专利名称：麸皮液体发酵制备米黑毛霉凝乳酶的方法
技术领域：
本发明属于生物工程技术领域，涉及一种以麸皮为原料液体发酵制备米黑毛霉凝乳酶的方法。
背景技术：
麦麸俗称麸皮、小麦麸，是以小麦籽实为原料加工面粉后得到的副产品，主要为小麦的种皮，占小麦籽粒质量的20%左右。我国有着巨大的麦麸资源，年产量约7000 8000万t左右。麦麸质地疏松、比重小、表面积大，其中含粗蛋白9.4 17.5%，粗脂肪1.7 5.6%，另外还含有丰富的膳食纤维、维生素、矿物质以及低聚糖和酚类化合物等成分。目前麦麸大多经简单加工后作为饲料配料或食醋、酱油酿造的原料，利用率较低。凝乳酶是干酪和干酪素生产过程中的关键性酶，其主要作用是专一性的剪切酪蛋白Phel05-Metl06的肽键，从而使酪蛋白胶粒发生沉淀。凝乳酶主要有三种来源，分别为动物凝乳酶，植物凝乳酶和微生物凝乳酶。微生物具有生长周期短，生长速度快，生长条件易于控制，生产成本低等特点，目前各国的发酵工业都比较发达，发酵产物的提取工艺比较完善。因此，对由微生物所分泌的 凝乳酶的研究和开发有广阔的前景。国内微生物凝乳酶菌种的产酶活力偏低，工艺复杂，导致生产成本过高，不易工业化大规模生产。本发明引进的米黑毛霉菌株，具有营养要求低、繁殖快、发酵产物易于提取分离、发酵周期短和凝乳酶产生能力强等优点，且其发酵生产的凝乳酶适合于干酪和干酪素生产。
发明内容
本发明的目的是提供一种以麸皮为原料制备凝乳酶的方法。本发明从国外引进优良菌种资源，采用液体制种固体发酵的方法，有效缩短了发酵周期。另外本发明以麸皮为原料进行液体发酵，有效解决了麸皮的利用问题，实现了农副产品的综合利用，同时有效缓解了凝乳酶市场供应不足的问题，工艺简单，便于进行工业化推广。本发明的目的是按如下技术方案实现的，其特征是它包括以下步骤:(I)菌种活化将保藏的米黑毛霉菌种(ATCC编号26282)接种于制备好的PDA斜面上，30°C培养72 96h，待孢子成熟即可使用；(2)孢子悬浮液的制备向培养成熟的试管斜面中注入5mL无菌生理盐水，用接种环或无菌玻棒搅动，刮下米黑毛霉孢子，振荡均匀并稀释至IO6个/mL，得到孢子悬液；(3)液体发酵培养基的制备将麸皮按10% (W/V)加入自来水，121°C灭菌lOmin，四层纱布过滤，得到液体发酵
培养基;⑷接种培养将孢子悬液按5% (V/V)接入液体发酵培养基中，30°C、180 220r/min摇瓶培养96 120h，得到发酵液；(5)酶液制备将发酵液于5000r/min、4°C低温离心15min,取上清液过0.45um微孔滤膜,得到酶液。本发明的有益效果(I)工艺简单，发酵周期短，适于工业化推广。(2)以麸皮为原料液体发酵生产凝乳酶，生产成本较低。(3)采用优良菌种进行发酵，得到液体凝乳酶活力高。
具体实施方式
下面的实施例可以进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1将保藏的米黑毛霉菌种接种于制备好的PDA斜面上，30°C培养72h，待孢子成熟即可使用；向培养成熟的试管斜面中注入5mL无菌生理盐水，用接种环或无菌玻棒搅动，刮下米黑毛霉孢子，振荡均匀并稀释至IO6个/mL，得到孢子悬液；将麸皮按10% (W/V)加入自来水，121°C灭菌lOmin，四层纱布过滤，得到液体发酵培养基；将孢子悬液按5% (V/V)接入液体发酵培养基中，300C、180r/min摇瓶培养96h，得到发酵液；将发酵液于5000r/min、4°C低温离心15min，取上清液过0.45um微孔滤膜，得到酶液。实施例2将保藏的米黑毛霉菌种接种于制备好的PDA斜面上，30°C培养84h，待孢子成熟即可使用；向培养成熟的试管斜面中注入5mL无菌生理盐水，用接种环或无菌玻棒搅动，刮下米黑毛霉孢子，振荡均匀并稀释至IO6个/mL，得到孢子悬液；将麸皮按10% (W/V)加入自来水，121°C灭菌lOmin，四层纱布过滤，得到液体发酵培养基；将孢子悬液按5% (V/V)接入液体发酵培养基中，30°C、200r/min摇瓶培养108h，得到发酵液；将发酵液于5000r/min、4°C低温离心15min，取上清液过0.45um微孔滤膜，得到酶液。实施例3将保藏的米黑毛霉菌种接种于制备好的PDA斜面上，30°C培养96h，待孢子成熟即可使用；向培养成熟的试管斜面中注入5mL无菌生理盐水，用接种环或无菌玻棒搅动，刮下米黑毛霉孢子，振荡均匀并稀释至IO6个/mL，得到孢子悬液；将麸皮按10% (W/V)加入自来水，121°C灭菌lOmin，四层纱布过滤，得到液体发酵培养基；将孢子悬液按5% (V/V)接入液体发酵培养基中，30°C、220r/min摇瓶培养120h，得到发酵液；将发酵液于5000r/min、4°C低温离心15min，取上清液过0.45um微孔滤膜，得到酶液。
权利要求
1.一种麸皮液体发酵制备米黑毛霉凝乳酶的方法，其特征在于步骤如下: (1)菌种活化 将保藏的米黑毛霉菌种(ATCC编号26282)接种于制备好的PDA斜面上，30°C培养72 96h，待孢子成熟即可使用； (2)孢子悬浮液的制备 向培养成熟的试管斜面中注入5mL无菌生理盐水，用接种环或无菌玻棒搅动，刮下米黑毛霉孢子，振荡均匀并稀释至IO6个/mL，得到孢子悬液； (3)液体发酵培养基的制备 将麸皮按10% (W/V)加入自来水，121°C灭菌lOmin，四层纱布过滤，得到液体发酵培养基; (4)接种培养 将孢子悬液按5% (V/V)接入液体发酵培养基中，30°C、180 220r/min摇瓶培养96 120h，得到发酵液； (5)酶液制备 将发酵液于5000r/min、4°C低温离心15min,取上清液过0.45um微孔滤膜,得到酶液。
全文摘要
本发明公开了一种麸皮液体发酵制备米黑毛霉凝乳酶方法。本发明制备米黑毛霉凝乳酶的步骤包括菌种活化、孢子悬浮液的制备、液体发酵培养基的制备、接种、发酵培养、酶液制备。本发明的制备方法原料价格低廉，操作工艺简单，发酵周期短，降低了生产成本，适合生产推广。
文档编号C12R1/785GK103160484SQ20131010854
公开日2013年6月19日 申请日期2013年3月29日 优先权日2013年3月29日
发明者张卫兵, 艾对元, 赵炜 申请人:甘肃农业大学