专利名称：一种干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物发酵技术和饲料领域，具体涉及一种干酪乳杆菌在饲料中的应用。
背景技术：
抗生素被广泛用作饲料添加剂，然而抗生素作为饲料添加剂产生的细菌耐药性和药物残留等问题，会对人类健康造成危害。因此，研究有效的抗生素饲料添加剂替代产品日益受到重视。抗菌肽分子量小、热稳定性强。一方面，抗菌肽可以耐受饲料制粒时的高温；另一方面，在规模化发酵生产时经高温浓缩工序，可充分杀灭杂菌体而不导致抗菌肽失活，并且，产品在推广应用后不会出现因工程菌的扩散所导致的环境生态问题。同时，因抗菌肽分子量较小，不易具有免疫原性。鉴于抗菌肽这些优点，对其研究开发已成为目前世界上研究抗生素替代品的前沿性课题。目前，国内作为添加剂生产应用的主要是蚕抗菌肽AD—一酵母制剂。大多数的畜禽试验也是围绕这种抗菌肽进行的。相关文献报道有:1、“抗菌肽制剂代替抗生素在断奶仔猪饲粮中的应用效果”(《中国饲料》2001年第18期13-14页)，通过在断奶仔猪的饲料中用抗菌肽代替抗生素，对仔猪的腹泻、生产性能等作了比较。结果表明，抗菌肽在仔猪断奶应激期间抗腹泻效果不比抗生素差。适量的抗菌肽比抗生素促生长的效果要好，但高剂量的抗菌肽则降低了仔猪的生长。2、“抗菌肽与抗生素饲喂肉鸡的效果比较”(《广东饲料》2004年第02期)，发现抗菌肽对肉鸡有促进生长和提高免疫力作用。与中草药抗生素相比，在出栏率、平均体重、饲料效率等方面均无显著性差异，且在出栏前4天停喂，抽检无残留。
3、“蚕抗菌肽AD-酵母制剂对粤黄鸡肠道消化酶和饲料品质的影响”(《中国家禽》2004年第7期)通过饮水方式给粤黄鸡添加抗菌肽的饲养试验结果表明，抗菌肽可促进小鸡生长和减少排泄物氮含量。此外，国外有报道称，抗菌肽对饲料防霉也有一定的效果。到目前为止，仅有少数抗菌肽作为饲料添加剂进行了小规模的实验研究，实验的结果都为正效应；抗菌肽大规模的在饲料业中的应用还屈指可数。另外，国内干酪乳杆菌行业发展尚处于起步阶段，对菌种的研究及相关发酵剂的研究较少，国内大批量使用的干酪乳杆菌菌种及发酵剂大都来自国外知名厂商，国内干酪乳杆菌行业生产商或销售商销售量比较小，因此干酪乳杆菌行业还有较大的发展空间。且目前国内的学者对干酪乳杆菌产细菌素的生产工艺及其作为饲料添加剂的生产工艺方面还在起步阶段，商业化产品还很有限，因此亟待大规模的开发利用。目前有关干酪乳杆菌方面的专利申请如下:申请号:201210277454.4，发明名称“一株干酪乳杆菌及其在饲料中的应用”，该专利涉及一株干酪乳杆菌及其在饲料中的应用，并具体公开了该菌株能发酵产生磷脂酶A2，产酶量高，将该菌株应用于饲料领域，以含植物磷脂的油料作物或其加工副产品为发酵底物，以硫酸铵、氯化钠、玉米淀粉作为能量供体，以该菌株作为发酵菌株，通过固态发酵制备饲料添加剂。但该专利不涉及抗菌肽的利
权利要求
1.一种干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，所述干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)保藏名称为干酪乳杆菌lyT-7，保藏单位:中国典型培养物保藏中心，保藏号为:CCTCCM2010197，其特征在于:将10吨规模发酵获得的干酪乳杆菌发酵液，通过喷雾干燥并经加入脱毒后的油菜饼制成含干酪乳杆菌菌数IO9活菌/克的饲料添加剂。
2.根据权利要求1所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述10吨规模的干酪乳杆菌发酵液生产工艺流程包括: A、干酪乳杆菌的斜面接种 B、500ml三角瓶培养 C、0.5吨的种子罐发酵 DUO吨大罐发酵48小时 所述发酵液生产工艺中的培养基为:葡萄糖2.21%，蛋白胨2.41%，酵母膏0.64% ； 所述三角瓶培养的培养温度为30°C，起始pH为6.0，接种量为2%，摇瓶装量为75ml/100ml ； 所述发酵罐中的发酵条件为:接种量5%，在发酵前12h内每隔Ih给予间歇搅拌，转数lOOrpm，维持时间30min，在发酵30小时时进行一次补料，补加0.01%氨水。
3.根据权利要求2所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的添加量为7%。
4.根据权利要求1所述干酪乳 杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述干酪乳杆菌饲料添加剂的生产工艺流程为: 将干酪乳杆菌发酵液于60°C喷雾干燥至含水量在8%以下，获得干菌粉，然后加入脱毒后油菜饼，制得含干酪乳杆菌菌数为IO9活菌/克的饲料添加剂。
5.根据权利要求4所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述干菌粉每克含有的乳杆菌活菌数为1011。
6.根据权利要求4所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述干酪乳杆菌饲料添加剂于饲料中的添加量为每吨饲料添加2公斤。
7.根据权利要求4所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述脱毒后油菜饼的制备工艺如下: 油菜饼加水，条件:油菜饼:麸皮=9: lg/g,水料比为1.0:0.7g/g,起始pH值6.0,用搅拌机配料，在lkg/cm2，110°C蒸汽压下消毒20 30分钟，冷却至35 °C，在接种铺料机中接入菌种，堆料，物料厚度控制在3公分，发酵室温度控制在32°C，相对湿度为95%，发酵时间3天，用气流干燥机干燥，再用粉碎机把产品粉碎成100目以下的粉末即得；所述菌种为假丝酵母:干酪乳杆菌=2: lg/g,总接种量为4.50 X IO7 cfu/g。
8.根据权利要求7所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述假丝酵母是接种于麦芽汁液体培养基，灭菌、接种，150r/min摇床，28°C培养3天得到。
9.根据权利要求8所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述麦芽汁液体培养基的制作方法为:先将麦芽糖化液用4 6层纱布过滤，然后将以水调匀至产生泡沫的鸡蛋清倒入过滤后的糖化液中，搅拌煮沸后再过滤，并将滤液稀释到5 6波美度，ρΗ6.4，121°C灭菌20分钟即可。
10.根据权利要求7所述干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，其特征在于:所述干酪乳杆菌采用MRS液体培养基:蛋白胨IOg ;牛肉膏IOg ;酵母膏5g ;Κ2ΗΡ04.3Η20 2g ;乙酸钠5g ;葡萄糖 20g ;吐温 801g ;柠檬酸二铵 2g ；MgS04*7H20 0.58g ；MnS04*4H20 0.25g ;加蒸馏水IOOOmL ；pH6.2-6.4，121 °C，15min灭菌备用，然后将干酪乳杆菌接种于MRS液体培养基，灭菌、接种，静置培 养，30°C，2 3天即得。
全文摘要
本发明涉及一种干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用，所述干酪乳杆菌，保藏名称为干酪乳杆菌lyT-7，保藏单位中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M2010197。将10吨规模发酵获得的干酪乳杆菌发酵液，通过喷雾干燥并经加入脱毒后的油菜饼制成含干酪乳杆菌菌数109活菌/克的饲料添加剂。本发明在利用假丝酵母和干酪乳杆菌发酵后，不仅能起到脱毒的作用，而且还能提高油菜饼蛋白的含量和油菜饼营养成分，将干酪乳杆菌应用于常规饲料，经饲喂仔猪试验证明，其成活率、抗病能力、增重效果得到有效提高。
文档编号C12N1/20GK103202386SQ20131016210
公开日2013年7月17日 申请日期2013年5月6日 优先权日2013年5月6日
发明者韩磊, 罗璠, 李婉丽, 孙群, 杨志荣, 冯甦 申请人:四川大学