用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒，包括盒体、盒盖和设置在盒体内的衬垫，所述衬垫上设有小孔，装有植物血凝素的试剂管、装有丝裂霉素的试剂管、装有秋水仙素的试剂管被设置在所述小孔内。本实用新型所公开的试剂盒结构简单、设计合理，使用本实用新型的试剂盒在检测染色体不稳定综合征时，通过对染色体畸变试验和淋巴细胞微核率检测的结合，可对染色体不稳定综合征做出简单、快捷、经济的实验室辅助诊断，检测结果准确可靠，便于在广大试验仪器、条件相对简单的实验室推广应用。
【专利说明】用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于细胞遗传学【技术领域】，涉及一种用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒。
【背景技术】
[0002]染色体断裂综合征(chromosomal breakage syndrome)是一类具有非专一的染色体自发断裂、易患恶性肿瘤的综合征，属孟德尔遗传的单基因病。多在幼年起病，因不但纯合而且杂合子也表现了较高的肿瘤易患性而引人注目。现已记载的染色体断裂综合征有着色性干皮病(xerodermapigmentosa,简称XP)、毛细血管扩张共济失调症(ataxiate langi ectasia or Louis-Barr syndrome,简称 AT)、范可尼贫血(fanconianemia,简称FA)等。其中，范可尼贫血是一种常染色体隐性遗传性血液系统疾病，属于先天性再生障碍性贫血。临床表现为造血功能衰竭，多发性先天畸形(皮肤棕色色素沉着，骨骼畸形、性发育不全等)，易患白血病和恶性肿瘤倾向。对这类疾病的早诊早治，可以改善大多数患者的症状，提高患者的生存率。
[0003]目前现有的检测范可尼贫血等先天性遗传染色体不稳定综合征的方法主要有染色体畸变分析法、淋巴细胞微核检测法、基因检测法、单细胞凝胶电泳法、生化分析法。染色体畸变分析法是将外周血在含有PHA和DNA交联剂(常用丝裂霉素C)的培养基中培养72小时后收获制片，选取200个中期分裂相进行分析，来统计染色体的畸变率；淋巴细胞微核检测法是将外周血在含有PHA的培养基中培养72小时后收获制片，镜检后统计2000个已转化的淋巴细胞中有微核率及微核细胞率；以范可尼贫血为例，基因检测法是从外周血中提取基因组DNA，通过PCR方法分析FANCC基因的突变情况，FANCC特有的突变位点包括IVS4(+4)A>T(第四内含子上的第四个碱基由A突变成T)和322delG(在cDNA序列的第322位丢失了碱基G);单细胞凝胶电泳法是通过单细胞凝胶电泳，分析外周血单个核细胞中，具有彗星拖尾现象的细胞的比例；以范可尼贫血为例，生化分析法是通过蛋白质印迹法检验范可尼贫血核心复合物中FANCD2蛋白泛素化情况，从而评价范可尼蛋白复合物的功倉泛。
[0004]以上几种方法作为染色体不稳定综合征的实验室辅助诊断方法在实际操作中各有特点:染色体畸变分析和淋巴细胞微核检测优点在于操作相对容易，可以作为疾病的初筛，收费较低，易于被患者接受；缺点在于需要建立自己实验室的CUt-Off值。基因检测的方法优势在于突变位点明确，对结果的判定比较容易；缺点是需要专门的仪器设备和具有分析能力的专门技术人员，医院不易常规开展。单细胞凝胶电泳和生化分析的方法优点在于方法较新，辅助诊断效果较好；缺点是技术比较难掌握，而且受致病因研究进展的限制，不能对所有的染色体不稳定综合征进行检测，医院很难常规开展。
[0005]根据文献报道，范可尼贫血细胞对某些DNA交联剂，即丝裂霉素(MMC)异常敏感。在低浓度的MMC诱导下FA染色体断裂率明显高于正常人，染色体畸变试验是目前范可尼贫血的经典诊断依据。近年的研究结果还表明，包括范可尼贫血在内的染色体断裂综合征患者往往也会出现淋巴细胞微核率较高。淋巴细胞微核率的检测由于具有经济，简便，快速的特点，在疾病初期筛查中具有很大的优势。
实用新型内容
[0006]为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测为染色体不稳定综合征的试剂盒，将染色体畸变检测和淋巴细胞微核率检测相结合，可以快速、简便、经济地检测范可尼贫血等先天性遗传染色体不稳定综合征。
[0007]为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是:一种用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒，包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有植物血凝素的试剂管(4 )、装有丝裂霉素的试剂管(5 )、装有秋水仙素的试剂管(6)被设置在所述小孔内。
[0008]其中，所述试剂盒还包括:装有Giemsa染色法I染色液的试剂管(7)和装有Giemsa染色法II染色液的试剂管(8)。
[0009]其中，所述衬垫(3)上设有5个小孔，所述小孔在所述衬垫(3)上分成两排平行排列。
[0010]通过以上技术方案，本实用新型的有益效果如下:
[0011](I)本实用新型的试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。
[0012](2)本实用新型的试剂盒在检测染色体不稳定综合征时，通过对染色体畸变试验和淋巴细胞微核率检测的结合，可对染色体不稳定综合征做出简单、快捷、经济的实验室辅助诊断，检测结果准确可靠，便于在广大试验仪器、条件相对简单的实验室推广应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1为本实用新型的结构示意图；
[0014]图中，1-盒体，2-盒盖，3-衬垫，4-装有植物血凝素的试剂管，5-装有丝裂霉素的试剂管，6-装有秋水仙素的试剂管，7-装有Giemsa染色法I染色液的试剂管，8-装有Giemsa染色法II染色液的试剂管。
【具体实施方式】
[0015]下面结合实施例对本实用新型的【具体实施方式】作进一步描述，本实用新型的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本实用新型的范围构成任何限制。
[0016]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0017]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0018]如图1所示，本实用新型提供了一种用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒，包括盒体1、盒盖2和设置在盒体I内的衬垫3，所述衬垫3上设有5个小孔，所述小孔在所述衬垫3上分成两排平行排列，装有植物血凝素的试剂管4、装有丝裂霉素的试剂管5、装有秋水仙素的试剂管6、装有Giemsa染色法I染色液的试剂管7和装有Giemsa染色法II染色液的试剂管8被设置在所述小孔内。
[0019]其中，所述植物血凝素、丝裂霉素的、秋水仙素均为固体试剂，使用时根据需要配制成液体试剂来使用，所述Giemsa染色法I染色液和Giemsa染色法II染色液均为本领域常规染色试剂。
[0020]检测步骤如下:
[0021](I)使用常规技术进行外周血常规培养，其中染色体畸变检测培养基中添加PHA和不同浓度的丝裂霉素，淋巴细胞微核检测培养基中只添加PHA ;其中两个培养基中PHA的终浓度均按照本领域常规参数添加，染色体畸变检测培养基的丝裂霉素终浓度范围为25ng/ml ?100ng/ml ；
[0022](2)37°C的C02培养箱培养，其中淋巴细胞微核检测培养基培养54小时，淋巴细胞微核检测培养基培养72小时；
[0023](3)收获细胞；其中染色体畸变检测实验收获后添加秋水仙素将染色体分裂阻滞在分裂中期；
[0024](4)制片和染色；使用Giemsa染色法I染色液和Giemsa染色法II染色液,采用常规Giemsa染色法，其中染色体畸变检测还需要做Q显带；
[0025](5)镜检；低倍镜检查制片和染色效果，高倍镜和油镜下观察和统计染色体畸变和淋巴细胞微核率；
[0026](6)根据实验室建立的cut-off值对检测结果做出结论。
[0027]上面已经举例说明了本实用新型的实施例，本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本实用新型的精神和范围下可以对本实用新型技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本实用新型的保护范围内。
【权利要求】
1.一种用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有植物血凝素的试剂管(4)、装有丝裂霉素的试剂管(5)、装有秋水仙素的试剂管(6)被设置在所述小孔内。
2.按照权利要求1所述的一种用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括:装有Giemsa染色法I染色液的试剂管(7)和装有Giemsa染色法II染色液的试剂管(8)。
3.按照权利要求2所述的一种用于检测染色体不稳定综合征的试剂盒，其特征在于:所述衬垫(3)上设有5个小孔，所述小孔在所述衬垫(3)上分成两排平行排列。
【文档编号】C12M1/00GK203613174SQ201320689048
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】王桂林, 张玉杰, 邓胜, 孙媛, 梁超, 王绪华, 方国伟, 黄士昂, 陈忠 申请人:北京海思特临床检验所有限公司