引入人源cd24核苷酸序列的转化减毒李斯特菌及其疫苗的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种引入人源CD24核苷酸序列的转化减毒李斯特菌及其疫苗，其特征在于，所述人源CD24核苷酸位于PKSV7穿梭质粒上，并在减毒李斯特菌或其子代中复制并表达；本发明疫苗克服现有技术中肝癌治疗的诸多不足，用于临床治疗和预防肝癌对化放疗药物的耐药性及术后的转移复发，具有较高的安全性和可靠性。
【专利说明】引入人源CD24核苷酸序列的转化减毒李斯特菌及其疫苗
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物领域，特别是一种引入了人源CD24核苷酸序列的转化的减毒李斯特菌。
【背景技术】
[0002]肿瘤及其相关性疾病对人们的健康产生了越来越多的威胁。目前，全球范围内，肝细胞肝癌占到了 80-90%，在最常见的肿瘤中列第五位，在肿瘤相关性死亡中列第三位。全世界，50%的肝细胞肝癌都是由于乙型肝炎病毒感染引起的。在中国，由于乙肝病毒感染的高发性，肝细胞肝癌的发病率高达1/10000。由于肝癌的恶性程度较高及较差的预后，目前的治疗主要集中在抗病毒治疗、放射治疗、药物化疗及手术治疗。但是，肝癌往往会产生化放疗抵抗以及术后的复发及转移。肝癌干细胞作为一个新的概念被提了出来，用来解释肝癌产生化放疗抵抗的机制。肝癌干细胞是存在于肝癌中的一小群细胞，它们能够自我更新、增殖、分化成肝癌细胞。这些细胞群通过某些已知或者未知的机制对化放疗药物产生抵抗，从而影响肿瘤的转移复发。随着表观遗传学的发展，一些非常重要的肝癌干细胞表面分子标记被陆续发现，如:⑶13、⑶90、⑶133和EpCAM。这些表面标记对于鉴定和分离肝癌干细胞扮演着十分重要的角色。CD24是一个高度糖基化的、粘蛋白样的细胞表面蛋白，其高表达于诸多实体肿瘤，如:淋巴瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、食管癌、乳腺癌、肾透明细胞癌等。2012年,香港大学Irene Oi Lin Ng教授在国际顶级刊物《Cancer Cell》上撰文证明称:CD24在化放疗抵抗的肿瘤组织中高表达，是肝癌干细胞的重要表面标记。CD24+的肝癌细胞对于肝癌的化放疗及术后复发转移起到关键作用。
[0003]李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种格兰染色阳性的胞内寄生菌,对体抗力较差的老人、孕妇和小孩能够引起腹泻。20世纪，李斯特菌被认为是最有潜力的活疫苗载体，目前全 球十大最有潜力的疫苗中，李斯特菌疫苗独占两席。李斯特菌在体内主要被巨噬细胞、肝库普佛细胞及脾淋巴细胞吞噬。李斯特菌溶血素O能够溶解细胞膜，使得李斯特菌能够自由进出细胞，在细胞与细胞之间传播。李斯特菌在胞内期分泌的蛋白可被蛋白酶降解并递呈给MHC-1类通路。同时，该分泌蛋白可以直接被递呈并激活MHC-1I分子通路。因此，李斯特菌疫苗可以激活⑶4+和⑶8+的T淋巴细胞。
[0004]PKSV7穿梭质粒是本领域常用的质粒载体，虽然在
【发明者】侯嘉杰, 杨雨, 孙倍成, 陈云 申请人:南京新赛尔思生物科技有限公司