一种制醋的曲霉菌种的制作方法
【专利摘要】一种曲霉菌种，该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）保藏，保藏号为CGMCC?NO.8847。本发明的菌种是一种复合菌种，在固态醋生产过程中只需添加本菌种就可以，无需添加酒母、醋酸菌种，生产操作过程也比较简单。糖化、酒精发酵、醋酸发酵不用单独设计工艺，它们的生化反应是在同时进行的。本发明菌种固态法生产食醋，不用倒池翻醅，从而降低了劳动强度，提高了劳动效率。
【专利说明】一种制醋的曲霉菌种
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种制醋的菌种与应用。
【背景技术】
[0002]目前，我国固态发酵食醋工艺普遍使用的是黑曲霉，这类菌种酶系比较单一，只有含有淀粉酶和糖化酶，糖化力比较强，但在食醋发酵过程中还需要添加酒母、醋酸菌种。操作过程比较复杂，劳动强度较大，劳动效率低，质量控制也存在着较大的难度，出品率较低。
【发明内容】
[0003]本发明的目的之一，是针对目前固态醋生产过程比较复杂的状况提供一种生产固态食醋的复合型菌种；本发明的目的之二，是提供前述菌种的制备方法。
本发明的目是这样实现的: 一种曲霉菌种，该菌种已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC N0.8847。
该菌种的制备方法如下:
A、菌种的分离:
(1)取5支装有无菌生理盐水的试管，分别标记1、2、3、4、5号，取保存该菌种试管的菌落2环，放入盛有无菌生理盐水的I号试管内，用力振摇，使微生物均匀的悬浮于水中；
(2)用Iml无菌吸管按无菌操作法，从I号试管中吸取Iml悬浮液注入2号管中，并将2号管快速充分振摇，使悬浮液均匀。同样由2号管中吸取Iml悬浮液注入3号管中，并将3号管迅速充分振摇，使悬浮液均匀。以此类推直至5号管；
(3)用两支无菌吸管分别从4号及5号管中各取Iml悬浮液，并分别注入两个无菌培养皿中，再加入冷却至45°C的培养基15ml,迅速而轻微摇转,注意悬浮液与培养基的充分摇匀，静置后凝固成平板，然后将培养皿用纸固定好，并倒置于30°C恒温箱内培养，4天后从中挑选单个菌落，并移植试管斜面培养基上培养，如果只有一种菌生长，即得纯菌种；
B、曲霉囷种的制备
(I)制备斜面培养基
①培养基配方
豆汁(3。Β?浓度) 100mL 磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.1g 氯化钠(NaCl)0.1g
硫酸镁(MgSO4)0.2g
柠檬酸0.1g
鹿糖5.0g
琼脂2.5g
pH 值5.5 ~6.0②培养基制备
准确称取药品，在豆汁中加入药品并煮沸，使药品充分溶解，趁热将煮沸的培养基分装于试管中，将装有培养基的试管固定好放入高压蒸汽灭菌器内，取出后趁热摆斜面，待培养基凝固后即成菌种斜面培养基；
(2)曲霉囷种制备
①接种
按接种的 操作过程操作，在无菌环境下用接种针挑取长势好的孢子接入凝固好的斜面培养基中，分别接入10支培养基。
②培养
将接完种的10支放入恒温培养箱培养，培养温度定为30°C，培养时间定为72小时。菌落生长好后，5支作为保存菌种，5支作为生产菌种。
三、曲霉菌种的保存
包括以下顺序和步骤:
采用冰箱保藏法，将5支保存菌种放入冰箱中保存，温度控制在4~5°C之间，时间不得超过6个月。
D、曲霉囷种的应用:
(1)菌种的扩大培养
①制备培养基
取大米，用水浸泡20小时，然后用水冲洗干净，把浮水淋净，放入汽锅内将其蒸煮成米饭，出锅后将米饭摊凉，温度冷却30°C后,将其装入三角瓶内中，最后灭菌。
②扩大培养
在无菌环境下将试管中的菌种接入三角瓶内，然后放入恒温培养箱中进行堆积培养，温度为30°C，培养时间为18小时左右。待瓶底内部料发白长菌丝进行第一次摇瓶培养，将瓶内菌丝体摇匀摊平，再过4~5小时瓶底内部料发白长菌丝再进行第二次摇瓶，待菌丝长成米糠色呈孢子状，96小时培养完毕后，出瓶备用。
(2)糖化曲的制备
①原料:以高粱和麸皮为原料。
②工艺:采用通风制曲工艺制成糖化曲，原料蒸煮冷却后接入菌种，温度控制在37-39°C，制曲时间为66小时。
(3)固态法生产醋
①原、辅材料:以高粱为原料，以麸皮为辅料，以稻壳为填充料。
②主要工艺流程:蒸煮一冷却一接入菌种一发酵一淋醋。
E、曲霉菌种的保存
采用冰箱保藏法，将5支保存菌种放入冰箱中保存，温度控制在4-5°C之间，时间不得超过6个月。
有益效果:
1、本发明的菌种是一种复合菌种，在固态醋生产过程中只需添加本菌种就可以，无需添加酒母、醋酸菌种，生产操作过程也比较简单。糖化、酒精发酵、醋酸发酵不用单独设计工艺，它们的生化反应是在同时进行的，只是不同的发酵时期其生化反应的主体不同而已。2、本发明菌种固态法生产食醋，不用倒池翻醅，从而降低了劳动强度，提高了劳动效率。
3、本发明采用豆汁制做斜面培养基，具有菌种长势好的优点。
4、使用本发明菌种生产出的醋产品，产品清澈、无沉淀，酸甜适口，产品质量比较稳定。
5、本发明菌种产醋率较高，出品率达到10kg/kg(主料)，而其它的出品率在8.5-9kg/kg (主料)。
【具体实施方式】:
下面具体结合实例对本发明做进一步的详细说明。
菌种分类命名:曲霉 拉丁文名:Aspergillus sp
保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。
地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号 保藏日期:2014年2月24 保藏编号:CGMCC N0.8847
一、曲霉菌种的分离，包括以下顺序和步骤: 1、取5支装有无菌生理盐水的试管(每支9ml)，分别标记1、2、3、4、5号。取保存菌种试管的菌落2环，放入盛有无菌生理盐水的I号试管内，用力振摇，使微生物均匀的悬浮于水中。
2、用Iml无菌吸管按无菌操作法，从I号试管中吸取Iml悬浮液注入2号管中，并将2号管快速充分振摇，使悬浮液均匀。同样由2号管中吸取Iml悬浮液注入3号管中，并将3号管迅速充分振摇，使悬浮液均匀。以此类推直至5号管。
3、用两支无菌吸管分别从4号及5号管中各取Iml悬浮液，并分别注入两个无菌培养皿中，再加入冷却至45°C的培养基15ml,迅速而轻微摇转,注意悬浮液与培养基的充分摇匀，静置后凝固成平板，然后将培养皿用纸固定好，并倒置于30°C恒温箱内培养，4天后从中挑选单个菌落，并移植试管斜面培养基上培养，如果只有一种菌生长，即得纯菌种。
二、曲霉菌种的制备方法，包括以下顺序和步骤:
1、斜面培养基的制备
(1)培养基的配方
豆汁(3° Be )100mL
磷酸二氢钾(KH2PO4)0.1g
氯化钠(NaCl)0.1g
硫酸镁(MgSO4)0.2g
柠檬酸0.1g
鹿糖5.0g
琼脂2.5g
pH 值5.5 ~6.0
(2)培养基的制备
准确称取药品，在豆汁中加入药品并煮沸，使药品充分溶解。趁热将煮沸的培养基分装于试管中，每支试管约15ml。将装有培养基的试管固定好放入高压蒸汽灭菌器内，蒸汽压力0.1Mpa，灭菌温度121°C，灭菌时间30分钟，取出后趁热摆斜面，待培养基凝固后即成本发明菌种斜面培养基。
2、曲霉囷种的制备
(1)接种
按接种的操作过程操作，在无菌环境下用接种针挑取长势好的孢子接入凝固好的斜面培养基中，分别接入10支培养基。
(2)培养
将接完种的10支放入恒温培养箱培养，培养温度定为30°C，培养时间定为72小时。菌落生长好后,5支做为保存菌种，5支做为生产菌种。
三、曲霉菌种的保存，包括以下顺序和步骤:
采用冰箱保藏法，将5支保存菌种放入冰箱中保存，温度控制在4-5°C之间，时间不得超过6个月。
四、曲霉菌种的应用:
1、菌种的扩大培养
(1)培养基的制备
生产1000公斤食醋，需要使用I克的二代菌种。每次扩大培养菌种500克。
称取大米500克,用水浸泡20小时,然后用水冲洗干净,把浮水淋净,蒸煮成米饭，出锅后将米饭摊凉，温度冷却至30°C后，将其装入三角瓶内中。最后灭菌，蒸汽压力为0.1MPa,灭菌时间为30分钟。
(2)扩大培养
按接种的操作过程，在无菌环境下将试管中的菌种接入三角瓶内，然后放入恒温培养箱中进行堆积培养，温度为30°C，培养时间为18小时左右。待瓶底内部料发白长菌丝进行第一次摇瓶培养，将瓶内菌丝体摇匀摊平，再过4一5小时瓶底内部料发白长菌丝再进行第二次摇瓶，待菌丝长成米糠色呈孢子状，96小时培养完毕后，出瓶备用。
2、糖化曲的制备
(1)原料:以高粱和麸皮为原料。
(2)工艺:采用通风制曲工艺制成糖化曲，原料蒸煮冷却后接入菌种，温度控制在37-39°C，制曲时间为66小时。
3、固态发酵法制醋
以高粱为原料，以麸皮为辅料，以稻壳为填充料，主要工艺流程:蒸煮一冷却一接入菌种一发酵一淋醋。
【权利要求】
1.一种制醋的曲霉囷种，属曲霉囷种，其特征在于该囷种在中国微生物囷种保减管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC N0.8847。
2.一种曲霉菌种的制备方法，其特征在于方法如下: A、菌种的分离 (1)取5支装有无菌生理盐水的试管，分别标记1、2、3、4、5号，取保存该菌种试管的菌落2环，放入盛有无菌生理盐水的I号试管内，用力振摇，使微生物均匀的悬浮于水中； (2)用Iml无菌吸管按无菌操作法，从I号试管中吸取Iml悬浮液注入2号管中，并将2号管快速充分振摇，使悬浮液均匀。同样由2号管中吸取Iml悬浮液注入3号管中，并将3号管快速充分振摇，使悬浮液均匀。以此类推直至5号管； (3)用两支无菌吸管分别从4号及5号管中各取Iml悬浮液，并分别注入两个无菌培养皿中，再加入冷却至45V的培养基15ml,快速而轻微摇转,注意悬浮液与培养基的充分摇匀，静置后凝固成平板，然后将培养皿用纸固定好，并倒置于30°C恒温箱内培养，4天后从中挑选单个菌落，并移植试管斜面培养基上培养，如果只有一种菌生长，即得纯菌种； B、曲霉囷种的制备 (1)制备斜面培养基 ①培养基配方 豆汁(3。Β?浓度) 100mL 磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.1g 氯化钠(NaCl)0.1g 硫酸镁(MgSO4)0.2g 柠檬酸0.1g 鹿糖5.0g 琼脂2.5g pH 值5.5 ~6.0 ②培养基制备 准确称取药品，在豆汁中加入药品并煮沸，使药品充分溶解，趁热将煮沸的培养基分装于试管中，将装有培养基的试管固定好放入高压蒸汽灭菌器内，取出后趁热摆斜面，待培养基凝固后即成菌种斜面培养基； (2)曲霉囷种制备 ①接种 按接种的操作过程操作，在无菌环境下用接种针挑取长势好的孢子接入凝固好的斜面培养基中，分别接入10支培养基。 ②培养 将接完种的10支放入恒温培养箱培养，培养温度定为30°C，培养时间定为72小时。菌落生长好后，5支作为保存菌种，5支作为生产菌种； C、曲霉菌种的保存 采用冰箱保藏法，将5支保存菌种放入冰箱中保存，温度控制在4~5°C之间，时间不得超过6个月。
【文档编号】C12N1/14GK103937679SQ201410109595
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年3月21日 优先权日:2014年3月21日
【发明者】郭子刚 申请人:北康酿造食品有限公司