一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法
【专利摘要】本发明涉及一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，即将人参皂甙Rb1降解生成人参皂甙Rd的方法。在常温条件下将人参皂甙Rb1溶液和酶制剂混合均匀，直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为5-20kV/cm，处理的脉冲数为1-10个，酶制剂的添加量为1-4%，所采用的酶为价格低廉的商业化纤维素酶和β-葡萄糖苷酶。本方法在人参皂甙Rb1酶解过程中引入高压脉冲电场，提高了酶活性，加速了人参皂甙Rb1降解的反应速度，快速、高效地促进人参皂甙Rb1转化生成稀有人参皂甙Rd。本方法与传统的转化方法相比，无需加热、制备时间短、得率高、能耗少。
【专利说明】一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，特别是涉及高压脉冲电场耦合酶解制备方法。
【背景技术】
[0002]人参(Panax ginseng C.A.Meyer)为五加科人参属植物,广泛应用于医药学领域。人参皂甙作为人参代谢重要次级产物，具有多种药理活性。其中稀有人参皂甙Rd属于原人参二元醇，具有神经系统保护作用、抗癌细胞转移、促进神经干细胞增殖、预防化学药物引起肾损伤及阻止血管收缩等作用。
[0003]但是稀有人参皂甙Rd在人参中含量较低，含量只有千分之几，从人参中直接提取显然不符合实际。目前的化学合成技术步骤复杂、产率很低，也难以工业化生产。
[0004]稀有人参皂甙的化学结构与人参中某些含量高的人参皂甙如Rbl相比，只是缺少了一个或几个糖基，因此可以通过水解某些高含量人参皂甙的糖基来获得稀有人参皂甙。目前，用于人参皂甙糖基水解的方法主要有化学转化法和生物转化法。其中化学转化法反应包括酸水解和碱水解，但存在专一性差，副产物多、产率低的缺点；生物转化法包括微生物转化和酶法转化，但反应周期长，工艺复杂。本发明方法具有条件温和、不破坏皂甙结构、操作步骤简单、选择性高、得率高等优点，并且采用的酶为价格低廉的商业化用酶。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提出一种高压脉冲电场与酶耦合降解人参皂甙Rbl制备稀有人参皂甙Rd的方法，以克服目前化学法和生物法降解人参皂甙Rbl的缺点。
[0006]本发明涉及一种降解人参皂甙Rbl快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，利用高压脉冲电场技术耦合酶制剂降解人参皂甙Rbl制备稀有人参皂甙Rd，在常温下将人参皂甙Rbl样品溶解于缓冲溶液中，加入酶制剂混合均匀，直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为5-20kV/cm，处理的脉冲数为1-10个，将高压脉冲电场处理后的物料加入有机溶剂萃取，离心分离，取上清液，挥发除掉溶剂，即获得人参皂甙Rd。
[0007]所述的酶制剂为纤维素酶或β -葡萄糖苷酶。
[0008]所述酶制剂添加量为1_4%。
[0009]所述缓冲溶液使用醋酸钠-醋酸缓冲液。
[0010]所述有机溶剂使用正丁醇时用水饱和溶液。
[0011]本方法由于在酶解反应过程中引入高压脉冲电场，提高酶活性，加速酶解反应速度，快速、高效地促进人参皂甙Rbl转化生成稀有人参皂甙Rd。
[0012]本发明将高压脉冲电场技术与商业化酶制剂进行耦合制备稀有人参人参皂甙Rd，具有非热、反应速度快、副产物少、成本低等优点，为人参皂甙结构修饰提供新方法。
【专利附图】
【附图说明】[0013]图1人参皂甙Rbl降解生成人参皂甙Rd的反应途径【具体实施方式】
[0014]结合以下给出的实施例对本发明方法作进一步详细说明。
[0015]实施例1
[0016]本发明将人参皂甙Rbl降解生成人参皂甙Rd的方法，是在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入3%β -葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为15kV/cm，脉冲数为8 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，经高效液相色谱分析人参皂甙Rd的得率为91.42%。
[0017]实施例2
[0018]将人参皂甙Rbl降解生成人参皂甙Rd的方法，是在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入3%β-葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为lOkV/cm，脉冲数为10 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，经高效液相色谱分析人参皂甙Rd的得率为70.35%。
[0019]实施例3
[0020]将人参皂甙Rbl降解生成人参皂甙Rd的方法，是在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入3%β-葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为20kV/cm，脉冲数为6 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，经高效液相色谱分析人参皂甙Rd的得率为44.52%。
[0021]实施例4
[0022]将人参皂甙Rbl降解生成人参皂甙Rd的方法，是在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入4%β-葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为20kV/cm，脉冲数为8 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，经高效液相色谱分析人参皂甙Rd的得率为56.29%。
[0023]实施例5
[0024]将人参皂甙Rbl降解生成人参皂甙Rd的方法，是在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入2%纤维素酶Cellulasel.5L FG，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为15kV/cm，脉冲数为10 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，经高效液相色谱分析人参皂甙Rd的得率为51.06%。
[0025]实施例6
[0026]将人参皂甙Rbl降解生成人参皂甙Rd的方法，是在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入2%纤维素酶Cellulase (Aspergillus niger),混合均匀,在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为15kV/cm，脉冲数为10 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，经高效液相色谱分析人参皂甙Rd的得率为46.81%。
【权利要求】
1.一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，利用高压脉冲电场技术耦合酶制剂降解人参皂甙Rbl制备稀有人参皂甙Rd，其特征在于: 在常温下将人参皂甙Rbl样品溶解于缓冲溶液中，加入酶制剂混合均匀，直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为5-20kV/cm，处理的脉冲数为1-10个，将高压脉冲电场处理后的物料加入有机溶剂萃取，离心分离，取上清液，挥发除掉溶剂，即获得人参皂甙Rd。
2.根据权利要求1所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 所述的酶制剂为纤维素酶或葡萄糖苷酶，添加量为1_4%。
3.根据权利要求1所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 所述缓冲溶液使用醋酸钠-醋酸缓冲液。
4.根据权利要求1所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 所述有机溶剂使用正丁醇时用水饱和溶液。
5.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人参皂甙Rbl溶液中 加入3%β -葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为15kV/cm，脉冲数为8 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，人参皂甙Rd的得率为91.42%。
6.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入3% β -葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为lOkV/cm，脉冲数为10 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，人参皂甙Rd的得率为70.35%。
7.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入3% β -葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为20kV/cm，脉冲数为6 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，人参皂甙Rd的得率为44.52%。
8.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入4%β-葡萄糖苷酶，混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为20kV/cm，脉冲数为8 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，人参皂甙Rd的得率为56.29%。
9.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人参皂甙Rbl溶液中加入2%纤维素酶Cellulasel.5L FG,混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为15kV/cm，脉冲数为10 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分离，上清液挥发除去溶剂，人参皂甙Rd的得率为51.06%。
10.根据权利要求1至4任一项所述的一种快速制备稀有人参皂甙Rd的方法，其特征在于: 在ImM人参阜式Rbl溶液中加入2%纤维素酶Cellulase, Aspergillus niger,混合均匀，在常温下直接通入高压脉冲电场进行处理，其电场强度为15kV/cm，脉冲数为10 ;用水饱和正丁醇萃取反应液，离心分`离，上清液挥发除去溶剂，人参皂甙Rd的得率为46.81%。
【文档编号】C12P33/20GK103525892SQ201310429027
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年9月20日 优先权日:2013年9月20日
【发明者】卢丞文, 殷涌光 申请人:吉林大学