专利名称:一种提高那西肽产量的菌种培养方法
技术领域:
本发明属于生物合成技术领域,具体地说,涉及一种可以有效提高那西肽产量的菌种培养方法。
背景技术:
那西肽(Nosih印tide)又称诺西肽,是一种带有5个噻唑环的多肽类抗生素,其分子式为C51H43N13O12S6,相对分子量为1222.那西肽可以促进动物生长,提闻饲料利用率,与以往抗生素类饲料添加剂相比,具有用量少、无药物残留,毒性小、对环境影响小等特点,是前景看好的新型绿色环保饲料添加剂,已被美国、日本、欧盟、中国等世界许多国家和地区批准使用。那西肽原料药的生产主要采用生物合成法,目前国内只有浙江汇能公司、安徽皖北药业和山东胜利股份公司三家生产。由于生产技术水平的限制,如菌种生产水平低,发酵液粘稠、需氧量大等因素限制,致使生产成本较大,不利于该产品的市场化。但由于那西肽独特的优点,随着规模做大和工艺的改进,那西肽毛利率也逐年提高,市场需求量快速增加。那西肽是多肽类抗生素,分子内含有多种氨基酸,正常斜面的那西肽产生菌孢子外观菌落大,孢子白,现有斜面配制方法不能有效体现菌体对参与那西肽生物合成途径的氨基酸的调控与表达。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可以有效提高那西肽产量的菌种培养方法,通过在那西肽产生菌的斜面培养基中添加适量半光胱氨酸,改善那西肽产生菌的孢子质量,达到提高发酵水平的目的。本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的,一种提高那西肽产量的菌种培养方法,其特征在于,在那西肽产生菌的斜面培养基中按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸,然后接种那西肽产生菌的沙土孢子进行菌种培养,孢子培养成熟后接种到摇瓶中进行发酵。所述那西肽产生菌为那西肽活跃链霉菌。所述那西肽产生菌的斜面培养基经过消毒后再按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。本发明的优选方案是在那西肽产生菌的斜面培养基中按1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。所述那 西肽产生菌的斜面培养基质量比配方为:淀粉2.0%,黄豆饼粉0.5%,kN03
0.1%, NaCl 0.05%, MgSO4.7 H2O 0.05%, FeSO4 0.001%,琼脂 1.8%,余量为纯化水。那西肽活跃链霉菌(S.actuous)合成那西肽的生物合成途径中,至少有Glu、Cys、Thr, Trp等氨基酸直接参与那西肽的生物合成。在那西肽产生菌发酵过程中,微量半胱氨酸能促进那西肽生物合成,高剂量半胱氨酸明显抑制那西肽生物合成,外源加入半胱氨酸量难以把握,易造成发酵代谢异常,发酵低产,而通过菌体自身调节,加强半胱氨酸的生成能力,解除半胱氨酸对 那西肽生物合成途径的限制,达到提高发酵水平的目的。本发明中那西肽产生菌孢子外观菌落中等,紧凑,突起,淡黄色,本发明通过在斜面培养基中添加适量的半胱氨酸以提高菌种对半胱氨酸的耐受性,改善菌体在生物合成途径中对半胱氨酸的通量表达,提高生物合成强度,最终表现为放瓶效价的提高,改善那西肽产生菌的孢子质量,达到显著提高那西肽产量的目的。
具体实施例方式选用斜面培养基的配方为(质量百分比):淀粉2.0%,黄豆饼粉0.5%,kN03 0.1%,NaCl 0.05%, MgSO4.7 H2O 0.05%, FeSO4 0.001%,琼脂 1.8%,余量为纯化水;培养基消毒前用30%Na0H溶液调为pH值7.8 8.0,培养基消毒后pH值7.0 7.2。那西肽产生菌选择那西肽活跃链霉菌。在那西肽产生菌的斜面培养基中按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸,即每I毫升斜面培养基中添加100 1000微克的半胱氨酸。在本实施例中,那西肽的效价采用高效液相法进行检测。实施例一:不同浓度半胱氨酸对那西肽生物合成的影响
向消毒后那西肽产生菌的斜面培养基中分别按照100微克/毫升、500微克/毫升、1000微克/毫升和1500微克/毫升的量加入半胱氨酸,同时以不添加半胱氨酸的培养基作为对照组,然后接种那西肽活跃链霉菌的沙土孢子进行菌种培养,培养110 120小时,孢子培养成熟后接种到摇瓶中进行发酵,110 120小时后,取样测定那西肽的效价,结果如表I所示。表I 培养基中不同浓度半胱氨酸对那西肽生物合成的影响
权利要求
1.一种提高那西肽产量的菌种培养方法,包括那西肽产生菌的斜面培养基,其特征在于,在所述那西肽产生菌的斜面培养基中按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸,然后接种那西肽产生菌的沙土孢子进行菌种培养,孢子培养成熟后接种到摇瓶中进行发酵。
2.根据权利要求1所述一种提高那西肽产量的菌种培养方法,其特征在于,所述那西肽产生菌为那西肽活跃链霉菌。
3.根据权利要求1所述一种提高那西肽产量的菌种培养方法,其特征在于,所述那西肽产生菌的斜面培养基经过消毒后再按100 1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。
4.根据权利要求1或3所述一种提高那西肽产量的菌种培养方法,其特征在于,在那西肽产生菌的斜面培养基中按1000微克/毫升的量加入半胱氨酸。
5.根据权利要求1所述一种提高那西肽产量的菌种培养方法,其特征在于,所述那西肽产生菌的斜面培养基质量比配方为:淀粉2.0%,黄豆饼粉0.5%,kN03 0.1%,NaCl 0.05%,MgSO4.7 H2O 0.05%, FeSO4 `0.001%,琼脂 1.8%,余量为纯化水。
全文摘要
本发明公开一种提高那西肽产量的菌种培养方法,包括那西肽产生菌的斜面培养基,其特征在于,所述那西肽产生菌的斜面培养基经过消毒后按100~1000微克/毫升的量加入半胱氨酸,然后接种那西肽产生菌的沙土孢子进行菌种培养,孢子培养成熟后接种到摇瓶中进行发酵;本发明通过在斜面培养基添加适量的半胱氨酸,改善那西肽产生菌的孢子质量,可明显提高那西肽的产量。
文档编号C12P21/02GK103103240SQ20131002775
公开日2013年5月15日 申请日期2013年1月25日 优先权日2013年1月25日
发明者秦艳飞, 李为全, 刘瑞华, 陈伟 申请人:安徽省皖北药业股份有限公司