5%、甘露醇30%、 白砂糖15%、二氧化硅0. 75%、硬脂酸镁0. 75% ；
(2)将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、 白砂糖混合12分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。实施例3采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。所采用原料(以重量百分比计)碳酸钙22%，牛初乳粉17%、全脂奶粉30%、甘露醇 15%、白砂糖14%、二氧化硅1. 2%、硬脂酸镁0. 8%。采用如下制备步骤
(1)按重量百分比取以下原料碳酸钙22%，牛初乳粉17%、全脂奶粉30%、甘露醇15%、 白砂糖14%、二氧化硅1. 2%、硬脂酸镁0. 8% ；
(2)将上述碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、白砂糖混合15分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。实施例4采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。所采用原料(以重量百分比计)碳酸钙25%，牛初乳粉15. 5%、全脂奶粉25%、甘露醇20%、白砂糖12%、二氧化硅1. 5%、硬脂酸镁1. 0%。采用如下制备步骤
(1)按重量百分比取以下原料碳酸钙25%，牛初乳粉15.5%、全脂奶粉25%、甘露醇20%、 白砂糖12%、二氧化硅1. 5%、硬脂酸镁1. 0% ；
(2)将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、 白砂糖混合13分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。实施例5采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。所采用原料(以重量百分比计)碳酸钙30%，牛初乳粉10%、全脂奶粉观％、甘露醇 10%、白砂糖20%、二氧化硅1. 0%、硬脂酸镁1. 0%。采用如下制备步骤
(1)按重量百分比取以下原料碳酸钙30%，牛初乳粉10%、全脂奶粉观％、甘露醇10%、 白砂糖20%、二氧化硅1. 0%、硬脂酸镁1. 0% ；
(2)将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、 白砂糖混合10分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。实施例6采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。所采用原料(以重量百分比计)碳酸钙观％，牛初乳粉12%、全脂奶粉21%、甘露醇 21%、白砂糖16. 4%、二氧化硅0. 8%、硬脂酸镁0. 8%。采用如下制备步骤
(1)按重量百分比取以下原料碳酸钙观％，牛初乳粉12%、全脂奶粉21%、甘露醇21%、 白砂糖16. 4%、二氧化硅0. 8%、硬脂酸镁0. 8% ；
(2)将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、 白砂糖混合14分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。实施例7采用下列方案制备一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。所采用原料(以重量百分比计)碳酸钙35%，牛初乳粉16%、全脂奶粉10%、甘露醇 28%、白砂糖10%、二氧化硅0. 5%、硬脂酸镁0. 5%。采用如下制备步骤
(1)按重量百分比取以下原料碳酸钙35%，牛初乳粉16%、全脂奶粉10%、甘露醇28%、 白砂糖10%、二氧化硅0. 5%、硬脂酸镁0. 5% ；(2)将上述重量百分比的碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、经粉碎并过100目筛的甘露醇、 白砂糖混合11分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与按上述重量百分比所取的二氧化硅、硬脂酸镁进行混合后，压制成1200mg/片的片剂，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。实验例以下通过试验来进一步说明本发明以本发明实施例4所制备的牛初乳钙咀嚼片进行增强免疫力功能评价试验。1材料和方法。1. 1样品本发明实施例4所制备的牛初乳钙咀嚼片，为浅黄色咀嚼片，置阴凉干燥处保存。人体口服推荐剂量为1. 2g/片X 4片/次X 1次/天，适宜人群为免疫力低下的4岁及以上儿童、青少年及成人。以成人每人60kg体重计算，折合剂量0.08g/kg/天。 片剂粉碎后备用。奶粉对照组采用厂家提供的全脂奶粉。1. 2实验动物与分组河南省实验动物中心(实验动物生产许可证号为SCXK (豫) 2005-0001)提供的清洁级昆明种雄性小鼠250只，体重18g 22g。饲料由同一单位提供。 每50只小鼠为一大组，共五大组。免疫I组，进行碳廓清实验；免疫II组，进行脏体比值测定、半数溶血值(HC5tl)的测定和抗体生成细胞数的测定；免疫III组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定；免疫IV组，进行迟发型变态反应实验；免疫V 组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每大组50只小鼠按体重随机分为5小组， 即溶剂对照组和奶粉对照组、低、中、高剂量组。1.3实验环境条件温度22°C14°C，湿度52°/Γ58%。实验动物使用许可证号为 SYXK (湘)2003-0002。1. 4剂量选择及样品处理据人体口服推荐量，设本试验牛初乳钙咀嚼片低、中、 高剂量分别为0.4g/kg.W、0.8g/kg.W、2 . 4g/kg. bw (分别相当于人体推荐量的5、10、30 倍)，受试液配制时分别取本试验牛初乳钙咀嚼片4. 00g、8. 00g,24. OOg加蒸馏水至200ml ，按O.aiil/lOg.lm体积给小鼠灌胃，每天一次，连续30天。奶粉对照组参照样品中剂量设置为0. 8g/kg. bw,受试液配制时取全脂奶粉8. OOg加蒸馏水至200ml，按0. 2ml/10g. bw体积给小鼠灌胃。溶剂对照组灌胃予以等体积的蒸馏水。1. 5主要仪器与试剂动物台秤、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、722分光光度计、恒温水浴箱、酶标仪、显微镜等。无菌手术器械、游标卡尺、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板，96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、 试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、Hank's液(ρΗ7· 2-7. 4)、RPMI1640培养液、小牛血清、青链霉素、ConA、l%冰醋酸，lmol/L的HCL溶液，酸性异丙醇(96mL异丙醇加lmol/ L的HCL溶液4mL)、MTT、PBS缓冲液(Ph7. 2-7. 4)、补体、SA缓冲液、琼脂糖、都氏试剂、YAC-I细胞、乳酸纳、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0. 2mol/L的 Tris-HCL缓冲液、1%的NP40、印度墨汁、0.1 %的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Giemsa染液寸。1.6实验方法。1. 6.1脏器/体重比值测定称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。
1.6.2迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)小鼠腹腔注射SRBC (0. 2ml/每鼠)致敏后4天，测量左后足跖厚度，然后在测量部位皮下注射20%(v/v) SRBC(20ul/每鼠)，于注射后Mh测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以攻击前后足距厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。1.6.3 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’ s液的小平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hank’ s液洗2次，每次离心10分钟(lOOOr/min)。然后将细胞悬浮于ImL完全培养液中，计数活细胞数，用 RPMI1640培养液调整细胞浓度为3 X IO6个/mL。再将细胞悬液分两孔加入M孔培养板中， 每孔lmL，在其中一孔加75 μ L ConA液(相当于7. 5 μ g/mL)，另一孔作为对照，置5% 二氧化碳，37 C培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入不含小牛血清的 RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL) 50 μ 1/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入 ImL酸性异丙醇，吹打混勻，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3 个平行孔，用酶标仪，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。1.6. 4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心O000 r/min) IOmin，将压积SRBC用生理盐水配成洲(ν/ν)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0. 2mL·将免疫后5天的小鼠处死，取脾，轻轻磨碎，用Hanks液制成细胞悬液，200 目筛网过滤，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在5ml Hanks液中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5X IO6个/mL。将表层培养基加热溶解后与等量的PH7. 4、2倍浓度的Hanks液混合，分装小试管，每管0. 5ml，再向管内加入用SA液配制的10%SRBC50ul (v/v)、20ul脾细胞悬液(5 X IO6个/mL)，迅速混勻后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.证，然后用SA液稀释的补体(1 10) 加入到玻片凹槽内，继续温育1. 5h后计数溶血空斑数。1. 6. 5半数溶血值(HC5tl)的测定取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射洲卜八，用生理盐水配制)压积RBCO. 2mL进行免疫。5天后，摘除眼球取血于离心管内， 放置约Ih，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000rpm离心lOmin，收集血清。用SA 缓冲液将血清稀释为200倍，取1 mL置试管内，依次加入10% (v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBCO. 5mL。补体ImL(用SA缓冲液按1 :10稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。置37 C恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。2000rpm离心lOmin，取上清lmL，加都氏试剂3mL。同时取10%(v/v，用SA缓冲液配制)压积SRBCO. 25mL，加都氏试剂至4mL于另一试管中，充分混勻，放置IOmin后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC5tl)表示，按下式计算
半数溶血值(HC5tl) =样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值X稀释倍数 1. 6. 6小鼠碳廓清实验小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每IOg体重注射0. 1 mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉丛取血 20ul，加入到anl 0.1 %Na2C03溶液中，摇勻。以0. 1% Na2CO3溶液作空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、牌，称重，计算吞噬指数
3- ο1.6.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)小鼠腹腔注射20% (ν/v，用生理盐水配制)的压积鸡红细胞(2000rpm，IOmin)悬液1 mL，间隔30min，颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1 min。 取腹腔巨噬细胞洗液lmL，滴于载破片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37 C孵箱温育 30min。孵毕，于生理盐水中漂洗以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇丙酮(1:1)固定，4%(v/ v)GiemSa-磷酸缓冲液染色，用蒸馏水漂洗晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数
吞噬率％=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数X 100 吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数 1.6.8 NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法)受试小鼠颈椎脱白处死，无菌取脾， 制成脾细胞悬液，用Hank’ s液洗3次，弃上清将细胞浆弹起，加入0. 5ml灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0. 5ml 2倍Hank，s液及Snl Hank，s液，IOOOrpm离心IOmin，用ImL 含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用台酚兰染色计数(活细胞数应在95%以上)，调整细胞浓度为2 X107f/mL此为效应细胞，取传代后Mh生长良好的YAC-I细胞用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4X IO5个/ml此为靶细胞；取靶细胞和效应细胞各IOOul (效靶比50 1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各lOOul，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2. 5%Triton各IOOul ；上述各项均设三个平行孔，于37 C，5% 二氧化碳培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min， 每孔吸取上清IOOul置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液lOOul，根据室温反应 3-10min，每孔加入lmol/L的HCl 30ul，在酶标仪490nm处测定光密度(OD)。NK细胞活性=[(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔 0D)]X100%
1. 7实验数据统计用EXCel2003、SpSS11.0软件进行统计分析。用Spssll.O软件分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Durmett法进行各剂量组与奶粉对照组、各剂量组与溶剂对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane ‘ sT2检验进行两两比较。2 结果
2.1本试验牛初乳钙咀嚼片对小鼠体重的影响见表1-5。经方差齐性检验，免疫I组小鼠体重增长值方差不齐，采用秩和检验统计，各组小鼠实验初、实验中期、实验末体重及其它组小鼠实验期间体重增长方差齐，采用单因素方差分析，结果显示，各组之间上述指标总体比较无显著性差异(P>0.05)。表1免疫I组小鼠体重(X 士s，g)
权利要求
1.一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，其特征在于由以下重量百分比的原料组成 碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、甘露醇10_30%、白砂糖10_20%、二氧化硅 0. 5-1. 5%、硬脂酸镁 0. 5-1. 0%。
2.根据权利要求1所述的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片，其特征在于其制备方法如下(1)按重量百分比取碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10-30%、甘露醇 10-30%、白砂糖 10-20%、二氧化硅 0. 5-1. 5%、硬脂酸镁 0. 5-1. 0% ；(2)将碳酸钙18-35%，牛初乳粉10-20%、全脂奶粉10_30%、经粉碎并过100目筛的甘露醇10-30%、白砂糖10-20%混合10-15分钟后，加入质量分数为50%的食用酒精制粒，再经干燥、整粒，然后将得到颗粒与二氧化硅0. 5-1. 5%、硬脂酸镁0. 5-1. 0%进行混合后，压制成片，包装，即制得一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。
全文摘要
本发明公开了一种增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片。本发明的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片是由碳酸钙、牛初乳粉、全脂奶粉、甘露醇、白砂糖、二氧化硅和硬脂酸镁，按一定重量配比组成。本发明产品配方中以碳酸钙、牛初乳粉相配伍，使其通过各自有效途径发挥对免疫系统的调节作用，同时以全脂奶粉、甘露醇、白砂糖等作为辅料调节口感，使本品有浓郁的牛奶香甜味，具有口感佳，易吸收的特点。本发明的增强免疫力的牛初乳钙咀嚼片适用于免疫力低下的4岁以上儿童、青少年和成人，是一种高效的增强免疫力的保健食品。
文档编号A23C9/20GK102524407SQ201110422518
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者殷光玲, 黄远英 申请人:广东汤臣倍健生物科技股份有限公司