构建干扰载体的方法
【专利摘要】本发明公开了构建干扰载体的方法。步骤如下：首先干扰片段寡脱氧核苷酸，即将目标干扰片段脱氧核苷酸使用无菌的双蒸水稀释，直至其浓度达到1ug/ul,其后分别取相应的片段溶液进行退火，形成双链；将载体进行双酶切，首先制备大肠杆菌，然后将载体转化，然后将质粒进行少量抽提，再进行酶切鉴定；最后将DNA模板与双酶切载体连接；最后将阳性菌落PCR初步进行鉴定即可。质粒在进行抽提的时候，应加大菌体使用量；鉴定前可以使用菌脱液进行菌脱，其PH需要在5－5.5之间。本发明的有益效果是，与预期的结果一致，误差较小，而且平均值准确，操作简便。
【专利说明】构建干扰载体的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种实验方法，具体来说，构建干扰载体的方法。
【背景技术】
[0002]载体(vector)，能载带微量物质共同参与某种化学或物理过程的常量物质，在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。在基因操作过程中使用运载体有两个目的:一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。现在所用的运载体主要有两类:一类是细菌细胞质的质粒，它是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(—般有I~200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。另一类运载体是噬菌体或某些病毒等。现在人们还在不断寻找新的运载体，如叶绿体或线粒体DNA也有可能成为运载体。
【发明内容】
[0003]为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案:
构建干扰载体的方法，步骤如下:首先干扰片段寡脱氧核苷酸，即将目标干扰片段脱氧核苷酸使用无菌的双蒸水稀释，直至其浓度达到lug/ul，其后分别取相应的片段溶液进行退火，形成双链；将载体进行双酶切，首先制备大肠杆菌，然后将载体转化，然后将质粒进行少量抽提，再进行酶切鉴定；最后将D N A模板与双酶切载体连接；最后将阳性菌落P CR初步进行鉴定即可。
[0004]本发明中，质粒在进行抽提的时候，应加大菌体使用量。
[0005]本发明中，鉴定前可以使用菌脱液进行菌脱，其P H需要在5 — 5.5之间。
[0006]本发明的有益效果是，与预期的结果一致，误差较小，而且平均值准确，操作简便。
【具体实施方式】
[0007]构建干扰载体的方法，步骤如下:首先干扰片段寡脱氧核苷酸，即将目标干扰片段脱氧核苷酸使用无菌的双蒸水稀释，直至其浓度达到lug/ul，其后分别取相应的片段溶液进行退火，形成双链；将载体进行双酶切，首先制备大肠杆菌，然后将载体转化，然后将质粒进行少量抽提，再进行酶切鉴定；最后将D N A模板与双酶切载体连接；最后将阳性菌落P c R初步进行鉴定即可。质粒在进行抽提的时候，应加大菌体使用量；鉴定前使用菌脱液进行菌脱，其P H需要在5.3。
[0008]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.构建干扰载体的方法，其特征在于，步骤如下:首先干扰片段寡脱氧核苷酸，即将目标干扰片段脱氧核苷酸使用无菌的双蒸水稀释，直至其浓度达到lug/ul，其后分别取相应的片段溶液进行退火，形成双链；将载体进行双酶切，首先制备大肠杆菌，然后将载体转化，然后将质粒进行少量抽提，再进行酶切鉴定；最后将D N A模板与双酶切载体连接；最后将阳性菌落P CR初步进行鉴定即可。
2.如权利要求1所述的构建干扰载体的方法，其特征在于，质粒在进行抽提的时候，应加大菌体使用量。
3.如权利要求1所述的构建干扰载体的方法，其特征在于，鉴定前可以使用菌脱液进行菌脱，其P H需要在5 — 5.5之间。
【文档编号】C12N15/66GK103602696SQ201310525087
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】徐丽 申请人:徐丽