专利名称：枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种微生物制剂及其制备方法与应用，特别是枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法与应用，属于饲用微生物领域。
背景技术：
芽孢杆菌类微生物添加剂是利用正常微生物群成员中的有益芽孢杆菌制成的一种活菌制剂，具有天然耐高温和耐酸碱等优点。枯草芽孢杆菌是ー类好氧生长、可形成芽孢的革兰氏阳性菌，也是国内外公认可在饲料中直接添加使用的益生菌。枯草芽孢杆菌在制剂中以内生孢子形式存在，孢子进入动物肠道后能迅速萌发并分泌活性很强的蛋白酶、月旨肪酶、淀粉酶等，有助于降解饲料中某些复杂的化合物，产生有益代谢产物，促进营养物质 的消化吸收，达到促进动物生长和提高饲料转化率的目的。由于枯草芽孢杆菌具有丰富的多功能酶活性和促生长、适宜加工耐贮藏等优点，因而越来越受到相关研究人员的重视。
发明内容
本发明的目的在于提供ー种由单ー菌株生产的、生产成本低廉、用于促进肉禽饲料转化率、提高生产性能效果显著的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法以及该制剂的应用。本发明的目的是通过以下技术方案实现的枯草芽孢杆菌制剂，其特征在干，该制剂由枯草芽孢杆菌BS0903和载体制得，制剂中的枯草芽孢杆菌活菌含量为I X 109cfu/g 1父1011。血/^，所述枯草芽孢杆菌850903(8&(^11118 subtilis BS0903)，2012 年 3 月 14 日送中国典型培养物保藏中心保藏，株号BS0903，保藏编号为CCTCC NO :M2012078。所述的枯草芽孢杆菌菌种复苏传代后制成种子菌液并经发酵罐增菌培养后得到发酵罐菌液，发酵罐菌液与载体的重量百分比为发酵罐菌液80 92%、载体8 20%。所述的载体为淀粉、滑石粉、碳酸钙、高岭土中的ー种或任意几种的混合体。BS0903种子培养液由可溶性淀粉、牛肉粉、NaCl、水构成，其PH值为7. 2 7. 4，各组分的重量百分比为可溶性淀粉3%、牛肉粉O. 5%、NaClO. 5%、余量为水。所述发酵罐增菌培养的发酵罐培养液由可溶性淀粉、豆粉、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢ニ钾、磷酸ニ氢钾、水构成，其PH值为7. 8 8.0，各组分的重量百分比为可溶性淀粉5%、豆粉2%、酵母粉O. 8%、蛋白胨O. 5%、磷酸氢ニ钾O. 2%、磷酸ニ氢钾O. 1%、余量为水。枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
1)将枯草芽孢杆菌BS0903置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液，所述枯草芽孢杆菌BS0903 (Bacillus subtilis BS0903)，2012年3月14日送中国典型培养物保藏中心保藏，株号BS0903，保藏编号为CCTCC NO M2012078 ；
2)将步骤I)制得的种子菌液置于发酵罐培养液中进行发酵罐增菌培养，制得发酵罐菌液；所述发酵罐培养液由可溶性淀粉、豆粉、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢ニ钾、磷酸ニ氢钾、水构成，其PH值为7. 8 8. 0，各组分的重量百分比为可溶性淀粉5%、豆粉2%、酵母粉O. 8%、蛋白胨O. 5%、磷酸氢ニ钾O. 2%、磷酸ニ氢钾O. 1%、余量为水。
3)将发酵罐菌液和载体混合均匀，经离心喷雾干燥，制得枯草芽孢杆菌制剂，所述枯草芽孢杆菌制剂中的活菌含量为lX109cfu/g lX10ncfu/g，所述的发酵罐菌液与载体的重量百分比为发酵罐菌液80 92%、载体8 20%。步骤3)所述的载体为淀粉、滑石粉、碳酸钙、高岭土中的ー种或任意几种的组合体。步骤I)中所述种子培养液由可溶性淀粉、牛肉粉、NaCl、水构 成，其PH值为7. 2 7. 4，各组分的重量百分比为可溶性淀粉3%、牛肉粉O. 5%、NaClO. 5%、余量为水。上述枯草芽孢杆菌制剂的应用，其特征在于，将枯草芽孢杆菌制剂按家禽饲料或饮水重量O. I O. 2%的添加量添加到家禽饲料或饮水中，可提高饲料的转化率13. 8 21. 5%。最終制得的枯草芽孢杆菌制剂为干粉状。本发明米用了一种枯草芽抱杆菌BS0903 (Bacillus subtilis BS0903)菌株,该菌株是从历年来收集、保存的若干株健康家禽肠道内分离的枯草芽孢杆菌菌株中，经反复筛选后获得的一株具有较强纤维素酶、淀粉酶与碱性蛋白酶活性的枯草芽孢杆菌菌种。本发明简单合理、科学，生产稳定，成本低，保存与运输方便。枯草芽孢杆菌制剂经ロ服途径(饮水或拌料)饲喂肉禽后，具有改善消化功能，提高饲料转化率，促进生长的作用。通过区域试验应用表明，将该枯草芽孢杆菌制剂兑水或拌料后，饲喂肉禽，结果平均增重达13. 8 21. 5%，本发明是一种较为理想的提高肉禽生长性能的微生物制剂。
具体实施例方式实施例一
枯草芽孢杆菌制剂，该制剂由枯草芽孢杆菌BS0903和载体制得，发酵罐菌液与载体的重量百分比为发酵罐菌液80 92%、载体8 20%。载体为淀粉、滑石粉、碳酸钙、高岭土中的ー种或任意几种的混合体。制剂中的枯草芽孢杆菌活菌含量为lX109cfu/g
IX 10ncfu/g，枯草芽孢杆菌 BS0903 (Bacillus subtilis BS0903)，2012 年 3 月 14 日送中国典型培养物保藏中心保藏，株号BS0903，保藏编号为CCTCC NO :M2012078。枯草芽孢杆菌菌种复苏传代后制成种子菌液并经发酵罐增菌培养后得到发酵罐菌液，BS0903种子培养液由可溶性淀粉、牛肉粉、NaCl、水构成，其PH值为7. 2 7. 4，各组分的重量百分比为可溶性淀粉3%、牛肉粉O. 5%、NaClO. 5%、余量为水。发酵罐增菌培养的发酵罐培养液由可溶性淀粉、豆粉、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢ニ钾、磷酸ニ氢钾、水构成，其PH值为7. 8 8. 0，各组分的重量百分比为可溶性淀粉5%、豆粉2%、酵母粉O. 8%、蛋白胨
O.5%、磷酸氢ニ钾O. 2%、磷酸ニ氢钾O. 1%、余量为水。实施例ニ
枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
I)将枯草芽孢杆菌BS0903置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液，枯草芽孢杆菌BS0903 (Bacillus subtilis BS0903)，2012年3月14日送中国典型培养物保藏中心保藏，株号BS0903，保藏编号为CCTCC NO M2012078 ;种子培养液由可溶性淀粉、牛肉粉、NaCl、水构成，其PH值为7. 2 7. 4，各组分的重量百分比为可溶性淀粉3%、牛肉粉O. 5%、NaClO. 5%、余量为水；2)将步骤I)制得的种子菌液置于发酵罐培养液中进行发酵罐增菌培养，制得发酵罐菌液；发酵罐培养液由可溶性淀粉、豆粉、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢ニ钾、磷酸ニ氢钾、水构成，其PH值为7. 8 8. O,各组分的重量百分比为可溶性淀粉5%、豆粉2%、酵母粉O. 8%、蛋白胨O. 5%、磷酸氢ニ钾O. 2%、磷酸ニ氢钾O. 1%、余量为水。3)将发酵罐菌液和载体混合均匀，经离心喷雾干燥，制得枯草芽孢杆菌制剂，枯草芽孢杆菌制剂中的活菌含量为lX109cfu/g lX10ncfu/g，发酵罐菌液与载体的重量百分比为发酵罐菌液80 92%、载体8 20% ；载体为淀粉、滑石粉、碳酸钙、高岭土中的ー种或任意几种的组合体。 实施例三
将枯草芽孢杆菌BS0903菌种通过复苏传代后制成种子菌液，再将种子菌液经发酵罐增菌培养后与载体混合均匀，经离心喷雾干燥，制成活菌含量为lX109cfu/g lX10ncfU/g枯草芽孢杆菌制剂。将体重相近的7日龄苏禽黄鸡120羽，随机分为对照组和试验组，每组60羽，単独饲养。对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加基础日粮重量O. 15%的实施例一或实施例ニ制得的枯草芽孢杆菌制剂。饲养过程中保持试验组与对照组温度、湿度、光照、通风等条件一致。分别在14、21、28、35、42、49日龄进行称重，记录每羽鸡的体重以及每组鸡的耗料量，统计试验全期各组平均增重和采食量。结果试验组黄羽肉鸡平均增重15. 6%。实施例四
将体重相近的7日龄AA肉鸡100羽，随机分为对照组和试验组，每组50羽，単独饲养。对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加基础日粮重量O. 1%的实施例一或实施例ニ制得的枯草芽孢杆菌制剂。饲养过程中保持试验组与对照组温度、湿度、光照、通风等条件一致。分别在14、21、28、35、42、49日龄进行称重，记录每羽鸡的体重以及每组鸡的耗料量，统计试验全期各组平均增重和采食量。结果试验组AA肉鸡平均增重21. 5%。实施例五
将体重相近的14日龄高邮鸭80羽，随机分为对照组和试验组，每组40羽，単独饲养。对照组与试验组均饲喂基础日粮，试验组在饮水中添加饮水重量O. 2%的实施例一或实施例ニ制得的枯草芽孢杆菌制剂。饲养过程中保持试验组与对照组温度、湿度、光照、通风等条件一致。分别在21、28、35、42、49、56日龄进行称重，记录每羽鸭的体重以及每组鸭的耗料量，统计试验全期各组平均增重和采食量。结果试验组高邮鸭平均增重14. 7%。实施例六
将体重相近的14日龄扬州鹅80羽，随机分为对照组和试验组，每组40羽，単独饲养。对照组与试验组均饲喂基础日粮，试验组在饮水中添加饮水重量O. 2%的实施例一或实施例ニ制得的枯草芽孢杆菌制剂。饲养过程中保持试验组与对照组温度、湿度、光照、通风等条件一致。分别在28、42、56、70日龄进行称重，记录每羽鹅的体重以及每组鹅的耗料量，统计试验全期各组平均增重和采食量。结果试验组扬州鹅平均增重13.8%。
权利要求
1.一种枯草芽孢杆菌制剂，其特征在干，该制剂由枯草芽孢杆菌BS0903和载体制得，制剂中的枯草芽孢杆菌活菌含量为lX109cfu/g lX10ncfu/g，所述枯草芽孢杆菌BS0903(Bacillus subtilis BS0903)，2012年3月14日送中国典型培养物保藏中心保藏，株号BS0903，保藏编号为 CCTCC NO :M2012078。
2.根据权利要求I所述的枯草芽孢杆菌制剂，其特征在于，所述的枯草芽孢杆菌菌种复苏传代后制成种子菌液并经发酵罐增菌培养后得到发酵罐菌液，发酵罐菌液与载体的重量百分比为发酵罐菌液80 92%、载体8 20%。
3.根据权利要求I所述的枯草芽孢杆菌制剂，其特征在于，所述的载体为淀粉、滑石粉、碳酸钙、高岭土中的ー种或任意几种的混合体。
4.根据权利要求I所述的枯草芽孢杆菌制剂，其特征在干，BS0903种子培养液由可溶性淀粉、牛肉粉、NaCl、水构成，其PH值为7. 2 7. 4，各组分的重量百分比为可溶性淀粉3%、牛肉粉0. 5%, NaClO. 5%、余量为水。
5.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌制剂，其特征在干，所述发酵罐增菌培养的发酵罐培养液由可溶性淀粉、豆粉、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢ニ钾、磷酸ニ氢钾、水构成，其PH值为7. 8 8. 0，各组分的重量百分比为可溶性淀粉5%、豆粉2%、酵母粉0. 8%、蛋白胨0.5%、磷酸氢ニ钾0. 2%、磷酸ニ氢钾0. 1%、余量为水。
6.一种枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 1)将枯草芽孢杆菌BS0903置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液，所述枯草芽孢杆菌BS0903 (Bacillus subtilis BS0903)，2012年3月14日送中国典型培养物保藏中心保藏，株号BS0903，保藏编号为CCTCC NO M2012078 ； 2)将步骤I)制得的种子菌液置于发酵罐培养液中进行发酵罐增菌培养，制得发酵罐菌液；所述发酵罐培养液由可溶性淀粉、豆粉、酵母粉、蛋白胨、磷酸氢ニ钾、磷酸ニ氢钾、水构成，其PH值为7. 8 8. 0，各组分的重量百分比为可溶性淀粉5%、豆粉2%、酵母粉0. 8%、蛋白胨0. 5%、磷酸氢ニ钾0. 2%、磷酸ニ氢钾0. 1%、余量为水； 3)将发酵罐菌液和载体混合均匀，经离心喷雾干燥，制得枯草芽孢杆菌制剂，所述枯草芽孢杆菌制剂中的活菌含量为lX109cfu/g lX10ncfu/g，所述的发酵罐菌液与载体的重量百分比为发酵罐菌液80 92%、载体8 20%。
7.根据权利要求6所述的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤3)所述的载体为淀粉、滑石粉、碳酸钙、高岭土中的ー种或任意几种的组合体。
8.根据权利要求6所述的枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤I)中所述种子培养液由可溶性淀粉、牛肉粉、NaCl、水构成，其PH值为7. 2 7. 4，各组分的重量百分比为可溶性淀粉3%、牛肉粉0. 5%, NaClO. 5%、余量为水。
9.一种如权利要求I或6所述的枯草芽孢杆菌制剂的应用，其特征在于，将枯草芽孢杆菌制剂按家禽饲料或饮水重量0. I 0. 2%的添加量添加到家禽饲料或饮水中，可提高饲料的转化率13. 8 21. 5%。
全文摘要
枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法与应用，属于饲用微生物领域。该制剂由枯草芽孢杆菌BS0903和载体制得，制剂中的枯草芽孢杆菌活菌含量为1×109cfu/g～1×1011cfu/g，所述枯草芽孢杆菌BS0903(BacillussubtilisBS0903)，2012年3月14日送中国典型培养物保藏中心保藏，株号BS0903，保藏编号为CCTCC NOM2012078。枯草芽孢杆菌菌种复苏传代后制成种子菌液并经发酵罐增菌培养后得到发酵罐菌液，与载体混合后经离心喷雾干燥即制成枯草芽孢杆菌制剂。本发明简单合理、科学，生产稳定，成本低，保存与运输方便。枯草芽孢杆菌制剂经口服途径(饮水或拌料)饲喂肉禽后，具有改善消化功能，提高饲料转化率，促进生长的作用，本发明是一种较为理想的提高肉禽生长性能的微生物制剂。
文档编号C12N11/10GK102660534SQ20121013954
公开日2012年9月12日 申请日期2012年5月8日 优先权日2012年5月8日
发明者倪同艳, 张永强, 李德元, 童海兵, 苗晋锋, 许明, 龚建森 申请人:李德元