侦测核酸之方法

文档序号:509721阅读:257来源:国知局
侦测核酸之方法
【专利摘要】本发明提供侦测核酸之方法,包括于样本中提供磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子,其中该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上,该可侦测性纳米粒子包含至少一种具有不同侦测讯号的纳米粒子,且连接于该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面的该寡核苷酸与该样本中的核酸一区域形成互补;使该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子与该样本反应;以及侦测来自该可侦测性纳米粒子的讯号以确认该样本中的每种核酸。
【专利说明】侦测核酸之方法
【技术领域】
[0001]本发明关于侦测核酸的方法与套组。【背景技术】
[0002]聚合酶链反应(polymerase chain reaction ;PCR)已发展数十年,广泛地运用在核酸分析。近年来,实时聚合酶链反应(real-time PCR)因为高灵敏度以及可定量分析的能力,而被大量地使用。实时PCR的定量结果系来自于侦测连接于目标DNA或RNA的荧光染料例如SYBR荧光(SYBR green(DreamTaq?))的荧光强度。然而,荧光的结果容易受到背景噪声的影响而误判,且荧光染料经时衰退,造成侦测上的限制。因此,有需要发展改善PCR反应的灵敏性与侦测限制的方法。

【发明内容】

[0003]本发明一实施形态提供一种侦测样本中至少一种核酸的方法,包括:提供磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子;使该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子与该样本反应;以及侦测来自该可侦测性纳米粒子的讯号以确认该样本中的每种核酸;其中,该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上,该可侦测性纳米粒子包含至少一种具有不同侦测讯号的纳米粒子,且连接于该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面的该寡核苷酸与该样本中的核酸一区域形成互补。
[0004]本发明另一实施形态提供一种侦测核酸的套组,包括含有磁性纳米粒子与可侦测性粒子的混合物,其中该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上。
【专利附图】

【附图说明】
[0005]第I图为显示本案一实施例之磁性纳米粒子及可侦测性纳米粒子与目标核酸在PCR循环中反应的示意图。
[0006]第2图为显示使用SYBR Green侦测进行实时PCR分析的目标DNA浓度与荧光强度关系的图。
[0007]第3图为显示本案一实施例中使用寡核苷酸连接的纳米粒子进行PCR分析法的目标DNA浓度与SERS讯号强度关系的图。
[0008]第4图为显示本案一实施例中对于10介摩尔(zeptomole)的目标DNA浓度,使用寡核苷酸连接的纳米粒子于PCR分析法的40个循环后,呈现的SERS讯号强度图。
[0009]【主要组件符号说明】
[0010]f可侦测性纳米粒子
[0011]2~磁性纳米粒子
[0012]3,4~寡核苷酸
[0013]5~目标核酸[0014]6~单股核酸
[0015]101,201,301,401,501,601 ~步骤
[0016]本发明之具体实施详细说明如下,然而以下的实施例仅用于进一步揭露本发明之技术内容,不应藉以限制本案的发明范畴。
【具体实施方式】
[0017]本案一实施形态提供使用纳米粒子为主的系统于核酸扩增反应,例如聚合酶链反应(PCR)或实时PCR,确认核酸的方法。以纳米粒子为主的系统包括磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子,此二种纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上。位于磁性纳米粒子表面的寡核苷酸与位于可侦测性纳米粒子表面的寡核苷酸彼此不互补(complementary),因此在一般条件下,磁性纳米粒子与可侦测纳米粒子两者不会发生交互作用。位于磁性纳米粒子或任一种可侦测纳米粒子的表面的寡核苷酸被设计为与欲侦测的目标DNA的一区域互补,作用如核酸引子(primer),可与目标核酸杂交并以该目标核酸作为铸模(template)而延伸,形成与目标核酸互补的序列。位于磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子的表面的寡核苷酸以该目标核酸作为铸模而延伸后,延伸出的序列因为彼此互补而可杂交,使得磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子连结形成复合物。之后,可透过磁性捕捉技术等,收集此复合物,并且根据可侦测性纳米粒子发出的讯号以及核酸扩增反应的循环次数,以确认目标核酸。
[0018]如第I图所示之一实施形态(以PCR反应进行侦测),将欲侦测的样本5与可侦测性纳米粒子I及磁性纳米粒子2混合(步骤101)。可侦测纳米粒子I或磁性纳米粒子2的表面分别连接寡核苷酸3,4,该寡核苷酸设计为目标核酸5的引子。位于磁性纳米粒子表面的寡核苷酸与位于可侦测纳米粒子表面的寡核苷酸彼此不互补,因此磁性纳米粒子与可侦测纳米粒子彼此不会反应(杂交)。在PCR反应中,目标核酸先变性,形成单股核酸6(步骤201)。在变性步骤结束后,单股核酸彼此黏合(anneal)并分别与磁性纳米粒子及可侦测纳米粒子表面的寡核苷酸杂`交(步骤301)。之后,以目标核酸为铸模,位于磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子表面的寡核苷酸开始延伸(extend),形成与目标核酸互补之序列(步骤401)。此PCR反应继续进行下一个变性,使得单股核酸以及位于磁性纳米粒子及可侦测纳米粒子表面的延伸的寡核苷酸分离(步骤501)。游离的核酸及连接于磁性纳米粒子及可侦测纳米粒子表面的延伸的寡核苷酸序列经互补序列的交联而黏合,形成复合体(步骤601)。此复合体由磁性纳米粒子及可侦测纳米粒子经由延伸的核苷酸序列杂交、交联而构成。之后,此复合体不仅可以透过磁场磁性捕捉技术而收集,也可侦测来自可侦测性纳米粒子所发出的讯号,透过侦测到的讯号,得知目标核酸。
[0019]根据本案之实施形态,核酸扩增反应的侦测限制可大幅地降低,而且不需增加反应循环次数,因此可减少反应时间。
[0020]本案另一实施形态提供侦测一样本中至少一种核酸的方法,使用至少一种具有不同侦测讯号的可侦测性纳米粒子。此方法具体包括如上述之表面连接寡核苷酸的磁性纳米粒子及可侦测性纳米粒子。特征在于,可侦测性纳米粒子包括至少一种具有不同侦测讯号的纳米粒子,且位于任一种可侦测纳米粒子表面的寡核苷酸与样本中对应的核酸的一区域互补,作用如对应的核酸的引子。位于不同种类的磁性纳米粒子与可侦测纳米粒子的表面之寡核苷酸彼此之间不互补,因此在不同纳米粒子表面上的寡核苷酸彼此不会交互作用(例如杂交)。藉由侦测来自不同种类的可侦测性纳米粒子的讯号,在单一的PCR反应中可侦测一种以上的核酸,因而简化多种基因扩增(multiplex)的步骤。
[0021]本案所述之磁性纳米粒子系指任何具有磁性的纳米粒子,没有特别限制。本发明之磁性纳米粒子可包括氧化铁纳米粒子(iron-oxide nanoparticles ;10NPs)、超磁性氧化铁纳米粒子(superparamagnetic iron oxide nanoparticles; SPIONs)或其组合。为了稳定性、应用性或寡核苷酸的连接,磁性纳米粒子可经表面修饰,例如以二氧化硅(SiO2)、葡聚糖(dextran)等进行表面修饰。
[0022]本案所述之可侦测性纳米粒子可例如任何具有化学可侦测性、光学可侦测性或电化学可侦测性的纳米粒子。可侦测性纳米粒子较佳为光学可侦测性,例如具有表面增加拉曼散射(surface enhanced Raman scattering ;SERS)活性的纳米粒子、突光纳米粒子(fluorescent nanoparticle)、量子点(quantum dots)等、或其组合。例如具有表面增加拉曼散射(SERS)活性的纳米粒子可为商业上可购买者或由实验室制造者。具有SERS活性的纳米粒子可例如金、银等、或其合金。具有SERS活性的纳米粒子的表面可经修饰以符合寡核苷酸的连接或因应其用途。
[0023]荧光纳米粒子可为任何显示荧光讯号的纳米颗粒。荧光纳米粒子可包括荧光染剂(fluorochrome)、异硫氰酸突光素(fluorescein isothiocyanate ;FITC) > Alexa Fluor染料、花青染料(Cyanine dyes C2,Cy3,Cy5)、荧光蛋白光敏素为主的近红外线荧光蛋白(fluorescent protein phytochrome-based near-1nfrared fluorescent protein ;iRFP)、生物性冷光(bioluminescence)、萤火虫发光酶(firefly luciferase ;Fluc)、Gaussia冷光素酶(Gaussia luciferase ;Gluc)、或其组合,或例如以CdSe或ZnS为主的量子点(quantum dots)。 在确认样本中不同核酸序列的情形中,具有不同、可分辨的SERS讯号的SERS活性纳米粒子、或具有不同荧光讯号的荧光纳米粒子、或带有不同侦测讯号的SERS活性纳米粒子与荧光纳米粒子的组合,皆可使用。由于磁性纳米粒子可被捕捉于磁场,可侦测性纳米粒子可侦测于光学侦测系统,因此,本案所述方法可缩短读取时间以及简化核酸扩增反应例如PCR或实时PCR的步骤。而且,因为可侦测性纳米粒子,特别是SERS活性纳米粒子,可降低侦测核酸的限制至次阿摩尔(sub-attomole)或介摩尔(zeptomole)的程度,并且背景噪声少。
[0024]此述的寡核苷酸系指具有50个以下碱基(base)长度的短核苷酸序列。本案所述之寡核苷酸与目标核酸的一区域互补,作用如同目标核酸的引子,特别是在PCR或实时PCR反应之中。寡核苷酸可根据习知步骤设计及合成,没有特别限制。于一实施例中,连接于该可侦测性纳米粒子表面的寡核苷酸为目标核酸的顺向引子,而连接于该磁性纳米粒子表面的寡核苷酸为目标核酸的反向引子。但本发明不限于此实施例,也可为连接于该磁性纳米粒子表面的寡核苷酸为目标核酸的顺向引子,而连接于该可侦测纳米粒子表面的寡核苷酸为目标核酸的反向引子。在不同纳米粒子表面的寡核苷酸可分别作用为顺向或反向引子,没有特别限制。磁性纳米粒子及可侦测性纳米粒子表面的寡核苷酸的连接可依习知步骤进行,例如化学I禹合法(chemical coupling)、生物素(biotin)与链酶抗生物素蛋白(streptavidin)的共轭键结等,没有特别限制。但是应注意,在不同纳米粒子上的寡核苷酸彼此不互补,以避免纳米粒子上的寡核甘酸互相作用而不与目标核酸杂交或黏合。在侦测数种不同核酸时可设计在不同可侦测性纳米粒子上的寡核苷酸为不同引子,并专一性地连接于目标核酸序列。
[0025]本案所述之方法可应用于核酸扩增反应,例如PCR、实时PCR等。核酸扩增反应主要包括三个步骤:变性、黏合及延伸,为一循环而重复数次。根据本案所述之方法,核酸扩增反应循环数可为1~40循环数,或20-40循环数,但不限于此。
[0026]本案一实施形态之方法可更包括收集纳米粒子的步骤。当磁性纳米粒子与可侦测纳米粒子藉由互补序列的交联(杂交)而形成复合体时,利用磁性捕捉技术可收集纳米粒子以进行讯号侦测。磁性捕捉技术可包括习知的磁性分离法,例如磁性分离柱、盘或芯片,或是自动收集装置。
[0027]根据本案一实施形态,本案所述之方法可有效用于微生物的侦测、致病菌的侦测、疾病的诊断、水质的侦测、食品安全的侦测、搭配诊断(companion diagnostics)等。例如藉由侦测特定的核酸浓度以确认污染水质及食物中的微生物浓度、或者对于怀疑受致病菌感染之个体或罹患癌症或其它疾病之个体的生物样本侦测其生物标志(特定核酸)的浓度等。根据本发明,可轻易地完成水质、食品安全及疾病等的侦测。
[0028]本案一实施形态亦提供侦测核酸用的套组,可包括含有如上述之表面连接寡核苷酸的磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子的混合物。此述套组还可包含核酸扩增用的溶液,例如包含聚合酶、脱氧核苷酸、缓冲液等。
[0029]实施例
[0030]具有SERS活性的纳米金粒子的制备
[0031 ] 首先,根据柠檬酸还原法制造纳米金粒子(AuNPs)。
[0032]柠檬酸还原法中,先形成小的AuNP粒子,以此粒子为种粒子,生长AuNP。种粒子的形成系将柠檬酸三钠(50mg)溶于蒸馏水(5mL)中,形成1%溶液。将其加入于四氯金酸(hydrogen tetrachloroaurate) (20mg)于蒸懼水(50mL)中的回流溶液中。此溶液的颜色由淡黄色转为深红紫色。在回流30分钟后移除加热。纪录此溶液在300nm至900nm的UV-Vis光谱,显示具特征的表面电浆共振(SPR)峰在517nm波长。电子扫描显微镜(TEM)的影像分析显示此纳米粒子的粒径为12nm±lnm (可作为种粒子)。
[0033]之后,以上述种粒子合成较大的AuNP。
[0034]首先将四氯金酸(hydrogentetrachloroaurate) (lmL, IlmmoldnT3 溶液)加入蒸馏水(32mL)中,于冷凝器中回流。将上述合成的种粒子AuNP加入此溶液(ImL),随后加入柠檬酸三钠溶液(0.34mL, 1%溶液)。30秒后,此溶液开始变为蓝色,I分钟后变为红色。10分钟后,移除加热,搅拌并使溶液冷却。纪录此溶液在300nm至900nm的UV-Vis光谱,显示具特征的SPR峰在535nm波长。TEM的影像分析显示此纳米粒子的粒径为51nm±2nm。将此成长的AuNP与溶于5mL氨水(lmol/dm3)的50mg的4-对硫醇苯甲酸(MBA)混合。
[0035]之后,使用桌上型系统纪录MBA-AuNPs的SERS光谱。
[0036]将上述的终溶液(0.2mL)以水(0.8mL)稀释,放置于液态样本架,使雷射照射点位于此溶液的中心。此雷射发射105 μ m直径的波导,透过透镜形成0.25cm宽的光束。此光束通过焦点长度0.7cm的透镜,形成光直径100 μ m的焦点。之后,使此雷射有效地发射及收集来自该样本体积6.9nL的讯号。
[0037]寡核苷酸被覆的AuNP的制备[0038]使用标准1-乙基-3- (3- 二甲基胺基丙基)碳二亚胺(EDC)使MBA上的-COOH基与具有C6-胺基修饰的序列识别号2所示之寡核苷酸序列的末端-NH2基耦合,使得序列识别号2所不之寡核苷酸序列被覆于上述所得的MBA-AuNP表面。
[0039]具体地说,将上述所得的MBA-AuNP (118 μ L)与I μ L新鲜制备的于水中的EDC溶液(7mg/mL)混合。加入含有序列识别号2所示之寡核苷酸序列的DNA溶液(该寡核苷酸序列2 μ L于100pmol/L的DNA溶液),使其搅拌过夜。之后离心及再分散于120 μ L水中。于完全再悬浮后缓慢倒掉澄清液体,所得的产物为具有寡核苷酸序列被覆的SERS活性纳米粒子。
[0040]氧化铁纳米粒子的制备
[0041]氧化铁纳米粒子(IONP)系于氩雰围气下合成。
[0042]具体为,于一反应烧瓶内加入FeCl2(0.0345moles)、FeCl3(0.069moles)及去离子水(150mL),之后加入Na0H(5mol/dm3)调整混合物的pH值。持续搅拌此溶液直到成为碱性。以去离子水清洗形成黑色沉淀物,并以冰醋酸调整溶液PH值为5以下。最后逐渐加入Η202 (10νο1%)直到没有再出现冒泡的现象,表示没有反应发生。之后以新鲜去离子水清洗产物并悬浮,加入葡聚醣(dextran) (MW=10, OOODa)。于超音波混合后,加入NH4OH调整pH为10。然后使此混合物持续搅拌并加热至75°C,维持在此温度60分钟。之后使用分子量截取值(molecular weight cut-off ;MWC0) 10,OOODa的膜透析此悬浮液,去除多余的葡聚醣。将此悬浮液于6000rpm离心30分钟,移除大的凝结块。最后通过0.2 μ m过滤器。
[0043]接着,使上述所得的氧化铁纳米粒子(IONP)表面涂布Si02。
[0044]具体步骤为, 将上述所得IONP (5 μ L,3.6mg/mL)与Ig聚乙烯吡咯啶(polyvinylpyrrolidone ;PVP)于5mL水的溶液混合。使用的PVP的平均分子量为
10,OOODa0 30分钟后,使IONP于乙醇中沉淀,于40mL蒸馏水中再悬浮。之后加入(3-胺基丙基)三乙氧基硅烷((3-Aminopropyl) triethoxysilane ;APTES) (500L),再加入 6 滴浓缩NH30 30分钟后,将此产物磁性沉淀,以连续5次的丙酮与水清洗。最后将所得产物分散于水(2mL)中。从TEM分析中显示最终产物中,核心Fe3O4为20nm±3nm,壳SiO2具有3nm±lnm的厚度。
[0045]寡核苷酸被覆的IONP的制备
[0046]使用标准1-乙基-3- (3- 二甲基胺基丙基)碳二亚胺(EDC)使具有C6-羧基修饰的序列识别号3所示之寡核苷酸序列的末端-C00H基与上述所得的IONP表面的-NH2基耦合,使得序列识别号3所示之寡核苷酸序列被覆于上述所得的IONP表面。
[0047]具体步骤为,将上述所得的10NP(118yL于lmg/mL水)与IyL新鲜制备的EDC溶液(7mg/mL)混合。加入含有序列识别号3所示之寡核苷酸序列的DNA溶液(该寡核苷酸序列2 μ L于100pmol/L的DNA溶液),使其搅拌过夜。之后磁性沉淀,于120 μ L水中再分散。以5倍体积的水清洗,所得产物为具有寡核苷酸序列被覆的具磁性的纳米粒子。
[0048]以SYBR Green侦测的PCR分析法
[0049]使用SYBR Green (DreamTaq? Green PCR Master Mix K1081)于 AppliedBiosystems7500实时PCR侦测系统进行实时PCR分析。所有合成的DNA购买自ThermoFisher Scientific。分析中的目标DNA序列为如序列识别号I所示之人工合成序列,来自例如E.col1-K.pastoris转运载体pPpHIS4的大肠杆菌质体之单股IOObp的DNA。引子为44bp长、5’端具有20bp的胸腺嘧唳间隔(thymine spacer)以及24bp活性引子区域如序列识别号2、3所示之寡核苷酸序列。每一分析进行下列流程40个循环:预热95°C、10分钟,变性95°C、15秒,黏合与延长60°C、60秒。反应中每一引子的DNA量为10皮摩尔(picomole)。目标DNA的量则为10菲摩尔(femtomole)至10介摩尔(zeptomole)。实时PCR分析的结果如第2图所示。图中显示,当反应中目标DNA的浓度从IX 10_14摩尔降低至1X10_17摩尔(总体积为24 μ I)时,SYBR Green荧光的可计量的循环数已达到阈值。超过此阈值,即使再降低目标DNA的量,所得到的结果也会是一样(如1χ10_17摩尔至1χ10_2°摩尔的目标DNA量)。而且,目标DNA量IxlO-17摩尔至lxl(T2°摩尔所需的SYBR Green荧光讯号到达阈值的时间相同。由此可知,使用SYBR Green侦测(DreamTaq? Green PCR MasterMix)的DNA分析的可计量侦测限制为10阿摩尔(attomole)。
[0050]以寡核苷酸被覆的纳米粒子侦测的PCR分析法
[0051 ] 使用上述SYBR GREEN侦测的PCR分析法相同的目标DNA及引子对(B卩前述实施例的目标DNA及引子对),但是将引子被覆于SERS活性纳米粒子及氧化铁纳米粒子(IONP)上取代使用传统的PCR引子,进行以SERS为主的侦测。
[0052]具体步骤为,使用如前所得到的被覆序列识别号2所示之寡核苷酸序列的SERS活性纳米粒子,与被覆序列识别号3所示之寡核苷酸序列的氧化铁纳米粒子,以相同于上述SYBR GREEN侦测的PCR操作步骤进行,包括添加的反应物及PCR循环流程。在40个循环后,从PCR装置中移出样本。收集磁性物质并以蒸馏水清洗数次,最后以丙酮清洗。清洗步骤中,纪录SERS讯号,显示由SERS活性纳米粒子所呈现的拉曼讯号(Raman signal)。校正SERS讯号强度1077CHT1为起始的目标核酸浓度。结果如第3图所示,所得的SERS峰强度与全部目标DNA的浓度呈现良好的正相关性。基于SERS讯号强度约1000且背景噪声为300的程度,预估100秒整合时间的侦测限制为约I介摩尔(zeptomole)的目标DNA浓度。
[0053]再一方面,分析10介摩尔(z印tomole)的目标DNA的SERS讯号强度,如第4图所示。图中,讯号高度在1077CHT1有300次,背景噪声约±100次,在516CHT1的峰来自Si表面,可作为参考波峰。从此样本的讯号表现与背景噪声比例来看,以寡核苷酸被覆纳米粒子侦测的PCR分析法可达到I介摩尔(zeptomole)的核酸浓度的侦测限制。相较于传统基于荧光表现的标准PCR反应系统具有10阿摩尔(attomole)的侦测限制,以寡核苷酸被覆纳米粒子侦测的PCR分析法的侦测限制具有较传统PCR反应系统1000倍以上的灵敏度。
[0054]虽然本发明已以较佳实施例揭露如上,然其并非用以限定本发明,任何熟悉此项技艺者,在不脱离本发明之精神和范围内,当可做些许更动与润饰,因此本发明之保护范围当视后附之申请专利范围所界定者为准。
【权利要求】
1.一种侦测样本中至少一种核酸的方法,包括: 提供磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子; 使该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子与该样本反应; 以及侦测来自该可侦测性纳米粒子的讯号以确认该样本中的每种核酸; 其中,该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上,该可侦测性纳米粒子包含至少一种具有不同侦测讯号的纳米粒子,且连接于该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面的该寡核苷酸与该样本中的核酸一区域形成互补。
2.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中位于该磁性纳米粒子与任一种该可侦测性粒子的表面的该寡核苷酸彼此不互补。
3.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中位于该磁性纳米粒子与任一种该可侦测性粒子的表面的该寡核苷酸为该样本中该核酸的引子。
4.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该磁性纳米粒子包括氧化铁纳米粒子、超磁性氧化铁纳米粒子(superparamagnetic iron oxide nanoparticles)或其组合。
5.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该可侦测性纳米粒子具有化学可侦测性、光学可侦测性或电化学可侦测性。
6.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该可侦测性纳米粒子包括具有表面增加拉曼散射(SERS)活性的纳米粒子、突光纳米粒子、量子点(quantum dots)或其组合。
7.权利要求6所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该具有表面增加拉曼散射活性(SERS)的纳米粒子包括纳米金粒子、纳米银粒子或其组合。
8.权利要求6所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该荧光纳米粒子包括荧光染剂(fIuorochrome)、异硫氰酸突光素(fluorescein isothiocyanate ;FITC)、AlexaFluor染料、花青染料(Cyanine dyes C2,Cy3,Cy5)、荧光蛋白光敏素为主的近红外线荧光蛋白(fluorescent protein phytochrome-based near-1nfrared fluorescent protein ;iRFP)、生物性冷光(bioluminescence)、萤火虫发光酶(firefly luciferase ;Fluc)、Gaussia 冷光素酶(Gaussia luciferase ;Gluc)或其组合。
9.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该样本中核酸与该磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子进行核酸扩增反应。
10.权利要求9所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该核酸扩增反应包括聚合酶链反应(PCR)或实时聚合酶链反应(real-time PCR)。
11.权利要求9所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该核酸扩增反应包括1-40个循环。
12.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该样本中的核酸包括单股核酸、双股核酸或其混合。
13.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该样本中的核酸包括DNA、RNA或其混合。
14.权利要求1所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,更包括收集该磁性纳米粒子及该可侦测性粒子的步骤。
15.权利要求14所述之侦测样本中至少一种核酸的方法,其中该收集步骤包括磁性捕捉技术。
16.权利要求1所述之侦测样本 中至少一种核酸的方法,用于微生物的侦测、疾病的诊断、水质的侦测、食品安全的侦测、或搭配诊断(companion diagnostics)。
【文档编号】C12Q1/68GK103805690SQ201210574505
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2012年12月26日 优先权日:2012年11月6日
【发明者】P-L.德瑞克 申请人:财团法人工业技术研究院
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