专利名称：一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法
技术领域：
本发明属于食品加工技术领域，涉及一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法，具体涉及以海地瓜为原料，通过组织自溶及外源蛋白酶酶解制备具有抗氧化功能的小分子多肽的方法。
背景技术：
海地瓜是海参的一种，其体壁组织富含蛋白质，食用价值高。目前多肽产品开发已经成为海地瓜深加工产品研发的重要方向。海地瓜多肽一般以可供食用的鲜活海地瓜为原料，利用蛋白酶等进行水解制成，是具有多种功能活性的肽类，具有良好的稳定性、水溶性，因此与普通的制品相比，多肽产品具有易消化、生物效价高、无抗原性等优点。海地瓜多肽(特别是小分子多肽)具有明显的抗氧化活性功能，是消除自由基，延缓机体衰老，预防疾病发生的功能性食品和药品的重要来源。国内关于利用自溶及蛋白酶复合酶解制备海地瓜抗氧化多肽的研究尚未见报道。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法，
为解决上述技术问题，所采用的技术方案具体步骤是:
步骤(I).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，低于4°C的温度下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒径小于等于0.5cm ；
步骤(2).在海地瓜肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至5.0 7.0，45 60°C自溶酶解8 14h ，得到海地瓜组织水解液； 步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌10 20min，冷却至常温后，调整pH值至
6.0 7.0，添加蛋白酶1000 5000U/g，然后置于40 60°C水浴中水解6 12h，水解过程中保持搅拌速度与PH恒定，得到海地瓜水解液；
所述的蛋白酶可为所有蛋白酶；
步骤(4).将海地瓜水解液置于80 100°C水浴中灭活蛋白酶10 20min，冷却至常温后，3000 8000r/min离心10 30分钟，取上清液；
步骤(5).采用超滤膜技术对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液；
步骤￠).海地瓜小分子多肽液经50 60°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。作为优选，一种海地瓜抗氧化多肽制备方法的具体操作步骤是:
步骤(I).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，(TC下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒径小于等于0.5cm ；
步骤(2).在海地瓜肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至6.0，50°C自溶酶解12h，得到海地瓜组织水解液；
步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌lOmin，冷却至常温后，调整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于55 °C水浴中水解8h，水解过程中保持搅拌速度与pH恒定，制得海地瓜水解液；
步骤(4).将海地瓜水解液置于85°C水浴灭活木瓜蛋白酶20min,冷却至常温后，5000r/min离心15分钟,取上清液；
步骤(5).采用截留分子量为3000Da的切向流超滤膜包对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液；
步骤￠).海地瓜小分子多肽液经55°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。本发明具有的有益效果:
本发明制备的海地瓜抗氧化多肽具有很好的水溶性，多肽分子量低，易被人体吸收；抗氧化功能活性稳定，具有延缓衰老的功效，在功能性产品领域有着广阔的市场前景。本发明制备方法工艺简单、过程易控，以价格低廉的海地瓜作为原料，利用其自身组织自溶及外源添加蛋白酶，进行复合酶解，在丰富酶切位点多样性的同时，降低蛋白酶使用量，进一步降低生产成本，方法制成的海地瓜抗氧化多肽具有安全性高、易吸收及无毒害作用，具有良好的清除自由基功能。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步的分析(下面实施例中海地瓜肉糜粒径小于等于 0.5cm)。实施例1 步骤(I).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，低于4°C的温度下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步骤(2).在海地瓜肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至5.0，45°C自溶酶解14h，得到海地瓜组织水解液；
步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌lOmin，冷却至常温后，调整pH值至6.0，添加胰蛋白酶1000U/g，然后置于40°C水浴中水解12h，水解过程中保持搅拌速度与pH恒定，得到海地瓜水解液；
步骤(4).将海地瓜水解液置于80°C水浴中灭活蛋白酶20min,冷却至常温后，3000r/min离心30分钟，取上清液；
步骤(5).采用超滤膜技术对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液；
步骤￠).海地瓜小分子多肽液经50°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。实施例2
步骤(I).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，低于2°C的温度下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步骤(2).在海地瓜肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至7.0，60 0C自溶酶解8h，得到海地瓜组织水解液；
步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌20min，冷却至常温后，调整pH值至7.0，添加木瓜蛋白酶5000U/g，然后置于60°C水浴中水解6h，水解过程中保持搅拌速度与pH恒定，得到海地瓜水解液；
步骤(4).将海地瓜水解液置于100°C水浴中灭活木瓜蛋白酶IOmin,冷却至常温后，8000r/min离心10分钟,取上清液；
步骤(5).采用超滤膜技术对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液；
步骤￠).海地瓜小分子多肽液经60°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。实施例3
步骤(1).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，低于rc的温度下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步骤(2).在海地瓜肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至6.0，50°C自溶酶解IOh，得到海地瓜组织水解液；
步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌15min，冷却至常温后，调整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于50°C水浴中水解9h，水解过程中保持搅拌速度与pH恒定，得到海地瓜水解液；
步骤(4).将海地瓜水解液置于90°C水浴中灭活木瓜蛋白酶15min,冷却至常温后，5000r/min离心20分钟,取上清液； 步骤(5).采用超滤膜技术对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液；
步骤￠).海地瓜小分子多肽液经55°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。实施例4
步骤(1).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，(TC下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步骤(2).在海地瓜肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至6.0，50°C自溶酶解12h，得到海地瓜组织水解液；
步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌lOmin，冷却至常温后，调整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于55 °C水浴中水解8h，水解过程中保持搅拌速度与pH恒定，制得海地瓜水解液；
步骤(4).将海地瓜水解液置于85°C水浴灭活木瓜蛋白酶20min,冷却至常温后，5000r/min离心15分钟,取上清液；
步骤(5).采用截留分子量为3000Da的切向流超滤膜包对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液；
步骤￠).海地瓜小分子多肽液经55°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。实施例4制得的海地瓜抗氧化多肽经ABTS法检测结果表明1.0mg/mL海地瓜抗氧化多肽抗氧化能力相当于1.3mmol/L维生素C,即VCEAC值为1.3mmol/g。
权利要求
1.一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤: 步骤(I).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，低于4°C的温度下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒径小于等于0.5cm ； 步骤(2).在海地瓜肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至5.0 7.0，45 60°C自溶酶解8 14h，得到海地瓜组织水解液； 步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌10 20min，冷却至常温后，调整pH值至6.0 7.0，添加蛋白酶1000 5000U/g，然后置于40 60°C水浴中水解6 12h，水解过程中保持搅拌速度与PH恒定，得到海地瓜水解液； 所述的蛋白酶可为所有蛋白酶； 步骤(4).将海地瓜水解液置于80 100°C水浴中灭活蛋白酶10 20min，冷却至常温后，3000 8000r/min离心10 30分钟，取上清液； 步骤(5).采用超滤膜技术对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液； 步骤￠).海地瓜小分子多肽液经50 60°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。
2.如权利要求1所述的一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤: 步骤(I).将海地瓜剖开后去除消化道内容物，(TC下斩拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒径小于等于0.5cm ； 步骤(2).在海地瓜 肉糜中加入等体积去离子水，搅拌混匀后，调整pH值至6.0，50°C自溶酶解12h，得到海地瓜组织水解液； 步骤(3).将海地瓜组织水解液煮沸灭菌lOmin，冷却至常温后，调整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于55°C水浴中水解8h，水解过程中保持搅拌速度与pH恒定，制得海地瓜水解液； 步骤(4).将海地瓜水解液置于85°C水浴灭活木瓜蛋白酶20min,冷却至常温后，5000r/min离心15分钟,取上清液； 步骤(5).采用截留分子量为3000Da的切向流超滤膜包对上清液进行超滤，获得海地瓜小分子多肽液； 步骤￠).海地瓜小分子多肽液经55°C旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得海地瓜抗氧化多肽冻干粉。
全文摘要
本发明涉及一种海地瓜抗氧化多肽的制备方法。现有用自溶及蛋白酶复合酶解制备海地瓜抗氧化多肽的研究甚少。该方法是将清洗干净的海地瓜在低于4℃下斩拌切碎，加入等体积去离子水，混匀，调pH值至5.0～7.0，45～60℃自溶酶解8～14h，然后煮沸灭菌10～20min，调pH值至6.0～7.0，加入蛋白酶1000～5000U/g，于40～60℃水浴水解6～12h，然后于80～100℃水浴灭酶10～20min，离心取上清液，再采用超滤膜技术对上清液超滤，最后经50～60℃旋转蒸发浓缩、真空冷冻干燥，制得产品。本发明制备多肽有较好水溶性，多肽分子量低，易被人体吸收；抗氧化活性稳定，具有延缓衰老的功效。
文档编号A23L1/325GK103120328SQ20131002273
公开日2013年5月29日 申请日期2013年1月22日 优先权日2013年1月22日
发明者王天明, 马永钧, 苏意钢, 杨志坚, 秦乾安, 朱燕芳, 肖金星, 郑刚 申请人:浙江大学舟山海洋研究中心, 舟山瑞洋水产品研发有限公司