一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，是将植物乳杆菌培养至稳定期后加入经过破壁处理的酿酒酵母，将发酵液离心得到菌泥，菌泥中混入保护剂进行真空干燥，将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉与低聚糖混合。本发明的方法简便、成本低，实现了废物资源化，适合工业化生产。
【专利说明】一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，属于食品生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]植物乳杆菌(L PIantarum)属于乳杆菌科中的乳杆菌属,革兰氏阳性菌,兼性厌氧，是人体胃肠道的益生菌群，代谢可以产生有机、细菌素、过氧化氢、双乙酰等多种天然抑菌物质，调整菌群之间的关系，维持和保证菌群最佳优势组合以及组合的稳定，阻止了致病菌的定殖与入侵，拮抗致病菌和有害微生物的生长及毒素的黏附，具有维持肠道菌群平衡的作用。
[0003]冷冻干燥技术为目前多数菌粉制作中常采用的一种方法，但是需要的设备昂贵，且处理量较少，不易在工业化中实现，而常压干燥菌粉存在干燥时间长，菌体容易污染杂菌的问题，解决干燥手段是植物乳杆菌产品市场化、降低成本的重要问题。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，其技术方案如下:植物乳杆菌培养至稳定期后加入经过破壁处理的酿酒酵母；将发酵液离心得到菌泥，菌泥中混入保护剂进行真空干燥，将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉与低聚糖混合。
[0005]所述保护剂组成为:以重量份数计，谷氨酸钠0.05-3%, Vc0.05-2%, L-半胱氨酸
0.05-1 %，甘油0.5-5 %，海藻糖5-15 %，蔗糖3-8 %，玉米淀粉10-25 %，玉米面10-25 %，其余为脱脂奶粉。
[0006]所述酿酒酵母为CGMCC 2.602或啤酒厂废酵母。
[0007]酿酒酵母CGMCC 2.602具有麦角甾醇产量高的优点，并且分泌谷胱甘肽。
[0008]所述植物乳杆菌为Lactobacillus plantarum Ml_UVs29,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC N0.2591，地址:北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏时间2008年7月14日。
[0009]所述酿酒酵母破壁方法可以为超声波法、化学法、高压匀浆法、冻融法或溶菌酶法中任--种。
[0010]所述破壁后酿酒酵母与植物乳杆菌发酵液体积比为1% -10%。
[0011]所述保护剂添加量为菌泥重量的0.1 % -1 %。
[0012]所述真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉先经过磨粉后与低聚糖混合。
[0013]所述低聚糖添加量为植物乳杆菌菌粉重量的1% -10%。
[0014]所述真空干燥方法为:温度为30~40°C，压强为-0.06~-0.1Mpa，真空干燥20h ~30h。
[0015]所述磨粉工艺如下:将真空干燥得到的干燥的植物乳杆活菌体于无菌磨粉机中磨粉，得到植物乳杆活菌粉。
[0016]所述植物乳杆菌种的发酵培养条件为:[0017]I) 一级种子液的培养
[0018]取上述已经活化培养的斜面种子，将菌落洗脱，以无菌操作加入到改良的MRS液体培养基，改良的MRS液体培养基成份除不含琼脂外，其他成分与含量同改良MRS琼脂斜面培养基，37 ± I °C培养24-28h，得到一级种子液；
[0019]2) 二级种子液的培养
[0020]将所得一级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%，培养温度37±1°C，培养时间24-28h，得到二级种子液；
[0021]3)三级种子液的培养
[0022]将所得二级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%，培养温度37± I°C，培养时间24-28h，得到三级种子液；
[0023]4)发酵增殖培养
[0024]将所得三级种子液接入改良的MRS液体培养基，按体积比计，接种量为10-15%，发酵温度37 ± 0.5°C，发酵时间22-26h发酵成熟。
[0025]本发明具有如下优点:
[0026]a)酿酒酵母可以产生麦角留醇和谷胱甘肽，真空干燥时对植物乳杆菌形成保护，提高了植物乳杆菌的存活率；
[0027]b)将含有麦角 留醇的植物乳杆菌制剂在常温条件下保存24个月活菌数未出现明显变化；
[0028]c)本发明的方法简便、成本低，实现了废物资源化，适合工业化生产，解决了冷冻干燥制备菌制剂的不易大规模生产的现状，具有很好的应用前景。
【具体实施方式】
[0029]植物乳杆菌的活化:
[0030]植物乳杆菌为Lactobacillus plantarum Ml_UVs29,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC N0.2591，地址:北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏时间2008年7月14日。
[0031]将植物乳杆菌接种于改良MRS琼脂斜面培养基上，然后放进培养箱中，在37±0.5°C的温度下培养24h，以固体培养基采用划线培养。
[0032]以在培养基中的浓度计，改良MRS琼脂斜面培养基组分为:蛋白胨10g/L，牛肉浸出物10g/L，酵母粉4g/L，葡萄糖3g/L，乙酸钠4g/L，柠檬酸二胺lg/L，土温801ml/L，琼脂15g/L (配制固体培养基时加入)，磷酸氢二钾lg/L，七水硫酸镁0.lg/L，七水硫酸锰0.05g/L0
[0033]改良MRS琼脂斜面培养基制备:按比例称取上述各培养基组分，放入大烧杯中，加入500mL蒸馏水，用药勺搅匀，在电炉上加热，边加热边搅拌至溶解，把烧杯从电炉上取下，加蒸懼水定容至所需体积1000mL,调pH至6.8,121°C灭菌15min。
[0034]植物乳杆菌培养方法:
[0035](a) 一级种子液的培养
[0036]取上述已经活化培养的斜面种子，将菌落洗脱，以无菌操作加入到改良的MRS液体培养基，改良的MRS液体培养基成份除不含琼脂外，其他成分与含量同改良MRS琼脂斜面培养基，37 ± I °C培养24h，得到一级种子液，活菌数为1.5X101QCfu/mL。
[0037](b) 二级种子液的培养
[0038]将所得一级种子液接入改良的MRS液体培养基，接种量10 % (体积比)，培养温度37±1°C，培养时间24h，得到二级种子液。
[0039](C)三级种子液的培养
[0040]将所得二级种子液接入改良的MRS液体培养基，接种量10 % (体积比)，培养温度37 ± I °C，培养时间24h，得到三级种子液。
[0041](d)发酵增殖培养
[0042]将所得三级种子液接入改良的MRS液体培养基，接种量10 % (体积比)，发酵温度37±0.5°C，发酵时间22h发酵成熟。经检测发酵增殖培养后植物乳杆菌Ml-UVs29为对数生长期，活菌数为2.4X101Qcfu/mL。
[0043]实施例1
[0044]植物乳杆菌培养至稳定期后加入体积比为I %的经过超声波破壁处理的酿酒酵母CGMCC 2.602。
[0045]酿酒 酵母培养采用麦芽汁培养基。
[0046]将得到的发酵液离心，菌泥中混入重量比为0.1 %的保护剂后进行真空干燥，所述保护剂组成为:谷氨酸钠0.05%，Vc0.05%, L-半胱氨酸0.05%，甘油0.5%，海藻糖5%，蔗糖3%，玉米淀粉10%，玉米面10%，其余为脱脂奶粉。
[0047]将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉经过磨粉后与I %低聚糖混合。
[0048]真空干燥方法为:温度为30°C,压强为-0.06Mpa,真空干燥20h。
[0049]结果见表1。
[0050]实施例2
[0051]植物乳杆菌培养至稳定期后加入体积比为5%的经过超声波破壁处理的酿酒酵母CGMCC 2.602。
[0052]酿酒酵母培养采用麦芽汁培养基。
[0053]将得到的发酵液离心，菌泥中混入重量比为0.5%的保护剂后进行真空干燥，所述保护剂组成为:谷氨酸钠2 %，Vc I %，L-半胱氨酸0.5 %，甘油2 %，海藻糖10 %，蔗糖5 %，玉米淀粉15%，玉米面15%，其余为脱脂奶粉。
[0054]将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉经过磨粉后与5%低聚糖混合。
[0055]真空干燥方法为:温度为35°C,压强为-0.08Mpa,真空干燥25h。
[0056]结果见表1。
[0057]实施例3
[0058]植物乳杆菌培养至稳定期后加入体积比为10%的经过超声波破壁处理的酿酒酵母 CGMCC 2.602。
[0059]酿酒酵母培养采用麦芽汁培养基。
[0060]将得到的发酵液离心，菌泥中混入重量比为0.5%的保护剂后进行真空干燥，所述保护剂组成为:谷氨酸钠3%，Vc 2%, L-半胱氨酸I%，甘油5%，海藻糖15%，蔗糖8%，玉米淀粉25%，玉米面25%，其余为脱脂奶粉。
[0061]将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉经过磨粉后与10%低聚糖混合。[0062]真空干燥方法为:温度为40°C，压强为-0.1Mpa,真空干燥30h。
[0063]结果见表1。
[0064]实施例4
[0065]植物乳杆菌培养至稳定期后加入体积比为8%的经过超声波破壁处理的啤酒厂废酵母。
[0066]酿酒酵母培养米用麦芽汁培养基。
[0067]将得到的发酵液离心，菌泥中混入重量比为0.5%的保护剂后进行真空干燥，所述保护剂组成为:谷氨酸钠1.5%，Vc 2%, L-半胱氨酸0.8%，甘油2%，海藻糖10%，蔗糖6%，玉米淀粉15%，玉米面15%，其余为脱脂奶粉。
[0068]将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉经过磨粉后与5%低聚糖混合。
[0069]真空干燥方法为:温度为35°C,压强为-0.08Mpa,真空干燥25h。
[0070]结果见表1。
[0071]表1
【权利要求】
1.一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下: 1)植物乳杆菌培养至稳定期后加入经过破壁处理的酿酒酵母； 2)将步骤I)得到的发酵液离心，菌泥中混入保护剂后进行真空干燥，所述保护剂组成为:谷氨酸钠0.05-3 %，Vc0.05-2 %，L-半胱氨酸0.05-1 %，甘油0.5-5 %，海藻糖5_15 %，蔗糖3-8%，玉米淀粉10-25%，玉米面10-25%，其余为脱脂奶粉； 3)将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉与低聚糖混合。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述酿酒酵母为CGMCC2.602或啤酒厂废酵母。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述酿酒酵母破壁方法为超声波法、化学法、高压匀浆法、冻融法或溶菌酶法。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述破壁后酿酒酵母与植物乳杆菌发酵液体积比为1% -10%o
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述保护剂添加量为菌泥重量的0.1m
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉先经过磨粉后与低聚糖混合。
7.根据权利要求1或6所述方法，其特征在于，所述低聚糖添加量为植物乳杆菌菌粉重量的 1% -10%。
8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，真空干燥方法为:温度为30~40°C，压强范围为-0.06到-0.1Mpa，真空干燥20h~30h。
9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，具体步骤如下: 1)植物乳杆菌培养至稳定期后加入体积比为1%-10%的经过超声波破壁处理的酿酒酵母 CGMCC 2.602 ； 2)将步骤1)得到的发酵液离心，菌泥中混入重量比为0.1% -1%的保护剂后进行真空干燥，所述保护剂组成为:谷氨酸钠0.05-3 %，Vc0.05-2 %，L-半胱氨酸0.05-1 %，甘油0.5-5 %，海藻糖5-15 %，蔗糖3-8 %，玉米淀粉10-25 %，玉米面10-25 %，其余为脱脂奶粉； 3)将真空干燥得到的植物乳杆菌菌粉经过磨粉后与低聚糖混合。
【文档编号】C12N1/04GK103695330SQ201210413224
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2012年10月25日 优先权日:2012年10月25日
【发明者】于长青, 钱丽丽, 左锋 申请人:黑龙江八一农垦大学