专利名称：酶法催化合成α-熊果苷的方法
OH;而0_熊果苷，即4-羟基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷，其结酶法催化合成α-熊果苷的方法技术领域
本发明属于α -熊果苷的制备领域，特别涉及到一种酶法催化合成α _熊果苷的方法。
背景技术：
熊果苷(arbutin)，又名熊果甙、熊果素、熊果叶甙、熊果酚甙或杨梅式，是一种源于杜鹃花科熊果属的多年生常绿小灌木植物-熊果叶子细胞里的成份，具有良好的皮肤美白效果，广泛应用于化妆品行业。熊果苷依结构不同可分为α型和β型，β型，即4-羟苯基-β -2-D-吡喃葡萄糖苷，其结构式为
权利要求
1.一种酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于，包括如下步骤(I)斜面种子培养是取野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris) CGMCC NO. 1243菌种，接种于斜面培养基，置于30°C 35°C下培养24 36小时；所述斜面培养基的组成质量浓度百分比如下4% 6%蔗糖，O. 5%蛋白胨，O. 5%酵母膏，O. 5%氯化钠，O. Ρ/ΓΟ. 15% 磷酸氢二钾和2%琼脂，其pH值为7. 0-7. 8 ；(2)液体菌种培养用接种环挑取一环菌种，接种于装有50mL基本发酵培养基的250mL 三角瓶中，置30°C 35°C摇床上，以150r/mirT200r/min振荡培养24 36小时，得到种子培养液；(3)将种子培养液，按接种量5%-10%，加入装有200mL基本发酵培养基的500mL三角瓶中，置 30°C 35°C，以 150r/mirT200r/min 振荡培养 24-48 小时后，冷冻，于 600(T8000r/min 下离心2(T25min，收集菌体；用PBS缓冲液洗涤菌体2 3次，低温超声破碎，于600(T8000r/ min下离心2(T25min，取上清液，即为胞内粗酶液；(4)向胞内粗酶液加入鹿糖和对苯二酹，于160r/min 180r/min、35 40°C下反应 36^48小时后，将反应产物分离纯化，即得α -熊果苷；所述蔗糖和对苯二酚加入的摩尔比为 I : 30。
2.根据权利要求I所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于所述基本发酵培养基的组成质量浓度百分比如下4°/Γ6%蔗糖，O. 5%蛋白胨，O. 3%牛肉膏，O. 1%酵母膏， O. 5% I. 0%硫酸镁和2%碳酸钙，其pH值为7. 0-7. 8。
3.根据权利要求I或2所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于所述步骤(4)对苯二酌·浓度为40 mmol/L,鹿糖浓度为150 180mmol/L。
4.根据权利要求3所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于所述反应产物分离纯化，是将反应产物置于大孔吸附树脂柱ΑΒ-8中静止吸附I. 5 2h。
5.根据权利要求4所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于所述反应产物和大孔吸附树脂柱ΑΒ-8的加入比为Iml Γ2δο
全文摘要
本发明公开一种酶法催化合成α-熊果苷的方法，包括如下步骤(1)斜面种子培养是取野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampestris)CGMCCNO.1243菌种，接种于斜面培养基培养；(2)液体菌种培养挑取一环菌种，接种于基本发酵培养基中，置摇床上振荡培养，得到种子培养液；(3)将种子培养液，加入基本发酵培养基中，振荡培养24-48小时后，冷冻，离心收集菌体；用PBS缓冲液洗涤菌体2~3次，低温超声破碎，离心，取上清液，即为胞内粗酶液；(4)向胞内粗酶液加入蔗糖和对苯二酚反应，将反应产物分离纯化，即得α-熊果苷。本发明具有生产效率高，对苯二酚转化率高、成本低、工艺流程短等优点。
文档编号C12P19/44GK102978265SQ201210508199
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月3日 优先权日2012年12月3日
发明者韦慧芳, 罗生芳 申请人:韦慧芳, 罗生芳