专利名称：一种检测五条染色体数目异常的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测方法，具体地说，本发明涉及一种检测五条染色体数目异常的方法。
背景技术：
21三体综合征又称唐氏综合征或先天愚型属常染色体畸变，是小儿染色体病中最常见的一种，活婴中发生率约1/(600 800)，母亲年龄愈大，本病的发病率愈高。约60%患儿在胎儿早期即夭折流产。21三体综合征会导致包括学习障碍、智能障碍和残疾等。另夕卜，13、18、X和Y染色体的非整倍性分别导致帕陶氏综合征、爱德华氏综合征、克莱恩费尔特综合征和特纳氏综合征，这些非整倍染色体导致的遗传病会不同程度地使人体发育失常和出现其它病变。一旦患儿出生，将给家庭带来巨大的痛苦，也给社会带来沉重的负担。目前，临床上用于检测唐氏综合征的手段主要是抽取孕妇血清，检测母体血清中妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)、游离hCGB亚基(早期两项)或甲型胎儿蛋白(AFP)和绒毛促性腺激素(HCG)和游离雌三醇(uE3)(中期三项)的指标，结合孕妇预产期、体重、年龄和采血时的孕周，计算出“唐氏儿”的危险系数，这样可以查出80%的唐氏儿和部分18三体，但不能确诊胎儿是否患病。唐氏筛查指数超出正常的孕妇应进行羊膜穿刺检查或绒毛检查，然后进行胎儿细胞染色体核型分析。而染色体核型分析的缺点是耗时长(一周以上)，技术要求相对较高，收费也较高。分子诊断，又称基因诊断，是一种应用高科技手段检测DNA和RNA，进而揭示基因的结构和表达的技术。该技术目前发展迅速，应用领域十分广泛。我们的方法应用多重PCR和毛细电泳的方法，具有灵敏、定量、快速、高通量等技术优势。我们的发明能为产科临床提供一种优越的分子诊断方法。
发明内容
本发明提供了一种同步扩增三十八个人类基因位点(男性三十八位点，女性 位点)的多重PCR方案，并能同步检测13、18、21、X和Y五条染色体数目异常的方法
及该方法的用途。根据本发明的第一方面，一种检测五条染色体数目异常的方法，用于同时检测包括21、13、18、X和Y染色体在内的五条染色体数目的非整倍性，包括:(I)、在所述五条染色体上分别选取七个基因，针对所选取的三十八的基因设计了三十八对引物(表I) ;(2)、利用以上引物组合进行多重PCR和毛细电泳；(3)、利用软件对电泳结果进行分析。优选地，所述染色体数目的非整倍性是指不同于正常人体的染色体数目的增加或者缺失。优选地，步骤(I)还包括在这五条染色体之外的其他染色体上选取三个基因作为对照(CK)。优选地，所述步骤(2)中的PCR模板为人类基因组DNA。
优选地，同一染色体的若干个基因尽量位于该染色体的不同区域；设计片段大小介于IOObp和400bp之间,相邻两片段大小之差一般为3 10bp。根据本发明的另一方面，一种采用前述方法的用途，所述的方法应用于采用有创和无创两种手段获得需要检测的临床样品的产前诊断。优选地，所述的有创手段通过羊膜穿刺获取羊水或胚胎绒毛膜细胞。优选地，所述的无创手段通过流式细胞仪筛选孕妇外周血得到胎儿细胞。由于采用了上述技术方案，本发明具有如下的有益效果:本发明人经过深入的研究，首次研发生产结合了 PCR和毛细电泳优势的“人类染色体非整倍性多重分子检测试剂盒”(以下简称“试剂盒”)。该试剂盒采用分子诊断的方法，不仅灵敏度和准确率高、耗时短(8小时)，而且能同时检测5种不同的先天遗传病，费用也相对低廉。这正 是目前临床急需的诊断手段，具有良好的市场应用前景。表1、人类染色体非整倍性分析各位点及引物序列表
权利要求
1.一种检测五条染色体数目异常的方法，用于同时检测包括21、13、18、X和Y染色体在内的五条染色体数目的非整倍性，包括:(I)、在所述五条染色体上分别选取七个基因，针对所选取的三十八的基因设计了三十八对引物；(2)、利用以上引物组合进行多重PCR和毛细电泳；(3)、利用软件对电泳结果进行分析。
2.如权利要求1所述的方法，所述染色体数目的非整倍性是指不同于正常人体的染色体数目的增加或者缺失。
3.如权利要求1所述的方法，步骤(I)还包括在这五条染色体之外的其他染色体上选取三个基因作为对照(CK)。
4.如权利要求1所述的方法，所述步骤(2)中的PCR模板为人类基因组DNA。
5.如权利要求1所述的方法，同一染色体的若干个基因尽量位于该染色体的不同区域；设计片段大小介于IOObp和400bp之间,相邻两片段大小之差一般为3 10bp。
6.一种如前述权利要求中的任一项所述的方法的用途，所述的方法应用于采用有创和无创两种手段获得需要检测的临床样品的产前诊断。
7.如权利要求6所述的用途，所述的有创手段通过羊膜穿刺获取羊水或胚胎绒毛膜细 胞。
8.如权利要求6所述的用途，所述的无创手段通过流式细胞仪筛选孕妇外周血得到胎儿细胞。
全文摘要
本发明涉及一种检测五条染色体数目异常的方法。用于同时检测包括21、13、18、X和Y染色体在内的五条染色体数目的非整倍性，包括(1)在所述五条染色体上分别选取七个基因，针对所选取的三十八的基因设计了三十八对引物；(2)利用以上引物组合进行多重PCR和毛细电泳；(3)利用软件对电泳结果进行分析。
文档编号C12Q1/68GK103074416SQ20121020420
公开日2013年5月1日 申请日期2012年6月20日 优先权日2012年6月20日
发明者吴勇, 徐冰 申请人:海尔施生物医药股份有限公司