专利名称：用于氯霉素残留检测的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种能识别氯霉素的单克隆抗体以及用于检测氯霉素的酶联免疫分析方法与试剂盒。
背景技术：
氯霉素作为一种广谱抗生素，具有良好的抗菌效果和低廉的价格，广泛用于治疗各种敏感菌感染。然而，氯霉素对造血系统有严重不良反应，可导致不可逆的再生障碍性贫血。许多国家和地区都制定了相关法律来控制氯霉素的使用，我国农业部也已将氯霉素列为禁用药，在所有动物源性食品中不得检出(农业部235号公告，2002)。目前国内外氯霉素的残留检测方法主要有仪器分析方法和免疫学分析方法。仪器方法主要是采用液相-质谱联用和气相-质谱联用，具有测定结果准确可靠，分离度好，能进行多残留分析等优点，但是需要昂贵的设备、复杂的前处理和专业的操作人员，在很大程度上限制了它的使用。酶联免疫检测方法(ELISA)是一种经典的免疫分析方法，具有特异性好、灵敏度高、操作简单、检测费用低等优点，适合兽药残留监控系统中批量检测。近年来，有关氯霉素残留ELISA检测方法的报道较多，如表I所示。表I近年有关氯霉素残留ELISA检测方法的研究
权利要求
1.一种能识别氯霉素的单克隆抗体，其特征在于，它是由保藏号为CCTCC N0C201152 的杂交瘤细胞HSBSA/4B7所分泌的。
2.权利要求I所述的杂交瘤细胞HSBSA/4B7，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为 CCTCC NO C201152o
3.包含权利要求I所述的单克隆抗体的试剂盒。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，该试剂盒是用于检测氯霉素的酶联免疫试剂盒。
5.一种检测氯霉素的酶联免疫方法，包括免疫原、包被原、抗体的制备以及样品的处理和检测，其步骤如下(1)将氯霉素半琥珀酸酯与牛血清白蛋白偶联得到免疫原；(2)将氯霉素半琥珀酸酯与卵清蛋白偶联得到包被原；(3)利用步骤(I)的免疫原免疫小鼠，通过细胞融合与筛选得到保藏号为CCTCCNO C201152的杂交瘤细胞HSBSA/4B7 ；(4)用保藏号为CCTCCNO C201152的杂交瘤细胞HSBSA/4B7制备单克隆抗体；(5)用步骤(2)的包被原包被固相载体；(6)将待测样品用乙酸乙酯提取，经氮气吹干和正己烷净化后，残渣用样品稀释液溶解得到待测物；(7)对步骤￠)的待测物进行酶联免疫检测，其中样品稀释液的组分及配比为=NaCl 8. 0g, KH2PO4O. 2g，Na2HPO4 · 12Η202· 9g，KCl O. 2g， 加双蒸水至1000mL。
6.权利要求I所述的单克隆抗体在制备检测氯霉素的酶联免疫试剂盒中的应用。
7.权利要求3或4所述的试剂盒在动物组织氯霉素残留检测中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种能识别氯霉素的特异性单克隆抗体和一种用于检测氯霉素的酶联免疫方法及试剂盒。本发明的单克隆抗体是由杂交瘤细胞HSBSA/4B7所分泌，该杂交瘤细胞保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NOC201152。本发明的酶联免疫检测方法包括免疫原、包被原、抗体的制备以及样品的处理和检测等步骤。本发明的单克隆抗体对氯霉素的识别专属性强，灵敏度高，酶联免疫方法及试剂盒的精密度好、准确性高。
文档编号C12R1/91GK102585009SQ20121004522
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月27日 优先权日2012年2月27日
发明者刘振利, 彭大鹏, 戴梦红, 易红波, 王玉莲, 袁宗辉, 谢长清, 陈冬梅, 陶燕飞, 黄玲利 申请人:华中农业大学