专利名称：一种乳酸菌培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种培养基，特别涉及一种乳酸菌培养基。
背景技术：
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)被公认为是胃炎、消化性溃疡和胃癌的主要致病因子，医学上治疗幽门螺杆菌感染的常用方法是利用质子泵抑制剂加两种抗生素的三联疗法，但由于随之产生的耐药菌株的增多，使得疗效下降。研究结果表明，某些特定的乳酸菌对幽门螺杆菌具有抑制乃至杀灭作用，可以缓解甚至治愈幽门螺杆菌引起的相关疾病，因此，在医学上有很好的应用价值，逐渐成为国际上的研究热点。目前在国内外，已有一些关于利用乳酸菌抑制幽门螺杆菌的体内、体外实验报道，但几乎所有报道都没有提到一个事实，那就是在以往的对乳酸菌的体外筛选实验中所使用的乳酸菌培养 基(如MRS培养基作为乳酸菌的选择性培养基被广泛使用，商业化产品以Merck公司和Oxoid公司的最为常见)本身对幽门螺杆菌的抑制作用。本发明申请人发现，在筛选对幽门螺杆菌有抑制作用的乳酸菌的体外实验中，作为乳酸菌最常采用的MRS培养基自身对幽门螺杆菌具有很强的抑制作用，这种抑制会造成筛选实验的假相，对筛选过程产生一定的干扰。因此，本领域特别需要有一种培养基既能保证乳酸菌的良好生长，又能消除培养基本身对幽门螺杆菌的抑制作用，从而获得真实的体外筛选结果。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服以往在筛选抑制幽门螺杆菌的乳酸菌时，所用的乳酸菌培养基本身对幽门螺杆菌存在抑制作用，从而干扰筛选结果的缺陷，而提供一种既能保证乳酸菌的良好生长，且对幽门螺杆菌没有抑制作用的培养基。为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案之一为:一种乳酸菌培养基，所述的乳酸菌培养基由如下组分组成:I)蛋白胨 10 12g/L ;2 )酵母提取物4 6g/L ；3)葡萄糖 6 22g/L ;4)酸碱缓冲剂2 7g/L，所述的酸碱缓冲剂为柠檬酸铵和/或磷酸氢二钾；5)生长因子0.15 0.4g/L，所述的生长因子为硫酸镁和/或硫酸锰；6)牛肉浸膏0 10g/L;7)可溶性淀粉0 15g/L ；8)果糖 0 3g/L;和9)琼脂 0 20g/L;所述培养基的pH值为5.8-6.9。本发明中，所述的乳酸菌培养基中含有牛肉浸膏0 10g/L ;较佳地，所述的乳酸菌培养基中含有牛肉浸膏8 10g/L。
本发明中，所述的乳酸菌培养基中含有可溶性淀粉0 15g/L ;较佳地，所述的乳酸菌培养基中含有可溶性淀粉5 15g/L。本发明中，所述的乳酸菌培养基中含有果糖0 3g/L ;较佳地，所述的乳酸菌培养基中含有果糖3g/L。本发明中,所述的乳酸菌培养基中含有琼脂0 20g/L ;较佳地,所述的乳酸菌培养基中含有琼脂10 20g/L。本发明优选地，所述的蛋白胨为胰蛋白胨和/或酪蛋白胨。本发明优选地，所述的柠檬酸铵不超过5g/L ;所述的磷酸氢二钾不超过2.5g/L ；所述的硫酸镁不超过0.3g/L ;所述的硫酸锰不超过0.2g/L。本发明 更优选地，所述的乳酸菌培养基由如下组分组成:胰蛋白胨10 12g/L、牛肉浸膏9 10g/L、酵母提取物4 5g/L、葡萄糖20 22g/L、朽1檬酸铵1.5 2.0g/L、磷酸氢二钾2.0 2.5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04 0.2g/L和琼脂10 14g/L，所述培养基的pH值为6.88-6.91。本发明中，溶解所述乳酸菌培养基的介质为本领域常规，较佳地为水；所述水为本领域常规所述，如去离子水、蒸馏水、双蒸水等。本发明的乳酸菌培养基的制备方法为本领域常规，只需将其包含的各组分简单混合，然后按照本领域常规微生物培养基的制备条件制备即可。本发明提供的技术方案之二为:如前所述的乳酸菌培养基在筛选对幽门螺杆菌有抑制作用的乳酸菌中的应用。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于:本发明的培养基可供乳酸菌良好生长，且克服了以往几乎所有商业化的MRS培养基对幽门螺杆菌有抑制作用的问题，可用于筛选对幽门螺杆菌有抑制作用的乳酸菌，在筛选实验中得到真实可靠的筛选结果；同时，本发明的培养基大大降低了乳酸菌培养基的成本。本发明申请人发现了之前相关研究中从未提及的重要现象，即乳酸菌培养基本身对幽门螺杆菌存在抑制作用，而使用本发明的培养基可以排除乳酸菌筛选实验中的干扰，将为筛选对幽门螺杆菌有抑制作用的乳酸菌的实验带来根本的改观，从而为今后相关研究获得真实的结论奠定基础。
图1为Merck公司和Oxoid公司的MRS培养基对幽门螺杆菌抑制作用的结果图，其左边为Oxoid公司的培养基，右边为Merck公司的培养基。图2为本发明的培养基与Merck公司和Oxoid公司的MRS培养基在抑制幽门螺杆菌作用方面的对比结果图，其中，a为本发明的培养基，b为Oxoid公司的MRS培养基，c为Merck公司的MRS培养基。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。下述实施例中所用药品如无特别说明，均购自国药集团药业股份有限公司。商品化MRS培养基购自Merck公司和Oxoid公司。实施例1本实施例的乳酸菌培养基所包含的各组分如下表所示:
权利要求
1.一种乳酸菌培养基，其特征在于，所述的乳酸菌培养基由如下组分组成: 1)蛋白胨10 12g/L； 2)酵母提取物4 6g/L； 3)葡萄糖6 22g/L; 4)酸碱缓冲剂2 7g/L，所述的酸碱缓冲剂为柠檬酸铵和/或磷酸氢二钾； 5)生长因子0.15 0.4g/L，所述的生长因子为硫酸镁和/或硫酸锰； 6)牛肉浸膏0 10g/L； 7)可溶性淀粉0 15g/L； 8)果糖0 3g/L;和 9)琼脂0 20g/L; 所述培养基的PH值为5.8-6.9。
2.如权利要求1所述的乳酸菌培养基，其特征在于，所述的乳酸菌培养基中含有牛肉浸膏8 10g/L。
3.如权利要求1所述的乳酸菌培养基，其特征在于，所述的乳酸菌培养基中含有可溶性淀粉5 15g/L。
4.如权利要求1所述的乳酸菌培养基，其特征在于，所述的乳酸菌培养基中含有果糖3g/L。
5.如权利要求1所述的乳酸菌培养基，其特征在于，所述的乳酸菌培养基中含有琼脂10 20g/L。
6.如权利要求1所述的乳酸菌培养基，其特征在于，所述的蛋白胨为胰蛋白胨和/或酪蛋白胨。
7.如权利要求1所述的乳酸菌培养基，其特征在于，所述的柠檬酸铵不超过5g/L;所述的磷酸氢二钾不超过2.5g/L ;所述的硫酸镁不超过0.3g/L ;所述的硫酸锰不超过0.2g/L。
8.如权利要求7所述的乳酸菌培养基，其特征在于，所述的乳酸菌培养基包括如下组分:胰蛋白胨10 12g/L、牛肉浸膏9 10g/L、酵母提取物4 5g/L、葡萄糖20 22g/L、柠檬酸铵1.5 2.0g/L、磷酸氢二钾2.0 2.5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04 0.2g/L和琼脂10 14g/L，所述培养基的pH值为6.88-6.91。
9.如权利要求1 8任一项所述的乳酸菌培养基在筛选对幽门螺杆菌有抑制作用的乳酸菌中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种乳酸菌培养基，该乳酸菌培养基由如下组分组成1)蛋白胨10～12g/L；2)酵母提取物4～6g/L；3)葡萄糖6～22g/L；4)酸碱缓冲剂2～7g/L；5)生长因子0.15～0.4g/L；6)牛肉浸膏0～10g/L；7)可溶性淀粉0～15g/L；8)果糖0～3g/L；和9)琼脂0～20g/L；该培养基的pH值为5.8-6.9。本发明的培养基可供乳酸菌良好生长，且克服了以往几乎所有商业化的MRS培养基对幽门螺杆菌有抑制作用的问题，可用于筛选对幽门螺杆菌有抑制作用的乳酸菌，在筛选实验中得到真实可靠的筛选结果；同时，本发明的培养基大大降低了乳酸菌培养基的成本。
文档编号C12N1/20GK103194417SQ201310147929
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月25日 优先权日2013年4月25日
发明者苗君莅, 郭本恒, 吴正钧, 于鹏, 刘振民 申请人:光明乳业股份有限公司