专利名称：Ema与pcr结合检测饲料中沙门氏菌活细胞试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及ー种用于检测饲料中沙门氏菌活细胞试剂盒，具体涉及ー种EMA与PCR结合检测饲料中沙门氏菌活细胞试剂盒。
背景技术：
畜禽饲用含有沙门氏菌的饲料，如果菌量达到一定数目，就可引起疾病或带菌，因此准确、快速地检测饲料中的沙门氏菌，对于防止畜禽和人类沙门氏菌污染具有十分重要 的意义。传统的PCR检测方法可以对沙门氏菌等特定微生物DNA的单条基因片段进行放大，放大后，特定的DNA片段被成千上万倍的复制，运用可视技术按照细菌基因序列探測和识别复制后细菌的遗传物质可以更加容易。然而，目前的PCR检测方法容易出现假阳性的结果，这造成了巨大的浪费和不必要的召回事件的发生。出现这种结果的原因是，PCR技术跟其它的DNA法一祥，均不能将活的跟死的沙门氏菌区分开，因此这导致PCR技术提供了错误的結果。
实用新型内容由鉴于此，本实用新型的目的是提供ー种EMA与PCR结合检测饲料中沙门氏菌活细胞试剂盒，克服了现有技术的不足，可用于快速检测检测饲料样品中沙门氏菌活细胞，制作简单，使用方便。为了实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案ー种EMA与PCR结合检测饲料中沙门氏菌活细胞试剂盒，包括箱体，其中，所述箱体底部的内壁上均匀设置有六个与离心管相配合的凹槽，所述凹槽内设有分别放入沙门氏菌阳性对照、沙门氏菌阴性对照、Taq预混酶、Taq预混酶引物混合物、DL Marker 2000,EMA溶液的六个离心管。本实用新型的有益效果为利用本实用新型可采用EMA与PCR结合技术用叠氮溴化こ锭染料对饲料样品的菌悬液进行处理，叠氮溴化こ锭在强光照的环境下进入死的细菌体内后与DNA分子进行结合，使得细菌在染色后不能被溶解，但不能穿透活细胞，这种改进的PCR技术很容易区分饲料样品中死的沙门氏菌及活的沙门氏菌，从而为饲料中沙门氏菌的快速、准确检测提供有效手段。本实用新型在EMA与PCR结合检测饲料中沙门氏菌活细胞检测中使用，制作简单，携帯方便，节省了检测时临时准备检测用品的时间，提高了工作效率。本实用新型的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本实用新型的实践中得到教导。本实用新型的目标和其他优点可以通过下面的说明书或者附图中所特别指出的结构来实现和获得。
[0009]图I为本实用新型的结构示意图；图2为本实用新型的底部凹槽的示意图。
具体实施方式
如图I、图2所示，本实用新型的箱体I底部均匀设置有六个凹槽，分别为沙门氏菌阳性对照离心管凹槽21、沙门氏菌阴性对照离心管凹槽31、Taq预 混酶离心管凹槽41、Taq预混酶弓I物混合物离心管凹槽51、DL Marker 2000离心管凹槽61、EMA溶液离心管凹槽71，在沙门氏菌阳性对照离心管凹槽21、沙门氏菌阴性对照离心管凹槽31、Taq预混酶离心管凹槽41、Taq预混酶引物混合物离心管凹槽51、DL Marker 2000离心管凹槽61、EMA溶液离心管凹槽71内分别放入相应的沙门氏菌阳性对照离心管2、沙门氏菌阴性对照离心管3、Taq预混酶离心管4、Taq预混酶引物混合物离心管5、DL Marker 2000离心管6、EMA溶液离心管7。Taq预混酶及引物混合物，其预混酶为20 u/mL，引物浓度为IOOpmol/mL ,其保存条件为-20 ° C。引物其序列为GTGAAATTATCGCCACGTTCGGG，SE-2:CATCGCACCGTCAAAGGAAC。EMA 溶液，其浓度为 O. 5mg/mL。本实用新型用于EMA与PCR结合检测饲料中沙门氏菌活细胞试验，采用EMA与PCR结合技术用叠氮溴化こ锭染料对饲料样品的菌悬液进行处理，叠氮溴化こ锭在强光照的环境下进入死的细菌体内后与DNA分子进行结合，使得细菌在染色后不能被溶解，但不能穿透活细胞，这种改进的PCR技术很容易区分饲料样品中死的沙门氏菌及活的沙门氏菌，从而为饲料中沙门氏菌的快速、准确检测提供有效手段。最后说明的是，以上实施例仅用以说明本实用新型的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本实用新型的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本实用新型技术方案的精神和范围，均应涵盖在本实用新型的权利要求范围中。
权利要求1. 一种EMA与PCR结合检测饲料中沙门氏菌活细胞试剂盒，包括箱体，其特征在于所述箱体底部的内壁上均匀设置有六个与离心管相配合的凹槽，所述凹槽内设有分别放入沙门氏菌阳性对照、沙门氏菌阴性对照、Taq预混酶、Taq预混酶引物混合物、DL Marker 2000、EMA溶液的六个离心管。
专利摘要本实用新型公开了一种EMA与PCR结合检测饲料中沙门氏菌活细胞试剂盒，包括箱体，其中，所述箱体底部的内壁上均匀设置有六个与离心管相配合的凹槽，所述凹槽内设有分别放入沙门氏菌阳性对照、沙门氏菌阴性对照、Taq预混酶、Taq预混酶引物混合物、DLMarker2000、EMA溶液的六个离心管。本实用新型克服了现有技术的不足，可用于快速检测检测饲料样品中沙门氏菌活细胞，制作简单，使用方便。
文档编号C12Q1/68GK202610240SQ20122022810
公开日2012年12月19日 申请日期2012年5月21日 优先权日2012年5月21日
发明者班付国, 高延玲, 周红霞, 刘宏伟, 张发旺, 梁军, 侯文宏, 赵全成, 曲登峰, 王世山, 赵瑜, 张影, 雷东风, 彭峰, 徐品, 宋志超, 姚德新, 常守海, 陈阳, 董鹏, 李金磊, 狄元冉, 张磊 申请人:河南省兽药监察所