专利名称：基质金属蛋白酶9的抗体的制作方法
技术领域：
本发明是在细胞外酶、细胞外基质酶、蛋白酶和免疫学的领域内。
背景技术：
基质金属蛋白酶(MMP)是参与形成和重塑细胞外基质的细胞外酶家族。这些酶含有保守催化域，在所述保守催化域中，锌原子由三个组氨酸残基配位。当前，已知这一家族的超过20名成员，所述成员被组织成包括胶原酶、明胶酶、溶基质素(stromelysin)、基质溶素(matrilysin)、釉质溶素(enamelysin)和膜MMP在内的若干群组。MMP2和MMP9属于基质金属蛋白酶的明胶酶群组。除了含有大多数MMP所共有的信号肽、前肽、催化、锌结合和血液结合素样域以外，明胶酶还含有多个纤维结合蛋白样域和O-糖基化域。异常活性的某些MMP已显示在肿瘤生长、癌转移、发炎和血管疾病中起作用。参见，例如胡(Hu)等人(2007)自然评论:药物发现(Nature Reviews:Drug Discovery)6:480-498。因此，在特定治疗环境中会需要抑制一种或一种以上MMP的活性。然而，某些其它MMP的活性常为正常功能所必需。由于大多数MMP抑制剂靶向保守催化域，且因此抑制许多不同的MMP，故其治疗性使用已引起因为必需的非致病相关MMP受到抑制而导致的副作用。纵使有这一问题，已证明还是难以开发对特定MMP具有特异性的抑制剂，因为酶促活性的抑制通常需要抑制剂靶向催化域。因此，基质金属蛋白酶酶促活性的大多数抑制剂很可能与一种以上MMP反应，归因于所述一种以上MMP的催化域中的同源性。因而，仍然存在对特异性抑制单个MMP的催化活性且不与其它MMP反应的治疗试剂的需求。
发明内容
本发明提供了涉及结合到基质金属蛋白酶-9 (MMP9)蛋白质(MMP9也称为明胶酶-B)上的结合蛋白(例如抗体和其抗原结合片段)的组合物和使用方法，其中所述结合蛋白包含免疫球蛋白(Ig)重链(或其功能片段)和Ig轻链(或其功能片段)。本发明另外提供特异性结合到MMP9上且不结合到其它相关基质金属蛋白酶上的MMP9结合蛋白。所述MMP9结合蛋白应用于有必要或需要获得MMP9的特异性调节(例如抑制)(例如不直接影响其它基质金属蛋白酶的活性)的应用中。因此，在本发明的某些实施例中，抗MMP9抗体是MMP9的活性的特异性抑制剂 。具体地说，本文所公开的MMP9结合蛋白将适用于抑制MMP9,同时允许其它相关基质金属蛋白酶的正常功能。因此，本发明尤其提供:
1.一种MMP9结合蛋白，其包含免疫球蛋白重链或其功能片段和免疫球蛋白轻链或其功能片段，其中所述蛋白不结合到除MMP9以外的基质金属蛋白酶上。2.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述重链包含选白SEQ ID NO:13到SEQ IDNO: 15中的一者或一者以上的互补决定区(CDR)，且所述轻链包含选白SEQ ID N0:16到SEQID NO:18中的一者或一者以上的⑶R。3.根据实施例2所述的蛋白质，其中所述重链包含选自由SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:5到SEQ ID NO:8组成的群组的可变区，且所述轻链包含选自由SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:9到SEQ ID NO:12组成的群组的可变区。4.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述重链是IgG。5.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述轻链是K链。6.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述蛋白质对MMP9的结合抑制了 MMP9的酶促活性。7.根据实施例6所述的蛋白质，其中所述抑制是非竞争性的。8.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述重链由具有选自由SEQ ID NO:19到SEQID NO:22组成的群组的核苷酸序列的聚核苷酸编码，且所述轻链由具有选自由SEQ ID NO:23到SEQ ID NO:26组成的群组的核苷酸序列的聚核苷酸编码。9.一种载体，其包含一种或一种以上聚核苷酸，所述聚核苷酸具有选自由SEQ IDNO:19到SEQ ID NO:26组成的群组的核苷酸序列。10.一种细胞，其包含根据实施例9所述的载体。11.一种医药组合 物，其包含根据实施例1所述的蛋白质。12.一种医药组合物，其包含根据实施例9所述的载体。13.一种医药组合物，其包含根据实施例10所述的细胞。
图1展示小鼠单克隆抗MMP9抗体(AB0041)的重链可变区的氨基酸序列，以及重链的人类化变异体的氨基酸序列(VH1-VH4)，所述氨基酸序列经比对以展示由人类化得到的构架氨基酸序列中的差异。CDR以斜体形式展示，且人类化变异体中与亲本小鼠单克隆相比不同的氨基酸加下划线。图2展示小鼠单克隆抗MMP9抗体(AB0041)的轻链可变区的氨基酸序列，以及这一轻链的人类化变异体的氨基酸序列(VH1-VH4)，所述氨基酸序列经比对以展示由人类化得到的构架氨基酸序列中的差异。CDR以斜体形式展示，且人类化变异体中与亲本小鼠单克隆相比不同的氨基酸加下划线。图3展示MMP9蛋白质的示意图。
具体实施例方式除非另外指明，否则本发明的实践采用细胞生物学、毒理学、分子生物学、生物化学、细胞培养、免疫学、肿瘤学、重组DNA和相关领域中的标准方法和常规技术，这是处于此项技术的技能范围内的。所述技术描述于文献中，且从而可供所属领域的技术人员使用。参见，例如阿尔贝茨B.(Alberts, B.)等人细胞分子生物学(Molecular Biologyof the Cell) ”,第5版,加兰科学出版公司(Garland Science),纽约州纽约(New York,NY), 2008 ;富特D.(Voet, D.)等人“基础生物化学:分子水平下的生命(Fundamentals ofBiochemistry:Life at the Molecular Level) ”,第 3 版，约翰威立父子出版公司(JohnWiley&Sons),新泽西州霍伯肯(Hoboken, NJ), 2008 ;萨姆布鲁克 J.(Sambrook, J.)等人，“分子克隆:实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual) ”,第3版,冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press), 2001 ;奥苏贝尔 F.(Ausubel, F.)等人，“分子生物学实验指南(Current Protocols in Molecular Biology) ”,约翰威立父子出版公司，纽约，1987和定期更新；弗莱士尼R.1.(Freshney, R.1.)，“动物细胞培养:基础技术手册(Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique) ”,第 4 版，约翰威立父子出版公司，新泽西州萨默塞特(Somerset, NJ), 2000 ;和“酶学方法(Methods inEnzymology) ”丛书,学术出版社(Academic Press),加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego,CA)。此外，参见例如“免疫学实验指南(Current Protocols in Immunology)”，(R科伊科(R-Coico)丛书编辑)，威立出版公司(Wiley)，2010年8月最新更新。MMP9结合蛋白本发明提供结合到基质金属蛋白酶-9 (MMP9)蛋白质(MMP9也称为明胶酶-B)上的结合蛋白(例如抗体和其抗原结合片段)。本发明的结合蛋白通常包含免疫球蛋白(Ig)重链(或其功能片段)和Ig轻链(或其功能片段)。本发明另外提供特异性结合到MMP9上且不结合到其它基质金属蛋白酶(例如MMPl、MMP2、MMP3、MMP7、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13)上的 MMP9 结合蛋白。因此，所述特异性MMP9结合蛋白一般不明显或可检测地与非MMP9基质金属蛋白酶交叉反应。特异性结合MMP9的MMP9结合蛋白应用于有必要或需要获得MMP9的特异性调节(例如抑制)(例如不直接影响其它基质金属蛋白酶的活性)的应用中。在本发明的某些实施例中，抗MMP9抗体是MMP9活性的抑制剂，且可以是MMP9的特异性抑制剂。具体地说，本文所公开的MMP9结合蛋白将适用于抑制MMP9，同时允许其它相关基质金属蛋白酶的正常功能。“MMP的抑制剂”或“MMP9活性的抑制剂”可以是抗体或其抗原结合片段，其直接或间接抑制MMP9活性，包括(但不限于)酶促加工、抑制MMP9对其底物的作用(例如通过抑制底物结合、底物裂解等)等。本发明还提供特异性结合到非小鼠MMP9 (例如人类MMP9、猕猴MMP9和大鼠MMP9)的MMP9结合蛋白上。本发明还提供充当非竞争性抑制剂的MMP9结合蛋白(例如抗MMP9抗体和其功能片段)。“非竞争性抑制剂”是指抑制剂在远离酶的底物结合位点的位点处结合，且由此可结合酶并实现抑制活性，无论酶是否结合到其底物上。所述非竞争性抑制剂可例如提供可实质上不依赖于底物浓度的抑制水平。本发明的MMP9结合蛋白(例如抗体和其功能片段)包括结合MMP9(尤其人类MMP9)的MMP结合蛋白，且其具有与本文所公开的重链多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或95%以上氨基酸序列一致性的重链多肽(或其功能片段)。
本发明的MMP9结合蛋白(例如抗体和其功能片段)包括结合MMP9(尤其人类MMP9)的MMP结合蛋白，且其具有与本文所公开的重链多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或95%以上氨基酸序列一致性的轻链多肽(或其功能片段)。本发明的MMP9结合蛋白(例如抗体和其功能片段)包括结合MMP9(尤其人类MMP9)且具有重链多肽(或其功能片段)的MMP结合蛋白，所述重链多肽(或其功能片段)具有如本文所公开的重链多肽的互补决定区(“CDR”)和轻链多肽(或其功能片段)的CDR。如本文中所用，在核酸和多肽的情形下，“同源性”或“一致性”或“相似性”是指分别基于氨基酸序列或核酸序列的比对的两个多肽或两个核酸分子之间的关系。同源性和一致性可各自通过比较每一个序列中的位置来测定，所述序列可出于比较的目的进行比对。当经比较的序列中的等效位置被相同碱基或氨基酸占据时，那么分子在所述位置处是一致的；当等效位点被相同或相似氨基酸残基(例如空间和/或电子性质上相似)占据时，那么分子可被称为在所述位置处同源(相似)。作为同源性/相似性或一致性的百分比的表达是指在经比较的序列所共有的位置处一致或相似的氨基酸的数目的函数。在比较两个序列时，不存在残基(氨基酸或核酸)或存在额外残基也降低一致性和同源性/相似性。如本文所用，“一致性”意指当序列经比对以使序列匹配最大化(即，考虑间隙和插入)时，在两个或两个以上序列的相应位置处一致的核苷酸或氨基酸残基的百分比。序列通常经比对以达成在指定区内的最大对应性，所述指定区例如是长度为至少约20、25、30、35>40>45>50>55>60>65个或65个以上氨基酸或核苷酸、且可最大达到参考氨基酸或核苷酸的全长的区。对于序列比较，通常一个序列充当参考序列，将测试序列与其比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机程序，必要时，指定子序列坐标，且指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法基于指定的程序参数来计算测试序列相对于参考序列的序列一致性百分比。适于 测定序列一致性百分比的算法的实例是BLAST和BLAST2.0算法，所述算法分别描述于阿特休尔(Altschul)等人(1990)分子生物学杂志(J.Mol.Biol.) 215:403-410和阿特休尔等人(1977)核酸研究(Nucleic Acids Res.) 25:3389-3402中。执行BLAST分析的软件可公开通过国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation) (www.ncb1.nlm.nih.gov)获得。其它不例性算法包括 ClustalW(希金斯D.(Higgins D.)等人(1994)核酸研究 22:4673-4680),其可在 www.eb1.ac.uk/Tools/clustalw/index, html 获得。不一致的残基位置可因保守氨基酸取代而不同。保守氨基酸取代是指具有相似侧链的残基的可交换性。举例来说，具有脂肪族侧链的氨基酸群组是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；具有脂肪族-羟基侧链的氨基酸群组是丝氨酸和苏氨酸；具有含酰胺侧链的氨基酸群组是天冬酰胺和谷氨酰胺；具有芳香族侧链的氨基酸群组是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；具有碱性侧链的氨基酸群组是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；且具有含硫侧链的氨基酸群组是半胱氨酸和蛋氨酸。两个核酸之间的序列一致性还可从两个分子在严格条件下彼此杂交方面描述。杂交条件可根据此项技术中的标准方法(参见，例如萨姆布鲁克等人，分子克隆:实验室手册，第2版，(1989)冷泉港出版公司(Cold Spring Harbor),纽约)进行选择。严格杂交条件的一个实例是在50°C或50°C以上和0.lXSSC(15mM氯化钠/1.5mM柠檬酸钠)下杂交。严格杂交条件的另一实例是在42°C下在以下溶液中孵育过夜:50%甲酰胺、5XSSC(150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(ρΗ7.6)、5Χ登哈特氏溶液(Denhardt' s solution)、10%硫酸葡聚糖和20mg/ml变性的经剪切的鲑精DNA ;随后在约65°C下在0.1XSSC中洗涤过滤器。严格杂交条件是至少如上述代表性条件般严格的杂交条件，其中如果条件如上述特定严格条件至少约80%般严格、通常至少90%般严格，那么所述条件被视为至少如上述特定严格条件般严格。因此，本发明提供例如抗体或其抗原结合片段，其包含:重链可变区多肽，其与本文所述的重链可变区的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5到SEQ ID NO:8)具有至少80%、85%、90%、9 5%或95%以上的氨基酸序列一致性；和可变轻链多肽，其与本文所述的轻链多肽的氨基酸序列(例如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:9到SEQ ID NO:12)具有至少80%、85%、90%、95%或95%以上的氨基酸序列一致性。以下更详细地描述本发明的抗MMP9抗体的实例。技述MMP9结合蛋白包括抗体和其功能片段。如本文所用的术语“抗体”意指经分离的或重组多肽结合剂，其包含特异性结合抗原的抗原决定基的肽序列(例如可变区序列)。所述术语以其最广泛的意义使用且特定涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、人类抗体、人类化抗体、嵌合抗体、纳米抗体、双功能抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及包括(但不限于)Fv、scFv、Fab、Fab'、F(ab' )2和Fab2的抗体片段,只要其展示所需生物学活性即可。术语“人类抗体”是指除可能的非人类CDR区以外含有人类来源序列的抗体，且不暗示存在免疫球蛋白分子的完整结构，仅暗示抗体在人类中具有最低免疫原性作用(即，不诱导对其自身产生抗体)。“抗体片段”包含全长抗体的一部分，例如全长抗体的抗原结合区或可变区。所述抗体片段在本文中也可称为“功能片段”或“抗原结合片段”。抗体片段的实例包括Fab、Fab' >F(ab/ )dPFv片段；双功能抗体；线性抗体(萨帕塔(Zapata)等人(1995)蛋白质工程(Protein Eng.)8(10) =1057-1062);单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。木瓜蛋白酶消化抗体产生:两个一致的抗原结合片段，称为“Fab”片段，所述片段各具有单个抗原结合位点；和剩余的“Fe”片段(一种反映容易结晶的能力的名称)。胃蛋白酶处理产生F(ab' )2片段，其具有两个抗原组合位点且仍然能够使抗原交联。“Fv”是含有完整抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。这一区由呈紧密、非共价缔合形式的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚物组成。在这一构型中，每一个可变域的三个互补决定区(CDR)相互作用以界SVh-'二聚物表面上的抗原结合位点。六个CDR共同赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或仅包含对抗原具有特异性的六个CDR中的三者的经分离的Vh或 '区)也具有识别和结合抗原的能力，不过亲和力通常比完整Fv片段低。除重链和轻链可变区以外，“Fab”片段还含有轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CH1)。Fab片段起初在木瓜蛋白酶消化抗体后观察到。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于F(ab,)片段在重链CH1域的羧基端含有若干其它残基，所述残基包括来自抗体铰链区的一个或一个以上半胱氨酸。F(ab' )2片段含有两个Fab片段，所述Fab片段接近铰链区由二硫键连接，且起初在胃蛋白酶消化抗体之后观察到。Fab' -SH在本文中是恒定域的半胱氨酸残基携有游离硫醇基的Fab'片段的名称。抗体片段的其它化学偶合也是已知的。
来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可基于其恒定域的氨基酸序列而被指定为两个明确不同类型(称为K和λ)中的一者。视其重链恒定域的氨基酸序列而定，免疫球蛋白可被指定成5个主要种类:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且数个这些种类可进一步分为子类(同型)，例如IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。“单链Fv”或“sFv”或“scFv”抗体片段包含抗体的Vh和\域，其中这些域以单个多肽链的形式存在。在一些实施例中，Fv多肽另外包含在Vh和\域之间的多肽连接子，所述多肽连接子使sFv能够形成用于抗原结合的所需结构。对于sFv的综述，参见普吕克通(Pluckthun),单克隆抗体的药理学(The Pharmacology of Monoclonal Antibodies),第113卷(罗森堡(Rosenburg)和穆尔(Moore)编)施普林格出版公司(Springer-Verlag),纽约，第269页到第315页(1994)。术语“双功能抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含与相同多肽链(Vh-')中的轻链可变域(')连接的重链可变域(Vh)。通过使用过短而不允许在同一链上的两个域之间配对的连接子，所述域被迫与另一链的互补域配对，从而产生两个抗原结合位点。双功能抗体另外描述于例如EP404，097、W093/11161和霍林格(Hollinger)等人(1993)美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sc1.)美国 90:6444-6448 中。“经分离的”抗体是已鉴别且白其天然环境的组分中分离和/或回收的抗体。其天然环境的组分可包括酶、激素和其它蛋白性或非蛋白性溶质。在一些实施例中，经分离的抗体经纯化(I)达到如由洛利法(Lowry method)测定大于抗体的95重量％,例如大于99重量％;(2)达到例如通过使用旋杯测序仪足以获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或⑶达到通过凝胶电泳(例如SDS-PAGE)在还原或非还原性条件下且利用考马斯蓝(Coomassie blue)或银染色检测均质。由于抗体天然环境中的至少一种组分将不存在，故术语“经分离的抗体”包括在重组细胞内的原位抗体。在某些实施例中，经分离的抗体通过至少一个纯化步骤制备。如本文所用，“免疫反应性”是指抗体或其片段对氨基酸残基序列(“结合位点”或“抗原决定基”)具有特异性，然而如果与其它肽/蛋白质交叉反应，那么在其被调配以供人类使用的投与的水平下无毒性。“抗原决定基”是指能够与抗体或其抗原结合片段形成结合相互作用的抗原部分。抗原决定基可以是线性肽序列(即，“连续的”)或可由非相连氨基酸序列组成(即，“构象的”或“不连续的”)。术语“优选结合”意指结合剂以与其结合无关氨基酸序列相比较大的亲和力结合到结合位点上。抗MMP9抗体可从重链和轻链的CDR方面描述。如本文所用的术语“CDR”或“互补决定区”打算意指在重链和轻链多肽两者的可变区内发现的非相连抗原组合位点。这些特定区已由以下描述:卡巴特(Kabat)等人，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)252:6609-6616(1977);卡巴特等人，美国卫生和公共服务部(U.S.Dept, of Health and HumanServices), “免疫学相关蛋白质的序列(Sequences of proteins of immunologicalinterest) ”(1991);乔塔(Chothia)等人，分子生物学杂志196:901-917(1987);和麦卡勒姆(MacCallum)等人，分子 生物学杂志262:732-745 (1996)，其中定义包括当针对彼此比较时氨基酸残基的重叠或子集。尽管如此，涉及抗体的CDR或接枝的抗体或其变异体的任一定义的应用打算处于如本文中定义和使用的术语的范围内。涵盖如由以上引用的参考文献中的每一者定义的CDR的氨基酸残基作为比较阐述于以下表I中。
表 1:CDR 定义
权利要求
1.一种MMP9结合蛋白，其包含 免疫球蛋白重链多肽或其功能片段，和 免疫球蛋白轻链多肽或其功能片段， 其中所述MMP9结合蛋白特异性结合MMP9。
2.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白结合人类MMP9的抗原决定基，所述抗原决定基包含氨基酸残基R162、E111、D113和1198。
3.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白与抗体竞争结合到人类MMP9上，所述抗体包含重链多肽。
4.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白与抗体竞争结合到人类MMP9上，所述抗体包含重链多肽，所述重链多肽包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5到SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白与抗体竞争结合到人类MMP9上，所述抗体包含轻链多肽，所述轻链多肽包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:9到SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白与抗体竞争结合到人类MMP9上，所述抗体包含重链多肽和轻链多肽，所述重链多肽包含SEQ ID NO: 13到SEQID NO:15的互补决定区CDR，所述轻链多肽包含SEQ ID NO:16到SEQ ID NO:18的CDR。
7.根据权利要求6所述的MMP9结合蛋白，其中所述重链多肽包含SEQID N0:13到SEQID NO: 15的互补决定区CDR，且所述轻链多肽包含SEQ ID N0:16到SEQ ID N0:18的CDR。
8.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白与抗体竞争结合到人类MMP9上，所述抗体包 含重链多肽和轻链多肽，所述重链多肽包含选自由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5到SEQ ID NO:8组成的群组的可变区，所述轻链多肽包含选自由SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:9到SEQ ID NO:12组成的群组的可变区。
9.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述重链多肽是IgG。
10.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白对MMP9的所述结合抑制MMP9的酶促活性。
11.根据权利要求10所述的MMP9结合蛋白，其中所述抑制是非竞争性的。
12.根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白，其中所述MMP9结合蛋白与抗体竞争结合到人类MMP9上，所述抗体包含重链多肽和轻链多肽，所述重链多肽由具有选自由SEQ ID NO:19到SEQ ID NO:22组成的群组的核苷酸序列的聚核苷酸编码，所述轻链多肽由具有选自由SEQ ID NO:23到SEQ ID NO:26组成的群组的核苷酸序列的聚核苷酸编码。
13.—种经分离的核酸，其包含编码以下的核苷酸序列: 重链多肽，其包含SEQ ID N0:13到SEQ ID NO: 15的互补决定区⑶R ;和/或轻链多肽,其包含 SEQ ID NO:16 到 SEQ ID NO:18 的 CDR0
14.根据权利要求13所述的经分离的核酸，其中所述重链多肽包含选自由SEQID NO:1、SEQID NO:3和SEQ ID NO:5到SEQ ID NO:8组成的群组的氨基酸序列。
15.根据权利要求13所述的经分离的核酸，其中所述轻链多肽包含选自由SEQID NO:2、SEQID NO:4和SEQ ID NO:9到SEQ ID NO:12组成的群组的氨基酸序列。
16.根据权利要求13所述的经分离的核酸，其包含选自由SEQID N0:19到SEQ ID NO:26组成的群组的序列。
17.一种载体，其包含根据权利要求13所述的经分离的核酸。
18..一种细胞，其包含根据权利要求17所述的载体。
19.一种医药组合物，其包含根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白。
20.一种医药组合物，其包含根据权利要求17所述的载体。
21.一种医药组合物，其包含根据权利要求18所述的细胞。
22.—种抑制具有具备MMP9活性的肿瘤或肿瘤相关组织的个体的MMP9活性的方法，所述方法包含: 以有效抑制MMP9活性的量投与所述个体根据权利要求19所述的医药组合物；其中MMP9活性在所述个体中被抑制。
23.—种检测患者的组织中MMP9表达的方法，所述方法包含: 使来自所述患者的组织样本与根据权利要求1所述的MMP9结合蛋白接触； 和检测存在或不存在MMP9 ； 其中MMP9存在于所述组织样本中指示所述MMP9表达于组织中。
全文摘要
本发明提供涉及结合到基质金属蛋白酶-9MMP9蛋白质(MMP9也称为明胶酶-B)上的结合蛋白(例如抗体和其抗原结合片段)的组合物和使用方法，其中所述结合蛋白包含免疫球蛋白Ig重链(或其功能片段)和Ig轻链(或其功能片段)。
文档编号C12P21/08GK103140240SQ201180041422
公开日2013年6月5日 申请日期2011年8月26日 优先权日2010年8月27日
发明者斯科特·艾伦·麦考利, 玛利亚·沃伊斯贝戈 申请人:吉联亚生物科技有限公司