专利名称：一种五肽的部分代谢物用于制备抗心肌缺血产品的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药、食品、试剂等技术领域，具体地说是涉及生物医药技术方面的一种小肽的部分代谢物的新用途，更具体地说是涉及一种五肽即单核细胞移动抑制因子的部分体内代谢物用于制备抗心肌缺血产品的新用途，再具体地说是一种涉及6个小肽在制备抗心肌缺血产品中的应用。
背景技术：
随着人们生活水平的提高，心血管疾病已成为危害人类健康的主要疾病，近年来的流行病学调查显示，我国人群心血管疾病发病率和死亡率均呈持续上升趋势，且发病年龄逐渐降低，已经成为一种严重威胁人类健康，影响人们生活质量的常见病、多发病，尤其是急性心肌缺血严重危害人类的身体健康。心肌缺血的研究概况(一)概述心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态；即心脏某一部位血供严重或完全不足，致使该部位心肌氧和营养物质供应不足或中断，代谢产物堆积所造成的病理状态，严重时可导致心肌坏死(梗死)，多由冠脉痉挛、冠脉严重或完全阻塞造成。冠状动脉粥样硬化导致的冠脉狭窄或闭塞是引起心肌缺血最主要、最常见的病因，进而导致心肌缺血缺氧，由此引起的心脏病即大家常说的“冠心病”，所以冠心病是心肌缺血的“罪魁祸首”。心肌缺血严重危害中老 年人的健康，近年来随着生活水平的提高，冠状动脉粥样硬化呈现年轻化的趋势，一些20 30岁的年轻人也出现心肌缺血的表现。(二)疾病分类1、隐匿型冠心病隐匿型冠心病是指无临床症状，但有心肌缺血客观证据(心电图典型缺血性ST段改变、心肌血流灌注减少等)的冠心病。近年来大量的研究发现，大约25% 50%的急性猝死者中，生前无心绞痛发作史，但近90%的尸检中，发现这些人均有严重的冠状动脉粥样硬化病变。即使在已发生急性心肌梗死的病人中，也仍有30%的病人没有症状。无症状心肌缺血可发生在不同类型的心绞痛中。患者经治疗后症状消失但仍有心肌缺血存在，这是预后不良的重要指标。此类型患者也可能突然转为心肌梗死，亦可能逐渐演变为心肌纤维化出现心脏增大，发生心力衰竭或心律失常，个别患者亦可能猝死。因此，无症状性心肌缺血应引起人们的足够重视，及时发现，并给以及早的诊断与治疗。2、心绞痛型是冠状动脉供血不足，心肌急剧的、暂时的缺血与缺氧引起的临床综合征其特点为阵发性的前胸压榨样疼痛感觉，可放射到左上肢，常发生于劳力、受寒、情绪激动、饱食等时，持续数分钟，休息或舌下含服硝酸甘油等消失。3、心肌梗死型是在冠状动脉病变的基础上，发生冠状动脉血供急剧减少或中断，使相应的心肌严重而持久地急性缺血所致的部分心肌急性坏死。心肌梗死常是在冠状动脉粥样硬化病变的基础上继发血栓形成所致。4、缺血性心肌病是由于动脉粥样硬化病变使心肌的供氧和需氧不平衡而导致心肌细胞减少、坏死、心肌纤维化、心肌瘢痕形成。其特 点为心脏变得僵硬，逐渐扩大，发生心律失常和心力衰竭。5、猝死型是自然发生、出乎意料的突然死亡。猝死型冠心病好发于隆冬季节，年龄多不大，是由于在动脉粥样硬化的基础上，发生冠状动脉痉挛或栓塞，导致心肌急性缺血，造成局部电生理紊乱，引起暂时的严重心律失常(如室颤)等所致(陈在嘉，高润霖主编。冠心病。北京:人民卫生出版社，2002)。(三)发病原因心肌缺血常见的原因是冠状动脉粥样硬化，其次还有炎症(风湿性、梅毒性、川崎病和血管闭塞性脉管炎等)、痉挛、栓塞、结缔组织疾病、创伤和先天性畸形等多种。流行病学研究发现，与动脉粥样硬化相关的重要危险因子为高脂血症、高血压病、糖尿病、吸烟、月巴胖、同型半胱氨酸增高、体力活动少、高龄和男性等。其发病机制目前主要认为是心肌缺血引起细胞凋亡、钙离子超载、大量氧自由基产生及脂质过氧化反应物增强，炎性因子的介入及参与细胞信号转导的细胞因子的激活等。(四)临床表现临床可表现为心绞痛、心肌梗塞、心律失常及心力衰竭。心肌缺血是中老年人的常见病和多发病，处于这个年龄阶段的人，在日常生活中，如果出现下列情况，要及时就医，尽早诊查。1、劳累或精神紧张时出现胸骨后或心前区闷痛，或紧缩样疼痛，并向左肩、左上臂放射，持续3 5分钟，休息后自行缓解者，时伴有大汗。2、体力活动时出现胸闷、心悸、气短，休息时自行缓解者。3、出现与运动有关的咽喉痛及烧灼感、紧缩感，牙痛等。4、饱餐、寒冷、饮酒后出现胸痛、胸闷者。5、夜晚睡眠枕头低时，感到胸闷憋气，需要高枕卧位方感舒适者；熟睡、或白天平卧时突然胸痛、心悸、呼吸困难，需立即坐起或站立方能缓解者。6、性生活或用力排便时出现心慌、胸闷、气急或胸痛不适。7、突发的心动过缓、血压降低或晕厥者。(五)诊断鉴别1、冠心病相关的危险因素检查为尽早发现心肌缺血，40岁以上的人应定期进行相关体检，了解有无冠心病相关的危险因素，如血脂、血压、血糖、颈部血管超声、心脏超声、心电图等检查。
2、受负荷试验检查若属于心肌缺血的高危人群，就要请医生询问，是否具备典型的冠心病症状，决定是否需要接受负荷试验，如活动平板心电图、腺苷负荷心脏超声心动图以及冠脉多排CT。3、冠状动脉造影检查通过无创检查的评价来决定是否需要进一步采用冠心病诊断的金标准——冠状动脉造影来确诊，以明确冠脉病变的程度及范围。专家观点:由具有丰富临床经验的心脏科医生判断为典型冠心病症状的患者，可以考虑直接进行冠脉造影检查，必要时植入支架治疗，而没有必要先做冠脉的多排CT (中华医学会心血管病分会，中华心血管病杂志编辑委员会，中国循环杂志编辑委员会。急性心肌梗死诊断和治疗指南。中华心血管病杂志，2001，29 (2):270)。(六)疾病治疗1、治疗原则由于心肌缺血有发生心肌梗塞和猝死的危险，因此发现心肌缺血时，要及早治疗。积极预防动脉粥样硬化的发生，如已发生，应积极治疗，防治病变发展并争取逆转。已发生并发症者，应及时治疗，防治恶化，延长患者寿命。现代医学对本病治疗主要有药物治疗、外科手术、介入、干细胞移植及基因治疗
坐寸o2、药物治疗 目前对冠心病的药物治疗主要分为硝酸酯类、^受体阻滞剂、钙离子通道阻滞剂、抗凝药和抗血小板聚集类、他汀类和血管转换酶抑制剂(简称:ACEI)等。但这些药物也都存在着较为明显的副作用。长期大量给药时会出现药物依赖性和各种不良反应等副作用。可以总结为ABCDENT方案:A.抗血小板药物(如阿司匹林、氯吡格雷)防治血栓形成，预防冠状动脉和脑动脉血栓栓塞；B.￠-受体阻断剂(如美托洛尔或其缓释片)，减慢心率减少心肌的牦氧，预防猝死；C.钙离子拮抗剂；D.他汀类药物(如阿托伐他汀、瑞舒伐他汀等)降低血浆中的胆固醇，稳定动脉斑块，防止斑块脱落形成血栓；E.RAS系统阻断剂(如贝那普利和缬沙坦等)预防心室重构，改善心功能等；N.硝酸脂类药物(如单硝酸异山梨脂):扩张冠状动脉，增加心肌供血；T.溶栓药物溶解急性形成的血栓，用于急性心肌梗死。3、介入治疗即经皮冠状动脉介入治疗(简称:PCI):支架术。冠状动脉介入治疗即PCI术，是近30年来冠心病治疗史上的里程碑事件，这是一种不用外科开胸、病人无痛苦感开通冠状动脉的微创方法。具有创伤小、恢复快、住院时间短的特点，广为患者接受。从早期的单纯球囊扩张术，到裸金属支架时代，到现在发展为药物涂层支架时代，已成为治疗本病的重要手段。所以对于症状发作典型或不稳定、药物治疗不理想、无创检查提示心肌缺血的患者建议行冠脉造影检查，必要时行支架置入术。
4、手术治疗外科冠脉搭桥术:复杂多支血管病变、无保护左主干病变者可选择(中华医学会心血管病分会，中华心血管病杂志编辑委员会，中国循环杂志编辑委员会。急性心肌梗死诊断和治疗指南。中华心血管病杂志，2001，29 (2):270，和李妍，郭照江，贾国良。系统科学方法与冠状动脉介入治疗后再狭窄研究。医学与哲学2002年23卷05期)。(七)疾病预防1、预防方法A、心肌缺血的患者的饮食心肌缺血的患者在饮食上掌握几点原则，注意低盐低脂清淡饮食，多吃红薯、西红柿、胡萝卜等蔬菜，这些都是能提高患者身体抵抗能力的食物。喝些绿茶，茶叶中含有少量的茶碱，有一定的利尿作用，对患者的心肌缺血治疗有一定的帮助，茶叶中还有维生素C，能起到一个很好的防治动脉硬化的作用，但不宜过浓。每天坚持吃些黑木耳，能有助于降低血粘度，改善心肌缺血。B、心肌缺血患者情绪上要注意不要大喜大悲，保持充足睡眠。养成良好生活习惯，定时排便，不能过度劳累。C、应该适度运动，促进心肌侧枝循环的建立。D、病情如有变化要及时就诊治疗。2、预防药物冠心病一级预防的AB⑶E:冠心病的一级预防方案包括可以总结为AB⑶E。A.阿司匹林； B.^受体阻滞剂；C.钙离子拮抗剂；D.他汀类调血脂药；E.血管紧张素转换酶抑制剂(陈在嘉，高润霖主编。冠心病。北京:人民卫生出版社，2002)。(A)流行病学调查缺血性心脏病是常见的心血管疾病，在临床上发病率比较高，心肌缺血多发生在40岁以后，平均患病率约为6.49%。随着人民生活水平的提高，目前心肌缺血在我国的患病率呈逐年上升的趋势。在中国心血管疾病的死亡率已经成为继恶性肿瘤之后的第二大致死因素。据WHO统计，在中国，2002年在每100000人中，就有54人死于缺血性心脏病，死亡率占所有心血管疾病的23.4%,居第一位。中国人民解放军第二军医大学芮耀诚教授课题组研究发现单核细胞移动抑制因子(简称:五肽MLIF或MLIF)具有防治缺血性脑血管病和心肌缺血的作用，申请了国家发明专利并已获授权(专利号分别为ZL200810200610.0及ZL200910055203.X)。MLIF最初是从无菌培养的溶组织内阿米巴中发现的五肽(Met-Gln-Cys-Asn-Ser )。因此，研究出一种有效的治疗方法来阻止潜在的发病过程是很必要的，结合现有的化合物或药物，从中发掘寻找新型、成分明确、疗效确切、不良反应小的抗心肌缺血产品仍然势在必行，特别是用于预防、诊断、检测、保护和治疗心肌缺血等方面的药物具有非常重要的意义，能够产生显著的社会效益和经济效益。
但是，经文献检索等，到目前为止，尚未发现有该五肽的部分代谢物用于制备抗心肌缺血产品等方面的报道。
发明内容
本发现所需要解决的技术问题是公开了一种小肽的部分代谢物的新用途，即该小肽的部分代谢物具有抗心肌缺血的新作用，能够用于制备抗心肌缺血产品，以克服现有技术存在的上述缺陷。也就是说，本发明针对现有技术的不足，通过实验研究和理论探索，目的是要提供一种小肽的部分代谢物的新用途，意在明确小肽的部分代谢物的新用途，即该小肽的部分代谢物作为抗心肌缺血产品的新用途，为抗心肌缺血的预防、诊断、检测、保护、治疗和研究提供更有效的、更有针对性的产品。所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽是指用于制备抗心肌缺血产品的小肽，包括五肽单核细胞移动抑制因子MLI的体内某些代谢产物包括四肽QS(简称:QS)、四肽丽(简称:MN)、三肽CS (简称:CS)、三肽MC (简称:MC)、二肽MQ (简称:MQ)、二肽NS (简称:NS)，合计6种的五肽及其代谢物(QS、MN、CS、MC、MQ、NS)。所述的五肽MLIF及其体内某些代谢产物包括四肽QS、四肽丽、三肽CS、三肽MC、二肽MQ、二肽NS、二肽QC (简称:QC)，合计8种的五肽及其代谢物(MLIF、QS、MN、CS、MC、MQ、NS、QC)均为已知化合物，其氨基酸序列分别如下:SEQID NO:1 =Met-Gln-Cys-Asn-Ser ；SEQ ID NO:2 =Gln-Cys-Asn-Ser ；SEQ ID NO:3 =Met-Gln-Cys-Asn ；SEQ ID NO:4 =Cys-Asn-Ser ；SEQ ID NO:5 =Met-Gln-Cys ；SEQ ID NO:6 =Met-Gln ；SEQ ID NO:7 =Asn-Ser ；SEQ ID NO:8 =Gln-Cys ；即:①单核细胞移动抑制因子(简称:MLIF)的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；②四肽QS的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；③四肽MN的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；④三肽CS的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；⑤三肽MC的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；⑥二肽MQ的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；⑦二肽NS的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；⑧二肽QC的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；以上8种五肽及其代谢物均由广东八加一医药有限公司按照现有常规技术完成了合成，纯度达到98%以上，实现了商业化生产合成。所述的抗心肌缺血产品是指医药、食品或试剂等技术领域中，用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的产品，是包括药物、试剂、食品或保健品等中的一种或多种，优选药物和保健品，进一步优选药物。
所述的心肌缺血疾病及其直接相关疾病是指包括隐匿型冠心病、心绞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病或猝死型疾病等中的一种或多种，本发明对上述心肌缺血疾病早期的症状有较好的预防和治疗效果。一、技术构思自主开发研发创新药物是中国目前的一项紧迫任务，发现新药物、已有药物的新组合或新用途等均是有效的快捷途径，特别是发现已有药物或其组合物的新用途等更是快速见效的捷径，也是中国创新药物研制的优势所在。发明人在单核细胞移动抑制因子(简称:MLIF)的研究基础上进一步深入探索发现，通过经大鼠冠状动脉结扎造成心肌缺血模型的药理试验，该五肽的部分体内代谢物能显著降低心肌缺血所致大鼠心肌细胞损伤和心肌梗死范围，降低心肌缺血大鼠血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶，表明其具有防治心肌缺血作用，因此可用于制备防治心肌缺血药物；但是，未发现QC防治心肌缺血的活性。
缺血性心脏病是常见的心血管疾病，在中国心血管疾病的死亡率已经成为继恶性肿瘤之后的第二大致死因素，缺血性心脏病的死亡率占所有心血管疾病的第一位。心肌缺血症已成为中国中老年人口的重要死亡原因和重大的社会与家庭负担,研制抗心肌缺血产品，尤其是预防、诊断、保护和治疗心肌缺血疾病等方面的产品特别是药物具有显著的社会效益、经济效益，能够明显减轻家庭的经济压力和监护负担，也能够明显提高患者的生存质量。总而言之，发明人通过对小肽及其代谢物进行系统的筛选，并推断在抗心肌缺血等方面的药效，其主要途径之一是通过该小肽及其代谢物特别是其代谢物来发挥的，研究结果也证明和证实了该小肽的部分代谢物具有显著的抗心肌缺血作用。根据此想法和思路，发明人通过反复的实验研究与分析和理论探索，已成功得到预期的研究结果和应用产品。二、用于制备抗心肌缺血产品的小肽的研究本研究发现，小肽MLIF体内代谢物中的6个小肽具有防治心肌缺血的药理作用。本发明提供6个小肽，即该五肽的部分体内代谢产物(QS、丽、CS、MC、MQ、NS)，其氨基酸序列分别为 SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7在制备防治心肌缺血药物中的应用。经大鼠冠状动脉结扎造成心肌缺血模型的药理试验，结果表明，6个小肽能显著降低心肌缺血所致大鼠心肌细胞损伤和心肌梗死范围，降低心肌缺血大鼠血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶，表明其具有防治心肌缺血作用，因此可用于制备防治心肌缺血药物；但是，未发现QC防治心肌缺血的活性。与MLIF相比，这六个小肽具有合成相对容易、成本较低的优势。因此，发明人进一步认真观察小肽及其代谢物即该五肽及其代谢物对防治心肌缺血的影响，深入探讨小肽及其代谢物防治心肌缺血的机制所在，仔细分析小肽及其代谢物在防治心肌缺血方面的作用，以期对心肌缺血症病人发病机理的研究提供新的思路、途径和实验数据。三、用于制备抗心肌缺血产品的小肽的活性与作用本发明对用于制备抗心肌缺血产品的五肽及其代谢物在心肌缺血疾病或其直接相关疾病等的预防、诊断、保护、治疗和研究等方面的活性进行了多方面的试验。
用于制备抗心肌缺血产品的该五肽及其代谢物在预防、诊断、保护和治疗心肌缺血疾病等方面的试验(一)对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用1、实验动物:大鼠。2、实验分组:将实验大鼠随机分组。3、实验步骤:麻醉大鼠后，将其仰卧位固定。在胸左侧第五肋间处切开胸壁并沿胸骨左缘切断第四和第五肋骨，剪开心包膜，暴露心脏，于左冠状动脉前降支丛下穿缝合线，结扎缝合线造成心肌缺血，将心脏放回胸腔，用手排出胸内残留气体，关闭胸腔，整个开胸到闭胸操作过程快速完成。假手术组大鼠左冠状动脉前降支丛仅穿线，不结扎冠脉。冠脉结扎后各小肽组大鼠分别尾静脉注射低剂量和高剂量的小肽，假手术组和模型组注射同体积的生理盐水。缺血后麻醉处死大鼠。取血，离心取血清，测定肌酸激酶(简称:CK)和乳酸脱氢酶(简称:LDH)。取心脏，在冠脉结扎线下，平行于冠状沟，将心室肌横切，将心肌置于硝基四氮唑蓝(简称:N-BT)染液中，振摇染色后取出，正常心肌染为暗蓝色，梗塞区心肌则不着色，在解剖镜下分离梗塞区，分别称重，以梗塞区心肌重量占心肌重量的百分比(％)作为衡量梗塞范围的指标。4、结果:大鼠冠脉结扎后缺血5h，模型组缺血区心肌梗死。与模型组比较，6个小肽(QS、丽、CS、MC、MQ、NS)均可减轻缺血区心肌梗死重量，降低梗塞区/全心的百分比，且差异具有显著性意义(P〈0.05，P<0.01)。与模型组比较，小肽QC不显著缩小缺血区心肌梗死重量及梗塞区/全心的百分比。说明6个小肽(QS、丽、CS、MC、MQ、NS)对心肌缺血损伤有保护作用。大鼠冠脉结扎5h后造成心肌缺血，心肌细胞损伤，细胞内LDH和CK释放入血，导致血清中LDH和CK含量升高；模型组大鼠血清LDH和CK与假手术组比较差异非常显著(P〈0.01)。与模型组比较，6个小肽(QS、MN、CS、MC、MQ、NS)均可降低血清中CK和LDH含量，且差异具有显著性意义(P〈0.05，P〈0.01)`。与模型组比较，小肽QC不显著降低血清中CK和LDH含量。说明6个小肽(QS、丽、CS、MC、MQ、NS)对心肌缺血损伤有保护作用。上述实验结果表明，05、丽、05、1 :、1 、吧这6个小肽能减少冠脉结扎大鼠心肌梗塞面积，降低血清CK及LDH，表明其对心肌缺血损伤具有保护作用。而小肽QC不具有心肌缺血保护作用。因此，这6个小肽(03、丽、03、1 :、1 、吧)可用于制备防治心肌缺血药物。本发明的所述及的用于制备抗心肌缺血产品的小肽可以以组合物的形式施用于需要治疗的患者，所说的组合物包括治疗有效量的用于制备抗心肌缺血产品的小肽和医药学上可接受的载体。以上的具体实验证明，均证明本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽以及药物组合物是一种安全、高效、稳定、价廉的防治心肌缺血疾病及其直接相关疾病的药物或保健品。综上所述，本发明对小肽的部分代谢物进行了理论探索和实验研究，发现该五肽的部分代谢物水平对于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血症具有极为重要的作用。因此，可针对该五肽的部分代谢物制备抗心肌缺血产品，优选药物和食品，进一步优选以本发明的该五肽的部分代谢物为原料而制备的药物。四、用于制备抗心肌缺血产品的小肽的部分代谢物的用途
1、概述本发明的目的是提供一种用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的产品，包括药物、试剂、食品等中的一种或多种，优选药物和保健品，进一步优选药物。已完成的急性毒性实验证明，小鼠灌胃给药对该活性部位的最大耐受量超过
3.2g/kg，表明该单一成分安全可靠，解决了生物药成分复杂、有效成分含量低且含有有毒成分的问题。因此，用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其组合物可用于制备抗心肌缺血产品，优选以本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽为原料制备而成的药物和保健品，进一步优选药物。2、用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其组合物的使用方法与要求本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽可以单独或与其它活性组分联合使用，包括用于制备用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的产品，包括药物、试剂、食品等，尤其是药物。在具体使用方面，本发明所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽能够单独使用，还能够与其他许多化学物质一起使用。无论这些化学物质是否具有生物活性或具有治疗疾病的功能，包括辅助功能如协同放大作用、拮抗或缓解用于制备抗心肌缺血产品的小肽的副作用等，这些化学物质是包括医药学上可接受的载体、食品、天然产物、化学合成药物或人类用药等中的一种或多种；优选包括医药学上可接受的载体或者食品等中的一种或多种；进一步优选医药学上可接受的载体。本文使用的“医药学上可接受的载体”包括任何和所有的生理适用的溶剂、分散介质、胞衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂或吸收延迟剂等中的一种或多种。医药学上可接受载体的例子包括一种或多种的水、盐水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其组合物中的一种或多种。在许多情况下，在该组合物中最好包括等渗剂，例如，糖、诸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化钠等中的一种或多种。医药学上可接受载体还可以包含少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液等中的一种或多种，它们增强了该用于制备抗心肌缺血产品的小肽的有效期或效力。从具体的分类上看，所说的医药学上可接受的载体是指医药学领域常规的药物载体，包括赋形剂，如淀粉或水等中的一种或多种；润滑剂，如甘油或硬脂酸镁等中的一种或多种；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如淀粉或乳糖等中的一种或多种；粘接剂，如预胶化淀粉、糊精、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等中的一种或多种；渗透压调节剂，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一种或多种；稀释剂，如水等；崩解剂，如琼月旨、碳酸钙或碳酸氢钠等中的一种或多种；吸收促进剂，如季铵化合物等；表面活性剂，如十六烷醇等；吸附载体，如高岭土或皂粘土等中的一种或多种；润滑剂，如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇等中的一种或多种；另外，还可以在组合物中加入其它辅剂，如香味剂或甜味剂等中的一种或多种。例如，将活性组分用于制备抗心肌缺 血产品的小肽溶解、混悬或乳化于适宜的水性溶剂中(例如，蒸馏水、生理盐水或格林溶液等中的一种或多种)或油性溶剂中(例如，植物油例如橄榄油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一种或多种)中，即可制得注射制齐U，其中溶剂中可含有分散剂(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一种或多种)、渗透压调节剂(例如，氯化钠、甘油、D9 一甘露糖、D —山梨醇或葡萄糖等中的一种或多种)。在这种情况下，如有必要，可加入添加剂，例如增溶剂(例如，水杨酸钠或醋酸钠等中的一种或多种)、稳定剂(例如，人血清白蛋白等)、止痛剂(例如，苯甲醇等)等。本发明所述及的用于制备抗心肌缺血产品的小肽还可以以组合物的形式联合使用，特别是与用其它化学物质如药物对动物尤其是哺乳动物包括人或其他动物进行治疗所用的组合物或者是类似的组合物。所述哺乳动物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、猪、马、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、猕猴或恒河猴等中的一种或多种，优选人、小鼠、大鼠、猴、猪、兔或犬等中的一种或多种，进一步优选人、大鼠或猴等中的一种或多种。例如，可以将本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽加入适于给与受治疗者的药用组合物中。通常，该药用组合物包含本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽和药学上可接受的载体。用于制备抗心肌缺血产品的小肽的组合物特别是药物组合物可以有各种形式，包括例如液体、半固体和固体等剂量形式中的一种或多种；其中所说的药物组合物包括治疗有效量的用于制备抗心肌缺血产品的小肽为活性成分，以及一种或多种医药学上可接受的载体。用于制备抗心肌缺血产品的小肽的药物组合物可以采用本领域公知的常规生产方法制成各种剂型，例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。例如，本发明所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽可通过加入适当的辅料进一步制成颗粒齐U、胶囊剂、片剂、丸剂等 剂型，所述的辅料可以选自淀粉、糊精、乳糖、二氧化硅、磷酸氢钙、环糊精、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁、滑石粉等中的一种或多种。所述的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂或注射剂等中的一种或多种，采取口服或注射(包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一种或多种)等中的一种或多种给药途径进行心肌缺血疾病及其直接相关疾病的预防、诊断、检测、保护、治疗或科学研究。药物组合物优选含有重量比为0.5% 99%的活性成分用于制备抗心肌缺血产品的小肽，进一步优选含有重量比为60% 99%的活性成分用于制备抗心肌缺血产品的小肽，最优选含有重量比为95% 99%的活性成分用于制备抗心肌缺血产品的小肽。用于制备抗心肌缺血产品的小肽的药物组合物一般必须无菌且在生产储存条件下稳定。可以将该组合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂质体或其它适合于高药物浓度的有序结构。通过将所需量的该用于制备抗心肌缺血产品的小肽与所需上述成分的一种或组合一起加入适当的溶剂中并接着进行除菌过滤制备无菌注射液。一般而言，通过将该用于制备抗心肌缺血产品的小肽加入含有基本分散介质和所需的上述其它成分的无菌溶媒中制备分散液。在用于制备无菌注射液的无菌粉剂的情况下，推荐的制备方法是真空干燥和冷冻干燥剂。例如，通过诸如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过保持所需颗粒大小和通过使用表面活性剂，可以保持溶液的适当流动性。通过在该组合物中包括延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸盐或明胶)可以达到注射组合物的延长吸收。用于患者时，本发明所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽剂量为10 220mg/kg (!，该剂量或用量通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。
本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其药用组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间下有效达到所需治疗效果的量。用于制备抗心肌缺血产品的小肽的治疗有效量可以根据诸如个体的病况、年龄、性别和体重以及该用于制备抗心肌缺血产品的小肽在该个体引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量亦指该用于制备抗心肌缺血产品的小肽的有益治疗效果超过其任何毒性或有害效果的量。“预防有效量”是指在必要剂量和时间下有效达到所需预防效果的量。因为预防剂量用于患病前或疾病早期的受治疗者，预防有效量通常小于治疗有效量。本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽的治疗或预防有效量的典型的非限制性范围是10 220mg/kg，更优选为20 100mg/kg。应注意，剂量值将根据欲减轻的疾病类型和严重性变化，也就是说用于患者时，本发明所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽剂量或用量，通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。另外，应理解，对于任何特定受治疗者，应随着时间根据个体需要和给与或监督给与所述组合物的人的专业判断调整特定剂量制度，并且本文设定的剂量范围仅为例证性的，并不会限制要求保护的组合物的范围或实践。也就是说，需要根据治疗的对象、给药途径、所治疗疾病和状况等，变化本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽的每次和/或每日的剂量或用量。例如，经静脉给予哺乳动物，尤其是成年人(如体重60kg)，所述用于制备抗心肌缺血产品的小肽的单剂量约为20 180mg，优选约lOOmg，优选每日给药I 3次。可以调整剂量单位，以提供最佳所需反应(例如，治疗或预防应答)。例如，可以单次大剂量给药，可以在一段时间内给予几个均分量或根据治疗情况的迫切性按比例降低或增加剂量。配制易于给药和剂量统一的剂量单位形式的非肠道组合物尤其有利。本文使用的剂量单位形式，指适于欲治疗的哺乳动物受治疗者的单元剂量的物理分离单位；每个单位含有预定量的计算用于与所需药用载体一同产生所需治疗效果的活性物用于制备抗心肌缺血产品的小肽。本发明的剂量单位形式的规格，由以下确定并直接取决于以下(a)该用于制备抗心肌缺血产品的小肽的独特特征和欲达到的特定治疗或预防效果，和(b)在混合这种用于治疗个体敏感性用于制备抗心肌缺血产品的小肽的技术中的内在限制。3、用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其组合物的药物剂型和给药途径本发明所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其组合物制备的用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的产品，其中按照饮料、食品技术领域的要求制备的产品能够用于预防、保护和治疗心肌缺血疾病及其直接相关疾病；按照医药技术领域的要求制备的产品能够用于患者的治疗或保健，既能够单独直接用于制备治疗或保健的药物，也能够与许多化学物质进行混合或组合，直接或间接用于制备治疗或保健的药物。这里所述的化学物质与本节上文中所述的相同。在本发明中，所需物料包括本发明的原料、上述配套使用的化学物质等，均应根据实际情况和需要，采用食品级或药用级的物料。本发明所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其组合物，可以用本领域已知的各种方法给药，尽管在许多治疗用途中推荐的给药途径/给药方式是喷雾剂或口服给药。但是，技术人员会理解给药途径/给药方式随所需的结果而变化。在某些具体实施中，该活性化合物可以与保护该化合物免于快速释放的载体一同制备例如空释制剂，包括移植物传递系统、透皮贴传递系统或微囊传递系统等中的一种或多种。此外，还可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羟基乙酸、胶原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一种或多种。制备这种制剂的许多方法均已申请专利或一般为本领域技术人员所知(参见例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R.Robinson编辑，Marcel Dekker, Inc.,纽约，1978)。本发明所述的用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其组合物，通常通过口服或肠胃外给药等中的一种或多种方式，施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂或胶囊等中的一种或多种。在实施时，本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽可以与例如惰性稀释剂或可同化的食用载体一同口服。该用于制备抗心肌缺血产品的小肽(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或软壳明胶胶囊、压制成片剂或直接加入受治疗者的膳食中。关于口服治疗给药，可以将所述用于制备抗心肌缺血产品的小肽与赋形剂一起加入并以可食片剂、颊含片剂、锭齐U、胶囊、悬液、糖浆或糯米纸囊剂等等中的一种或多种形式使用。为了以非肠道给药之外给予本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽，可能需要用防止其失活的材料对该用于制备抗心肌缺血产品的小肽包衣或与该用于制备抗心肌缺血产品的小肽一同给予。亦可以将补充的活性化合物加入该组合物中。在具体实施时，将本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽与一种或多种可以用于治疗疾病的其它治疗药物共配制和/或共给予。这种联合使用，可以优越地利用较低剂量的该给予的治疗药物，因此避免可能的毒性或与各种单一疗法相关的并发症。制成液体制剂如水剂、油悬浮剂或其它液体制剂中的一种或多种，如糖浆、酊剂或酏剂等中的一种或多种；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液剂、水剂或油性悬浮剂等中的一种或多种。本发明的小肽可以按常规药剂学制备成注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂或其他的非注射途径制剂。 以上所述的使用形式中，优选的形式是片剂、包衣片剂、胶囊或其他非注射途径的其他制剂等中的一种或多种，进一步优选片剂或胶囊等中的一种或多种，特别优选片剂。综上所述，本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其组合物可用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的产品，优选药物和保健品，进一步优选药物。五、技术特长本发明经心肌缺血疾病的药理学试验，结果表明，该五肽分子的部分体内代谢物小肽能显著降低。与同类蛋白药物相比，该类小肽作用强；而且由于分子量小，易于通过血脑屏障，具有显著的脑通透性优势。本发明提供的小肽的部分代谢产物具有在制备防治心肌缺血疾病中良好的应用前景，为预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病提供了一种新的药物和应用剂型来源，从而对现有的抗心肌缺血产品系统特别是药物进行了改进、改善和提高，从而拓展了小肽及其代谢产物新的医药用途，也为防治心肌缺血提供了一种新的药物干预手段。本发明的用于制备抗心肌缺血产品的小肽及其代谢产物药理作用较强，预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的效果明显；安全低毒，克服了现有的常用药物造成的副作用；制备得到的制剂质量稳定，来源丰富，工艺简单，得率高，更适于医药、试剂等工业和行业的大规模生产和商业应用，具有良好的应用前景；可用于制备预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的产品，本发明的小肽及其代谢产物可以按常规药剂学制备成注射剂、片剂、胶囊剂或非注射途径的其他制剂，能够最大限度地发挥作用，而且使用范围特别广，因此容易推广应用，能够在较短的时间内产生巨大的社会效益和经济效益。总之，本发明有针对性地研究心肌缺血疾病，发现了一种新的抗心肌缺血产品，积极适应了现代医疗和科研领域的工作需要和人性化服务的需要，作出了意想不到的成绩。本发明是用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病等方面的安全原料，对开发利用中国现有药物、改进和提高现有的医疗水平具有重要价值。
具体实施例方式本发明研究了现有的抗心肌缺血疾病及其防治手段，提供了小肽的部分代谢产物作为一种新的抗心肌缺血产品的应用，便于医疗、试剂等行业的安全使用。本发明最终需要制备成抗心肌缺血产品进行应用，下面将列举实施例进行进一步说明。如有问题，可以与发明人直接联系13386272938或15900897066。上述提供的一些实验数据以及下列实施例中按前述发明内容给出几种配方及其使用方法及一些试验研究内容，但应该理解本发明并不仅限于此处所列出的研究内容，还应该理解此处所使用的术语仅用于描述特定的实施例，而并不是对本发明的限定。本发明研究了现有的用于制备抗心肌缺血产品的小肽的新的药理作用和新的用途，提供了一种能够用于制备预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病等产品的原料，便于医疗行业和相关行业如食品、饮料等领域的安全使用。(一)用于制备抗心肌缺血产品的小肽在预防、诊断、保护和治疗心肌缺血疾病方面的试验 为了更好地阐述本发明的活性和作用，下面通过实例进行详细描述，其中的用于制备抗心肌缺血产品的小肽样品源于中国市场。下面就本发明对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用，具体阐述如下:1、实验动物:SD大鼠，体重200 220个。2、实验分组:将实验大鼠随机分组:假手术组、模型组、低剂量组、高剂量组；临用时用生理盐水现配制成注射液，尾静脉注射给药。3、实验步骤:乙醚麻醉SD大鼠，迅速仰卧位固定。在胸左侧第五肋间处切开胸壁并沿胸骨左缘切断第四和第五肋骨，剪开心包膜，暴露心脏，于左冠状动脉前降支丛下穿I根缝合线，结扎缝合线造成心肌缺血，将心脏放回胸腔，用手尽量排出胸内残留气体，迅速关闭胸腔，整个开胸到闭胸操作过程在30秒内完成。假手术组大鼠左冠状动脉前降支丛仅穿线，不结扎冠脉。冠脉结扎后15分钟各小肽组大鼠分别尾静脉注射低剂量和高剂量的小肽，假手术组和模型组注射同体积的生理盐水。缺血5h后麻醉处死大鼠。取血，离心取血清，测定肌酸激酶和乳酸脱氢酶。取心脏，在冠脉结扎线下，平行于冠状沟，等厚地将心室肌横切成5片，将5片心肌置于硝基四氮唑蓝染液中，振摇染色15min后取出，正常心肌染为暗蓝色，梗塞区心肌则不着色，在解剖镜下分离梗塞区，分别称重，以梗塞区心肌重量占心肌重量的百分比(％)作为衡量梗塞范围的指标。4、数据及统计学分析:实验数据以SD表示，用SPSS10.0软件采用方差分析，进行差异的显著性检验。以上实验以及本发明的其他实验均证明，本发明用于制备抗心肌缺血产品的小肽以及其药物组合物是一种安全、高效、稳定、价廉的防治心肌缺血疾病及其直接相关疾病的药物或保健品。(二)用于制备抗心肌缺血产品的小肽在制备抗心肌缺血产品方面的剂型用于制备抗心肌缺血产品的小肽可以采用本领域公知的方法制成各种剂型，如片齐 、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、注射剂等，采取口服或注射(包括静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、皮下注射)、粘膜透析等给药途径进行心肌缺血疾病的防治。用于患者时，剂量根据患者的年龄、体重、给药途径以及症状的状况决定。本发明制备粉针剂一般采用常规的冷冻干燥法，以水作为溶媒，其步骤为:取用于制备抗心肌缺血产品的小肽或其代谢产物，加入赋形剂，加水溶解，加入活性炭，过滤除菌，灌装，半轧塞，冷冻干燥，压塞轧盖即可。所用的赋形剂选自甘露醇、水解明胶、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一种或几种。每瓶含小肽或其代谢产物10 lOOmg。本发明制备粉针剂也可采用喷雾干燥法，以水作为溶媒，其步骤为:取用于制备抗心肌缺血产品的小肽或其代谢产物，加或不加赋形剂(赋形剂同上)，加水溶解，加入活性炭，过滤除菌，喷雾干燥，无菌分装，压塞轧盖即可。每瓶含小肽或其代谢产物10 lOOmg。本发明制备小针剂时，以注射用水作为溶媒配制即可，也可加适量辅料，辅料选自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸、二甲基乙酰胺、PH调节剂、表面活性剂、环糊精、抗氧齐U、金属离子络合剂、抑菌剂中的一种或几种。注射剂可以配制成溶液、微乳液、乳液、脂质体、微球、微囊或其它适合于高药物浓度的有序结构，其中可包括延迟吸收的药剂，例如单硬脂酸盐、明胶、乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羟基乙酸、胶原蛋白、聚正酯或聚乳酸等，以达到注射组合物的延长吸收。每支含小肽或其代谢产物10 lOOmg。本发明制备葡萄糖输液或氯化钠输液，以注射用水作为溶媒，加入适量葡萄糖或氯化钠配制即可，也可加适量辅料，辅料选自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸、二甲基乙酰胺、PH调节剂、表面活性剂、抗氧剂、环糊精、金属离子络合剂、抑菌剂中的一种或几种。每瓶含小肽或其代谢产物10 lOOmg。本发明制备片齐U、胶囊、颗粒剂、口服液等口服制剂，辅料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸盐等，按常规技术制备。可包括高分子聚合物载体，如羟丙甲基纤维素或聚氧乙烯等，以达到口服组合物的延长释放。作为生物技术产品，本发明也可以采用本领域公知的常规生物技术制备小肽或其代谢产物表达载体直接或间接作为抗心肌缺血产品，优选以注射剂通过静脉注射或睾丸局部注射方式，进入体内；此外 ，还可以通过其他多种能够直接或间接有助于提高该小肽或其代谢产物功能的方法、化合物及用药途径，均能够作为抗心肌缺血产品尤其是药物的实施方案。但是，本发明的小肽及其代谢产物优选按常规药剂学制备成注射剂、片剂、胶囊剂或非注射途径的其他制剂。
至于用于制备抗心肌缺血产品的小肽的制备方法均是成熟的方法，已在多种期刊杂志以及专利文献等公开出版物发表过，在本发明中就不再赘述。在本发明中，以上所述的具体实施方式
和以下所述的实例均是为了更好地阐述本发明，并不是用来限制发明的范围。下面通过实施例的方式进一步对本发明作详细描述。以下实施例的实验中所用到的动物、仪器设备、试剂及其配制等均是来自上述的描述或符合有关的常规要求。实施例1、小肽的制备①四肽(QS)的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示:Gln-Cys-Asn_Ser.
②四肽(MN)的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示:Met-Gln-Cys_Asn.
③三肽(CS)的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示:Cys-Asn-Ser.
④三肽(MC)的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示:Met-Gln_Cys.
⑤二肽(MQ)的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示:Met_Gln⑥二肽(NS)的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示:Asn_Ser.
⑦二肽(QC)的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示:Gln_Cys.
以上小肽由广东八加一医药有限公司合成，纯度在98%以上。实施例2、对大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用表1、小肽对冠脉结扎大鼠心肌梗塞的影响(n=10，x±SD)
权利要求
1.一种五肽MLIF的部分代谢物在制备抗心肌缺血产品中的用途，所述的五肽MLIF的部分代谢物即四肽QS、四肽丽、三肽CS、三肽MC、二肽MQ、二肽NS的氨基酸序列如SEQ IDN0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7 所示。
2.一种五肽MLIF的部分代谢物的组合物在制备抗心肌缺血产品中的用途，所述的五肽MLIF的部分代谢物即四肽QS、四肽丽、三肽CS、三肽MC、二肽MQ、二肽NS的氨基酸序列如 SEQ ID N0:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7所/Jn o
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的抗心肌缺血产品是指医药、食品或试剂技术领域中，用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究心肌缺血疾病及其直接相关疾病的产品，是包括药物、试剂、食品或保健品中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的心肌缺血疾病及其直接相关疾病是指包括隐匿型冠心病、心绞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病或猝死型疾病中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的心肌缺血疾病及其直接相关疾病是指隐匿型冠心病、心绞痛型、心肌梗死型、缺血性心肌病或猝死型疾病的早期。
6.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的抗心肌缺血产品是将五肽MLIF的部分代谢物按常规药剂学制备成注射剂、粉针剂、片剂、胶囊剂或其他的非注射途径 制剂进行使用。
全文摘要
本发明涉及生物医药技术领域，是涉及一种五肽的部分代谢物用于制备抗心肌缺血产品的新用途，该小肽的氨基酸序列为如Seq No.2、No.3、No.4、No.5、No.6、No.7所示。经大鼠急性心肌缺血损伤模型的药理学实验，小肽及其代谢物能显著降低心肌缺血所致大鼠心肌损伤和心肌梗塞区范围，降低心肌缺血大鼠血清乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量，表明其具有防治心肌缺血功能，因此可用于制备防治心肌缺血药物。
文档编号A23L1/305GK103203009SQ20131013038
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月15日 优先权日2013年4月15日
发明者李铁军, 芮耀诚, 章越凡, 姜舒, 杨鹏远, 张恩德, 黄景华, 王习著 申请人:中国人民解放军第二军医大学, 上海捌加壹医药科技有限公司