用于uvc暴射的细胞培养基及其相关方法
【专利摘要】本发明涉及针对暴露于紫外线C(UVC)光暴射而最佳化的细胞培养基及相关方法。
【专利说明】用于UVC暴射的细胞培养基及其相关方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求提交于2011年2月23日的美国临时申请N0.61 / 445，988的权益， 其通过引用并入本文。
发明领域
[0003]本发明涉及针对暴露于紫外线C(UVC)光暴射而最佳化的细胞培养基及其相关方法。
[0004]发明背景
[0005]将用于制造医药产品的细胞培养基的灭菌是作为用于产生高品质医药产品的方法的一部分的重要步骤以防止发生生物负荷。这通常通过灭菌级过滤(0.2或0.1微米绝对等级过滤器)来达成。细胞培养基和上清液的霉支原体及病毒污染也对全世界生物医药制造商造成巨大挑战。已采用若干方法来灭活和/或移除溶液中的较大或较小、包膜或无包膜(或“裸露的”)的DNA或RNA病毒粒子。这些方法的实例包括过滤(纳米、病毒或0.1 微米)、色谱、分批热处理、流通式高温短时(HTST)、Y照射、低PH和化学灭活(溶剂、清洁剂)及分批或流通式紫外光C(UVC)。HTST为用于控制病毒的经验证方法，然而，它对含有诸如血清的蛋白质组分的细胞培养基具有不利作用。另外，已使用灭活病毒粒子的化学处理，但这些化学品的常见毒性性质限制它们在医药制造中的使用。此外，HTST需要工厂中专用且整合的基础设施，此可能成为预期制造药剂及治疗剂时的考虑因素。
[0006]除上述技术以外，已使用UVC技术以在自细胞上清液纯化这些蛋白质之前处理大规模蛋白质制剂。参见，例如，美国专利申请公布N0.20100203610A1。UVC技术依赖于光谱紫外波长范围内的光的特性以破坏不想要的有机体的DNA / RNA。UVC处理的强度(视为 UVC剂量)由光通量的强度和液体暴露于UVC光源的时间来规定。虽然所提供的UVC剂量需要足以有效地灭活所需有机体，但必须不能过高以致破坏溶液中对于包括目标蛋白质生产和品质的稳健过程而言所必需的组分。尽管培养基的UVC处理为病毒灭活的有效方式， 但本发明
【发明者】已发现，与未暴露于UVC光的培养基相比，使用在生长前已暴露于UVC光的培养基生长的细胞所产生的蛋白质效价减少。
[0007]因此，在本领域中需要UVC可处理的细胞培养基，及用于医药制造中使用UVC处理细胞培养基的方法。这些方法可尤其适用于保护有价值的细胞株免受病毒污染，节约因受污染且不可用的培养基而损失的成本，和用这些细胞株增加蛋白质生产的效率。因此，此类方法的开发可广泛应用于生物医药的制造中。
[0008]发明概述
[0009]本文提供一种细胞培养基，其包含(a)暴露于UVC光的基础培养基；和(b)包含 UV敏感性培养基组分的添加剂包，其在UVC暴射后添加至所述基础培养基中。在一个实施方案中，基础培养基不包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、 十一种、十二种、或十三种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、 酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。 在另一个实施方案中，添加剂包包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种、或十三种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，基础培养基呈粉末或液体形式，且添加剂包呈粉末或液体形式。在又一个实施方案中，培养基适于培养哺乳动物细胞，而在再一个实施方案中，培养基适于培养昆虫细胞。
[0010]本文还提供一种用于制备经UVC暴射的细胞培养基制剂的方法，所述方法包括以下步骤:(a)使基础培养基暴露于UVC光；和(b)将包含UV敏感性组分的添加剂包添加至所述经UVC暴射的基础培养基中。在一个实施方案中，基础培养基不包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种或十三种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，添加剂包包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种或十三种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，UVC光的波长为约254nm。在另一实施方案中，将基础培养基暴露于能量密度为约25至约350mJ / cm2的UVC光。在又一个实施方案中，将基础培养基暴露于能量密度为约125mJ / cm2的UVC光，而在另一实施方案中，将基础培养基暴露于能量密度为约175mJ / cm2的UVC光。在再一个实施方案中，使基础培养基暴露于UVC光的步骤足以破坏基础培养基中任何非包膜病毒的核酸。在另一个实施方案中，UVC光使用薄膜UVC反应器传递，而在另一实施方案中，UVC光使用螺旋状UVC反应器传递。
[0011]本文也提供一种用于生产蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤:(a)使基础培养基暴露于UVC光；(b)将包含UV敏感性培养基组分的添加剂包添加至所述经UVC暴射的基础培养基中；和(C)在经UVC处理的培养基中培养细胞以生产所需蛋白质。在一个实施方案中，基础培养基不包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种或十三种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛`、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，添加剂包包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种或十三种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，UVC光的波长为约254nm。在另一实施方案中，将基础培养基暴露于能量密度为约25至约350mJ / cm2的UVC光。在又一个实施方案中，将基础培养基暴露于能量密度为约125mJ / cm2的UVC光，而在另一实施方案中，将基础培养基暴露于能量密度为约175mJ /cm2的UVC光。在再一个实施方案中，使基础培养基暴露于UVC光的步骤足以破坏基础培养基中任何非包膜病毒的核酸。在另一个实施方案中，UVC光使用薄膜UVC反应器传递，而在另一实施方案中，UVC光使用螺旋状UVC反应器传递。在一个实施方案中，细胞为CHO细胞。在另一实施方案中，蛋白质为重组人类红血球生成素。
[0012]附图简述
[0013]图1.图1描述实施例1的HPLC效价结果。显示未经处理的对照培养基及各种经UVC处理的培养基组的结果。Y轴代表重组人类红血球生成素，以mg / L计，且X轴代表3种不同收集周期以及总产量。
[0014]图2.图2描述实施例1的Bradford测定结果。显示未经处理的对照培养基及各种经UVC处理的培养基组的结果。Y轴代表重组蛋白质，以mg / L计，且X轴代表3种不同收集周期以及总产量。
[0015]图3.图3描述实施例2的HPLC效价结果。显示未经处理的对照培养基及各种经 UVC处理的培养基组的结果。Y轴代表重组人类红血球生成素，以mg / L计，且X轴代表3 种不同收集。
[0016]图4.图4描述实施例2的Bradford测定结果。显示未经处理的对照培养基及各种经UVC处理的培养基组的结果。Y轴代表重组蛋白，以mg / L计，且X轴代表3种不同收集周期。
[0017]图5.图5描述实施例3的HPLC效价结果。显示未经处理的对照培养基及各种经 UVC处理的培养基组的结果。Y轴代表重组人类红血球生成素，以mg / RB计，且X轴代表 3种不同收集周期及收获周期的总和。
[0018]发明详述
[0019]本文所用的章节标题仅为达成组织目的，且不应解释为限制其中所述的主题。本申请中引用的所有参考均通过引用明确地并入本文。除非本文另有定义，否则结合本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常所理解的含义。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数且复数术语应包括单数。
[0020]本发明解决本领域对于UVC可处理的细胞培养基的需要。在开发本发明的新颖制剂及方法中须克服若干障碍。以原始培养基为起始材料，通过从原始培养基中移除UV敏感性组分来尝试配制稳定的新基础培养基。然而，相当意外地是，发现从原始培养基中移除UV 敏感性组分导致不包含UV敏感性组分的新基础培养基与包含UV敏感性组分的添加剂包中均出现某些不稳定性及溶解度问题。
[0021]不能对经分离混合物的行为进行预测来源于混合物内众多组分之间及两者间的化学相互作用。更具体而言，添加剂包的溶解度问题据信源于自缓冲系统中质子的相互作用。此外，新基础培养基及添加剂包的不稳定性问题也可能源于其它相互作用，诸如经由可能因暴露于UVC辐射而产生的反应性氧物质。
[0022]意外的是，发现添加剂包不稳定。添加剂包当自原始基础培养基中移除时最初不为可溶或热稳定的。为重新获得类似于原始培养基的稳定性，必需通过添加滴定剂来调整混合物的PH以使其可溶且稳定。
[0023]另一意外观测结果与当用UV处理时不包含UV敏感性组分的新基础培养基中的相互作用相关，该相互作用使得基础培养基的关键组分受破坏。此破坏将不可预测，因为添加剂包中的组分通常淬灭原始培养基中的反应性物质，从而保护其免于遭受UV。因置放于添加剂包中而不存在于新基础培养基中的潜在淬灭剂的非限制性实例包括吡哆醛及吡哆醛。 保留于新基础培养基中的可能已因不存在额外淬灭剂而受破坏的淬灭剂的非限制性实例包括丙酮酸盐。保留于新基础培养基中的可能已因不存在额外淬灭剂而受破坏的关键组分的非限制性实例包括胎牛血清蛋白。
[0024]然而，令人惊讶的是，添加剂包在某些方面如复杂混合物(如，原始基础培养基) 为自稳定的。添加剂包的天然pH为约6.7,与基础培养基大致相同。[0025]另一意外效果与UVC反应器的类型及相关剂量分布有关。若干处理UVC反应器如层状或薄膜反应器产生宽剂量分布，其通常具有高剂量尾部。虽然新培养基接收此宽分布(及过度曝光)，但令人惊讶地是未显著受破坏，如效价校正所证实。先前研究使用螺旋状UVC反应器，其相比于薄膜反应器产生紧密剂量分布。这些研究显示UVC处理使得效价(产物浓度)降低。当原始培养基经薄膜UVC处理时，结果为全过程失效，即，完全不发生细胞附着于滚瓶且不发生细胞生长。
[0026]因此,一方面本发明提供一种适于UVC暴射的细胞培养基,其中所述培养基包含基础培养基和包含UV敏感性培养基组分的添加剂包，该添加剂包在UVC暴射后添加至基础培养基中。在另一方面，本发明还提供一种用于制备经UVC暴射的细胞培养基制剂的方法，所述方法包括以下步骤:配制基础培养基，使基础培养基暴露于UVC光，和将包含UV敏感性组分的添加剂包添加至经UVC暴射的基础培养基中。在另一个方面，本文还提供一种用于生产蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤:使基础培养基暴露于UVC光，将包含UV敏感性培养基组分的添加剂包添加至经UVC暴射的基础培养基中，和在经UVC处理的培养基中培养细胞以生产所需蛋白质。
[0027]UV敏感性培养基组分
[0028]如下文进一步论述，细胞培养基包含许多支持细胞在体外环境中增殖的不同组分。已发现某些培养基组分对UVC光敏感且当暴露于UVC光时降解。这继而导致细胞培养物中产生的蛋白质减少。为克服细胞培养基经UVC处理时而观察到的对蛋白质产物效价的这种有害影响，需要适于UVC暴射的新基础培养基。因此，本发明的一个目的为提供不包含UV敏感性组分的基础培养基和包含UV敏感性组分的添加剂包。本文所用的“基础培养基”是指不包含某些UV敏感性组分的液体、粉末或其他形式的细胞培养基。本文所用的“添加剂包”是指在基础培养基已 暴露于UVC光之后，待添加至所述基础培养基的液体、粉末或其它形式的UV敏感性组分。
[0029]在一个实施方案中，基础培养基呈粉末形式且添加剂包呈粉末形式。在另一个实施方案中，基础培养基呈粉末形式且添加剂包呈液体形式。在又一个实施方案中，基础培养基呈液体形式且添加剂包呈粉末形式。在另一个实施方案中，基础培养基呈液体形式且添加剂包呈液体形式。
[0030]在一个实施方案中,适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少一种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、批哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12 (氰钴胺素)。在另一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少两种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少三种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少四种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少五种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中，适于 UVC暴射的基础培养基为不包含至少六种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少七种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、 烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少八种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少九种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中， 适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少十种选自由以下组成的组的组分的液体培养基: 硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、 甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少十一种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少十二种选自由以下组成的组的组分的液体培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、 甲氨蝶呤及维生素B12的液体培养基。
[0031]在一个实施方案中,适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少一种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少两种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少三种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，适于 UVC暴射的基础培养基为不包含至少四种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中,适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少五种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、 烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一实施方案中，适于 UVC暴射的基础培养基为不包含至少六种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少七种选自选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、 叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫`胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少八种选自选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少九种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少十种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少十一种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含至少十二种选自由以下组成的组的组分的粉末培养基:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中，适于UVC暴射的基础培养基为不包含硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12的粉末培养基。
[0032]在一个实施方案中，添加剂包为包含至少一种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，添加剂包为至少两种包含由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，添加剂包为包含至少三种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，添加剂包为包含至少四种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中，添加剂包为包含至少五种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，添加剂包为至少六种包含由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、卩P多醛、吡唆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中，添加剂包为包含至少七种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在一个实施方案中，添加剂包为包含至少八种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，添加剂包为包含至少九种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，添加剂包为包含至少十种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、批哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，添加剂包为包含至少十一种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一实施方案中，添加剂包为包含至少十二种由以下组成的组的组分的液体:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、批唆醛、吡唆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，添加剂包为包含硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、 吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12的液体。[0033]在一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少一种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少两种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、 吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少三种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少四种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、 色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、批唆醛、吡唆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少五种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少六种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、 核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少七种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少八种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、 酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少九种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少十种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在又一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少十一种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在再一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含至少十二种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。在另一个实施方案中，添加剂包呈粉末状且包含硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。
[0034]在另一实施方案中，本发明涉及一种套件，其包含适于UVC暴射的基础培养基及添加剂包。
[0035]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少一种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、 吡哆醇、吡哆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少两种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡哆醇、吡哆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少四种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡哆醇、吡哆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少五种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡唆醇、吡唆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少六种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡唆醇、吡唆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少七种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡唆醇、吡唆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少八种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡哆醇、吡哆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少九种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡哆醇、吡哆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少十种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡唆醇、吡唆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少十一种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡唆醇、吡唆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在又一个实施方 案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含至少十二种选自由以下组成的组的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡哆醇、吡哆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、核黄素、硫胺素、吡唆醇、吡唆醛、甲氨蝶呤及维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中。
[0036]在以下关于UV敏感性组分浓度的描述中，特定浓度及浓度范围为Ix培养基的最终浓度。熟练从业者将容易设想，2X培养基溶液所必需的浓度(即，给定浓度和范围的两倍)，3x培养基溶液所必需的浓度(即，给定浓度的三倍)，等。
[0037]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含叶酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.1至约10.0mg / L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含叶酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.5至约
5.0mg / L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含叶酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.0至约3.0mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含叶酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.0至约3.0mg / L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含叶酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.0mg / L的浓度。在另一实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含叶酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.5mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含叶酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约3.0mg / L的浓度。
[0038]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约1.0至约100.0mg / L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约10.0 至约90.0mg / L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约10.0至约80.0mg / L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约10.0至约70.0mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约15.0至约55.0mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约20.0至约50.0mg / L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约25.0 至约40.0mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约25.0至约35.0mg / L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约30.0至约35.0mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约30.0至约33.0mg / L 的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经 UVC暴射的基础培养基中，得到约31.0至约32.0mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约 31.0mg / L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸， 其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约32.0mg / L的浓度。在另一个实施方案中， 已暴露于UVC光的基础培养基还包含组氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约 31.5mg / L的浓度。
[0039]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经 UVC暴射的基础培养基中，得到约1.0至约100.0mg / L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约10.0至约90.0mg / L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包 含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约10.0至约80.0mg/L的浓度。 在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约10.0至约70.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC 光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约15.0至约 55.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸， 其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约20.0至约50.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约25.0至约40.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约30.0至约40.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约32.0至约38.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约34.0至约36.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约35.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约36.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含苯丙氨酸,其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约35.5mg/L的浓度。
[0040]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.1至约50.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.0至约20.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约5.0至约15.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
8.0至约12.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约8.0至约10.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约8.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约8.5mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约9.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含色氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约9.5mg/L的浓度。
[0041]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.0至约100.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约10.0至约90.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约20.0至约80.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约30.0至约70.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约40.0至约60.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约50.0至约60.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约53.0至约57.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约54.0至约56.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约55.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约55.5mg/L的浓度。在又一个实施方案中， 已暴露于UVC光的基础培养基还包含酪氨酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约 60.0mg/L的浓度。
[0042]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.01至约10.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于 UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.05至约 5.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸,其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约.08至约0.12mg/L的浓度。在再一个实施方案中， 已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
0.100至约0.110mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.101至约0.107mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.102至约0.104mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.102mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.103mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫辛酸，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.104mg/L的浓度。
[0043]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含烟酰胺，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.1至约10.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于 UVC光的基础培养基还包含烟酰胺，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.5至约 5.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含烟酰胺,其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.0至约3.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中， 已暴露于UVC光的基础培养基还包含烟酰胺，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
1.5至约2.5mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含烟酰胺，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.5mg/L的浓度。在又一个实施方案中， 已暴露于UVC光的基础培养基还包含烟酰胺，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
2.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含烟酰胺,其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.5mg/L的浓度。
[0044]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醛胺，其添加至经 UVC暴射的基础培养基中，得到约0.1至约10.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醛，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.5至约5.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醛，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.0至约3.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醛，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.5至约2.5mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醛，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.5mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醛，其添加至经UVC暴射的基础培养基中， 得到约2.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醛，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.5mg/L的浓度。[0045]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.0001至约lmg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于 UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.001至约0.lmg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.010至约0.050mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.020至约0.040mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.025至约0.035mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.030至约0.035mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.030 至约0.032mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.030mg/L的浓度。在又一个实施方案中， 已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
0.03lmg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含吡哆醇，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.032mg/L的浓度。
[0046]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素,其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.01至约10.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于 UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.05至约5.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素,其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.1至约1.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.1至约0.5mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.1至约0.3mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.15至约0.25mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.20至约0.23mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.21至约0.22mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于 UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.21Omg/ L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素,其添加至经 UVC暴射的基础培养基中，得到约0.213mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC 光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.216mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含核黄素，其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.219mg/L的浓度。
`[0047]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素,其添加至经UVC 暴射的基础培养基中，得到约0.1至约10.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于 UVC光的基础培养基还包含硫胺素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.5至约 5.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素,其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约1.0至约3.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
1.5至约2.5mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.0至约2.3mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.1至约2.2mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.lmg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含硫胺素，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约2.2mg/L的浓度。[0048]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含甲氨蝶呤，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.0000001至约0.001g/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含甲氨蝶呤，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.000001至约0.0001g/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含甲氨蝶呤，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.00001至约0.0001g/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含甲氨蝶呤，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.00001至约0.00005g/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含甲氨蝶呤，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.00002至约0.00004g/L的浓度。
[0049]在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含甲氨蝶呤，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.00003g/L的浓度。
[0050]在一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12,其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.01至约10.0mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
0.05至约5.0mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.1至约1.0mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.3至约0.8mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.5至约0.75mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.6至约0.7mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约
0.65至约0.70mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.67至约0.69mg/L的浓度。在又一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.67mg/L的浓度。在再一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.68mg/L的浓度。在另一个实施方案中，已暴露于UVC光的基础培养基还包含维生素B12，其添加至经UVC暴射的基础培养基中，得到约0.69mg/L的浓度。[0051]细胞、蛋白质及细胞培养物[0052]一般而言，细胞培养基含有基础溶液或“基础培养基(basal media) ”，本文中可互换地称作“基础培养基(base media)”，向其中添加所有所需组分。在本发明的上下文中，“基础培养基”是指不包含某些UV敏感性组分的细胞培养基。应理解，虽然下面所述的基础培养基一般可包含UV敏感性组分，但可任选地配制成不包含某些UV敏感性组分。例如，如果RPMI1640在本文中被公开为基础培养基，那么应理解它可任选地不包含某些UV敏感性组分，而所述UV敏感性组分在其它情况下通常存在于RPMI1640中。
[0053]通常，“细胞培养基(cell culturmg medium)”(也称为“培养基”、“细胞培养基(cell culture media) ”或“组织培养基”)为本领域从业者所理解的术语且已知是指细胞(如，动物或哺乳动物细胞)生长于其中且一般提供至少一种或多种来自下述组分的营养素溶液:能源(通常呈碳水化合物形式，诸如葡萄糖)；所有必需氨基酸及一般二十种基本氨基酸加上半胱氨酸；通常要求处于低浓度的维生素和/或其它有机化合物；脂类或游离脂肪酸，如亚麻油酸；及痕量元素，如通常要求处于极低浓度、通常在微摩尔浓度范围内的无机化合物或天然存在的元素。细胞培养基也可经补充以含有多种任选组分，诸如激素及其它生长因子，如，胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子、血清等；盐，如，钙盐、镁盐及磷酸盐；及缓冲液，如JEPES ;核苷及碱基，如，腺苷、胸苷、次黄嘌呤；及蛋白质和组织水解物，如，经水解的动物蛋白(蛋白胨或蛋白胨混合物，其可得自动物副产物，纯化的明胶或植物材料)；抗生素，如，庆大霉素(gentamycin);及细胞保护剂,如,普洛尼克多元醇(Pluronicpolyol)(普洛尼克F68 (Pluronic F68))。在某些实施方案中，细胞培养基不含血清且不含动物来源的产物或成分。
[0054]如从业者所了解，动物或哺乳动物细胞在适于所培养的特定细胞且可由本领域的技术人员在无不当实验的情况下确定的培养基中培养。可利用市售培养基，且其包括但不限于伊思考夫改良达尔伯克培养基(Iscove' s Modified Dulbecco' s Medium)、RPMI1640、最低必需培养基-a (MEM-a )、达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco ' sModification of Eagle' s Medium(DMEM))、DME / F12、a MEM、含欧氏 BSS 的伊格尔基础培养基(Basal Medium Eagle with Earle; s BSS)、含谷氨酸胺的高葡萄糖DMEM、不含谷氨酰胺的高葡萄糖DMEM、不含谷氨酰胺的低葡萄糖DMEM、含谷氨酰胺的DMEM: F121: 1、GMEM (格拉斯科氏MEM (Glasgow' s MEM))、含谷氨酰胺的GMEM、格雷氏完全昆虫培养基(Grace' s Complete Insect Medium)、不含 FBS 的格雷氏昆虫培养基(Grace, s InsectMedium)、含谷氨酰胺的汉姆氏F-1O (Ham F-10)、含谷氨酰胺的汉姆氏F_12 (Ham F-12)、含HEPES及谷氨酰胺的MDM、含HEPES且不含谷氨酰胺的MDM、IP41昆虫培养基、不含谷氨酰胺或酚红的15 (莱伯维茨(Leibovitz)) (2X)、不含谷氨酰胺的15 (莱伯维茨)、麦科伊氏5A改良培养基、培养基199、不含谷氨酰胺或酚红的伊格尔MEM (MEM Eagle) (2X)、含谷氨酰胺的MEM伊格尔-欧式BSS (MEM Eagle-Earle' s BSS)、不含谷氨酰胺的MEM伊格尔-欧式BSS、不含谷氨酰胺的MEM伊格尔-汉克氏BSS (MEM Eagle-Hanks BSS)、含谷氨酰胺的NCTC-109、含谷氨酰胺的里克特氏CM培养基(Richter' s CM Medium)、含HEPES、谷氨酰胺和/或青霉素-链霉素的RPMI1640、含谷氨酰胺的RPMI1640、不含谷氨酰胺的RPMI1640、施奈德氏昆虫培养基(Schneider' s Insect Medium)或本领域技术人员已知的任何其它培养基，它们针对特定细胞类型进行配制。必要时或需要时，且如本领域技术人员熟知及使用常规技术所实施，可向前述示例性培养基中添加补充组分或成分，包括适当浓度或量的任选组分。
[0055]另外，适于本发明方法的细胞培养条件为分批培养、补料分批培养或连续培养细胞通常所采用或已知的条件，注意pH、溶解氧(O2)和二氧化碳(CO2)、搅拌和湿度及温度。
[0056]本发明组合物可用于培养多种细胞。在一个实施方案中，培养基用于培养真核细胞，诸如植物和/或动物细胞。细胞可为哺乳动物细胞、鱼类细胞、昆虫细胞、两栖动物细胞或禽类细胞。培养基可用于培养以下细胞，包括，但不限于MK2.7细胞、PER-C6细胞、CHO 细胞、HEK293细胞、COS细胞及Sp2 / 0细胞、5L8杂交瘤细胞、达乌迪细胞(Daudi cell)、 EL4细胞、海拉细胞(HeLa cell)、HL_60细胞、K562细胞、尤卡特细胞(Jurkat cell),THP-1 细胞、Sp2 / 0细胞、原代上皮细胞(如，角质化细胞、子宫颈上皮细胞、支气管上皮细胞、 气管上皮细胞、肾上皮细胞及视网膜上皮细胞)及培养的细胞株及其品系(如，293胚肾细胞、BHK细胞、海拉子宫颈上皮细胞及PER-C6视网膜细胞、MDBK(NBL-1)细胞、911细胞、 CRFK细胞、MDCK细胞、贝欧细胞(BeWo cell)、张氏细胞(Chang cell)、底特律562细胞 (Detroit562cell)、海拉 229 细胞、海拉 S3 细胞、Hep-2 细胞、KB 细胞、LS180 细胞、LS174T 细胞、NC1-H-548 细胞、RPMI2650 细胞、Sff-13 细胞、T24 细胞、W1-28VA13.2RA 细胞、WISH 细胞、BS-C-1 细胞、LLC-MK2 细胞、克隆 M-3 细胞(Clone M_3cell)、I一 10 细胞、RAG 细胞、 TCMK-1 细胞、Y-1 细胞、LLC-PK1 细胞、PK(15)细胞、GH1 细胞、GH3 细胞、L2 细胞、LLC一RC256 细胞、MH1C1细胞、XC细胞、MDOK细胞、VSW细胞及TH— 1、BI细胞或它们的衍生物)、来自任何组织或器官的纤维母细胞(包括但不限于心、肝、肾、结肠、肠、食道、胃、神经组织(脑、 脊髓)、肺、血管组织(动脉、静脉、毛细血管)、淋巴组织(淋巴腺、腺样增殖体、扁桃体、骨髓和血液)、脾、及纤维母细胞和纤维母细胞样细胞株(如，TRG-2细胞、IMR-33细胞、Don 细胞、GHK-21细胞、瓜氨酸血症细胞、德姆西细胞(Dempsey cells)、底特律551细胞、底特律510细胞、底特律525细胞、底特律529细胞、底特律532细胞、底特律539细胞、底特律 548细胞、底特律573细胞、HEL299细胞、IMR-90细胞、MRC-5细胞、W1-38细胞、W1-26细胞、MiCl1 细胞、CV-1 细胞、C0S-1 细胞、C0S-3 细胞、C0S-7 细胞、Vero 细胞、DBS — FrhL-2 细胞、BALB / 3T3 细胞、F9 细胞、SV — T2 细胞、M — MSV — BALB / 3T3 细胞、K一BALB 细胞、 BL0-11 细胞、N0R-10 细胞、C3H / IOTI / 2 细胞、HSDM1C3 细胞、KLN205 细胞、McCoy 细胞、小鼠L细胞、品系2071 (小鼠L)细胞、L一M品系(小鼠L)细胞、L一MTK(小鼠L)细胞、NCTC 纯系2472及2555、SCC — PSAl细胞、Swiss / 3T3细胞、印度莫塔克细胞(Indian muntac cells)、SIRC细胞、C11细胞及詹森细胞(Jensen cell)或其衍生物)或本领域的技术人员已知的任何其它细胞类型。
[0057]本文公开的培养基可用于培养悬浮细胞或黏附细胞。本发明组合物适于细胞的黏附式、单层式或悬浮式培养、转染及培育，且适于在单层式或悬浮式培养的细胞中表达蛋白质或抗体。
[0058]由本发明培养基支持的细胞可来源于任何动物，诸如小鼠或仓鼠和人类。在本发明培养基中培育的细胞可为正常细胞或异常细胞(即，转化的细胞、培养的细胞或来源于患病组织样本的细胞)。
[0059]动物细胞、哺乳动物细胞、培养的细胞、动物或哺乳动物宿主细胞、宿主细胞、重组细胞，重组宿主细胞等为可根据本发明方法培养的细胞的所有术语。此类细胞通常为得自或来源于哺乳动物的细胞株且当在含有适当营养素和/或生长因子的培养基中置于单层式培养或悬浮式培养时能够生长并存活。对于特定细胞培养的生长和维持所必需的生长因子和营养素能够由相关领域的技术人员根据经验轻易地确定，诸如例如Barnes和 Sato (1980, Cell, 22:649):Mamma.1 ian Cell Culture, J.P.Mather 编，Plenum Press, NY, 1984 ;及美国专利N0.5，721，121中所述。
[0060]众多类型的细胞可根据本发明方法培养。细胞通常为动物或哺乳动物细胞，其可表达及分泌，或可经分子工程改造以表达及分泌大量特定蛋白(更具体而言为关注的糖蛋白)至培养基中。应理解，由宿主细胞产生的糖蛋白对宿主细胞而言可为内源或同源的。或者，糖蛋白对宿主细胞而言为异源(即，外来)的，例如，由中国仓鼠卵巢(CHO)宿主细胞产生及分泌的人类糖蛋白。另外，哺乳动物糖蛋白，即，最初得自或来源于哺乳动物有机体的糖蛋白，是由本发明方法获得且可由细胞分泌至培养基中。
[0061]有利地由本发明方法产生的哺乳动物糖蛋白的非限定性实例包括细胞激素、细胞激素受体、生长因子(如，EGF、HER-2、FGF — a、FGF — ^、TGF- a、TGF — ^、PDGF, IGF-U IGF-2、NGF、NGF— (6);生长因子受体，包括融合蛋白或嵌合蛋白。其它非限制性实例包括生长激素(如，人类生长激素、牛生长激素)；胰岛素(如，胰岛素A链和胰岛素B链)、胰岛素原；红血球生成素(EPO);达贝泊汀(darb印oetin)、群落落刺激因子(如，G-CSF, GM-CSF, M-CSF);白细胞介素(如IL-1至IL-12);血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGF-R)； 干扰素(如IFN-a、P或Y);肿瘤坏死因子(如，TNF-a和TNF-P )及其受体、TNFR-1和 TNFR-2 ;血小板生成素(TPO);凝血酶；脑利钠肽(BNP);凝血因子(如，因子VII1、因子IX、 冯威利布兰德氏因子(von Willebrands factor)等)；抗凝血因子；组织纤维蛋白溶酶原活化因子(TPA)如，尿激酶或人类尿液或组织型TPA;促滤泡激素(FSH);促黄体生成激素 (LH);降钙素；CD 蛋白质(如，0)3、0)4、0)8、0)28、0)19等);CTLA 蛋白质(如，CTLA4) ；T 细胞和B细胞受体蛋白；骨形态形成蛋白(BNP，如，BMP-U BMP-2、BMP-3等);神经营养因子如，骨源性神经营养因子(BDNF);神经营养素，如，3— 6 ;肾素；类风湿因子；RANTES ;白蛋白；松弛素；巨噬细胞抑制蛋白(如，MIP-1、MIP-2);病毒蛋白或抗原；表面膜蛋白；离子通道蛋白；酶；调控蛋白；抗体；免疫调节蛋白(如，HLA、MHC、B7家族)；导向受体；转运蛋白；超氧化物歧化酶(SOD) ;G蛋白偶联受体蛋白(GPCR);神经调节蛋白；阿尔茨海默氏病 (Alzheimer' s Disease)相关的蛋白质和肽(如，A_P)及本领域已知的其它糖蛋白。融合蛋白及多肽、嵌合蛋白及多肽、以及任一上述蛋白质和多肽的片段或部分、或突变体、变异体、或类似物也包含在可由本发明方法产生的适合蛋白质、多肽和肽中。
[0062]适于容纳、表达及产生蛋白质供后续分离和/或纯化的动物或哺乳动物宿主细胞的非限制性实例包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，诸如CHO-Kl (ATCC CCL-61)、DG44(Chasm 等人，1986Som.Cell Molec.Genet., 12:555—556 ；KoIkekar 等人，1997, Biochemistry, 36:10901—10909 ;及 WOOl / 92337A2)、二氢叶酸还原酶阴性 CHO 细胞(CH0 / -DHFR, Urlaub 及 Chasin, 1980，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 77:4216)、及 dp 12.CHO 细胞(美国专利 N0.5，721，121);由 SV40 转化的猴肾 CVl 细胞(C0S 细胞、C0S-7，ATCC CRL-1651);人`类胚肾细胞(如，293细胞或经亚克隆以在悬浮式培养中生长的293细胞，Graham等人，1977， J.Gen.Virol.,36:59);幼仓鼠肾细胞(BHK,ATCC CCL-10);猴肾细胞(CVI,ATCC CCL-70)； 非洲绿猴肾细胞(VER0-76，ATCC CRL-1587 ；VER0,ATCC CCL-81);小鼠塞特利氏细胞(mousesertoli cell) (TM4, Mather, 1980，Biol.R 印 rod.，23:243— 251);人类子宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL-2);犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL-34);人肺细胞(W138，ATCC CCL-75);人类肝癌细胞Ofep-G2，HB8065);小鼠乳腺肿瘤细胞(MMT060562，ATCC CCL-51);布法罗大鼠肝细胞(buffalo rat liver cell) (BRL3A, ATCC CRL1442) ；TRI 细胞(Mather, 1982, AnnalsNY Acad.Sc1.，383:44-68) ；MCR5 细胞；FS4 细胞。
[0063]适于使用本发明方法和过程培养的细胞可含有如，经由转化、转染、感染、或注射而引入的表达载体(构建体)，诸如容纳编码序列或其部分的质粒等，该编码序列或其部分编码用于在培养过程中表达和产生的蛋白质。这些表达载体含有插入的编码序列的转录和翻译所必需的元件。本领域技术人员熟知和实施的方法可用于构建含有编码所产生的蛋白质和多肽的序列以及适当的转录和翻译控制元件的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。这些技术描述于J.Sambrook等人，1989，Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Plainview,N.Y.及 F.M.Ausubel 等人，1989,Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley& Sons, New York，N.Y，所有这些文献均为了任何目的并入本文。
[0064]除了以悬浮式培养或单层式培养培育哺乳动物细胞以外，本发明培养基和方法也可用于由哺乳动物细胞产生病毒的方法。根据本发明该方面的此类方法包括(a)获得待用病毒感染的哺乳动物细胞；(b)使所述细胞与病毒在适于促进病毒感染细胞的条件下接触 '及(C)在本发明培养基中在适于促进细胞产生病毒的条件下培育细胞。根据本发明，可以在本发明培养基中培育细胞之前、期间或之后使细胞与病毒接触；用病毒感染哺乳动物细胞的最佳方法为本领域熟知的且将为普通技术人员所熟悉。可预期在本发明培养基中悬浮培育的经病毒感染的哺乳动物细胞所产生的病毒效价高于(如，为2倍、3倍、5倍、10倍、20倍、25倍、50倍、100倍、250倍、500倍或1000倍高效价)未在本发明培养基中悬浮培育的细胞。这些方法可用于产生多种哺乳动物病毒和病毒载体，包括但不限于腺病毒、腺伴随病毒、逆转录病毒、流感病毒和用于疫苗制造的其它病毒等。在本发明培养基中培育经感染细胞之后，包含病毒、病毒载体、病毒粒子或其组分(蛋白质和/或核酸(DNA和/或RNA))的所用培养基可用于达成多种目的，包括产生疫苗、产生用于细胞转染或基因治疗的病毒载体、感染动物或细胞培养物、研究病毒蛋白和/或核酸等。或者，可根据本领域的普通技术人员所熟悉的蛋白质和/或核酸分离技术，使病毒、病毒载体、病毒粒子或其组分任选地从所使用的培养基中分离。
[0065]细胞培养类型
[0066]出于理解而非限制的目的，熟练从业者应了解，用于蛋白质产生的细胞培养和培养操作可包括三种通用类型；即连续培养、分批培养和补料分批培养。在连续培养中，例如，在培养期间向细胞提供新鲜培养基补充物(即，补料培养基)，同时每天移除旧培养基且例如，每天或连续收集产物。在连续培养中，补料培养基可每天添加且可连续添加，即，以滴液或输注形式添加。对于连续培养，细胞可在培养物中保持所要时长， 只要细胞保持存活且维持环境及培养条件即可。
[0067]在分批培养中，最初在培养基中培养细胞且不移除、置换或补充此培养基，即在培养操作期间或结束之前不给细胞“补给”新培养基。在培养操作结束时收集所需产物。
[0068]对于补料分批培养，通过在操作期间每天一次或多次(或连续)给培养基补充新鲜培养基来增加培养操作时间，即，在培养期间给细胞“补给”新培养基(“补料培养基”)。 补料分批培养可包括如上文所述的各种补给方案和时间，例如每天、每隔一天、每两天等， 每天一次以上或每天少于一次等。此外，补料分批培养可连续补给补料培养基。接着在培养/产物操作结束时收获所需产物。
[0069]根据本发明，可使用动物或哺乳动物细胞培养惯常采用的培养容器和/或培养设备，在大规模或小规模产生蛋白质的条件下，进行细胞培养及由细胞产生糖蛋白。如本领域技术人员所了解，在实验室规模下通常使用组织培养皿、T-烧瓶和旋转烧瓶。对于在较大规模(如，500L、1000L、2000L、5000L、10000L等)下培养，可使用发酵槽型罐式培养装置、气升型培养装置、流体化床生物反应器、中空纤维生物反应器、滚瓶培养、搅拌罐生物反应器系统、填充床型培养装置，或本领域技术人员已知的任何其它合适的装置。微载体可能与或可能不与滚瓶或搅拌罐生物反应器系统一起使用。该系统可以分批、连续或补料分批模式操作。另外，培养设备或系统可能配备有或可能不配备有利用过滤器、重力、离心力等的细胞分离器。
[0070]在一个实施方案中，使细胞培养基础培养基暴露于UVC光，然后储存直至需要时， 届时，在用于细胞培养之前将添加剂包添加至经UVC暴射的基础培养基中。在另一个实施方案中，作为自动化过程的一部分处理细胞培养基础培养基，其中作为分步过程的一部分将添加剂包添加至经UVC暴射的基础培养基中，不间断地储存。熟练从业者应容易设想，可进行此UVC暴射过程的许多方式，其中必需步骤为基础培养基的UVC暴射，继而在某一时间点添加添加剂包。
[0071]UV 光
[0072]术语“紫外光”是指从X射线区域(IOOnm)延伸至可见区(400nm)的光的电磁波谱的区段。特别地，紫外光通常分成四个部分:(I)真空紫外光一波长为100至200nm，(2) 紫外线C (UVC)—波长为200-280nm, (3)紫外线B (UVB)—波长为280至315nm,及(4)紫外线八(爪^)—波长为315至40011111。在一个实施方案中，在将细胞培养基引入培养设备(如， 生物反应器)中之前，使细胞培养基础培养基暴露于UVC光。
[0073]在本发明的一个实施方案中，在将细胞培养基引入生物反应器中之前，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与280nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与275nm之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与270nm之间的UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于 200nm与265nm之间的UVC光。在再一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与 260nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与255nm 之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与250nm之间的 UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与245nm之间的UVC 光。在再一个实施方案中，使细胞培养`基暴露于波长介于200nm与240nm之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与235nm之间的UVC光。在一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与230nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与225nm之间的UVC光。在又一个实施方案中， 使细胞培养基暴露于波长介于200nm与220nm之间的UVC光。在再一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与215nm之间的UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与210nm之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于200nm与205nm之间的UVC光。在又一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于205nm与280nm之间的UVC光。在再一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于210nm与280nm之间的UVC光。在又一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于215nm与280nm之间的UVC光。在再一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于220nm与280nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于225nm与280nm之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于230nm与280nm之间的UVC光。在再一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于235nm与280nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于240nm与280nm之间的UVC光。在又一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于245nm与280nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于250nm与280nm之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于255nm与280nm之间的UVC光。在再一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于260nm与280nm之间的UVC光。在一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于265nm与280nm之间的UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于270nm与280nm之间的UVC光。在再一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于275nm与280nm之间的UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于205nm与275nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于2IOnm与270nm之间的UVC光。在再一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于215nm与265nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于220nm与260nm之间的UVC光。在再一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于225nm与255nm之间的UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于230nm与250nm之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于235nm与245nm之间的UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于245nm与265nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于248nm与260nm之间的UVC光。在又一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于249nm与259nm之间的UVC光。在另一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于250nm与258nm之间的UVC光。在再一实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于251nm与257nm之间的UVC光。在又一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于252nm与256nm之间的UVC光。在另一个实施方案中，使细胞培养基暴露于波长介于253nm与255nm之间的UVC光。
[0074] 在本发明的另一个实施方案中，在将细胞培养基引入至生物反应器中之前，使细胞培养基暴露于波长为254nm的UVC光，。在本发明其它实施方案中，细胞培养基暴露于UVC光的波长为254nm+/-lnm,或波长为254nm+/-2nm,或波长为254nm+/-3nm,或波长为 254nm+/—4nm,或波长为 254nm+/-5nm,或波长为 254nm+/-6nm,或波长为 254nm+/_7nm,或波长为254nm+/-8nm,或波长为254nm+/-9nm,或波长为254nm+/-10nm,或波长为254nm+/_15nm,或波长为 254nm+/-20nm,或波长为 254nm+/_25nm。
[0075]本文所用的术语“能量”是指暴射所处理的细胞培养基的紫外辐射的量，以毫焦耳/cm2或焦耳/m2为单位。在本发明的一个实施方案中，在将细胞培养基引入生物反应器中之前，使细胞培养基暴露于能量密度为25-350mJ/cm2、更优选能量密度为60_250mJ/cm2且最优选能量密度为100-150mJ/cm2的UVC光。在另一个实施方案中，在将细胞培养基引 入生物反应器中之前，使细胞培养基暴露于能量密度为125mJ/cm2的UVC光。在本发明的其它实施方案中，将细胞培养基暴露于能量密度为125mj/cm2+/-lmj/cm2，或能量密度为 125mj/cm2+/-2mj/cm2，或能量密度为 125mj/cm2+/-3mj/cm2，或能量密度为 125mJ/ cm2+/-4mj/cm2,或能量密度为 125mj/cm2+/-5mj/cm2，或能量密度为 125mJ/cm2+/-10mJ/ cm2,或能量密度为125mj/cm2+/-15mj/cm2，或能量密度为1252+/-20mJ/cm2，或能量密度为 125mj/cm2+/-25mj/cm2，或能量密度为 125mj/cm2+/-30mj/cm2，或能量密度为 125mJ/ cm2+/-40mj/cm2，或能量密度为 125mJ/cm2+/-50mJ/cm2，或能量密度为 125mJ/cm2+/-60mJ/ cm2,或能量密度为125mj/cm2+/-70mj/cm2，或能量密度为125mj/cm2+/-80mj/cm2’或能量密度为 125mj/cm2+/-90mj/cm2，或能量密度为 125mj/cm2+/-100mj/cm2，或能量密度为 125mJ/ cm2+/-110mj/cm2,或能量密度为125mj/cm2+/-120mj/cm2的UVC光。在本发明的另外其它实施方案中，将细胞培养基暴露于能量密度为175mj/cm2+/-lmj/cm2，或能量密度为175mJ/ cm2+/-2mj/cm2,或能量密度为 175mj/cm2+/-3mj/cm2，或能量密度为 175mj/cm2+/-4mj/cm2， 或能量密度为175mj/cm2+/-5mj/cm2，或能量密度为175mj/cm2+/-10mj/cm2，或能量密度为 175mj/cm2+/-15mj/cm2，或能量密度为 175mj/cm2+/-20mj/cm2，或能量密度为 175mJ/ cm2+/-25mj/cm2,或能量密度为 175mj/cm2+/-30mj/cm2，或能量密度为 175mJ/cm2+/-40mJ/ cm2,或能量密度为175mj/cm2+/-50mj/cm2，或能量密度为175mj/cm2+/-60mj/cm2，或能量密度为 175mj/cm2+/-70mj/cm2，或能量密度为 175mj/cm2+/-80mj/cm2，或能量密度为 175mJ/ cm2+/_90mj/cm2,或能量密度为 175mJ/cm2+/-100mJ/cm2,或能量密度为 175mJ/cm2+/-110mJ/ cm2,或能量密度为 175mj/cm2+/-120mj/cm2，或能量密度为 175mj/cm2+/-130mj/cm2，或能量密度为175mj/cm2+/-140mj/cm2，或能量密度为175mj/cm2+/-150mj/cm2，或能量密度为 175mJ/cm2+/-160mJ/cm2,或能量密度为 175mJ/cm2+/-17OmJ/cm2 的 UVC 光。
[0076]尽管已提供能量密度的特定实施例，但应注意，可在本文所公开的方法中使用的 UVC源传递在目标能量密度周围的能量密度范围；该能量密度范围也称作“剂量分布”。能量密度分布的一个特征为能量密度扩展的不对称性，其具有“高剂量尾部”。分布可使用 P10、P50、P90及平均值的几率量度来归纳。P#值描述了处理流体(如，培养基)的剂量值。因此，60mJ/cm2的PlO值意指10%流体接收小于60mJ/cm2的能量密度。该方法适于 UVC暴射装置，诸如本文所述的螺旋状UVC反应器。
[0077]在所公开方法的另一个实施方案中，可采用层状UVC暴射装置(如，薄膜UVC反应器)来传递UVC光。当采用层状或薄膜UVC暴射装置时，分布可近似如下:P10=l/2*平均值，P90=2*平均值。因此，若欲在本文所述的条件下采用层状或薄膜UVC暴射装置，则分布将为 PlO ~60，平均值=125mJ/cm2 和 P90 ~250mJ/cm2。
[0078]与以上论述一致，应注意，当在本发明中提供UVC光的目标能量密度时，其暗指目标能量密度体现由上文所提供的剂量分布规则所述的剂量范围。更具体而言，在一个实施方案中，目标UVC能量密度包括处于能量密度的P10-P60分布内的所有能量密度；在另一个实施方案中，目标UVC能量密度包括处于能量密度的P65分布内的所有的能量密度；在另一个实施方案中，目标UVC能量密度包括处于能量密度的P70分布内的所有能量密度；在另一个实施方案中，目标UVC能量密度包括处于剂量的P75分布内的所有能量密度；在另一个实施方案中，目标UVC能量密度包括处于能量密度的P80分布内的所有能量密度；在另一个实施方案中，目标UVC剂量包括处于能量密度的P85分布内的所有能量密度；在另一个实施方案中，目标UVC能量密度包括处于能量密度的P90分布内的所有的能量密度；在另一个实施方案中，目标UVC能量密度包括处于能量密度的P95分布内的所有能量密度。
[0079]在本发明的上下文中，应了解，UVC能量密度可使用所提供的标量范围来描述(如，125mj/cm2+/-lmj/cm2 的能量密度、或 125mj/cm2+/-2mj/cm2 的能量密度、或 125mJ/cm2+/-3mj/cm2 的能量密度、或 125mj/cm2+/-4mj/cm2 的能量密度、或 125mJ/cm2+/-5mJ/cm2 的能量密度、或 125mj/cm2+/-10mj/cm2 的能量密度、或 125mj/cm2+/-15mj/cm2 的能量密度、或125mj/cm2+/-20mj/cm2的能量密度、或125mj/cm2+/-25mj/cm2的能量密度、或 125mJ/cm2+/-30mJ/cm2 的能量密度、或 125mJ/cm2+/-40mJ/cm2 的能量密度、或 125mJ/cm2+/-50mj/cm2 的能量密度、或 125mJ/cm2+/-60mJ/cm2 的能量密度、或 125mJ/cm2+/_70mJ/cm2的能量密度、或125mj/cm2+/-80mj/cm2的能量密度、或125mj/cm2+/-90mj/cm2的能量密度、或125mj/cm2+/-100mj/cm2的能量密度、或125mj/cm2+/-110mj/cm2的能量密度、或125mJ/cm2+/-120mJ/cm2的能量密度或在本发明的另外其它实施方案中，175mJ/cm2+/-lmJ/cm2的能量密度、或175mj/cm2+/-2mj/cm2的能量密度、或175mj/cm2+/-3mj/cm2的能量密度、或 175mj/cm2+/-4mj/cm2 的能量密度、或 175mj/cm2+/-5mj/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-10mj/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-15mJ/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-20mJ/cm2 的能量密度、或 175mj/cm2+/-25mj/cm2 的能量密度、或 175mj/cm2+/-30mj/cm2 的能量密度、或175mj/cm2+/-40mj/cm2的能量密度、或175mj/cm2+/-50mj/cm2的能量密度、或 175mJ/cm2+/-60mJ/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-70mJ/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-80mj/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-90mJ/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-100mJ/cm2 的能量密度、或 175mj/cm2+/-110mj/cm2 的能量密度、或 175mj/cm2+/-120mj/cm2 的能量密度、或175mj/cm2+/-130mj/cm2的能量密度、或175mj/cm2+/-140mj/cm2的能量密度、或 175mJ/cm2+/-150mJ/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-160mJ/cm2 的能量密度、或 175mJ/cm2+/-170mj/cm2)的能量密度，或其可使用所述的剂量分布函数来描述(如，目标能量密度P10-60、P65、P70、P75、P80、P85、P90 和 P95 范围内的能量密度)。
[0080]UVC暴射装置
[0081]本发明的细胞培养基及方法可与用以使细胞培养基础培养基暴露于UVC的任何装置、系统、设备或方法一起使用。装置的非限制性实例可见于美国专利N0.7，651，660、美国专利N0.6，773，608、美国专利N0.6，596，230、美国专利N0.5，725，757、美国专利N0.5，707，594和美国专利申请(公布N0.20040245164A1。在一个实施方案中，本发明的细胞培养基和方法与螺旋状UV反应器一起使用。在另一个实施方案中，本发明的细胞培养基和方法与层流(或薄膜)UV反应器一起使用。
[0082]其它培养某处理
[0083]预期本文所提供的细胞培养基和方法可与除UVC暴射以外的处理方法或装置一起使用，以在细胞培养之前对培养基进行灭菌或消毒。在一个实施方案中，HTST与本发明的培养基和方法组合使用(参见，如，美国专利N0.7，420，183)。在另一个实施方案中，pH值调整(如，调整至4以下)与本发明的培养基和方法组合使用。
[0084]在一个实施方案中，在暴露于UVC光之后对细胞培养基进行过滤步骤。本文所用的术语“无菌过滤”或“无菌过滤器”是指通过使用标准生物无菌过滤器从细胞培养基中移除微等离子体和其它潜在污染物。在本发明的一个实施方案中，在将细胞培养基引入生物反应器中之前，使细胞培养基通过具有最大尺寸为200nm的孔的无菌过滤器。
[0085]在另一个实施方案中，在暴露于UVC光之前或之后，使细胞培养基通过深层过滤器(cbpth filter) 0术语“深层过滤器”是指具有多个过滤层的过滤器，各层负责过滤不同尺寸和密度的微粒物质。这种类型的过滤过程类似于尺寸排阻。轻物质在滤床顶部分离。 培养基在下层中逐渐变得较细且较密。在上层中移除较大悬浮粒子，而由下层移除较小粒子。
[0086]在另一个实施方案中，细胞培养基用灭活病毒的化学品处理，诸如溶剂、洗涤剂、 补骨脂素、或(6-丙内酯。
_7] 其它实施方案
[0088]在一个实施方案中，本发明提供一种提供病毒灭活培养基的方法，该方法通过给培养基中补充过量的已知或疑似对UVC光敏感的培养基组分，如，硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素 B12 (氰钴胺素)以补偿其经UVC光处理后的部分破坏来达成。
[0089]如本文所述，多 种常用培养基组分在暴露于UVC光之后降解或变得生物学上无活性。为补偿此降解，可将易发生UVC介导的降解的培养基组分以过剩量添加至培养基配方中，该过剩量在暴露于UVC光之后提供足量的这些化合物。换句话说，因UVC暴射而灭活的给定培养基组分的量可通过添加灭活组分的量来补充以使培养基具有所需量的组分。在一个实施方案中，可在UVC暴射之前作为培养基的补充物添加组分；而在另一个实施方案中， 可在UVC暴射之后作为培养基的补充物添加组分。
[0090]在一个特定实例中，鉴定已知或疑似由UVC光灭活的培养基组分。然后鉴别培养基中组分的初始量。独立地，基于预定UVC剂量根据经验确定降解的组分的量。或者，可通过使用组分的已知特性作为指导(如，吸光度、浓度、UVC剂量等)进行计算来确定。然后将预测待降解的组分量以无菌添加方式(如，包含适当浓度的组分的无菌溶液)添加至培养基中。随后，将补充的培养基暴露于UVC光。
[0091]在另一个特定的实例中，鉴定已知或疑似由UVC光灭活的培养基组分。然后鉴别培养基中组分的初始量。独立地，基于预定UVC剂量根据经验确定降解的组分的量。或者， 可通过使用组分的已知特性作为指导(如，吸光度、浓度、UVC剂量等)进行计算来确定。然后使经补充的培养基暴露于UVC光。随后，将预测待降解的组分的量以无菌添加方式(如， 包含适当浓度的组分的无菌溶液)添加至培养基中。
[0092]在已描述本发明的情况下，提供以下实施例以作说明而非限制。
实施例
[0093]所有实施例的材料和方法
[0094]重组人类红血球生成素是由在包含以下UV敏感性组分的DMEM/F12基础培养基中培养的CHO细胞株产生:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、 吡哆醇、核黄素、硫胺素及维生素B12和氨甲喋呤。
[0095]使这些实验的经UVC处理的培养基和对照培养基通过灭菌级过滤器。自小瓶中解冻细胞且在扩大体积滚瓶中实现按比例放大，继而接种至一系列生物反应器中用于过程的
生产期。[0096]这些实验在下列时间间隔下进行三次收集:收集1，8天;收集2，7天;收集3，7天。在37.(TC的设定点下操作过程的滚瓶按比例放大部分。在36.(TC的设定点下操作过程的滚瓶接种和生产部分。
[0097]以60W/m2的照射强度，以介于5至20升/小时(LPH)之间的流速，使用螺旋状流式UVC反应器(在254nm下)完成UVC处理。用对于所需条件正确的UVC剂量处理培养基。
[0098]实施例1
[0099]表1:实验条件-实施例1
【权利要求】
1.一种细胞培养基，其包含:a.暴露于UVC光的基础培养基；及b.包含UV敏感性培养基组分的添加剂包，所述添加剂包在UVC暴射后添加至所述基础培养基中。
2.根据权利要求1所述的细胞培养基，其中所述基础培养基不包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、i 种、十二种或十三种选自以下的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。
3.根据权利要求1所述的细胞培养基，其中所述添加剂包包含至少一种、两种、三种、 四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、^ 种、十二种或十三种选自以下的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的细胞培养基，其中所述基础培养基呈粉末或液体形式，且所述添加剂包呈粉末或液体形式。
5.根据权利要求1所述的细胞培养基，其中所述培养基适于培养哺乳动物细胞。
6.根据权利要求1所 述的细胞培养基，其中所述培养基适于培养昆虫细胞。
7.一种用于制备经UVC暴射的细胞培养基制剂的方法，所述方法包括以下步骤:a.使基础培养基暴露于UVC光；b.将包含UV敏感性组分的添加剂包添加至所述经UVC暴射的基础培养基中。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述基础培养基不包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、i 种、十二种或十三种选自以下的组分:硫辛酸、 组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述添加剂包包含至少一种、两种、三种、四种、 五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种、十二种或十三种选自以下的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。
10.根据权利要求7-9中任一项所述的方法，其中所述UVC光的波长为约254nm。
11.根据权利要求10所述的方法，其中将所述基础培养基暴露于能量密度为约25至约 350 mj/cm2 的 UVC 光。
12.根据权利要求11所述的方法，其中将所述基础培养基暴露于能量密度为约125 mj/cm2 的 UVC 光。
13.根据权利要求11所述的方法，其中将所述基础培养基暴露于能量密度为约175 mj/cm2 的 UVC 光。
14.根据权利要求7所述的方法，其中将所述基础培养基暴露于UVC光的步骤足以破坏所述基础培养基中任何非包膜病毒的核酸。
15.根据权利要求7所述的方法，其中所述UVC光使用薄膜UVC反应器传递。
16.根据权利要求7所述的方法，其中所述UVC光使用螺旋状UVC反应器传递。
17.一种用于产生蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤:a.使基础培养基暴露于UVC光； b.将包含UV敏感性培养基组分的添加剂包添加至所述经UVC暴射的基础培养基中；和 c.在所述经UVC处理的培养基中培养细胞以产生所需的蛋白质。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述基础培养基不包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、^ 种、十二种或十三种选自以下的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。
19.根据权利要求17所述的方法，其中所述包包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、i 种、十二种或十三种选自以下的组分:硫辛酸、组氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、吡哆醇、核黄素、硫胺素、甲氨蝶呤及维生素B12。
20.根据权利要求17-19中任一项所述的方法，其中所述UVC光的波长为约254nm。
21.根据权利要求20所述的方法，其中将所述培养基暴露于能量密度为约25至约350mj/cm2 的 UVC 光。
22.根据权利要求21所述的方法，其中将所述基础培养基暴露于能量密度为约125mj/cm2 的 UVC 光。
23.根据权利要求21所述的方法，其中将所述基础培养基暴露于能量密度为约175mj/cm2 的 UVC 光。`
24.根据权利要求17所述的方法，其中将所述基础培养基暴露于UVC光的步骤足以破坏所述基础培养基中任何非包膜病毒的核酸。
25.根据权利要求17所述的方法，其中所述细胞为CHO细胞。
26.根据权利要求17所述的方法，其中所述蛋白质为重组人类红细胞生成素。
27.根据权利要求17所述的方法，其中所述UVC光使用薄膜UVC反应器传递。
28.根据权利要求17所述的方法，其中所述UVC光使用螺旋状UVC反应器传递。
【文档编号】C12N5/00GK103534345SQ201280013227
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2012年2月17日 优先权日:2011年2月23日
【发明者】R.哈特, R.M.博伊基恩 申请人:安姆根有限公司