短小芽孢杆菌的培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种短小芽孢杆菌的培养方法，包括菌种活化，菌种发酵培养，菌种三角瓶培养，发酵罐培养的步骤。通过本发明所培养的短小芽孢杆菌的蛋白酶活力非常高。
【专利说明】短小芽孢杆菌的培养方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及短小芽孢杆菌的培养方法。
[0003]
【背景技术】
[0004]短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为芽孢杆菌属，菌体细杆状，一般为0.6—
0.7 μ mX 2.0一3.0 μ m,革兰氏阳性。B.pumilus存在半透明型和不透明型两种不同的菌落形态，对两种菌落分别进行传代，半透明菌落能产生半透明和不透明型菌落，且基本各占一半。而不透明菌落在传代过程中只产生少许的半透明菌落，且传至第4代时半透明型菌落消失。主要用于防治小麦根腐病和草莓灰霉病。通过培养短小芽孢杆菌可获得具有蛋白酶活力的菌液，而现有培养短小芽孢杆菌的方法所获得的菌液蛋白酶活力不高。
[0005]
【发明内容】
[0006]为了克服现有【技术领域】存在的上述缺陷，本发明的目的在于，提供一种短小芽孢杆菌的培养方法，解决现有技术 培养短小芽孢杆菌的方法所获得的菌液蛋白酶活力不高的问题。
[0007]本发明提供的短小芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤:
一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37°C培养24h；
二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入IOml种子发酵培养基中，37°C培养48h；
三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37°C培养48h；
四、将在三角瓶培养好的菌种接种于IOL种子发酵罐，37°C培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。
[0008]所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨,Ig酵母膏,0.1g磷酸高铁，20g琼月旨，适量海水经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.6 ;所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na2HPO4,0.1g CaCl2,801ml吐温经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.0 ;所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，IOg 干酪素，Ig KH2PO4 ,0.2 g MgSO4.7Η20，0.I g CaCl2.2H20 经 121°C灭菌 20min配置而成，pH值为7.0。
[0009]本发明提供的短小芽孢杆菌的培养方法，其有益效果在于，通过本发明所培养的短小芽孢杆菌的蛋 白酶活力非常高。
[0010]
【具体实施方式】[0011]下面结合一个实施例，对本发明提供的短小芽孢杆菌的培养方法进行详细的说明。
[0012]
实施例
[0013]本实施例的短小芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤:
一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37°C培养24h；
二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入IOml种子发酵培养基中，37°C培养48h；
三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37°C培养48h；
四、将在三角瓶培养好的菌种接种于IOL种子发酵罐，37°C培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。
[0014]所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨,Ig酵母膏,0.1g磷酸高铁，20g琼脂,适量海水经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.6 ;所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na2HPO4,0.1g CaCl2,801ml吐温经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.0 ;所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，IOg 干酪素，Ig KH2PO4 ,0.2 g MgSO4WH2O ,0.1 g CaCl2CH2O 经 121°C灭菌 20min 配置而成，pH值为7.0。
[0015]经蛋白酶活力检测,短小芽 孢杆菌的酶活力高达8000U/mL。
【权利要求】
1.一种短小芽孢杆菌的培养方法，其特征在于:包括以下步骤: 一、菌种活化，短小芽孢杆菌保存菌划线于平板培养基上，37°c培养24h； 二、菌种发酵培养，将活化后的菌种转接入IOml种子发酵培养基中，37°C培养48h； 三、将发酵培养好的菌种接种于1000ml三角瓶，37°C培养48h； 四、将在三角瓶培养好的菌种接种于IOL种子发酵罐，37°C培养44h，转速为150r/min，通气量为0.4vvm。
2.根据权利要求1所述的短小芽孢杆菌的培养方法，其特征在于:所述步骤一中平板培养基是由5g蛋白胨，Ig酵母膏，0.1g磷酸高铁，20g琼脂，适量海水经121°C灭菌30min配置而成，pH 7.6。
3.根据权利要求1所述的短小芽孢杆菌的培养方法，其特征在于:所述步骤二中种子发酵培养基或步骤三中三角瓶发酵培养基均是由5g蛋白胨，5g葡萄糖，0.1g Na2HP04,0.1gCaC12,801ml 吐温经 121°C灭菌 30min 配置而成，pH 7.0o
4.根据权利要求1所述的短小芽孢杆菌的培养方法，其特征在于:所述步骤四中所用培养基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白胨，IOg干酪素，Ig KH2P04 ,0.2 g MgS04*7H20 ,0.1 gCaC12*2H20经121°C灭菌20`min配置而成，pH值为7.0。
【文档编号】C12N1/20GK103881942SQ201210561071
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2012年12月21日
【发明者】张述智, 夏伟, 朱绍辉, 张 浩, 王晓丽, 徐权汗, 李之详, 许团辉 申请人:青岛中仁药业有限公司