头孢克洛及其合成方法

头孢克洛及其合成方法
【专利摘要】本发明提供了一种头孢克洛及其合成方法。头孢克洛的合成方法包括，在酶存在的情况下，7·A?C?C?A与D·苯甘氨酸甲酯盐衍生物形成反应混合液进行反应生成头孢克洛，其中，在反应混合液中加入头孢克洛晶种，晶种需在反应生成的头孢克洛析出前加入。该方法提高了反应效率、缩短了合成周期、提高7·A?C?C?A的转化率，并提高了所得头孢克洛的纯度。
【专利说明】头孢克洛及其合成方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及头孢克洛合成领域，特别地，涉及一种生物法合成头孢克洛的方法及由该方法合成的头孢克洛。
【背景技术】
[0002]头孢克洛化学名:该品为(61?,71?)-7-【(1?)-2-氨基-2-苯乙酰氨基)】-3-氯-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环【4.2.0】辛-2-烯-2-甲酸一水合物。头孢克洛是第二代口服头孢菌素。对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有很强的杀灭作用。对不产酶金黄色葡萄球菌和肺炎球菌的抗菌作用较头孢羟氨苄强2~4倍。可抑制所有流感嗜血杆菌，包括对氨苄西林耐药的菌株。
[0003]目前，国内外生产头孢克洛的工艺路线有化学法和生物法。目前国内主要采用化学法合成头孢克洛，国内采用生物法(酶法)的只有DSM合资的新华-肯孚公司。化学法以7-氨基-3-氯头孢烧酸(7-ACCA)为母核与苯甘氨酸(需对氨基进行保护)在四氢呋喃或乙腈等溶剂中进行缩合合成头孢克洛，再用DMF、2-萘酚等溶剂形成混合液对头孢克洛进行纯化制得头孢克洛原料药。化学法在四氢呋喃、乙腈等大量溶剂中进行合成，对有机溶剂的需求量大。反应过程剧烈，产物的纯度低，有机溶媒残留严重。“三废”的产生量较多，对环境污染严重。
[0004]生物法(酶法)以7-ACCA和苯甘氨酸甲酯(或其他衍生物)为底物利用青霉素酰化酶酶促合成头孢克洛。CN101090978A中提到在反应过程中加入7-ACCA和/或PGa，并将反应pH值优选为6.8~7.2。整个过程中虽然没有有机溶剂的加入，但产生的杂质较多，所得产物提纯工艺非常复杂。经过较长反应周期后转化率方可达到96%以上，如果缩短反应周期，转化率会大幅降低。

【发明内容】

[0005]本发明目的在于提供一种头孢克洛及其合成方法，以解决现有技术中酶法合成头孢克洛过程中杂质多，反应周期长，头孢克洛纯度低，头孢克洛分离提纯方法复杂的技术问题。
[0006]为实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种头孢克洛合成方法，在酶存在的情况下，7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物形成反应混合液进行反应生成头孢克洛，在头孢克洛析出之前，以纯度大于50%的头孢克洛作为晶种加入到反应混合液中。
[0007]进一步地，晶种浓度≥0.2% (w / V)。
[0008]进一步地，晶种浓度为0.5~5% (w / V)。
[0009]进一步地,晶种在反应混合液进行反应之前加入。
[0010]进一步地，晶种在反应混合液进行反应时加入。
[0011]进一步地，晶种在D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物滴加完后加入到反应混合液中。
[0012]进一步地，D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物为溶液，在反应开始后O~60分钟内以滴加的方式加完。
[0013]进一步地，D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物在反应开始后O~30分钟内以滴加的方式加完。
[0014]进一步地，反应pH值为6.0~6.5，温度为9~17°C。
[0015]根据本发明的另一方面还提供了一种按上述方法制得的头孢克洛。
[0016]进一步地，头孢克洛HPLC含量大于99.6 %。
[0017]本发明具有以下有益效果:
[0018]本发明提供的方法在反应前期加入头孢克洛作为反应的晶种，提高了反应效率，缩短了合成周期提高7-ACCA的转化率，并提高所得头孢克洛的纯度。
[0019]本发明提供的方法为酶法，反应过程中仅需酶催化而且以水为溶解相，无需任何有机溶剂，绿色环保，线路简单，产品收率高，纯度高。
[0020]除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本发明作进一步详细的说明。
【专利附图】

【附图说明】
[0021]构成本申请的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中:
[0022]图1是本发明优选实施例的所得头孢克洛的高效液相色谱(HPLC)图。`【具体实施方式】
[0023]以下结合附图对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
[0024]在头孢克洛析出前加入头孢克洛作为反应的晶种，提高反应过程中头孢克洛的结晶速度，极大的缩短了反应周期。控制D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物的添加方式，提高7-ACCA在反应体系中的溶解度，达到过饱和，提高产物的得率和纯度。
[0025]本发明包括以下步骤:在酶存在的情况下，7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物形成反应混合液进行反应得到头孢克洛，在反应混合液中加入晶种，晶种为头孢克洛。
[0026]反应体系中7-ACCA以溶液形式加入。当7-ACCA以固体进入反应体系后7-ACCA经溶解-扩散-发生反应过程。当7-ACCA以溶液形式加入反应体系后7-ACCA经扩散-发生反应过程。省去了溶解的过程，避免了 7-ACCA在反应体系中局部浓度过高导致反应不充分的问题。当7-ACCA固体形式加入后，此时反应体系中7-ACCA的浓度最高且过度集中与某个区域。头孢克洛只能在7-ACCA浓度较高的区域生成，此时作为晶种添加的头孢克洛无法扩散或靠近该区域，新生成的头孢克洛也无法受到远处晶种的吸引迁离固定化酶附近，而只能就近析出在固定化酶上。说明7-ACCA如果以固体形式加入，即使加入头孢克洛作为晶体也无法防止头孢克洛包覆固定化酶。
[0027]作为晶种的头孢克洛纯度需大于50%，晶种的纯度表示其中含杂量，通常头孢克洛中杂质为未反应完全的中间产物，由于不知中间产物具体为反应的哪个阶段所产生，因而也不能知道在加入后，会对反应造成何种影响，因而纯度不能过低。当杂质过多时，作为晶种加入的头孢克洛会增加反应体系的杂质量，使得反应过程中发生其他未知的副反应，这些副反应会降低后续所得头孢克洛的纯度，增加过滤提纯的难度，使得此法不适于工业运用。优选为头孢克洛晶种纯度大于90%。
[0028]所用酶为固定化酶。固定化酶为多孔结构，易附着其他杂质。反应在固定化酶附近发生，反应体系中仅存在7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物等物质，而这些物质的结构与头孢克洛结构相差较大，不能作为头孢克洛的晶种与之结合。反应所形成的新的头孢克洛无法迅速进入溶液中，而此时反应快速进行，不断有新的头孢克洛生成。反应产生的头孢克洛就近附着在固定化酶上并析出。随着反应的进行固定化酶上裸露的酶被新产生的头孢克洛覆盖，反应体系中未反应的原料物无法接近酶发生反应，随着反应时间的延长，反应不再进行。因而现有技术中酶法反应周期较长。
[0029]加入晶种后，晶种均匀分散于反应体系各处。反应在固定化酶附近发生，当产生第一个新的头孢克洛分子后，该新产生的头孢克洛水合物能受到其附近晶种的分子力吸引，迅速摆脱固定化酶而溶入反应体系中，结合于晶种上。随着反应的进行，该过程重复多次，晶种体积逐渐扩大，头孢克洛析出。晶种的加入能避免新产生的头孢克洛对固定化酶的包覆。使得整个反应过程中固定化酶的酶能一直裸露，持续催化反应体系中的原料物，使得反应持续发生。随着反应时间的延长，反应彻底进行，因而加入晶种后反应周期缩短，所得头孢克洛的产率得到提高。晶种的添加使得反应得到的头孢克洛在溶液中能尽快相互接触结晶析出，促进反应正向进行，使得反应充分。
[0030]在晶种的选择上，采 用反应体系中不存在的物质会引入新的杂质，为后续产物的分离制造麻烦。头孢克洛本身对相同结构的物质亲和力较强，因而能起到晶种的作用。此处的晶种可以各类头孢克洛，既可以是不含水的头孢克洛也可以含水量较高的头孢克洛(含水量可以大于20% )。新生成的头孢克洛溶于反应体系溶液中再析出，因而所得头孢克洛含水量9%左右。但这并不会影响最终所得头孢克洛的纯度。优选为经过2-萘酚、DMF分离提纯得到的头孢克洛。即含水量为4.6~6.0%的头孢克洛。由于其分子结构中仅含一个水分子，与新生成的头孢克洛结构最接近，因而析出效果最优。此时晶种缩短反应周期的效果最优。
[0031]晶种头孢克洛在反应生成的头孢克洛析出之前加入。进一步优选为在反应混合液中反应发生前或反应发生时加入，此时可通过实时提取反应混合液测定其中头孢克洛的生成量来确定反应是否发生。反应发生时可以是反应开始后至头孢克洛析出前的任意时段。当然晶种也可以是在D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物滴加完后加入反应混合液中。
[0032]当反应体系中头孢克洛的浓度大于40~45mg / ml时，头孢克洛析出。头孢克洛的加入方式既可以是在头孢克洛析出前的某一个时间点一次全部加入反应体系中，也可以是分多次地加入反应体系中。优选为在头孢克洛析出前某一时间点一次全部加入晶种。按这种方式添加能使反应体系中快速形成多个晶种，晶种均匀分布于反应体系各部分。为产物的析出提供多个位点。反应才开始不久，无论所生成的头孢克洛处于反应体系的任意位置，在其附近均有晶核等待与之结合，新生成的头孢克洛与晶种结合后，析出，能进一步的降低反应体系中头孢克洛的浓度，促进反应正向进行。能进一步缩短反应周期。优选晶种的添加浓度>0.2% (w / V)。按此浓度添加，能在反应体系中提供足够量的结晶核心，有利于进一步缩短反应周期。但晶种的添加量不能过大，否则反应体系粘度过大无法操作。优选为0.5~5% (w / V)。按此比例添加，既能避免过浓的晶种加大反应体系粘度，使反应无法顺畅进行，又能避免晶种的浪费，还能实现本发明的目的。
[0033]显然的，在酶法反应中加入晶种后，可以按照常用工艺进行反应，同样可以起到缩短反应周期的作用。优选的将D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物溶解为溶液，在反应开始后O~60分钟内以滴加的方式加完。进一步，在O~30分钟内以滴加的方式加完。D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物可为D-苯甘酸甲酯盐酸盐、D-苯甘氨酸甲酯硫酸盐、D-苯甘氨酸甲酯甲磺酸盐等。由于反应开始后O~60分钟7-ACCA为过饱和溶液，此时以滴加方式匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物，D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物进入反应体系就与7-ACCA发生反应，反应发生点附近7-ACCA浓度降低，使得整个反应体系能溶解更多的7-ACCA，7-ACCA在反应体系中过饱。7-ACCA进入反应体系的量增加，为提高头孢克洛的产率打好基础。
[0034]反应时反应体系pH值优选为5.8~6.6,进一步优选为6.0~6.5。由于pH大于
7.0时头孢克洛稳定性变差，如果反应体系维持较高pH值，部分已生成的头孢克洛会再次分解，使得体系中存在一些不确定的杂质，为后续分离提纯增加难度。当pH值为6.0~6.5时，反应体系中新生成的头孢克洛稳定性高，同时配合晶种的作用，新生成的头孢克洛能快速形成结晶，避免再次发生分解，从而缩短反应周期，提高产品产率和纯度。反应体系的PH值升高时可通过任意常用溶剂进行调节，优选为氨水进行调节。PH值控制手段简便。反应发生温度优选为5~25°C，进一步优选为9~17°C。温度过高所得头孢克洛会发生分解，增加体系中杂质的量，为分离提纯制造困难。温度过低会延长反应时间，降低酶活，使反应不充分。因而按此优选反应温度。
[0035]所加酶为酶法制备头孢克洛常用的酶如:青霉素酰基转移酶、青霉素酰化酶等可用于头孢克洛合成的酶。酶的加入量可按常规工艺进行选择、7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物的摩尔比也可按常规工艺选择。
[0036]本发明另一方面提供了一种按上述方法制得的头孢克洛，该头孢克洛中杂质HPLC含量小于0.4%，头孢克洛HPL`C含量大于99.6%。说明按此方法制得的头孢克洛纯度高，提纯简便，适于工业化应用。
[0037]实施例
[0038]以下实施例中所得头孢克洛均以下步骤进行精制、回收。所用酶为青霉素酰基转移酶购于湖南福来格生物技术有限公司。以下实施例中所用物质、仪器均为市售。
[0039]精制:用盐酸完全溶解头孢克洛悬浊液，过滤不溶物、碳脱后，溶液用氨水调PH4.0~5.5，温度2~15°C，将头孢克洛结晶出来，结晶后的溶液称为结晶母液。此过程获得的头孢克洛湿品经干燥后即为精制的头孢克洛。
[0040]回收:结晶母液中加入一定量的2-萘酚或DMF，使头孢克洛形成相应的复合物，过滤收集头孢复合物，加入一定量的水和盐酸溶解复合物，加入乙酸乙酯或二氯甲烷萃取2-萘酚，分液后将水相用氨水调pH4.0~5.5，得回收的头孢克洛湿品，经干燥后回收头孢克洛。回收的头孢克洛可做为的合成过程的晶种。
[0041]7-ACCA转化率=(反应时投入的7-ACCA重量-反应后溶液中残留的7-ACCA重量)/反应时投入7-ACCA的重量
[0042]头孢克洛的重量收率=精制后头孢克洛重量/反应时投入的7-ACCA重量
[0043]高效液相色谱法条件为:
[0044]流动相A:称取6.8g磷酸二氢钾，加1000ml超纯水溶解后，用lmol / L的NaOH溶液调pH至5.8，用孔径0.22 μ m的水系滤膜过滤后，脱气20分钟左右。
[0045]流动相B:量取50ml乙腈，加入到450ml的A相中，混匀后脱气20分钟左右。
[0046]柱子类型:KromasiIC185 μ m250mmX 4.6mm。
[0047]实施例1
[0048]取30g (128mmol) 7-ACCA加入200ml纯水用6mol / L氨水溶解，溶解后ρΗ7.8~
8.1，加入2000U青霉素酰基转移酶，O~10分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐溶液(溶液配制方法28.4g(141mmol)固体加入60ml纯水)。反应开始5分钟后，反应溶液中
0.2% (w / v)头孢克洛未析出前，一次性加入头孢克洛晶种(纯度大于90% )。合成pH6.4，温度15°C。
[0049]反应120分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为0.27mg / ml (参见图1)，7-ACCA转化率99.6%，筛网分离青霉素酰基转移酶与头孢克洛悬浊液，头孢克洛悬浊液精制后重量为43.6g，并从结晶母液中使用2-萘酚回收头孢克洛，获得回收的头孢克洛2.9g，头孢克洛总重量收率为1.49。
[0050]实施例2
[0051]取30g(128mmol)7-ACCA加入200ml纯水后加6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素酰基转移酶，O~10分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐溶液(溶液配制方法28.4g(Hlmmol)固体加入60ml纯水)，反应开始15分钟后，反应溶液中头孢克洛未析出前，一次性加入实例I中2-萘酚回收的头孢克洛2.9g晶种(纯度大于90% )，合成pH6.4，温度15°C。
[0052]反应120分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为0.38mg / ml, 7-ACCA转化率99.5%，筛网分离青霉素酰基转移酶与头孢克洛悬浊液，头孢克洛悬浊液精制后重量为44.50g，头孢克洛重量收率为1.48。
[0053]实施例3
[0054]按摩尔比1:1.05取7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐。7-ACCA加入纯水用6mol / L氨水溶解，加入12000U青霉素酰基转移酶，O~30分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液，反应未开始时，分3次加入5% (w / v)头孢克洛作为晶种(纯度大于50% )，反应 pH5.8，温度 5°C。
[0055]60分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为0.18mg / ml，7-ACCA转化率99.7%，头孢克洛总重量收率为1.49。
[0056]实施例4
[0057]按摩尔比1:1.2取740^与0-苯甘氨酸甲酯盐酸盐。7-40^加入纯水用611101 /L氨水溶解，加入1200U青霉素酰基转移酶，O~60分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液，反应开始5分钟后，反应溶液中头孢克洛未析出前，等分四次加入0.5% (w / v)头孢克洛作为晶种(纯度大于60% )，反应pH6.6，温度25°C。
[0058]60分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为0.20mg / ml，7-ACCA转化率99.7%，头孢克洛总重量收率为1.47。
[0059]实施例5
[0060]按摩尔比1:1.05取7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐。7-ACCA加入纯水用6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素酰基转移酶，O~35分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液，D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液滴加完成后，一次性加入0.7% (w / V)头孢克洛作为晶种(纯度大于80% )，反应pH6，温度9°C。
[0061 ] 180分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为0.62mg / ml，7-ACCA转化率99.2%，头孢克洛总重量收率为1.45。
[0062]对比例1I
[0063]取30g(128mmol) 7-ACCA加入200ml纯水后加6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素酰基转移酶，O~10分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐溶液(溶液配制方法28.4g(141mmol)固体加入 60ml 纯水),合成 pH6.4,温度 15。。。
[0064]120分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为15.9mg / ml, 7-ACCA转化率76.7 %，180分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为14.5mg / ml，7-ACCA转化率79.2%，反应360分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为13.2mg / ml，7_ACCA转化率
83.5%,
[0065]对比例2
[0066]取30g(128mmol) 7-ACCA加入200ml纯水后加6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素酰基转移酶，一次将D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐溶液(溶液配制方法28.4g(141mmol)固体加入60ml纯水)加入，7-ACCA很快析出，合成pH6.4，温度15°C。
[0067]反应180分钟物料变得很粘稠，与青霉素酰基转移酶难以分离。
[0068]对比例3
[0069]按摩尔比1:1.10取7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐。7-ACCA加入纯水用6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素酰基转移酶，O~30分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液，反应开始第5分钟时加入0.2% (w / V) 7-ACCA作为晶种，反应pH5.5，温度 17。。。
[0070]当7-ACCA加入后，马上发现有大量已溶解的7-ACCA再次析出，反应180分钟物料变得很粘稠，与青霉素酰基转移酶难以分离。
[0071]对比例4
[0072]按摩尔比1:1.10取7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐。7-ACCA加入纯水用6mol / L氨水溶解，加入2000U青霉素酰基转移酶，O~70分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液，反应开始第5分钟时加入0.1 % (w / v)头孢克洛作为晶种，反应pH6.8，温度18 °C。
[0073]120分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为10.9mg / ml，7-ACCA转化率
84.3%，180分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为8.7mg / ml，7-ACCA转化率87.5%,反应360分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为2.9mg / ml, 7-ACCA转化率95.6%.[0074]对比例5
[0075]按CN101090978A中的步骤合成头孢克洛。
[0076]按摩尔比1:1.10取7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐。7-ACCA加入纯水用6mol / L氨水调pH7.0,使7-ACCA少量溶解，加入2000U青霉素酰基转移酶，O~120分钟内匀速加入D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐水溶液，pH7.0，温度20°C。
[0077]反应270分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为5.92mg / ml, 7-ACCA转化率91 %，反应380分钟取样HPLC检测，此时的7-ACCA浓度为1.24mg / ml, 7-ACCA转化率97%，头孢克洛总重量收率为1.43。反应开始200分钟内7-ACCA未完全溶解。
[0078]实施例1中所得头孢克洛经本公司以及第三方公司实验验证。反应发生120分钟内7-ACCA的转化率大于99%，头孢克洛重量收率大于1.45，2-萘酚或DMF、乙酸乙酯(或二氯甲烷)残留均少于lOppm。参见图1为所得头孢克洛的HPLC曲线，可知所得产物为头孢克洛，且纯度高，基本没有其他杂质产生。
[0079]而未添加晶种的对比例I中，反应180分钟后，7-ACCA的转化率仅为79.2 %。
[0080]在不控制D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物的加入方式的对比例2中，得到头孢克洛HPLC含量仅为90%，且其中杂志含量较多且复杂。
[0081 ] 对比例3中采用7-ACCA作为晶种，在7-ACCA加入后，溶解的7-ACCA再次析出，影响反应的进程，与青霉素酰基转移酶难以分离，无法得到头孢克洛，无法实现本发明目的。
[0082]按照CN101090978A方法复现实验，反应270分钟后7-ACCA转化率仅为91 %，反应周期长，不能实现缩短反应周期的目的。
[0083]由上可见，本发明提供的方法能有效的缩短反应周期，所得头孢克洛纯度高，杂质基本没有，适于工业运用。
[0084]以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应`包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种头孢克洛合成方法，在酶存在的情况下，7-ACCA与D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物形成反应混合液进行反应生成头孢克洛，其特征在于，在所述头孢克洛析出之前，以纯度大于50 %的头孢克洛作为晶种加入到所述反应混合液中。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述晶种浓度≥0.2% (w / V)。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述晶种浓度为0.5~5% (w / V)。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述晶种在所述反应混合液进行反应之前加入。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述晶种在所述反应混合液进行反应时加入。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述晶种在所述D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物滴加完后加入到所述反应混合液中。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物为溶液，在反应开始后O~60分钟内以滴加的方式加完。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述D-苯甘氨酸甲酯盐衍生物在反应开始后O~30分钟内以滴加的方式加完。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应PH值为6.0~6.5，温度为9~17。。。
10.一种按权利要求1至9中任一项所述的头孢克洛合成方法制得的头孢克洛。
11.根据权利要求10所述的头孢克洛，其特征在于，所述头孢克洛HPLC含量大于99.6%。
【文档编号】C12P35/04GK103757085SQ201310629212
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年11月28日 优先权日:2013年11月28日
【发明者】许岗, 曾红宇, 易杰 申请人:湖南福来格生物技术有限公司