植物耐逆性相关蛋白GmNF-YB8及其编码基因和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种植物耐逆性相关蛋白GmNF-YB8及其编码基因和应用。本发明所提供的蛋白质，是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加,且与植物耐逆性相关的由序列1衍生的蛋白质。本发明所提供的蛋白质可以特异的调控含有CCAAT-box顺式元件的基因的转录表达，可以提高植物的耐盐性，实验表明，GmNF-YB8转基因植株经盐胁迫处理后的存活率可达90.3%，远高于对照植株的28.8%的存活率。这为人为控制耐逆相关基因的表达提供了基础，将在耐逆性增强的植物育种中发挥重要作用。
【专利说明】植物耐逆性相关蛋白GmNF-YB8及其编码基因和应用【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物耐逆性相关蛋白GmNF-YB8及其编码基因和应用。
【背景技术】
[0002]干旱、高盐和低温等逆境胁迫严重制约着大豆的生长、发育。因此，了解大豆对逆境条件的应答与信号传导机制，提高大豆品种的抗逆性，成为大豆遗传研究及品种改良的重要任务之一。
[0003]在逆境胁迫下植物体内会产生一系列应答反应，伴随着许多生理生化及发育上的变化。明确植物对逆境的反应机制，将为抗逆基因工程研究和应用提供科学论据。目前，植物抗逆性研究已逐渐深入到细胞、分子水平，并与遗传学和遗传工程研究相结合，探索用生物技术来改进植物生长特性，其目的是提高植物对逆境的适应能力。
[0004]在干旱、高盐和低温等环境胁迫的逆境条件下，植物能够在分子、细胞和整体水平上做出相应的调整，以最大程度上减少环境所造成的伤害并得以生存。许多基因受胁迫诱导表达，这些基因的产物不仅能够直接参与植物的胁迫应答，而且能够调节其它相关基因的表达或参与信号传导途径，从而使植物避免或减少伤害，增强对胁迫环境的抗性。与胁迫相关的基因产物可以分为两大类:第一类基因编码的产物包括离子通道蛋白、水通道蛋白、渗透调节因子(蔗糖、脯氨酸和甜菜碱等)合成酶等直接参与植物胁迫应答的基因产物;第二类基因编码的产物包括参与胁迫相关的信号传递和基因表达调节的蛋白因子，如蛋白激酶、转录因子等。其中，转录因子在植物胁迫应答的基因表达调控中起着重要作用。
[0005]转录因子也称为反式作用因子，是能够与真核基因启动子区域中顺式作用元件发生特异性作用的DNA结合蛋白，通过它们之间以及与其它相关蛋白之间的相互作用，激活或抑制转录。转录因子的DNA结合区决定了它与顺式作用元件结合的特异性，而转录调控区决定了它对基因表达起激活或是抑制作用。此外，其自身活性还受到核定位及寡聚化等作用的影响。
[0006]目前已知在植物中与胁迫相关的转录因子主要有:具有AP2结构域的AP2(APETALA2) /EREBP (乙烯应答兀件结合蛋白，ethylene responsive element bindingprotein)转录因子家族、含有碱性区域和亮氨酸拉链的bZIP (basic region/leucinezipper motif transcription factors)类转录因子、含有保守的WRKY氨基酸序列的WRKY转录因子家族、结合CCAAT-box的主要核转录因子的CBF (CCAAT binding factor)类转录因子、含有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)和亮氨酸拉链的MYC家族和具有色氨酸簇(Trpcluster)的 MYB 家族。
[0007]NF-Y是一类结合顺式作用元件CCAAT-box的转录因子，特异的识别并结合许多真核生物组成型、诱导性和细胞周期依赖性基因的启动子或增强子中的顺式作用元件CCAAT-box,进而在转录水平调控这些基因的表达。NF-Y是由NF-YA、NF-YB和NF-YC三个不同亚基组成的杂合三聚体。NF-YB蛋白与NF-YC蛋白通过彼此的HFM保守域，采用头尾相接的方式形成异源二聚体互作平台，吸引NF-YA蛋白结合到这个二聚体平台从而形成具有活性的异源三聚体核转录因子。NF-Y通过NF-YA亚基上的DNA结合域结合到靶基因启动子部分的CCAAT盒，执行转录激活或转录抑制功能。NF-Y的三个亚基的保守域分别具有不同的蛋白结构域，其中NF-YA保守域具有DNA结合结构域(DNAbinding domain)和与NF-YB/C异源二聚体互作结构域(subunit interaction domain)。NF-YB和NF-YC蛋白保守域则由组蛋白折叠基序(Histone-fold motif)构成。其中NF-YB与H2B组蛋白折叠基序相似，而NF-YC与H2A组蛋白折叠基序相似，组蛋白基序由三个α螺旋和两个环组成，负责Η2Α/Η2Β 二聚体的形成。
[0008]由于植物的逆境耐性是由多基因调控的复杂性状，依靠导入单个功能性蛋白基因很难实现植物抗逆性的综合提高。因此，利用一个关键转录因子促进多个功能基因的表达，增强植物的抗逆性，已经成为植物抗逆基因工程的研究热点。
【发明内容】
[0009]本发明的目的是提供一种与植物耐逆性相关的蛋白质。
[0010]本发明所提供的蛋白质是一种结合CCAAT-box的核转录因子蛋白，名称为GmNF_YB8,来源于大豆属大豆(Glycine max L.),是如下(a)或(b):
[0011](a)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
[0012](b)将序列I的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且与植物耐逆性相关的由序列I衍生的蛋白质。
[0013]序列I的蛋白质由188个氨基酸残基组成。
[0014]为了使(a)中的GmNF-YBS便于纯化，可在由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如下表所示的标签。
[0015]表标签的序列
[0016]
【权利要求】
1.蛋白质，是如下(a)或(b): Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b)将序列I的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且与植物耐逆性相关的由序列I衍生的蛋白质。
2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于:所述核酸分子为编码权利要求1所述蛋白质的基因，所述基因为如下I)或2)或3)或4)的DNA分子: 1)编码序列是序列表中序列2所不的DNA分子； 2)序列表中序列2所示的DNA分子； 3)在严格条件下与I)或2)限定的DNA分子杂交且编码耐逆性相关蛋白的DNA分子； 4)与I)或2)或3)限定的DNA序列具有90%以上同源性，且编码耐逆性相关蛋白的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述核酸分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于:所述重组载体为重组表达载体或重组克隆载体；所述重组表达载体中启动所述基因转录的启动子为如下al)或a2): al) 35S启动子； a2) Pmin启动子。`
6.权利要求1所述蛋白质，或权利要求2或3所述核酸分子在调控植物耐逆性中的应用。
7.培育耐逆性转基因植物的方法，包括如下步骤:将编码权利要求1所述蛋白质的基因导入目的植物中，得到与所述目的植物相比耐逆性更高的转基因植物。
8.根据权利要求6所述的应用或权利要求7所述的方法，其特征在于:所述耐逆性为耐盐性。
9.根据权利要求7-9中任一所述的应用或方法，其特征在于:所述植物为双子叶植物或单子叶植物。
10.权利要求1所述的蛋白质在作为转录因子中的应用。
【文档编号】C12N1/21GK103509095SQ201210216174
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年6月27日 优先权日:2012年6月27日
【发明者】马有志, 徐兆师, 郑炜君, 李连城, 陈明 申请人:中国农业科学院作物科学研究所