专利名称：一种鸭瘟活疫苗及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种鸭瘟活疫苗及其制备方法，属兽用生物制品领域。
背景技术：
鸭痕(duck plague),也称为鸭病毒性肠炎(duck virus enteritis),是由鸭肠炎病毒(duck enteritis virus)或称鸭痕病毒(duck plague virus)或称鸭痕疱疫病毒(duck plague herpesvirus)引起的鸭、鹅等雁形目禽类的一种急性、热性、败血性的传染病，其特征是血管损伤、组织出血、消化道粘膜糜烂、淋巴器官出现病变、实质器官退行性病变(Saif Y M.禽病学(第11版).高福，苏敬良译.北京:中国农业出版社，2005:389-398)。1923 年荷兰首次报道了该病(Baudet，A.E.R.F.1923.Mortality in ducks inthe Netherlands caused by a filterable virus.Fowl plague.Tijdschr Diergeneeskd50:455 - 459.)。1957年，黄引贤在我国最早报道该病并分离到病毒(黄引贤.拟鴨瘟的研究.华南农学院学报 .1959，1:67-78.)。该病发病率和死亡率很高，对水禽养殖业危害很大。目前预防鸭瘟的主要措施为疫苗免疫接种。常用的疫苗有灭活疫苗和活疫苗。鸭瘟灭活疫苗是由鸭瘟病毒鸭胚适应毒灭活后加油佐剂乳化而成。鸭瘟活疫苗是由鸭瘟病毒鸡胚化弱毒培养物，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥而成(中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二〇一〇年版(三部).中国农业出版社，2011，本发明以下简称《兽药典》)。鸭瘟病毒鸡胚化弱毒是鸭瘟病毒经过鸭胚连续传代10代后，再经鸡胚传代60多代致弱，对鸭的致病力减弱。该病毒的全基因组约为158091bp (GenBank N0.EU082088)。本发明使用的原始种毒为中国兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)保存的鸭瘟疱疹病毒强毒CVCC AV1221株，全基因组为162131bp(GenBank N0.JQ673560)，与鸭瘟病毒鸡胚化弱毒相比，存在两个额外的大片段(3513bp和528bp)。注:本发明所涉及的鸭痕(duck plague),也称为鸭病毒性肠炎(duck virusenteritis),其病原为鸭肠炎病毒(duck enteritis virus) /或称鸭痕病毒(duck plaguevirus) / 或称鸭痕疱疫病毒(duck plague herpesvirus)。
发明内容
本发明的目的是培育一株免疫原性和安全性都好的鸭肠炎病毒(duck enteritisvirus)弱毒病毒株，并用此弱毒株病毒作为鸭瘟活疫苗的生产毒种，制备出一种鸭瘟活疫苗提供鸭瘟防疫使用。本发明的技术方案1.一株鸭肠炎病毒(duck enteritis virus)是一株弱毒株,该株病毒已于2013年04月26日送交北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号CGMCC N0.7460。2.该鸭肠炎病毒CGMCC N0.7460是鸭瘟疱疹病毒强毒株CVCC AV1221经鸡胚成纤维细胞连续传代、克隆纯化得到的弱毒株病毒；CGMCC N0.7460毒株全基因组为160330bp，与鸭瘟疱疹病毒强毒CVCC AV1221株基因组(GenBank N0.JQ673560)相比，缺失了 145818-147618 位的核苷酸共 1801bp。3.一种鸭瘟疫苗主要含有鸭肠炎病毒CGMCC N0.7460株，其制备方法主要为:将鸭肠炎病毒CGMCC N0.7460株接种于SPF鸡胚制备的CEF单层细胞，培养至当病变率达75%以上收获病毒培养物，加常规冻干稳定剂，混匀后再经冷冻真空干燥制成鸭瘟活疫苗。给鸭接种有效剂量的疫苗，能使接种的鸭获得对鸭瘟疱疹病毒强毒株有效的免疫力。4.该鸭肠炎病毒CGMCCN0.7460株的基因组145818-147618位缺失区域按常规生物学技术插入不同的水禽病毒的保护性抗原基因片段构建成相应的重组病毒，分别用于制备活载体疫苗，同时预防鸭瘟和相应的水禽疾病。本发明具体方式1.生产种毒1.1原始种毒来源原始种毒为中国兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)保存的鸭瘟疱疹病毒强毒株，目录编码为CVCC AV1221 (见中国兽医药品监察所，中国兽医微生物菌种保藏管理中心编著.中国兽医菌种目录第二版，中国农业科学技术出版社，2002，pl38)。1.2弱毒株的培育
鸭痕病毒AV1221株经无特定病原体(Specific pathogen free, SPF)鸡胚成纤维细胞(chick embryo fibroblast, CEF)连续传代80代,克隆纯化得到的弱毒株,命名为鸭肠炎病毒(duck enteritis virus)DEVC86株,该毒株已于2013年04月送交北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号CGMCC N0.7460。1.3生物学特性1.3.1繁殖特性鸭瘟病毒DEVC86株接种SPFCEF细胞，感染复数(Μ0Ι)为0.01，测定病毒一步生长曲线，结果见表1，培养48小时病毒含量达最高，为IO6 8TCID5tlA).1ml，说明该病毒在CEF中具有良好的繁殖特性。表I鸭痕疱疫病毒DEVC86株不同培养时间的病毒含量
权利要求
1.一株鸭肠炎病毒病毒,其特征在于该鸭肠炎病毒(duck enteritis virus)是一株弱毒株，该株病毒已于2013年04月26日送交北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号CGMCCN0.7460。
2.如权利要求1所述一株鸭肠炎病毒，其特征在于该鸭肠炎病毒CGMCCN0.7460是鸭瘟疱疹病毒强毒株CVCCAV1221经鸡胚成纤维细胞连续传代、克隆纯化得到的弱毒株病毒；CGMCCN0.7460毒株全基因组为160330bp，与鸭瘟疱疹病毒强毒CVCCAV1221株基因组(GenBankN0.JQ673560)相比，缺失了 145818-147618 位的核苷酸共 1801bp。
3.一种鸭瘟活疫苗，其特征在于该疫苗主要含有鸭肠炎病毒CGMCCN0.7460株。
4.一种如权利要求3所述鸭瘟活疫苗的制备方法，其特征在于是将鸭肠炎病毒CGMCCN0.7460株接种于SPF鸡胚制备的CEF单层细胞，培养至当病变率达75%以上收获病毒培养物，加常规冻干稳定剂，混匀后再经冷冻真空干燥制成鸭瘟活疫苗。
5.如权利要求3所述一种鸭瘟活疫苗的应用，其特征在于给鸭接种有效剂量的疫苗，能使接种的鸭获得对鸭瘟疱疹病毒强毒株有效的免疫力。
6.如权利要求1所述一株鸭肠炎病毒的应用，其特征在于该鸭肠炎病毒CGMCCN0.7460株的基因组145818- 147618位缺失区域按常规生物学技术插入不同的水禽病毒的保护性抗原基因片段构建成相应的重组病毒，分别用于制备活载体疫苗，同时预防鸭瘟和相应的水禽疾病。
全文摘要
本发明涉及一种鸭瘟活疫苗及其制备方法。所提供的鸭肠炎病毒是人工致弱的鸭肠炎病毒CGMCC No.7460(DEVC86)株，能在CEF繁殖，病毒含量高，制造疫苗方便；雏鸭安全，对鸡不致死，具有良好的生物安全性；免疫原性好，能有效地保护各品种鸭抵抗鸭瘟感染；该鸭肠炎病毒CGMCC No.7460株的基因组145818-147618位缺失区域按常规生物学技术插入不同的水禽病毒的保护性抗原基因片段构建成相应的重组病毒。
文档编号C12R1/93GK103224913SQ20131016557
公开日2013年7月31日 申请日期2013年5月8日 优先权日2013年5月8日
发明者杨承槐, 李俊平, 李启红, 张广川, 刘丹, 李岭, 毛娅卿, 李慧姣, 夏业才 申请人:中国兽医药品监察所