一种高通量清露酊微生物检查方法
【专利摘要】本发明属于微生物【技术领域】，本发明的目的在于提供一种清露酊微生物限度检查的方法，有助于医学和生物学方面的研究。薄膜过滤使微生物被滤膜充分截留,再用适量无干扰的冲洗液洗去供试品的干扰,就能准确地进行样品的微生物限度检查。冲洗液的用量是关键,如过量冲洗,会使菌体受损,不利于生长,从而影响回收率,还会使滤膜受损,孔径改变,影响实验结果。反之,如冲洗不充分,样品抗菌作用就不能彻底消除,也无法保证实验效果的准确性。
【专利说明】一种高通量清露酊微生物检查方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一种清露酊微生物限度检查的方法，有助于医学和生物学方面今后对微生物的研究。
【背景技术】
[0002]清露酊较合理地运用了中医治标固本，滋阴润喉，清热解毒辨证施治。处方中桔梗、甘草清利咽喉载药上行，配枳壳理气升降气机。麦冬、天冬、石斛、生地、熟地滋阴清热润喉消炎。全方达到滋阴润喉，清热解毒(利咽)。主治急慢性咽炎、喉头水肿。本品气味方香纯正，口感良好，适宜患者服用，未见不良反应，为临床治疗急慢性咽炎、喉头水肿良药。
[0003]微生物限度检查法系检查法规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法，也是评价生产企业的要用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。检查项目包括染菌量及控制菌检查。
【发明内容】
[0004]清露酊由桔梗、石斛、枳实、生地、甘草、熟地、麦冬和天冬等中药组成，有治疗咽痛、咳喘和清热解毒功效，放置后出现少量沉淀，对质量功效无影响。清露酊含有15%乙醇，低醇环境对微生物生长有干扰，可影响试验结果的准确性。试验表明，按常规方法测定其回收率仅为50%~60%，不符合要求(应为70%以上)。通过采用薄膜过滤法测定，可以减少乙醇对试验结果的影响。
【具体实施方式】
[0005]1、供试液制备取样品的 上清液加稀释液制成供试液。
[0006]2、菌液制备按中国药典2005年版二部方法制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液，另配制浓度为l(T100cfu/ml大肠埃希菌液。
[0007]3、取供试液加滤器中经薄膜过滤后冲洗，在最后一次的冲洗液中加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，过滤。取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基上，培养。每株试验菌平行制备2个平皿，计数。
[0008]实施例1
1、供试液制备取样品的上清液10 ml，加稀释液至100ml，制成I 10供试液。
[0009]2、菌液制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液均按中国药典2005年版二部方法制备，浓度为5(T100cfu/ml，另配制浓度为10~IOOcfu /m I大肠埃希菌液。
[0010]3、取I 10供试液Iml加入装有50ml稀释液的滤器中，经薄膜过滤后，冲洗3次，每次100ml,在最后一次的冲洗液中各加入1ml的50~IOOcfu / ml大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，过滤。取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基上，分别置30~35°C培养48 h或置23~28°C培养72h。每株试验菌平行制 备2个平皿。按中国药典2005年版菌落计数方法计数。
【权利要求】
1.一种清露酊微生物限度检查的方法，其特征是:通过以下步骤实现的:(1)供试液制备取样品的上清液加稀释液制成供试液；(2)菌液制备按中国药典2005年版二部方法制备大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液，另配制浓度为l(T100cfU/ml大肠埃希菌液；(3)取供试液加滤器中经薄膜过滤后冲洗，在最后一次的冲洗液中加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，过滤；取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基上，培养；每株试验菌平行制备2个平皿，计数。
2.如权利要求1所述的细胞共养方法，其特征是:步骤(1)取样品的上清液10ml，加稀释液至100ml，制成I 10供试液。
3.如权利要求1所述的细胞共养方法，其特征是:步骤(2)大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液均按中国药典2005年版二部方法制备，浓度为5(T100cfu/ml，另配制浓度为KTlOOcfu /m I大肠埃希菌液。
4.如权利要求1所述的细胞共养方法，其特征是:步骤(3)取I10供试液Iml加入装有50ml稀释液的滤器中，经薄膜过滤后，冲洗3次，每次100mL，在最后一次的冲洗液中各加入1ml的50~IOOcfu / ml大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，过滤；取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基上，分别置30~35°C培养48 h或置23~28°C培养72h ;每株试验菌平行制备2个平皿；按中国药典2005年版菌 落计数方法计数。
【文档编号】C12Q1/02GK103882089SQ201210560914
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2012年12月21日
【发明者】王英俊, 郝智慧 申请人:青岛康地恩药业股份有限公司