专利名称：真菌代谢产物桥南霉素及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗肿瘤坏死因子的一种新结构化合物的分离纯化方法和应用，属于药物学范畴。
背景技术：
肿瘤坏死因子-alpha(TNF-a )的过表达是导致目前临床上尚不能完全医治的多种疾病，如内风湿性关节炎、g罗恩病、脑细胞缺血性坏死等的一个重要原因。目前，针对这类疾病采取的治疗方式是延缓和阻止疾病的进展、减轻疾病造成的疼痛，包括采用糖皮质激素(如强的松)、非甾体抗炎药(如C0X-2抑制剂)和免疫抑制剂(如阿贝西普)等，但这类药物均不能根治疾病。针对TNF-α的蛋白质性质开发出的抗体类拮抗剂类药物，如依那西普^tanerc印t)、英夫利昔(Infliximab)、阿达木单抗(Adalimumab)等，能利用抗原-抗体相互结合的特性与过量表达的TNF-α结合，起到拮抗TNF-α的作用。但这类生物拮抗剂价格昂贵，一年的治疗费用约需1万美元，而且只能采取注射的方式给药，这给患者带来诸多不便。小分子的可口服的TNF-α抑制剂药物，具有TNF-α生物拮抗剂那样作用靶点明确的优点，又没有给药不便的弊病，是目前亟待开发的新型药物，但到目前为止，尚没有一个针对TNF-α过表达的小分子药物问世。中国专利CN101^9161公开一种PET显像剂前体异喹啉甲酰胺衍生物的合成方法，属于稳定同位素标记前体的合成领域，该发明采用a)甘氨酸与适量摩尔比的邻氯苯甲酰氯在碱性环境下酰化反应得到2-氯马尿酸；b)使(a)中得到的2-氯马尿酸与苯甲醛在适宜的温度下环化反应，再加入适量的催化剂分子重排得到1-(2-氯苯基)异喹啉-3-甲酸；c)使1-(2-氯苯基)异喹啉-3-甲酸与卤代试剂反应后氨解得到通式为(I)的化合物。该合成工艺缩短了合成路线，降低了合成成本，并且简便实用，具有较高的收率。中国专利CN102099352A公开一种含有式(I)所示的喹啉甲酰胺衍生物或其药理学上可接受的盐作为有效成分的STAt3抑制剂，式中，W表示键或亚烷基链，X表示0、S、NR34，Rl R8和R34表示H、卤素、烷基、苯基、呋喃基、噻吩基等。
发明内容
本发明的目的是提供一种真菌代谢产物桥南霉素及其制备方法和应用。所述真菌代谢产物桥南霉素为新结构化合物QR，9S)-4’ -hydroxy-2-methyl-3—oxo—l， 3,3',9a-tetrahydro-2H-spiro-oxazolo[3,2-a]indole-9,2' -pyrrolo[2,3-b]quinoline]-3’-carboxamide，，分子式为C22H18N4O4,分子量为402，命名为桥南霉素；其结构
式如下
权利要求
1.真菌代谢产物桥南霉素，其特征在于为化合物OR，9S)-4’-hydrOXy-2-methyl-3-oxo-1’ 3,3',9a-tetrahydro-2H-spiro-oxazolo[3,2~a]indoie_9，2' -pyrro丄ο[2，3~b]quinoline]_3，-carboxamide，，分子式为 C22H18N4O4,分子量为 402 ；其结构式如下
2.如权利要求1所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)发酵生成制作种子平板，以划线方式接种真菌，将真菌发酵培养；2)分离纯化(1)将真菌以固体PDA平板发酵，收集菌体，以乙酸乙酷、甲醇溶液浸提，合并提取液， 减压浓缩得到浸膏，将浸膏分别用KOAc水溶液、MeOH与石油醚溶液处理，分別保留KOAc 相和MeOH相，丢弃水相和石油醚相，处理后的粗提物过中压RP-18反相层析柱，依次以H20、 30% MeOH,50% MeOH和100% MeOH洗脱，其中50% MeOH洗脱的组分按200mL/管收集，以薄层层析TLC检查，合并含有桥南霉素的不同组份；(2)将含有桥南霉素的组份再次通过RP-18中压反相柱层析分离，以40%MeOH和45% MeOH两个梯度洗脱，分部收集，合并有桥南霉素的组份，再通过一次以石油醚/丙酮为洗脱剂的硅胶层析柱即可纯化出真菌代谢产物桥南霉素。
3.如权利要求2所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述发酵采用葡萄糖-土豆-琼脂斜面，配方为葡萄糖20g，琼脂15g，土豆200g，自来水定容至1し
4.如权利要求2所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述以划线方式是将种子平板用无菌小刀划成3mmX3mm的小块，每个直径IOmm的发酵平板上放置3个小块。
5.如权利要求2所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于在步骤1)中， 所述发酵培养的条件为在观で的培养箱中发酵培养5天。
6.如权利要求2所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于在步骤2)第 (1)部分中，所述乙酸乙酯与甲醇的体积比为85 15。
7.如权利要求2所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于在步骤2)第 (1)部分中，所述浸提的次数为3次。
8.如权利要求2所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于在步骤2)第(1)部分中，所述KOAc水溶液中的KOAc与H2O的体积比为KOAc H2O = 1 1 ；所述 MeOH与石油醚的体积比可为MeOH 石油醚=1 1。
9.如权利要求2所述的真菌代谢产物桥南霉素的制备方法，其特征在于在步骤2)第(2)部分中，所述石油謎/丙酮的体积比为20 1。
10.如权利要求1所述真菌代谢产物桥南霉素在制备抗炎症药物或其他具有生物活性的先导物中的应用。
全文摘要
真菌代谢产物桥南霉素及其制备方法和应用，涉及抗肿瘤坏死因子的一种新结构化合物的分离纯化方法和应用。所述真菌代谢产物桥南霉素为C22H18N4O4，分子量为402，属于喹啉甲酰胺的衍生物，白色粉末，比旋光度[α]D＝-27.9(C＝0.43，in MeOH)，易溶于甲醇，难溶于氯仿等低极性溶剂。该化合物的结构至今未见报道。在TNF-α拮抗剂筛选的细胞模型上，该化合物表现出很好的拮抗活性，所述真菌代谢产物桥南霉素可用于制备抗炎症药物或其他具有生物活性的先导物。先发酵生成，再分离纯化所述真菌代谢产物桥南霉素可用于制备抗炎症药物或其他具有生物活性的先导物。
文档编号C12R1/66GK102584852SQ201110458140
公开日2012年7月18日 申请日期2011年12月30日 优先权日2011年12月30日
发明者刘军亮, 徐庆妍, 胡志钰, 郑忠辉, 黄耀坚 申请人:厦门大学